Orientador: Wilma De Grava Kempinas / Texto em português e inglês / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-20T10:45:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perobelli_JulianaElaine_D.pdf: 9640563 bytes, checksum: dea242a152c4f569490c3cdf5d5010c1 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Os desreguladores endócrinos são agentes químicos capazes de agir como agonistas ou antagonistas dos hormônios endógenos, interferindo na homeostasia do organismo. Como o sistema endócrino tem papel crítico sobre o desenvolvimento e função do sistema genital, este pode ser considerado um alvo particularmente vulnerável a perturbações endócrinas. A literatura apresenta dados sobre a exposição aos antiandrogênicos durante a vida pré-natal e adulta e suas consequências sobre a função reprodutiva de machos. Entretanto, poucos estudos se atentaram para as consequências da privação androgênica durante a pré-puberdade sobre o sistema genital masculino. A pré-puberdade corresponde à fase em que o epidídimo, órgão reprodutor masculino responsável pela maturação e estocagem dos espermatozoides, passa por importantes mudanças morfofuncionais, além de consistir em período de maior susceptibilidade aos desreguladores endócrinos. O objetivo do presente estudo foi avaliar as possíveis consequências da privação de andrógenos durante a pré-puberdade sobre a morfofisiologia do sistema genital masculino de ratos púberes e adultos, com ênfase sobre o epidídimo e qualidade espermática. A escolha por um agente antiandrogênico foi devida à vasta exposição ambiental e ocupacional da população mundial a este grupo de contaminantes. Ratos machos da variedade Wistar foram alocados em: grupo flutamida (25mg/Kg/dia de flutamida, via oral, do dia pós natal 21 ao 44) e controle (óleo de milho, via oral, durante o mesmo período). Os animais foram avaliados aos 50 dias e 75 dias de idade. Foram analisados os níveis séricos dos hormônios sexuais (LH, FSH e testosterona), níveis de testosterona intratesticular, peso de órgãos, histologia testicular e epididimária, imunohistoquímica para marcação de receptor androgênico (AR), proteína espermática 22 (SP22), calmodulina (CALM) e Rab11A em tecido epididimário, além de marcação de CALM e Rab11A no testículo e western blot para AR no epidídimo. Avaliações adicionais foram realizadas nos animais de 75 dias, como comportamento sexual, fertilidade após acasalamento natural e inseminação artificial, motilidade e morfologia espermática, contagens espermáticas nos testículos e epidídimos, análise do perfil proteico de membrana espermática e contagem de células de Sertoli. No grupo tratado com flutamida, os animais púberes apresentaram redução do peso dos órgãos sexuais, relacionado à diminuição na testosterona sérica, além de alteração no padrão de imunomarcação para AR e CALM no epidídimo. Os demais parâmetros foram comparáveis entre os grupos experimentais. Nos animais de 75 dias de idade que receberam flutamida observou-se alteração no padrão de imunomarcação para AR, CALM e Rab11A no epidídimo, diminuição do potencial de fertilidade após inseminação artificial, comprometimento da motilidade espermática, diminuição do número de espermatozoides na cabeça/corpo e cauda do epidídimo, aceleração do trânsito espermático nestas regiões epididimárias e alteração na concentração de CALM e Rab11A na membrana espermática. Os demais parâmetros foram similares entre os grupos experimentais. Os resultados obtidos mostram que a privação de andrógenos durante a pré-puberdade causou alterações na qualidade dos espermatozóides prejudicando o potencial de fertilidade dos indivíduos na idade adulta. Tais resultados parecem estar associados a mudanças no perfil proteico da membrana dos espermatozoides e na expressão de determinadas proteínas no epitélio epididimário, sugerindo que o desenvolvimento pós-natal do epidídimo pode ter sido comprometido, acarretando danos funcionais permanentes ao órgão / Abstract: Endocrine disrupters are chemicals that can act as agonists or antagonists of endogenous hormones, interfering with the homeostasis of the organism. Since the endocrine system plays a critical role in the development and function of the male reproductive