Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:28:34Z : No. of bitstreams: 1 freitas_js_me_sjrp_parcial.pdf: 313216 bytes, checksum: 07bb1e967b2839120a4de032d8fb0a21 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-08-22T14:57:13Z: freitas_js_me_sjrp_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-08-22T15:02:13Z : No. of bitstreams: 1 000714296.pdf: 5229905 bytes, checksum: 59baedbe46ef507d2ee66812f76eca90 (MD5) / O declínio das populações de anfíbios é um problema global com causas complexas. Atualmente há uma grande preocupação sobre os efeitos provocados por compostos que atuam como desreguladores endócrinos nos sistemas naturais. Os estrogênios são os principais contaminantes encontrados em corpos d´água e são responsáveis por causar uma série de distúrbios, principalmente ligados aos aspectos reprodutivos. O hormônio feminino 17β-estradiol é um potente contaminante que prevalece em águas superficiais, provenientes principalmente de efluentes municipais e industriais. É o hormônio responsável pela formação das características femininas, comportamento sexual e ovulação. Este estudo mostra o efeito do 17β-estradiol na gametogênese dos órgãos de Bidder e testículos e na resposta hepática de machos de Rhinella schneideri. Foram utilizados 40 machos adultos e analisada a gametogênese dos testículos e órgão de Bidder, além da avaliação da pigmentação hepática. Os animais foram tratados com 17β-estradiol durante 3, 7, (efeito de curto prazo) 15 e 30 (efeito de exposição prolongada) dias, utilizando injeções subcutâneas de 2mg/kg em dias alternados. Análises histoquímicas também foram realizadas para os três órgãos. Os resultados mostraram que o 17β-estradiol promoveu alterações tanto na espermatogênese, quanto na ovogênese bidderiana. Os tratamentos de curto prazo acarretaram em uma diminuição na quantidade de espermatozoides liberados no lume e um desequilíbrio na ocorrência de células iniciais da espermatogênese. Os tratamentos de exposição prolongada acarretaram principalmente na diminuição dos lóculos seminíferos e aumento na região intersticial, além da alteração de alguns tipos celulares como espermatogônias, espermatócitos e espermátides alongadas. Para o órgão de Bidder... / Amphibian’s populations decline is a global problem with complex causes. Currently, it is known that this decline is related to endocrine disruptors compounds in natural systems. Estrogens are the main compounds found in water bodies and are responsible for causing a number of disturbances, mainly linked to reproductive aspects. The female hormone 17β-estradiol is a potent organic contaminant that prevails in surface waters, mainly disposed by municipal and industrial effluents. This hormone induces the formation of feminine characteristics, sexual behavior and ovulation. In this study, we describe the effect of 17β-estradiol in the gametogenesis of the Bidder's organ and testes, beyond the liver response in males of Rhinella schneideri. We collected 40 adult males and analyzed the testis and the Bidder´s organ gametogenesis and the liver pigmentation. The animals were treated with 17β-estradiol for 3, 7, (short effect) 15 and 30 (extended effect) days, by subcutaneous injection of 2mg/kg on alternate days. Histochemical analyzes were also performed for the three organs. The results showed that 17β-estradiol promoted changes in spermatogenesis and in bidderian oogenesis. Short-treatments resulted in a decrease in the quantity of spermatozoa in the lume and an imbalance in the occurrence of initial cells of spermatogenesis. Long-treatments resulted in a decreased of the seminiferous locules and increased of the interstitial area, besides the alteration of some cell types, such as spermatogonias, spermatocytes and elongated spermatids. In the Bidder´s organ, the short-treatment resulted in increased of the young follicles and degeneration oocytes, establishing a possible renewal of female cells. The treatment of 15 days decreased the amount of degenerating oocytes and increased late follicles. After 30 days of treatment were... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Célio Fernando Baptista Haddad / Banca: Rafael O. de Sá / Banca: Antonio Sebben / Resumo: O estudo comparativo da ontogenia fornece dados que podem servir tanto para elucidar alguns dos mecanismos de evolução, como para realizar reconstruções filogenética, principalmente porque permite a observação da diferenciação morfológica e temporal durante o desenvolvimento. O estudo das modificações do processo de ontogenia também fornece dados relativos aos processos de especiação. Neste sentido, os anfíbios podem ser considerados os melhores modelos para o estudo de ontogenia. Como eles têm embriões geralmente de vida livre, a aquisição da série de desenvolvimento necessário é relativamente fácil, quando comparado com qualquer outro animal vertebrado. Entre os anuros, por causa da diversidade de modos reprodutivos (que inclui desenvolvimento direto), os pipídeos oferecem uma rara oportunidade de investigar como o cuidado parental pode ter influenciado o desenvolvimento geral e, em particular, as rotas de desenvolvimento do esqueleto. Além disso, a família Pipidae também é um ramo que se diferenciou relativamente cedo na árvore de vida dos anfíbios anuros. Esta família apresenta uma combinação única de características plesiomórficas e exclusivamente derivadas, algumas das quais parecem representar adaptações a um estilo de vida aquático. O presente estudo descreve o desenvolvimento do crânio de Pipa arrabali e compara os dados disponíveis para outras espécies do grupo, incluindo outros Pipidae e Xenoanura. Para as análises morfológicas, foram utilizados 51 embriões em diferentes estágios de desenvolvimento. Para observar as estruturas esqueléticas os espécimes foram diafanizados e corados com uma técnica de dupla coloração para diferenciação de cartilagem e osso. O condrocrânio desta