Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Rogerio Troian.pdf: 1860424 bytes, checksum: ba62f125166320434b87b83d216fc4e4 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Paracoccidioides brasiliensis, a thermodimorphic fungus, is the causative agent of paracoccidioidomycosis (PCM), a prevalent systemic mycosis in Latin America. Pathogenicity appears to be intimately related to the dimorphic transition from the hyphal to the yeast form, which is induced by a shift from environmental temperature to the temperature of the mammalian host. To cope with nutrient deprivation during the infection process, a number of pathogens employ the glyoxylate cycle (GC) to utilize fatty acids as carbon sources. The genes which constitute this pathway have been implicated in pathogenesis. An important aspect in the interaction between P.brasiliensis and your host is the ability to adhere to matrix extracelular components. In this work has shown that the isocitrate lyase of P. brasiliensis (PbICL) is located in the cell wall and also in the cytoplasm. PbICL recombinant and polyclonal antibody were able to inhibit the interaction of P. brasiliensis to epithelial cell cultures in vitro. Was also evaluated the ability of PbICL recombinant to connect the components of the extracellular matrix such as laminin, fibronectin, collagen type I and IV. These results suggest that PbICL is necessary to interaction between molecules of the extracellular matrix and P.brasiliensis, and that this interaction is crucial in adhesion and invasion of the fungus to the host cells. The kinetic parameters of PbICLr were determined. The sequence coding for methylisocitrate lyase of P. brasiliensis (PbmeICL) and the recombinant protein PbmeICLr were obtained. / Paracoccidioides brasiliensis, um fungo termodimórfico, é o agente causador da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica prevalente da América Latina. A patogenicidade aparenta estar intimamente relacionada com a transição dimórfica da fase de micélio para levedura presente no hospedeiro. Para suprir a deficiência de nutrientes durante o processo de infecção, alguns patógenos empregam o ciclo do glioxalato (CG) na utilização de ácidos graxos como fontes de carbono. Os genes que constituem esta via têm sido relacionados à patogênese. Um aspecto importante na interação entre P. brasiliensis e seu hospedeiro é a habilidade do fungo em aderir aos componentes da matriz extracelular. Nesse trabalho foi demonstrado que a isocitrato liase de P. brasiliensis (PbICL) está localizada na parede celular e também no citoplasma. PbICL recombinante (PbICLr) e o seu respectivo anticorpo policlonal foram capazes de inibir a interação de P. brasiliensis às culturas de células epiteliais in vitro. Foi avaliada também a capacidade da PbICLr de se ligar a componentes da matriz extracelular, como laminina, fibronectina, colágeno tipo I e IV. Esses resultados sugerem que PbICL é necessária para interação entre P. brasiliensis e moléculas da matriz extracelular, sendo essa interação fundamental na aderência e invasão do fungo às células do hospedeiro. Os parâmetros cinéticos da PbICLr foram determinados. A sequência que codifica para a metilisocitrato liase de P. brasiliensis (PbmeICL), bem como a proteína recombinante PbmeICLr foram obtidas.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-23Bitstream added on 2014-06-13T20:35:42Z : No. of bitstreams: 1 silva_lj_me_sjrp.pdf: 1135399 bytes, checksum: 5c78b7f4373a9244db399ef5e02efdad (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os polímeros microbianos extracelulares (exo-biopolímeros) são moléculas que apresentam um grande potencial de aplicação nas indústrias de alimentos, farmacêuticas, petrolíferas, de cosméticos, têxteis, de papéis, tintas, produtos agrícolas entre outras. Como biorremediadores, podem ser utilizados na remoção de metais pesados em ambientes aquáticos poluídos, atuando como agentes de biossorção por meio da acumulação de nutrientes a partir do meio ambiente. O objetivo do trabalho foi a produção de exobiopolímeros a partir de três Ascomicetos endofíticos (Colletotrichum sp., Guignardia sp. e Phomopsis sp.). Foi selecionado o fungo que apresentou a maior produção desse material biológico. Tanto esse exo-biopolímero quanto a biomassa foram avaliados quanto aos seus potenciais de biossorção dos íons metálicos chumbo (Pb+2) e cádmio (Cd+2). Para a obtenção do meio de cultivo utilizado para a produção de exo-biopolímeros, foram testados o meio mínimo de sais de Vogel modificado com diferentes fontes de nitrogênio definidas e glicose como única fonte de carbono. Em seguida, foi realizado um planejamento fatorial 3(3-0) com 27 experimentos em duplicata, onde as variáveis independentes foram o tempo, temperatura de cultivo e a concentração inicial de glicose. O fungo Colletotrichum sp. apresentou a maior produção de exo-biopolímero (5,71 gL-1) utilizando a uréia como fonte de nitrogênio, em cultivo a 28 ºC, 150 rpm e glicose 6 % (p/v) em 192 horas de cultivo. A execução do planejamento fatorial demonstrou que a produção de biomassa seca foi favorecida por faixas de temperatura e concentração inicial de glicose entre 24 e 32 ºC e 35 e 75 gL-1, respectivamente. A produção de exo-biopolímero foi favorecida por faixas de temperatura e concentração... / The microbial extracellular polymer (exo-biopolymers) are molecules that have a great potential for application in the industries of food, pharmaceutical, oil, cosmetics, textiles, paper, paints, agricultural products and others. As bioremediation, can be used in the removal of heavy metals in polluted aquatic environments, acting as agents of bioremediation through the accumulation of nutrients from the environment. Objective of this study was to produce exo-biopolymer from three endophytic Ascomycota (Colletotrichum sp., Guignardia sp. and Phomopsis sp.). Then, was selected the fungus that showed the highest production of exobiopolymer. Both the exo-biopolymer and biomass were assessed for their potential of biosorption of metallic ions lead (Pb+2) and cadmium (Cd+2). To obtain the culture medium used for the production of exo-biopolymers, was tested a minimal medium salts of Vogel modified with different nitrogen sources and glucose defined as the only carbon source. Next, was performed a factorial design 3(3-0) with 27 experiments in duplicate, where the independent variables were the time and temperature of cultivation and the initial concentration of glucose. Colletotrichum sp. had the highest production of exo-biopolymer (5.71 gL-1) using urea as the nitrogen source in cultivation at 28 ºC, 150 rpm, and glucose 6% (w/v) in 192 hours of culture. The implementation of the factorial design showed that the dry biomass production was enhanced by a range of temperatures and initial concentration of glucose between 24 and 32 ºC and 35 and 75 gL-1, respectively. The production of exobiopolymer was favored by a range of temperatures and initial concentration of glucose between 24 and 36 ºC and 35 and 70 gL-1, respectively. In the experiment, the fungus Colletotrichum sp. produced 6.11 gL-1 of... (Complete abstract click electronic access below)