system, this is an especially vulnerable target of potential endocrine perturbations. The literature presents data on exposure to antiandrogens during the prenatal life and adulthood and its consequences on the male reproductive function. However, few studies have investigated the possible effects on the male reproductive system of rats after androgen deprivation during prepuberty. The prepubertal period comprehends the phase in which the epididymis, male reproductive organ responsible for the sperm maturation and storage, undergoes significant morphofunctional changes, besides being a period of more vulnerability to endocrine disrupters, possibly due to hormonal imprinting. The aim of this study was to evaluate the possible consequences of androgen deprivation during the prepuberty on morphophysiology of male reproductive system of pubertal and adult rats, focusing on the epididymis and sperm quality. The choice of an antiandrogen agent was due to extensive environmental and occupational exposure of the general population to this group of contaminants. For this purpose, Wistar male rats were divided into flutamide group (flutamide 25mg/Kg/day, orally, from postnatal day 21 to 44) and control group (corn oil, orally, during the same period). The animals were evaluated at 50 days and 75 days of age. At both ages it was evaluated the serum sexual hormone levels, intra-testicular testosterone levels, organ weights, testicular and epididymal histopathology, immunohistochemistry for androgen receptor (AR), sperm protein 22 (SP22), calmodulin (CALM) and Rab11A in epididymal tissue, besides immunostaining for CALM and Rab11A in the testis and Western blot for AR in the epididymis. Furthermore, additional parameters were assessed in 75-day-old animals, such as sexual behavior, fertility after natural mating and after artificial insemination, sperm motility and morphology, sperm counts in the testis and epididymis, proteomic of sperm membrane by bi-dimensional electrophoresis and Sertoli cells counts. Pubertal animals showed reduced reproductive organs weight, probably due to a decrease in serum testosterone and changes in the pattern of immunostaining for AR and CALM in the epididymis. The other parameters were comparable between the groups. In animals at 75 days old changes in the pattern of immunostaining for AR, CALM and Rab11A in the epididymis, decreased fertility potential after artificial insemination, impaired sperm motility, decrease in the sperm numbers in the caput/corpus and cauda epididymis, acceleration of sperm transit time through these epididymal regions, and modifications in three proteins of sperm membrane were observed. Other parameters were similar between the groups. The results show that androgen deprivation during prepuberty impairs sperm quality affecting the fertility potential of the animals at adulthood. These results seem to be related to the changes in protein profile of sperm membrane and protein expression in the epididymis, suggesting that the postnatal development of the epididymis may have been compromised, causing permanent damage to the organ function / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) DISSERTAÇÃO SILVIA MARIA MACHADO DA ROCHA.pdf: 1171835 bytes, checksum: 4a1062089a3e3193881755deba885339 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O câncer do colo do útero (CCU), de grande importância para saúde pública, sendo considerado o 4º tipo de câncer que mais acomete mulheres no mundo, possui como principal fator de risco infecções por papilomavírus humanos (HPVs). Aproximadamente 70% de mulheres com câncer de colo de útero encontram-se em regiões menos desenvolvidas, o que demonstra uma relação socioeconômica. Os papilomavírus pertencem à família Papillomaviridae, que abrangem mais de 40 gêneros, dos quais cinco são compostos de HPVs, com pelo menos 200 espécies já descritas associadas a infecções humanas. Estes vírus são envelopados, esféricos e possuem como genoma DNA de fita dupla. Os HPVs possuem tropismo por células epiteliais e infecções persistentes podem levar a transformações intraepiteliais progressivas com evolução para lesões precursoras do câncer cervical, e por fim câncer. A infecção por HPV é a