espécie é caracterizado pela redução ou ausência de várias estruturas, com uma concentração destas modificações nas regiões etmoidal e anterior. Quando comparado com outras espécies, parece óbvio / Abstract: The study of comparative ontogeny provides data that can serve both, to elucidate some of the mechanisms of evolution and phylogenetic reconstruction, mainly because it allows for the observation of morphological and temporal differentiation during development. The study of modifications of ontogenic process also permits that data relating to the process of speciation be observed. In this regard, frogs may be considered the best models for the study of ontogeny. As they generally have free living embryos, the acquisition of the necessary developmental series is relatively easy, when compared with many other vertebrates. Amongst frogs, because of the diversity of reproductive modes (which includes direct developers), pipids offer a rare opportunity to investigate how parental care may have influenced development in general and skeletal developmental pathways in particular. Besides, the family Pipidae is also a relatively early offshoot of the anuran tree of life, presenting a unique combination of plesiomorfic characteristics and exclusive derived characteristics, some of which seems to represent adaptations to an aquatic lifestyle. Here in, I describe the development of the cranium of Pipa arrabali and compare the data available to other species in the group, including other Pipidae and Xenoanura. For the morphological analyses, I used 51 embryos in different developmental stages. To observe the skeletal structures the specimens were cleared and double stained for cartilage and bone differentiation. The chondrocranium of this species is characterized by several reductions or absence of structures, with a concentration of these modifications in the ethmoidal and anterior regions. When compared to other species, it seems obvious that heterocrony is a pervasive mechanism for the ontogenetic modifications observed / Mestre

Orientador: Denise de Cerqueira Rossa Feres / Banca: Denise de Cerqueira Rossa Feres / Banca: Márcio R.C. Martins / Banca: Francisco Langeani Neto / Resumo: Uma limitação nos estudos em ecologia de comunidades é a interpretação dos processos com base apenas em mecanismos contemporâneos, pois muitos padrões podem ser explicados com base nas linhagens evolutivas da comunidade. O objetivo deste estudo foi investigar a influência do parentesco nos padrões de uso de recursos (microhábitat e alimento) para os girinos de duas comunidades. Para isso, foi determinada a similaridade no uso de micro-hábitat e na dieta e aplicada a metodologia filogenética para caracteres orais e do condrocrânio dos girinos de 19 espécies da região noroeste do estado de São Paulo. As amostragens foram mensais, entre outubro de 2003 e maio de 2004, completando uma estação chuvosa. Para a obtenção das relações de parentesco entre as espécies, caracteres orais e do condrocrânio foram analisados pela metodologia filogenética. Como grupo externo, foram utilizados girinos de Discoglossidae. Os dados de uso de recursos foram analisados em uma escala mais detalhada e em outra mais ampla. A análise histórica foi realizada plotando os dados de uso de recursos sobre o cladograma, representando as relações de parentesco entre as espécies. A escala utilizada para descrição do uso de microhábitat influenciou o resultado obtido. Numa escala de mais detalhada foram evidenciadas variação intra-específica e no padrão geral das duas comunidades, de acordo com as dimensões do corpo d'água: os girinos ocuparam regiões mais profundas e distantes da margem na poça permanente, e essa ocupação pode estar relacionada com as maiores dimensões desta poça. Já o panorama resultante da análise efetuada para girinos de 19 espécies numa escala mais ampla é muito diferente: os girinos de "leptodactilídeos" presentemente estudados mantiveram o padrão plesiomórfico de Neobatrachia, indicando...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A limitation in the studies in community ecology is just the interpretation of the processes based on contemporary mechanisms, as many patterns can be explained based on the community's evolutionary lineages. The objective of this study was to investigate the phylogenetic influence in the patterns of resource use (microhábitat and food) for two tadpoles' communities. The similarity in the microhabitat use and in the diet between tadpoles of two communities was determined. These tadpoles were sampled monthly, between October of 2003 and May of 2004, along the rainy season. For the elaboration of an evolutionary hypothesis among species, oral and chondrocranial morphology of tadpoles of 19 species from northwestern region of São Paulo state were analyzed by phylogenetic methodology. Tadpoles of Discoglossidae were used as outgroup. The historical analysis of the resource use was made constrasting these data with the cladogram that represent the evolutionary relationship among the species, and analyzed in a detailed and in a broad scales. The used scale for microhabitat use influenced the results. In a more detailed scale the intraspecific variation was highlighted and caused the two communities to differ in the general pattern of tadpoles' distribution, according to the pond size: tadpoles' occupied areas deeper and distant from the margin in the permanent pond, which could be related to the largest size of this pond. In a broad scale the "leptodactylids" at present study maintained the plesiomorphic pattern of Neobatrachia, indicating a conservative evolutionary history, while the "hylids" diverged in the microhabitat use. The groups formed by the similarity analysis were basically constituted for (1) species little abundant, allowing the coexistence of species with high niche superposition; (2) ...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Denise de Cerqueira Rossa-Feres / Banca: Arif Cais / Banca: Jorge Jim / Banca: Célio Fernando Baptista Haddad / Banca: Marianna Botelho de Oliveira Dixo / Resumo: O primeiro passo para a conservação de anfíbios de uma determinada área é promover o conhecimento sobre a composição e a distribuição das espécies. O rápido declínio nas populações de várias espécies de anuros ao redor do mundo ressalta a necessidade e urgência no conhecimento da anurofauna, especialmente em regiões pouco amostradas, caso da Floresta com Araucária (FOM). Os objetivos do presente estudo foram: sintetizar o conhecimento sobre a diversidade de anfíbios registrados na FOM do sul do Brasil; aumentar o conhecimento sobre a distribuição geográfica de algumas espécies; inventariar e comparar a diversidade de anuros, nas fases larval e adulta, em habitats florestais e campos associados em dois estágios distintos de conservação (preservado e alterado); detectar possíveis variações sazonais no período reprodutivo das espécies; e comparar a composição de espécies de FOM com três ecossistemas adjacentes. Um total de 129 espécies foi levantado, sendo 103 registradas nas áreas amostras e o restante em registros secundários de museus. Dessas, 13 espécies são endêmicas da FOM. Por meio de comparações morfológicas e do canto de anúncio, 18 espécies foram confirmadas como não descritas. Além disso, pôde-se ampliar significativamente o conhecimento da distribuição geográfica de oito espécies de anfíbios anuros: Ischnocnema henselii, Dendropsophus anceps, D. nahdereri, Scinax granulatus, Trachycephalus dibernardoi, Pseudis cardosoi, Leptodactylus araucaria e L. nanus. Alguns destes registros representam avanços nas análises taxonômicas para FOM, por exemplo: Ischnocnema henselii é uma espécie críptica e algumas populações até o momento eram confundidas no Paraná com I. guentheri; Trachycephalus dibernardoi era identificada como T. imitatrix e Leptodactylus nanus como L. marmoratus. Na comparação entre os habitats inseridos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The first step in amphibian conservation of an area is to improve the knowledge about the species composition and distribution. The fast decrease in several anurans species worldwide highlights the urgency of knowledge about this faunal group, meanly in less studied regions, like the Brazilian Araucaria forest. Our aim is to synthesize the knowledge about the amphibian diversity recorded on Araucaria forest in Southern Brazil; to improve the knowledge about the geographic distribution of anurans species; to survey and compare the diversity of adults and tadpoles between preserved and disturbed forests and associated "campos" habitats (natural associated open areas recovered by herbaceous plants); to check for seasonal variations in the species reproductive periods; and to compare the Araucaria forest anuran species composition with other three adjacent ecosystems. We found records of 129 species occurring in Araucaria forest ecosystem, with 103 registered during the field survey and the remaining registered consulting specimens of scientific collections. A total of 13 species are endemic to this ecosystem. Comparisons of morphology and bioacoustics confirmed that 18 species, registered during field research, are not described yet. Moreover, we improved the knowledge on geographical distribution of eight species: Ischnocnema henselii, Dendropsophus anceps, D. nahdereri, Scinax granulatus, Trachycephalus dibernardoi, Pseudis cardosoi, Leptodactylus araucaria e L. nanus. Some of this records represent advances on taxonomic identification, for exemple: Ischnocnema henseli is a cryptic species and some of its populations were so far confused with I. guentheri in Paraná state; we also found that Trachycephalus dibernardoi was misidentified as T. imitatrix and Leptodactylus nanus as L. marmoratus. Comparing the preserved and disturbed forest remnants, we found differences... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cynthia Peralta de Almeida Prado / Coorientador: Renato Christensen Nali / Banca: Itamar Alves Martins / Banca: Victor Goyannes Dill Orrico / Resumo: A forma de comunicação mais estudada em anuros é a acústica, porém estudos atuais, inclusive com espécies de hábito noturno, demonstram que a comunicação visual também tem grande importância neste grupo. Este trabalho procurou compreender os contextos sociais e estímulos envolvidos na comunicação acústica e visual em Hypsiboas albopunctatus em uma lagoa e brejos no município de Rio Claro, estado de São Paulo. Os objetivos deste estudo foram: (1) verificar a influência do tamanho corporal de machos e temperatura do ar nas características físicas dos cantos (frequência dominante e duração das notas); (2) avaliar a influência do número de machos presentes no coro sobre a taxa de repetição de notas agressivas e de anúncio; (3) avaliar os fatores relacionados à emissão de notas agressivas e de anúncio por meio de observações diretas e experimentos de playback com machos no campo, utilizando diferentes tipos de canto; e (4) avaliar os fatores relacionados à emissão de sinais visuais pelos machos através de observações diretas e playbacks na presença e ausência de um macho intruso. Encontrou-se uma correlação negativa entre a massa corpórea e CRC (comprimento rostro-cloacal) do macho com frequência dominante e duração das notas agressivas, indicando que tais características podem ser utilizadas tanto por rivais quanto por fêmeas para avaliar o tamanho dos machos. Porém, características físicas dos cantos não tiveram correlação com a temperatura do ar, provavelmente devido ao fato dos dados terem sido coletados apenas na estação chuvosa, quando há pouca variação na temperatura. O número de machos no coro influenciou no número de notas agressivas emitidas; machos vocalizando em coros maiores emitiram menos notas agressivas, mostrando um provável aumento de limites de tolerância para... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The most studied form of communication in frogs is the acoustic one, but current studies have shown that visual communication is also important in this group, even in nocturnal species. We aimed to understand the social contexts and stimuli involved in the acoustic and visual communications of Hypsiboas albopunctatus in a pond and wetlands, in the municipality of Rio Claro, São Paulo state, southeastern Brazil. The specific aims of this study were: (1) to verify the influence of male body size and air temperature on the physical characteristics of the calls (dominant frequency and duration of notes), (2) to evaluate the influence of the number of males in the chorus on the repetition rate of aggressive and advertisement notes, (3) to evaluate the factors related to the emission of aggressive and advertisement notes through direct observations and playback experiments carried out in the field, using different types of calls, and (4) to evaluate the factors related to the emission of visual signals by males through direct observations and playback experiments with and without the presence of an intruder male. Dominant frequency and duration of aggressive notes were negatively correlated with male SVL (snout vent length) and body mass, suggesting that these traits might be used by females and rivals to evaluate male size. However, there was no correlation of any physical characteristics of the calls with air temperature, probably because data have been collected during the rainy season, when there is less variation in temperature. The chorus size influenced the number of aggressive notes emitted, i. e., focal males emitted less aggressive notes in larger chorus, which suggest an increase of tolerance regarding calls of neighbor males in larger chorus, allowing the resident males to defend their territories less aggressively, while maximizing... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Classius de Oliveira / Banca: Ana Maria de Lauro Castrucci / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Resumo: Os anfíbios compartilham com os demais vertebrados ectotérmicos a existência de um sistema pigmentar extracutâneo, constituído por células com o citoplasma repleto de melanina, em vários tecidos e órgãos. O papel funcional dessas células ainda não está definido, havendo várias hipóteses, dentre elas o papel na defesa contra patógenos. O objetivo do trabalho foi observar a resposta das células pigmentares viscerais presentes no fígado e testículos dos anuros frente ao processo inflamatório induzido experimentalmente por lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli. Para isso, foram realizadas análises morfológicas, estereológicas e histoquímicas; com o intuito de observar as respostas celulares envolvendo mudanças na forma e substâncias presentes desse tipo celular no fígado e testículos, além da descrição anatômica do sistema pigmentar extracutâneo desses animais após infecção. Foram utilizados 30 exemplares da espécie Eupemphix nattereri, os animais foram inoculados, com dose única de LPS de E. coli, sendo analisados 2 e 24 horas após a inoculação. Após esse período, os animais foram eutanasiados, a pigmentação visceral foi descrita, em 12 regiões pré-estabelecidas; sendo o fígado e testículos posteriormente retirados e submetidos ao processamento histológico para realização das análises. A pigmentação presente no fígado aumentou no grupo tratado após 24 horas, enquanto que nos testículos é observado aumento após 2 horas. As substâncias hemosiderina e lipofuscina não são verificadas nas gônadas, estando presentes apenas no fígado. Quanto à hemosiderina, não há variação significativa entre os tratamentos. Já a lipofuscina apresenta um aumento significativo nos animais tratados após 24 horas, estando ainda correlacionada positivamente com a quantidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ectothermic vertebrates have a well-developed system of melanin-containing cells present on several organs (liver, spleen, lung, heart, thymus, and gonads) and tissues (meninges and connective tissues surrounding blood vessels), constituting an extracutaneous pigmentary system. The functional role of these pigmented cells in the visceral organs are not known, however there are several hypotheses, including a bactericide function. Our aim was to characterize the response of visceral pigmented cells in the liver of the anuran Eupemphix nattereri inoculated with lipopolysaccharide (LPS) of Escherichia coli. Morphological, estereological and histochemicals analyses were carried out in order to describe the cellular responses involving changes in the form and amount of pigmentary substances that occur in this cellular type in the liver and testes. We inoculated twenty animals with one dose of LPS of E. coli, and analyzed 2 and 24 hours after the inoculation for observation of pigmented cells. After this period, the animals were euthanized and the liver and the testes were submitted to the histological processing. The pigmentation increased in the liver of the treatment group after 24 hours, whereas the pigmentation on testes increased after 2 hours of inoculation. In the liver, haemosiderin and lipofuscin are located within melanomacrophages, along with melanin. Haemosiderin showed no variation between the treatments, but lipofuscin increased in the treatment group after 24 hours. The amount of haemosiderin was not correlated neither with melanin nor lipofuscina, but melanin and lipofuscin were significantly correlated in the animals analyzed 24 hours after LPS inoculation. Haemosiderin and lipofuscin were not observed on testes. Although the liver and testes in E. nattereri presented pigmented... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-10-31Bitstream added on 2014-06-13T20:00:16Z : No. of bitstreams: 1 ramalho_ces_me_rcla.pdf: 366177 bytes, checksum: c0b4165015a30f1122b7496f028ef432 (MD5) / A forma de comunicação mais estudada em anuros é a acústica, porém estudos atuais, inclusive com espécies de hábito noturno, demonstram que a comunicação visual também tem grande importância neste grupo. Este trabalho procurou compreender os contextos sociais e estímulos envolvidos na comunicação acústica e visual em Hypsiboas albopunctatus em uma lagoa e brejos no município de Rio Claro, estado de São Paulo. Os objetivos deste estudo foram: (1) verificar a influência do tamanho corporal de machos e temperatura do ar nas características físicas dos cantos (frequência dominante e duração das notas); (2) avaliar a influência do número de machos presentes no coro sobre a taxa de repetição de notas agressivas e de anúncio; (3) avaliar os fatores relacionados à emissão de notas agressivas e de anúncio por meio de observações diretas e experimentos de playback com machos no campo, utilizando diferentes tipos de canto; e (4) avaliar os fatores relacionados à emissão de sinais visuais pelos machos através de observações diretas e playbacks na presença e ausência de um macho intruso. Encontrou-se uma correlação negativa entre a massa corpórea e CRC (comprimento rostro-cloacal) do macho com frequência dominante e duração das notas agressivas, indicando que tais características podem ser utilizadas tanto por rivais quanto por fêmeas para avaliar o tamanho dos machos. Porém, características físicas dos cantos não tiveram correlação com a temperatura do ar, provavelmente devido ao fato dos dados terem sido coletados apenas na estação chuvosa, quando há pouca variação na temperatura. O número de machos no coro influenciou no número de notas agressivas emitidas; machos vocalizando em coros maiores emitiram menos notas agressivas, mostrando um provável aumento de limites de tolerância para... / The most studied form of communication in frogs is the acoustic one, but current studies have shown that visual communication is also important in this group, even in nocturnal species. We aimed to understand the social contexts and stimuli involved in the acoustic and visual communications of Hypsiboas albopunctatus in a pond and wetlands, in the municipality of Rio Claro, São Paulo state, southeastern Brazil. The specific aims of this study were: (1) to verify the influence of male body size and air temperature on the physical characteristics of the calls (dominant frequency and duration of notes), (2) to evaluate the influence of the number of males in the chorus on the repetition rate of aggressive and advertisement notes, (3) to evaluate the factors related to the emission of aggressive and advertisement notes through direct observations and playback experiments carried out in the field, using different types of calls, and (4) to evaluate the factors related to the emission of visual signals by males through direct observations and playback experiments with and without the presence of an intruder male. Dominant frequency and duration of aggressive notes were negatively correlated with male SVL (snout vent length) and body mass, suggesting that these traits might be used by females and rivals to evaluate male size. However, there was no correlation of any physical characteristics of the calls with air temperature, probably because data have been collected during the rainy season, when there is less variation in temperature. The chorus size influenced the number of aggressive notes emitted, i. e., focal males emitted less aggressive notes in larger chorus, which suggest an increase of tolerance regarding calls of neighbor males in larger chorus, allowing the resident males to defend their territories less aggressively, while maximizing... (Complete abstract click electronic access below)

Orientadores: Shirlei Maria Recco-Pimentel, Luciana Bolsoni Lourenço Morandini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T17:27:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vittorazzi_StenioEder_M.pdf: 1698813 bytes, checksum: 820a78de37442254ed35e58e413de026 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O gênero Physalaemus é atualmente constituído de 42 espécies, distribuídas em sete grupos. No grupo de Physalaemus cuvieri, além dessa, estão alocadas outras oito espécies. Estudos citogenéticos disponíveis até momento para algumas espécies do gênero nos mostram um número diplóide de 2n = 22, sendo a morfologia cromossômica similar entre elas. O objetivo desse trabalho foi desenvolver novos marcadores citogenéticos para o estudo do grupo de Physalaemus cuvieri. Foram estudadas três populações de P. cuvieri e duas outras espécies do grupo, P. albonotatus e P. centralis. Foram isoladas três sequências de DNA repetitivo, as quais foram denominadas PcP190EcoRI, PcP883EcoRI e PcP174PstI. A primeira sequência apresentou similaridade com os DNAr 5S disponíveis no GenBank e assim, adicionalmente, foi feito experimento para isolar o DNAr 5S de P. cuvieri. Foram obtidos dois fragmentos com cerca 201 e 690pb, localizados por double- FISH em cromossomos distintos. A sequência PcP190EcoRI mostrou similaridade de aproximadamente 70% com a região de transcrição de ambos os tipos de DNAr 5S, sugerindo a origem dessa sequência a partir do DNAr 5S. A hibridação in situ com sondas das três sequências de DNA repetitivo isoladas, nas três populações de P. cuvieri, em P. albonotatus e em P. centralis, mostrou que todas as regiões cromossômicas marcadas são coincidentes com regiões de banda C detectadas em estudo prévio. No entanto, as populações de P. cuvieri e as espécies estudadas diferem entre si pelo número e localização de marcações com sondas das três sequências. Essas sequências representam bons marcadores cromossômicos, já que permitiram demonstrar tanto variações interpopulacionais em P. cuvieri como também diferenças interespecíficas, corroborando a sugestão prévia de que as diferentes populações de P. cuvieri podem se