infecção sexualmente transmissível (IST) mais comum em todo o mundo e a maioria das pessoas sexualmente ativas, homens e mulheres, terá contato com o vírus durante algum momento da vida. No presente estudo foram analisados o perfil citopatológico de pacientes atendidas em uma Unidade de Referência Secundária em Câncer Ginecológico do município de Belém/PA e a atividade do ácido caurenoico contra linhagens de câncer cervical. Para tanto houve a identificação do perfil dos achados microbiológicos e citopatológicos nos exames realizados pelo laboratório da Casa da Mulher, durante o período de um ano, sendo utilizados dados de 2.202 exames preventivos de câncer de colo de útero (PCCU), apresentando fraca correlação entre faixa etária e frequência de achados microbiológicos e alterações patológicas. Já os achados microbiológicos, apresentaram a presença de três espécies: Gardnerella vaginalis (23,48%), Candida sp. (12,44%) e Trichomonas vaginalis (0,68%). A prevalência de anormalidades citológicas correspondeu a 5,72%. As atipias celulares de significado indeterminado a 2,679%, e a proporção total das lesões neoplásicas potencialmente malignas foi de 1,09%. O aumento da cobertura de PCCU na população feminina precisa ser alcançado e a promoção da saúde deve ser efetivada por meio de parcerias intersetoriais, participação popular e responsabilização coletiva pela qualidade de vida. Já a avaliação do efeito genotóxico e mutagênico do ácido caurenoico (AC) em linhagens de câncer cervical foi realizada com a utilização de linhagens HeLa (HPV18-positivo), CaSki (HPV16-positivo) e C33A (HPV-negativo), sendo que o AC mostrou forte correlação positiva com os indicadores de genotoxicidade avaliados. Em concentrações elevadas, inibiu a expressão dos genes E6 e E7 de HPV, que interferem na regulação do ciclo celular. E, mesmo sendo observados efeitos genotóxicos, os ensaios apontaram para possibilidade do uso do AC como matéria-prima de agentes terapêuticos para câncer cervical com presença de HPV, assim como em pesquisas futuras sobre as funções de E6 e E7. / Cervical cancer (CC), which is of great importance for public health, is considered to be the 4th most common type of cancer in the world. Human papillomavirus (HPV) infections are the main risk factor. Approximately 70% of women with CC are in less developed regions, demonstrating a socioeconomic relationship. Papillomavirus belong to the family Papillomaviridae, with more than 40 genera, of which five are composed of HPVs, with at least 200 species already described associated with human infections. These virus are enveloped, spherical and have a double-stranded DNA genome. HPVs have tropism by epithelial cells and persistent infections can lead to progressive intraepithelial transformations with evolution to precursor lesions of cervical cancer, and finally cancer. HPV infection is the most common sexually transmitted infection in the world, and most sexually active people, men and women, will have contact with the virus at some point in their lives. In the present study, the cytopathological profile of patients treated at a Secondary Reference Unit in Gynecological Cancer of the city of Belém / PA and the activity of caurenoic acid against cervical cancer lines were analyzed. The profile of the microbiological and cytopathological findings was verified in the examinations carried out by the Casa da Mulher laboratory during a period of one year, using data from 2,202 cervical cancer preventive exams (PCCU), showing a weak correlation between age range and frequency of microbiological findings and pathological alterations. The microbiological findings were the presence of three species: Gardnerella vaginalis (23.48%), Candida sp. (12.44%) and Trichomonas vaginalis (0.68%). The prevalence of cytologic abnormalities corresponded to 5.72%. Atypia cells of undetermined significance corresponded to 2.679%, and the total proportion of potentially malignant neoplastic lesions was 1.09%. The increase in PCCU coverage in the female population needs to be achieved and health promotion must be effected through intersectoral partnerships, popular participation, and collective accountability for quality of life. On the other hand, the evaluation of the genotoxic and mutagenic effect of caurenoic acid (CA) in cervical cancer lines was performed using HeLa (HPV18-positive), CaSki (HPV16-positive) and C33A (HPV-negative). AC showed a strong positive correlation with the genotoxicity indicators evaluated. At high concentrations, it inhibited the expression of E6 and E7 HPV genes, which interfere with cell cycle regulation. Although genotoxic effects were observed, the assays pointed to the possibility of using CA as feedstock for therapeutic agents against cervical cancer with HPV, as well as future research on E6 and E7 functions.