tratar de um complexo de espécies crípticas. / Abstract: The genus Physalaemus is currently composed of 42 species, divided into seven groups. Within the Physalaemus cuvieri group are eight other species. Cytogenetic studies for some of the species within the genus show a diploid number of 2n = 22 and similar chromosome morphology. The aim of this research was to develop new cytogenetic markers to study the group of Physalaemus cuvieri. We studied three populations of P. cuvieri in addtion to two other species: P. albonotatus and P. centralis. We isolated three repetitive DNA sequences, which were named PcP190EcoRI, PcP883EcoRI and PcP174PstI. The former sequence showed similarities with the 5S rDNA available in GenBank and, therefore, an experiment was done to isolate the 5S rDNA of P. cuvieri. We obtained two fragments of about 201 bp and 690 bp, which were localized by double-FISH to distinct chromosomes. The PcP190EcoRI sequence showed approximately 70% similarity with the transcription regions of both types of 5S rDNA, suggesting the PcP190EcoRI sequence originated from the 5S rDNA. The three repetitive DNA sequences were detected by in situ hybridization to chromosomes from P. albonotatus, P. centralis and the three populations of P. cuvieri. These chromosome regions are coincident with C-bands detected in a previous study. Populations of P. cuvieri and others two species, however, differ by the number and location of the three sequences. These sequences seem to be good chromosomes markers since they were used to show interpopulational variation in P. cuvieri, as well interspecific differences. This supports the previous suggestion that different populations of P. cuvieri may be a complex of cryptic species. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Shirley Maria Recco Pimentel, Anete Pereira de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T04:15:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conte_Monica_D.pdf: 2562572 bytes, checksum: 5809c698460cf03316a75fff9039a861 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Muitas espécies de anfíbios estão entre as mais ameaçados de extinção, e no entanto, informações sobre a variabilidade genética e a estruturação genética das suas populações são ainda limitadas. No presente trabalho, a variabilidade genética de populações da espécie Physalaemus cuvieri foi analisada utilizando microssatélites como marcadores moleculares. Considerando-se sua ampla distribuição geográfica, variação morfológica interpopulacional e variação intra- e interpopulacional em algumas características citogenéticas, espécimes de dez populações de P. cuvieri foram amostradas, em São Pedro da Água Branca (MA), Urbana Santo (MA), Porto Nacional (TO), Uberlândia (MG), Vitória Brasil (SP), Palestina (SP), Nova Itapirema (SP), Chapada dos Guimarães (MT), Vitória da Conquista (BA) e Passo Fundo (RS). Dez locos de microssatélites de P. cuvieri foram isolados a partir de uma biblioteca enriquecida em repetições (CA)8 e (GT)8. A amplificação desses locos em 160 indivíduos de P. cuvieri revelou uma média de 5,7 alelos por loco e uma heterozigosidade esperada variando de 0,30 a 0,85. Embora a maior parte da variação genética esteja dentro das populações, o valor global do FST encontrado indica uma alta diferenciação entre essas populações. O baixo fluxo gênico encontrado sugere baixa capacidade dispersiva, no padrão de escala geográfica usado neste trabalho, e condiz com o comportamento filopátrico atribuído aos anuros. Nesse estudo foi ainda verificado que não existe correlação entre distância geográfica e distância genética das populações amostradas, sugerindo uma alta fidelidade dessa espécie aos seus locais de desova. Os resultados indicam que a distância geográfica sozinha não explica a variabilidade genética dessas populações. Duas populações, São Pedro da Água Branca (MA) e Nova Itapirema (SP), possivelmente passaram por efeito de gargalo populacional (bottleneck), que pode ser resultado, entre outros fatores, da destruição de habitat levando à fragmentação da população. Dos dez locos de microssatélites desenvolvidos para P. cuvieri, nove foram utilizados para verificar a possibilidade de amplificação e sua aplicabilidade no estudo da estrutura genética de duas outras espécies do grupo cuvieri muito proximamente relacionadas à P. cuvieri. Essas espécies são: P. ephippifer (15 indivíduos) e P. albonotatus (11). As duas populações estudadas ficaram isoladas das cinco de P. cuvieri, mostrando um alto grau de diferenciação genética, e indicando claramente sua condição de espécie distinta de P. cuvieri. A população de Crateús - CE agrupou com Urbano Santos - MA (ambas P. cuvieri). Este resultado corrobora os resultados de estudos citogenéticos. As populações de Porto Nacional (TO) e Passo Fundo (RS) formaram dois grupos de indivíduos cada uma. Parte dos indivíduos de Porto Nacional agrupou com a população de Uberlândia (MG) de P. cuvieri, e o restante dos indivíduos não mostrou nenhum agrupamento com qualquer outra população e espécies analisadas neste trabalho. Resultados semelhantes foram obtidos com a população de Passo Fundo, que não mostrou agrupamento com nenhuma outra população analisada. Estudos adicionais dessas populações serão necessários para melhor compreender esses dados. O conhecimento do padrão de dispersão da variabilidade genética de P. cuvieri, avaliada por microssatélites, somado ao conhecimento acumulado, obtido por meio de outras metodologias, poderá contribuir para a definição de estratégias de conservação e contribuir para o delineamento entre as fronteiras taxonômicas dessa espécie. / Abstract: Even though many amphibian species are among the most endangered animals, the knowledge about their genetic variability and population genetic structure is still limited. In the present work, natural populations of the barker frog Physalaemus cuvieri were analyzed for genetic variability