A disfunção erétil (DE) tem alta prevalência entre hipertensos e tem sido considerada marcador precoce de risco cardiovascular. A presença e gravidade da DE bem como a resposta clínica aos inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) parecem depender da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) endotelial e da extensão da doença aterosclerótica. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta clínica da vardenafila usada em dois regimes terapêuticos em hipertensos com DE vasculogênica e sem doença cardiovascular maior, correlacionando a gravidade da DE e a eficácia da vardenafila com dados antropométricos, laboratoriais, escore de risco cardiovascular e parâmetros vasculares funcionais e estruturais. A resposta clínica à vardenafila nos dois regimes foi avaliada conforme o percentual de respostas positivas à questão 3 do Perfil do Encontro Sexual (PES3). Os parâmetros vasculares considerados foram a espessura médio-intimal (EMI) da carótida comum, a dilatação mediada pelo fluxo (DMF) da artéria braquial e a dilatação nitrato-mediada (DNM). Foram incluídos 100 homens hipertensos com idade entre 50 e 70 anos, sendo 74 portadores de DE vasculogênica e 26 com função erétil normal que serviram de grupo controle. Nos pacientes com DE, o índice de massa corporal, relação cintura-quadril, EMI da carótida, níveis séricos de triglicerídeos, colesterol total e LDL foram significativamente maiores que no grupo controle. Após o uso de vardenafila on demand (fase 1), os pacientes com mais de 50% de respostas positivas ao PES3 ou 50% de respostas afirmativas e um incremento de 6 pontos ou mais em relação ao Índice Internacional de Função Erétil (IIEF-FE) basal e/ou resposta positiva a Questão de Avaliação Global (QAG), foram considerados respondedores. O escore do IIEF-FE basal se correlacionou negativamente com a EMI da carótida (r=-0,48, P<0,001) e com o escore de Framingham (r= -0,41, P<0,001) no grupo com DE. Houve forte correlação positiva entre a resposta clínica à vardenafila com a DMF (r= 0,70, P<0,001), que não se observou entre o sub-grupo de diabéticos. Os 35 pacientes considerados não-respondedores na fase 1 foram randomizados e, em desenho duplo-cego, receberam vardenafila ou placebo diariamente durante cinco semanas, podendo usar 10 mg de vardenafila uma hora antes da atividade sexual (fase2). Houve resposta clínica positiva em 38,8% dos que receberam a vardenafila na fase 2 e esta resposta se correlacionou com a frequência sexual (r= 0,68, P<0,01) e com o escore de Framingham (r= -0,65, P<0,01), com a EMI da carótida (r= -0,61, P=0,01) e com o LDL-colesterol (r= -0,64, P<0,01). A vardenafila foi bem tolerada em ambos os regimes terapêuticos. Concluímos que nessa amostra de hipertensos, a gravidade da DE foi relacionada a parâmetros vasculares estruturais (EMI), enquanto a resposta clínica à vardenafila on demand foi mais diretamente dependente da função vascular momentânea (DMF). Houve benefício na utilização de vardenafila diariamente com o objetivo de resgatar a eficácia do inibidor quanto à melhora do desempenho sexual. A falta de eficácia clínica ao inibidor da PDE5 em ambos os regimes terapêuticos pode servir como marcador clínico que identifica homens hipertensos com um risco cardiovascular aumentado. / Erectile dysfunction (ED) is a high prevalent disease in hypertensive subjects and has been considered an early cardiovascular risk marker. EDs presence and severity, as well as clinical response to phosfodiesterase type 5 (PDE5) inhibitors, vary according to nitric oxide (NO) availability and atherosclerosis extension. We investigated