and differentiation using microsatellites, considering its wide geographic distribution, interpopulational morphological variation and cytogenetic intra- and interpopulational variation. Analyzes comprised specimens from ten P. cuvieri populations sampled in the following regions of Brazil: São Pedro da Água Branca (MA), Urbano Santo (MA), Porto Nacional (TO), Uberlândia (MG), Vitória Brasil (SP), Palestina (SP), Nova Itapirema (SP), Chapada dos Guimarães (MT), Vitória da Conquista (BA) and Passo Fundo (RS). Ten microsatellite loci were isolated for P. cuvieri from a library enriched in (CA)8 and (GT)8 repeats. In 160 P. cuvieri individuals, the average number of alleles per locus was 5.7 and the expected heterozygosity ranged from 0.30 to 0.85. Although most of the genetic variation was found within populations, the overall FST value indicated high genetic differentiation among the populations. The low gene flow among populations suggested low dispersion capability within the geographic scale pattern used in this work, which is compatible with the anuran philopatric behavior. In addition, there was no correlation between geographic and genetic distances of these populations, suggesting fidelity of P. cuvieri populations to their spawning place. These results indicated that the geographic distance alone does not explain the genetic variability observed among these populations. The data also indicated that the populations from São Pedro da Água Branca (MA) and Nova Itapirema (SP), respectively in the Northeast and Southeast regions of Brazil, have likely gone through a recent population bottleneck effect. Destruction of natural habitats leading to population fragmentation could be a major cause of this suggested bottleneck effect. Of the ten microsatellite loci developed for P. cuvieri, nine were used to investigate cross-amplification and suitability for population genetic structure studies in two other species of the cuvieri group closely related to P. cuvieri. These species are: P. ephippifer (15 specimens) and P. albonotatus (11 specimens). These two populations remained isolated from all populations of P. cuvieri, demonstrating its high genetic differentiation, pointing that these two species are distinct from P. cuvieri. The Crateús (CE) population was grouped with Urbano Santos (MA) population (both P. cuvieri). This result corroborated previous cytogenetic results. The Porto Nacional (TO) and Passo Fundo (RS) populations were divided in two sets of individuals each one. Part of Porto Nacional individuals were clustering with P. cuvieri from Uberlândia (MG), and the remaining did not show any grouping with none of other analyzed species. Similar results were found to Passo Fundo population, which also did not show any group with the analyzed species. The knowledge of the dispersion pattern of the P. cuvieri genetic variability evaluated by microsatellites, in addition to the genetic variability data obtained using other methodologies, will contribute for the development of future ecological and conservation strategies and to improve the taxonomy of this species. / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Luciana Bolsoni Lourenço / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T06:46:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Quindere_YedaRumiSerraDouglas_M.pdf: 8609021 bytes, checksum: 5a91bb6ce1e8fff91e49eb0b18f73d2d (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O gênero Physalaemus é composto por 40 espécies divididas em sete grupos: ¿albifrons¿, ¿cuvieri¿, ¿deimaticus¿, ¿gracilis¿, ¿henselii¿, ¿olfersii¿ e ¿signifer¿. Nove espécies compõem o grupo "cuvieri" e dessas apenas P. cuvieri já teve seu cariótipo descrito com detalhes, tendo apresentado expressiva variação intra e interpopulacional em relação à localização de regiões organizadoras de nucléolo (NOR). Dado que P. Cuvieri apresenta ampla distribuição geográfica e que a variação mencionada foi encontrada em populações do sul e do sudeste do Brasil, no presente trabalho ampliamos seu estudo, com a análise cromossômica de quatro populações da região nordeste, uma da região norte e uma da região sudeste do Brasil. Adicionalmente uma população da Argentina também foi estudada. Com o intuito de comparar cariotipicamente P. cuvieri com outras espécies de Physalaemus, também foram estudados os cariótipos de P. albonotatus, P. centralis, P. cuqui e P. ephippifer, pertencentes ao grupo "cuvieri", P. albifrons, espécie recentemente removida desse grupo, e P. santafecinus atualmente do grupo de P. albifrons. Todas as populações de P. cuvieri aqui estudadas apresentaram cariótipo com 2n=22 cromossomos e grande variação em relação às NORs pôde ser observada. Duas populações de P. cuvieri (Urbano Santos-MA e Crateús-CE) apresentaram as NORs nos pares 8 e 9. No par 8, a NOR, de localização intersticial, mostrou-se adjacente a uma região de heterocromatina, enquanto a NOR presente no par 9 foi coincidente com um bloco heterocromático. Na população de São Pedro da Água Branca (MA), além dos pares 8 e 9, o par 7 foi também portador de NOR. Na população de Palmeiras (BA) e Uberlândia (MG), apenas um par cromossômico (8) foi portador de NOR. Na população mineira, diferenças intra-individuais foram encontradas principalmente em relação ao tamanho da NOR. Já nas populações da Argentina, a NOR intersticialmente localizada no o par cromossômico 8 não foi encontrada. Em todos os exemplares dessas populações argentinas, o par 11 foi portador de NOR e NORs adicionais foram encontradas nos cromossomos 1, 7 ou 8 (em posição pericentromérica) em alguns indivíduos. É interessante notar que o morfo 11 dessa população argentina é muito semelhante ao cromossomo 11 encontrado na população de Santa Maria (RS) analisada anteriormente. Já na população do estado de Tocantins, NORs múltiplas foram visualizadas em pelo menos cinco cromossomos (pertencentes aos pares 1, 3, 4 e 10), padrão