whether vasculogenic ED severity and clinical response to vardenafil used on demand or continuously were associated with structural and functional vascular changes in patients with uncomplicated hypertension. Our main efficacy criterion was per patient percentage of positive answers on Sexual Encounter Profile question 3(SEP3). Vascular parameters considered were intima-media thickness (IMT), flow-mediated dilation (FMD) on brachial artery and nitrate-mediated dilation. A total of 100 hypertensive men aging between 50 and 70 years were included. Among these patients, 74 had vasculogenic ED and 26 presented normal erectile function according to erectile domain of International Index of Erectile Function (IIEF-EF). Among those with ED, body mass index, waist-rip ratio, carotid IMT, triglycerides, total cholesterol and LDL-cholesterol were significantly higher than controls. After vardenafil on demand usage during phase 1, patients with more than 50% of positive answers on SEP3 or 50% and more than 6 points on IIEF basal score or positive answer to global evaliation question were considered responders. IIEF basal score correlated inversely with carotid IMT (r=-0.48, P<0.001) and with Framingham risk score (r= -0.41, P<0.001) in ED group. Clinical response to vardenafil strongly correlated with FMD (r= 0.70, P<0.001), except among diabetics. Non responders (n=35) on phase 1 were included on phase 2 when, after randomization, they received vardenafil 10 mg nightly or placebo during five weeks. Open vardenafil on demand were allowed one hour before sexual intercourse, and 38.8% of active group improved and became responders to vardenafil. Clinical response on phase 2 correlated with sexual frequency (r= 0.68, P<0.01), Framingham score (r= -0.65, P<0.01), carotid IMT (r= -0.61, P=0.01) and LDL-cholesterol (r= -0.64, P<0.01). We concluded that in hypertensive males with vasculogenic ED and no other clinical evidence of atherosclerosis, ED severity correlated with structural parameters (carotid IMT), while phosphodiesterase-5 effectiveness correlated with functional vascular aspects (brachial FMD). There were positive impact with continuous vardenafil on non responders to on demand regime and that could be an option to salvage strategy. Lack of PDE5 inhibitor efficacy in both therapeutic strategies could point out to higher cardiovascular risk and could be considered a useful clinical marker.

A disfunção erétil (DE) tem alta prevalência entre hipertensos e tem sido considerada marcador precoce de risco cardiovascular. A presença e gravidade da DE bem como a resposta clínica aos inibidores da fosfodiesterase tipo 5 (PDE5) parecem depender da biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) endotelial e da extensão da doença aterosclerótica. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta clínica da vardenafila usada em dois regimes terapêuticos em hipertensos com DE vasculogênica e sem doença cardiovascular maior, correlacionando a gravidade da DE e a eficácia da vardenafila com dados antropométricos, laboratoriais, escore de risco cardiovascular e parâmetros vasculares funcionais e estruturais. A resposta clínica à vardenafila nos dois regimes foi avaliada conforme o percentual de respostas positivas à questão 3 do Perfil do Encontro Sexual (PES3). Os parâmetros vasculares considerados foram a espessura médio-intimal (EMI) da carótida comum, a dilatação mediada pelo fluxo (DMF) da artéria braquial e a dilatação nitrato-mediada (DNM). Foram incluídos 100 homens hipertensos com idade entre 50 e 70 anos, sendo 74 portadores de DE vasculogênica e 26 com função erétil normal que serviram de grupo controle. Nos pacientes com DE, o índice de massa corporal, relação cintura-quadril, EMI da carótida, níveis séricos de triglicerídeos, colesterol total e LDL foram significativamente maiores que no grupo controle. Após o uso de vardenafila on demand (fase 1), os pacientes com mais de 50% de respostas positivas ao PES3 ou 50% de respostas afirmativas e um incremento de 6 pontos ou mais em relação ao Índice Internacional de Função Erétil (IIEF-FE) basal e/ou resposta positiva a Questão de Avaliação Global (QAG), foram considerados respondedores. O escore do IIEF-FE basal se correlacionou negativamente com a EMI da carótida (r=-0,48, P<0,001) e com o escore de Framingham (r= -0,41, P<0,001) no grupo com DE. Houve forte correlação positiva entre a resposta clínica à vardenafila com a DMF (r= 0,70, P<0,001), que não se observou entre o sub-grupo de diabéticos. Os 35 pacientes considerados não-respondedores na fase 1 foram randomizados e, em desenho duplo-cego, receberam vardenafila ou placebo diariamente durante cinco semanas, podendo usar 10 mg de vardenafila uma hora antes da atividade sexual (fase2). Houve resposta clínica positiva em 38,8% dos que receberam a vardenafila na fase 2 e esta resposta se correlacionou com a frequência sexual (r= 0,68, P<0,01) e com o escore de Framingham (r= -0,65, P<0,01), com a EMI da carótida (r= -0,61, P=0,01) e com o LDL-colesterol (r= -0,64, P<0,01). A vardenafila foi bem tolerada em ambos os regimes terapêuticos. Concluímos que nessa amostra de hipertensos, a gravidade da DE foi relacionada a parâmetros vasculares estruturais (EMI), enquanto a resposta clínica à vardenafila on demand foi mais diretamente dependente da função vascular momentânea (DMF). Houve benefício na utilização de vardenafila diariamente com o objetivo de resgatar a eficácia do inibidor quanto à melhora do desempenho sexual. A falta de eficácia clínica ao inibidor da PDE5 em ambos os regimes terapêuticos pode servir como marcador clínico que identifica homens hipertensos com um risco cardiovascular aumentado. / Erectile dysfunction (ED) is a high prevalent disease in hypertensive subjects and has been considered an early cardiovascular risk marker. EDs presence and severity, as well as clinical response to phosfodiesterase type 5 (PDE5) inhibitors, vary according to nitric oxide (NO) availability and atherosclerosis extension. We investigated whether vasculogenic ED severity and clinical response to vardenafil used on demand or continuously were associated with structural and functional vascular changes in patients with uncomplicated hypertension. Our main efficacy criterion was per patient percentage of positive answers on Sexual Encounter Profile question 3(SEP3). Vascular parameters considered were intima-media thickness (IMT), flow-mediated dilation (FMD) on brachial artery and nitrate-mediated dilation. A total of 100 hypertensive men aging between 50 and 70 years were included. Among these patients, 74 had vasculogenic ED and 26 presented normal erectile function according to erectile domain of International Index of Erectile Function (IIEF-EF). Among those with ED, body mass index, waist-rip ratio, carotid IMT, triglycerides, total cholesterol and LDL-cholesterol were significantly higher than controls. After vardenafil on demand usage during phase 1, patients with more than 50% of positive answers on SEP3 or 50% and more than 6 points on IIEF basal score or positive answer to global evaliation question were considered responders. IIEF basal score correlated inversely with carotid IMT (r=-0.48, P<0.001) and with Framingham risk score (r= -0.41, P<0.001) in ED group. Clinical response to vardenafil strongly correlated with FMD (r= 0.70, P<0.001), except among diabetics. Non responders (n=35) on phase 1 were included on phase 2 when, after randomization, they received vardenafil 10 mg nightly or placebo during five weeks. Open vardenafil on demand were allowed one hour before sexual intercourse, and 38.8% of active group improved and became responders to vardenafil. Clinical response on phase 2 correlated with sexual frequency (r= 0.68, P<0.01), Framingham score (r= -0.65, P<0.01), carotid IMT (r= -0.61, P=0.01) and LDL-cholesterol (r= -0.64, P<0.01). We concluded that in hypertensive males with vasculogenic ED and no other clinical evidence of atherosclerosis, ED severity correlated with structural parameters (carotid IMT), while phosphodiesterase-5 effectiveness correlated with functional vascular aspects (brachial FMD). There were positive impact with continuous vardenafil on non responders to on demand regime and that could be an option to salvage strategy. Lack of PDE5 inhibitor efficacy in both therapeutic strategies could point out to higher cardiovascular risk and could be considered a useful clinical marker.