que difere bastante daqueles encontrados nas outras populações de P. cuvieri. Também em relação ao padrão de distribuição de bandas heterocromáticas no cariótipo, a população de Tocantins analisada difere das demais, fato que intriga e corrobora a necessidade de uma revisão taxonômica da espécie em questão. A morfologia cariotípica de P. albifrons, P. albonotatus, P. centralis, P. cuqui, P. ephippifer e P. santafecinus foi muito semelhante, principalmente em relação aos primeiros pares cromossômicos, embora em P. albonotatus e P. cuqui a ordenação de alguns pares tenha sido diferente. Todas essas espécies puderam ser diferenciadas pela localização da NOR e em P.ephippifer um interessante heteromorfismo foi observado no par 8 portador de NOR em todas as fêmeas analisadas. Não foi descartada a hipótese de tal heteromorfismo estar relacionado à determinação sexual nessa espécie, no entanto, futuros estudos são necessários para sua comprovação. Exceto no cariótipo dos indivíduos de P. cuvieri de Tocantins, nos cariótipos aqui descritos a principal (ou única) NOR foi encontrada nos últimos pares cromossômicos, alterando a morfologia desses, o que dificultou a inferência de homeologias interespecíficas e dos possíveis rearranjos que envolveram a NOR durante a diferenciação das espécies em análise. Já com o bandamento C, algumas homeologias interespecíficas foram claramente notadas. Uma banda intersticial no braço curto do par 5, outras na região pericentromérica do braço curto dos pares 3 e 7, por exemplo, foram encontradas em P. cuvieri, P. centralis e P. ephippifer, e parecem homeólogas às encontradas nos pares classificados como 3, 5 e 7 no cariótipo de P. albonotatus / Abstract: The genus Physalaemus is composed by 41 species distributed in seven groups: ¿albifrons¿, ¿cuvieri¿, ¿deimaticus¿, ¿gracilis¿, ¿henselii¿, ¿olfersii¿ and ¿signifer¿. Nine species compose the group ¿cuvieri¿ but just P. cuvieri had already been karyotyped in details. Expressive intra and interpopulational variation related to the localization of the nucleolus organizer regions (NOR) was described for this species. Physalaemus cuvieri is widely geographically distributed and NOR variation was described based on populations from Southern and Southeastern Brazil. In the present work we analyzed the cytogenetic of four populations from Northeastern, one from Northern and one from Southeastern Brazil. Additionally, three Argentinian populations were also included. To cytogenetically compare P. cuvieri with other species of Physalaemus, species belonging to P. cuvieri group (i.e. P. albonotatus, P. centralis, P. cuqui and P. ephippifer), P. albifrons, recently removed from this group, and P. santafecinus, currently alocated in P. albifrons group, were also analyzed. All populations of P. cuvieri studied here showed diploid number of 22 chromosomes and high intraspecific variation was observed related to the NORs. Two populations of P. cuvieri (Urbano Santos, state of Maranhão (MA) and Crateús, state of Ceará (CE)) had pairs 8 and 9 as NOR-bearing chromosomes. In pair 8 the interstitial NOR was adjacent to C-bands whereas the NOR at the nineth pair was coincident with a heterochromatic block. In the population from São Pedro da Água Branca, state of Maranhão (MA), besides pairs 8 and 9, the seventh pair was also a NOR-bearing one. The specimens from Palmeiras, state of Bahia (BA) and Uberlândia, state of Minas Gerais (MG) showed only one NOR, which was located at pair 8. In the population from Uberlândia (MG) intraindividual differences was found related to the NOR size. In the populations from Argentina, the interstitial NOR in chromosome pair 8 was not found. In all the specimens of these Argentinean populations, pair 11 was the NOR-bearing chromosome pair and additional NORs were also found in chromosomes 1, 7 or 8 (in a pericentromeric position) in some of the individuals. The morph 11 of specimens from Argentina was very similar to the NOR-bearing eleventh pair described for specimens from Santa Maria (RS) previously analyzed. In contrast, in the population from Porto Nacional, state of Tocantins (TO), multiple NORs were visualized at least at five chromosomes (belonging to pair 1, 3, 4 and 10), a pattern that greatly differed from those found in the others populations of P. cuvieri. Also concerning the C-band distribution, the karyotype found in the population of Tocantins differed from the others. These findings are very interesting and can be useful for future taxonomic studies of this taxon. Regarding to chromosome morphology, P. albifrons, P. albonotatus, P. centralis, P. cuqui, P. ephippifer and P. santafecinus were very similar, specially for the seven first chromosome pairs, although in P. albonotatus and P. cuqui the position of some chromosome pairs was different. All the species could be differentiated by NOR localization and in P. ephippifer an interesting heteromorphism was detected in NOR bearing pair 8 of all the females. We do not discard the hypothesis that such heteromorphism could be related to sex determination in this species, but future studies are necessary to test it. Except for the karyotype of P. cuvieri from Tocantins, the karyotypes described here the principal (or only) NOR was found among the last chromosome pairs, resulting in different chromosome morphologies, what impaired interespecific inferences of homeologies and the recognition of possible rearrengements involving the NOR during the differentiation of the species analyzed. On the other hand, C-banding tecnique permitted to notice some interspecific homeologies. A band at an interstitial region in the short arm of pair 5, and pericentromeric C-bands in the short arm of pairs 3 and 7 were detected in P. cuvieri, P. centralis and P. ephippifer which seemed to be homeologous to C-bands found in pair 3, 5 and 7 of P. albonotatus / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural