Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5174_1.pdf: 2256316 bytes, checksum: 17f48cbb68279e09cc75129bfa86b4e4 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / As Sigatokas negra e amarela, causadas pelos fungos Mycosphaerella fijiensis e M. musicola, respectivamente, provocam graves prejuízos à bananicultura em todo o Mundo. A Sigatoka negra encontra-se distribuída no Brasil, exceto na Região Nordeste, e nos Estados do Rio de Janeiro, Espírito Santo, Goiás e Tocantins, enquanto a Sigatoka amarela é encontrada em todo o território nacional. O conhecimento da diversidade genética destes fungos é fundamental para o delineamento de estratégias de controle e tem sido estudada nos níveis local, regional, continental e global pelo uso de marcadores moleculares. A detecção da diversidade patogênica dos isolados também contribui para a compreensão da dinâmica das populações dos fungos e suas estratégias de estabelecimento em novas regiões. No Brasil essas informações ainda são escassas. Neste estudo objetivamos avaliar as diversidade genética e patogênica de M. fijiensis na Região Norte e Mato Grosso e analisar a variabilidade genética de isolados de M. musicola em Pernambuco, segundo maior produtor de banana da Região Nordeste e onde o fungo está estabelecido há muitos anos. Para tanto, foi necessário estabelecer previamente um novo sistema de cultivo que promovesse condições favoráveis ao crescimento micelial de M. musicola in vitro, baseado na avaliação da influência de diferentes meios de cultura, combinações de fontes de carbono e nitrogênio, valores de pH e regimes luminosos. O meio de cultura BDA/IFB, com o valor final de pH ajustado para 5,7, em regime de escuro contínuo, foi estabelecido como o melhor para o crescimento do fungo. A diversidade genética de 28 isolados de M. musicola foi então avaliada mediante a análise por RAPD, tendo sido obtidas 78 bandas, das quais 24 polimórficas, detectando-se elevada variabilidade genética entre os isolados coletados em nove municípios do Estado de Pernambuco, sem correlação clara entre a diversidade flagrada e as origens geográficas dos isolados. Quando a diversidade genética de M. fijiensis foi avaliada pela mesma técnica, foram obtidas 184 bandas distintas, sendo 158 polimórficas. A análise de clusters sugere a existência de uma elevada variabilidade genética do fungo entre os grupos formados e baixa dentro dos grupos. Estas conclusões foram confirmadas pelo estudo dos haplótipos gerados por AFLP, após análise de 298 bandas, sendo 264 polimórficas, para 42 isolados. A diversidade genética de M. fijiensis também foi avaliada pela análise das seqüências de ITS do DNA ribossomal e confirmam, na maior parte, as conclusões obtidas com as demais técnicas, ainda que gerando menor polimorfismo (apenas 4 posições polimórficas nas duas seqüências ITS). Nenhuma das duas análises permitiu identificar uma correlação clara entre padrão genético e origem geográfica, mas os marcadores AFLP e, em menor escala, o RAPD, mostraram-se muito mais poderosos como ferramentas para o estudo da diversidade intra-específica de M. fijiensis do que a análise de ITS. A demonstração da existência de diversidade patogênica entre os isolados deste fungo foi obtida a partir da inoculação em genótipos usados como diferenciadores. As reações individuais dos isolados-genótipos hospedeiros observadas revelaram a existência de variabilidade patogênica entre as populações brasileiras de M. fijiensis. A rápida disseminação do M. fijiensis no país, aliada a sua grande capacidade de recombinação gênica, e o elevado nível de variabilidade genética detectado entre os isolados de M. musicola no Estado de Pernambuco, são fatores preocupantes para a bananicultura local por ser o cultivo realizado basicamente por pequenos agricultores que utilizam cultivares suscetíveis às duas Sigatokas

Os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) têm papel fundamental na absorção de nutrientes, sobrevivência vegetal e na estruturação dos solos. Recentemente uma série de pesquisadores verificou que plantas associadas com FMA também podem se associar com os fungos de micélio escuro (DSE do inglês, dark septate endophytes). Embora de estudo recente, já se observou que os endófitos de micélio escuro igualmente podem promover o crescimento de plantas em diversos ambientes. O objetivo desse trabalho é realizar um levantamento de espécies de FMA e DSE em áreas de Mata Atlântica em um gradiente altitudinal, podendo advir respostas de relevância ecológica maior, como a influência da planta hospedeira, dos parâmetros do solo, da sazonalidade e da altitude sobre a ocorrência e diversidade desses fungos. Espera-se também esclarecer melhor a lacuna existente no conhecimento dos benefícios dos DSE para as plantas e dar o primeiro passo para a compreenção da interação dos FMA com os DSE. Avaliaram-se os atributos químicos, físicos e microbiológicos do solo e, entre estes, a ocorrência e diversidade dos FMA e DSE na raiz e solo rizosférico de diferentes espécies arbóreas da Mata Atlântica do Parque Estadual da Serra do Mar, Estado de São Paulo, Brasil, em um gradiente altitudinal: 80m, 600m e 1000m. As coletas de solo e raízes foram realizadas em quatro estações. Os dados foram submetidos à análise de variância ANOVA, teste LSD, análise canônica discriminante (ACD) e análise de redundância (RDA). Uma vez que muitas espécies de DSE são conhecidas por serem patogênicas sobre certas plantas, os isolados de DSE foram avaliados quanto à sua eventual patogenicidade. Os isolados não patogênicos foram selecionados para um bio-teste, sozinhos ou em combinação com um FMA em plantas de arroz. Foram identificadas no solo rizosférico 58 espécies de FMA e os gêneros Acaulospora e Glomus foram dominantes, enquanto que nas raízes, apenas 14 grupos de FMA foram encontrados e todos apresentaram elevada similaridade com a família Glomeraceae. Foram encontrados 251 isolados de DSE que se agruparam em 35 UTO. A maioria dos isolados de DSE foram patogênicos para as plantas de arroz. A época de amostragem teve efeito sobre a colonização radicular e diversidade dos FMA. A altitude foi importante em selecionar espécies de FMA e também agiu sobre o número de esporos e colonização por DSE e FMA. A maioria dos FMA e DSE ocorreu de forma generalizada nas diferentes espécies hospedeiras, apesar de existirem algumas espécies fúngicas com preferências para certas árvores. Os atributos do solo tiveram forte influência sobre a colonização pelos FMA, enquanto que para os DSE as diferenças na colonização foram pouco infuenciadas pelos parâmetros do solo. No entanto, as propriedades do solo foram responsáveis por dirigir a ocorrência de certas espécies de FMA e DSE. A interação entre FMA e DSE e os seus benefícios para as plantas hospedeiras ainda necessita de maiores estudos principalmente com relação a compreenção das condições fornecidas em experimentos que favoreçam ambas as associações. / Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) play a fundamental role in the absorption of nutrients, plant survival and soil structure. Recently a number of researchers found that plants associated with AMF may also be associated with dark mycelium fungi. In a recent study, it was observed that the dark septate endophytes (DSE), usually Ascomycetes, can promote the growth of plants in different environments. The aim of this study was to survey the diversity of AMF and DSE in Atlantic Forest areas in altitudinal gradients, which result in responses of greater ecological relevance, as the influence of the host plant, soil attributes, seasonality and altitude on occurrence and diversity of these fungi. We also expect to clarify the gap in the knowledge of the benefits of DSE for plants and take the first step towards the comprehension of the interaction of AMF and DSE. We evaluated the chemical, physical and microbiological attributes, and among these, the occurrence and diversity of AMF and DSE in the root and rhizospheric soil of different tree species of the Atlantic Forest of Serra do Mar State Park, State of Sao Paulo, Brazil, along an altitudinal gradient: 80m, 600m and 1000m. Samplings of the soil and roots were performed in four seasons. The data were submitted to ANOVA, LSD test, canonical discriminant analysis (CDA) and redundancy discriminant analysis (RDA). Since many species of DSE are known to be pathogenic on certain plants, DSE fungal isolates were evaluated for their eventual pathogenic activity. The isolates non-pathogenic were used in a bio-test to either alone or in combination with the AMF in rice plants. In the rhizosphere 58 AMF species were identified. The genera Acaulospora and Glomus were predominant. However, in the roots, only 14 AMF sequences were found and all had high similarity to the family Glomeraceae. In an analysis of the DNA ITS sequences of the 251 DSE isolates we found that they clustered into 35 UTOs. Most DSE found were considered pathogenic for rice. The season had no effect on root colonization and AMF diversity. Altitude was important in selecting AMF species and also acted on the number of spores and colonization by AMF and DSE. Most of the AMF and DSE were generalists, without a specificity for host plants, although there are some fungal species with preferences for certain trees. The soil properties had a strong influence on colonization by AMF while, for the DSE, differences in colonization do not seem to be related to soil attributes. However, soil attributes were responsible for directing the diversity of AMF and also of DSE species. The interaction between AMF and DSE and their benefits to the host plants require further studies to comprehend the conditions that favor both associations.

Os fungos micorrízicos arbusculares (FMA) têm papel fundamental na absorção de nutrientes, sobrevivência vegetal e na estruturação dos solos. Recentemente uma série de pesquisadores verificou que plantas associadas com FMA também podem se associar com os fungos de micélio escuro (DSE do inglês, dark septate endophytes). Embora de estudo recente, já se observou que os endófitos de micélio escuro igualmente podem promover o crescimento de plantas em diversos ambientes. O objetivo desse trabalho é realizar um levantamento de espécies de FMA e DSE em áreas de Mata Atlântica em um gradiente altitudinal, podendo advir respostas de relevância ecológica maior, como a influência da planta hospedeira, dos parâmetros do solo, da sazonalidade e da altitude sobre a ocorrência e diversidade desses fungos. Espera-se também esclarecer melhor a lacuna existente no conhecimento dos benefícios dos DSE para as plantas e dar o primeiro passo para a compreenção da interação dos FMA com os DSE. Avaliaram-se os atributos químicos, físicos e microbiológicos do solo e, entre estes, a ocorrência e diversidade dos FMA e DSE na raiz e solo rizosférico de diferentes espécies arbóreas da Mata Atlântica do Parque Estadual da Serra do Mar, Estado de São Paulo, Brasil, em um gradiente altitudinal: 80m, 600m e 1000m. As coletas de solo e raízes foram realizadas em quatro estações. Os dados foram submetidos à análise de variância ANOVA, teste LSD, análise canônica discriminante (ACD) e análise de redundância (RDA). Uma vez que muitas espécies de DSE são conhecidas por serem patogênicas sobre certas plantas, os isolados de DSE foram avaliados quanto à sua eventual patogenicidade. Os isolados não patogênicos foram selecionados para um bio-teste, sozinhos ou em combinação com um FMA em plantas de arroz. Foram identificadas no solo rizosférico 58 espécies de FMA e os gêneros Acaulospora e Glomus foram dominantes, enquanto que nas raízes, apenas 14 grupos de FMA foram encontrados e todos apresentaram elevada similaridade com a família Glomeraceae. Foram encontrados 251 isolados de DSE que se agruparam em 35 UTO. A maioria dos isolados de DSE foram patogênicos para as plantas de arroz. A época de amostragem teve efeito sobre a colonização radicular e diversidade dos FMA. A altitude foi importante em selecionar espécies de FMA e também agiu sobre o número de esporos e colonização por DSE e FMA. A maioria dos FMA e DSE ocorreu de forma generalizada nas diferentes espécies hospedeiras, apesar de existirem algumas espécies fúngicas com preferências para certas árvores. Os atributos do solo tiveram forte influência sobre a colonização pelos FMA, enquanto que para os DSE as diferenças na colonização foram pouco infuenciadas pelos parâmetros do solo. No entanto, as propriedades do solo foram responsáveis por dirigir a ocorrência de certas espécies de FMA e DSE. A interação entre FMA e DSE e os seus benefícios para as plantas hospedeiras ainda necessita de maiores estudos principalmente com relação a compreenção das condições fornecidas em experimentos que favoreçam ambas as associações. / Arbuscular mycorrhizal fungi (AMF) play a fundamental role in the absorption of nutrients, plant survival and soil structure. Recently a number of researchers found that plants associated with AMF may also be associated with dark mycelium fungi. In a recent study, it was observed that the dark septate endophytes (DSE), usually Ascomycetes, can promote the growth of plants in different environments. The aim of this study was to survey the diversity of AMF and DSE in Atlantic Forest areas in altitudinal gradients, which result in responses of greater ecological relevance, as the influence of the host plant, soil attributes, seasonality and altitude on occurrence and diversity of these fungi. We also expect to clarify the gap in the knowledge of the benefits of DSE for plants and take the first step towards the comprehension of the interaction of AMF and DSE. We evaluated the chemical, physical and microbiological attributes, and among these, the occurrence and diversity of AMF and DSE in the root and rhizospheric soil of different tree species of the Atlantic Forest of Serra do Mar State Park, State of Sao Paulo, Brazil, along an altitudinal gradient: 80m, 600m and 1000m. Samplings of the soil and roots were performed in four seasons. The data were submitted to ANOVA, LSD test, canonical discriminant analysis (CDA) and redundancy discriminant analysis (RDA). Since many species of DSE are known to be pathogenic on certain plants, DSE fungal isolates were evaluated for their eventual pathogenic activity. The isolates non-pathogenic were used in a bio-test to either alone or in combination with the AMF in rice plants. In the rhizosphere 58 AMF species were identified. The genera Acaulospora and Glomus were predominant. However, in the roots, only 14 AMF sequences were found and all had high similarity to the family Glomeraceae. In an analysis of the DNA ITS sequences of the 251 DSE isolates we found that they clustered into 35 UTOs. Most DSE found were considered pathogenic for rice. The season had no effect on root colonization and AMF diversity. Altitude was important in selecting AMF species and also acted on the number of spores and colonization by AMF and DSE. Most of the AMF and DSE were generalists, without a specificity for host plants, although there are some fungal species with preferences for certain trees. The soil properties had a strong influence on colonization by AMF while, for the DSE, differences in colonization do not seem to be related to soil attributes. However, soil attributes were responsible for directing the diversity of AMF and also of DSE species. The interaction between AMF and DSE and their benefits to the host plants require further studies to comprehend the conditions that favor both associations.

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T09:33:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcolino_VanessaAparecida_M.pdf: 839024 bytes, checksum: 8221cbe35310ad99667b00c446ed7dc1 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O consumo de bebida de uva pasteurizada, pronta para beber, vem aumentando nos últimos anos no Brasil. No ano de 2001, o consumo nacional foi de 11 milhões de litros, enquanto que nos primeiros 9 meses de 2002 este valor já ultrapassou 17 milhões, segundo Tetra Pak (2002). Com intuito de melhorar a qualidade microbiológica do produto, desde o início de sua produção até o final da linha de processo, foi realizada esta pesquisa, com base na investigação da presença de bolores termoresistentes e não termoresistentes em bebida com pH: 3,0 e o Brix: 14, produzida a partir das variedades Ceiber e Concordia. As análises realizadas incluíram desde a matéria-prima até o produto final, além da verificação da microbiota fúngica após 3 meses de vida útil do produto, a fim de se obter um produto microbiologicamente estável sob condições de armazenamento e, portanto, seguro para o consumidor. A amostragem foi realizada num total de 9 pontos, da linha de processamento, em cada uma das 6 coletas. No período de 27/01/2002 a 03/03/2002, foram feitas análises de 6 lotes do produto. A metodologia empregada para quantificação de bolores termoresistentes foi a descrita por Beuchat & Pitt (1992) com modificações preconizadas por Baglioni (1998); já para bolores e leveduras comuns foram utilizadas as análises preconizadas pelo Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods (A.P.H.A.) e Splittstoesser et ai (1993). Durante as análises dos 6 lotes amostrados, foram isoladas 25 linhagens fúngicas dentre as quais 24 apresentaram comportamento totalmente distinto, vindo posteriormente a confirmar sua termoresistência, após aplicação de choques térmicos seletivos. Os lotes 2 e 3 mostraram maior nível de contaminação por bolores termoresistentes apresentando 4,8 e 3,5 esporos/100ml, respectivamente, mesmo assim, a incidência foi baixa em geral menor que 5 esporos/100ml em todos os lotes. O lote 1 foi o responsável pela maior parte dos isolados termoresistentes, com 48% de cepas, representando 12 fungos diferentes. A incidência de leveduras em todos os lotes, foi alta e semelhante entre lotes, apresentando média de 7,55 x 106 UFC/ml, na matéria prima. Com intuito de demonstrar maior capacidade de resistência térmica de esporos mais velhos, foram utilizados esporos com idade de 1 mês e 3 meses. Todos os isolados, de ambas as idades, foram submetidos a choques térmicos programados que variaram de 85°C/15 min a 115°C/15 mino O isolado mais termoresistente, com 1 mês de idade, sobreviveu a 100°C/55 min, e foi identificado como Neosartorya fischeri, com parâmetros de D95°c= 1,66 min e Z= 11,98° C. Já o isolado de idade de 3 meses sobreviveu a 11 0°C/1 O min e foi identificado também como Neosartorya fischeri, com parâmetros de D95°c= 1,96 min e Z= 16,29° C. Os parâmetros cinéticos foram obtidos por linearização de Alderton & Snell (1970) devido ao comportamento não logarítmico de ambos os fungos. O processamento foi capaz de eliminar a contaminação fungíca no produto final e não se detectou bolores em produto final e produto final após 90 dias de vida útil. Existe, porém, a possibilidade de que bolores como Neosartorya fischeri sejam capazes de permanecer viáveis após o processo de pasteurização utilizado pela maioria das indústrias processadoras de bebida de uva, que aplicam binômios que variam entre 90-92°C/30 seg, devido à sua grande capacidade de termoresistência / Abstract: In Brazil the consuption of ready to drink pasteurized grape juice has increased in the last few years. In 2001, the national consumption was 11 million liters, however, in the first nine months of 2002, this number exceeded 17 million liters (Tetra Pak, 2002). The aim of this study was to quantify the incidence of heatresistant and non heat-resistant molds in the production line of juice formulated from Ceiber and Concordia grapes (pH: 3,0 and 14°Brix). The analysis was carried out from the raw material up to the final product, and afier 3 months of shelf-life to obtain the microbiological security of the product. Nine (9) points from the processing line were sampled for each batch. Six (6) production batches were analyzed from January 2ih, 2002 to March 3rd, 2002. The method of Beuchat and Pitt (1992) was used to quantify the heatresistant molds with the modifications suggested by Baglioni (1998). Common molds and yeast were anayzed according to the Compendium of Methods for the Microbiplogical Examination of Foods (A.P.H.A.) (1992), and Splittstoesser et ai (1993). Twenty-five (25) mold strains were isolated from the 6 batches, of which 24 showed completely different bahavior. Heat-resistance was confirmed in ali of the 24 strains, afier selective heat shocks. Batches 2 and 3 showed greater contamination with heat-resistant molds, showing 4,8 and 3,5 spores/100ml respectively in the raw material, however in general the contamination levei with heat-resistant strains was low, normally less than 5 spores/100ml. Batch 1 was responsible for the greatest variety of strains, 48% of the total, equivalent to 12 different molds. The highest incidence of yeasts was observed in the raw material, with levels of up to 106 CFU/ml. To confirm the greater heat-resistance of older spores when compared with younger spores, the heat-resistance test was carried out with 1 month and 3 months old spores. Ali the iso/ates, of both ages, were submitted to programmed heat shocks from 85°C/15 min up to 115°C/15 mino The most heat-resistant 1 month old mold spore survived 100°C/55 min and was identified as Neosartorya fischeri with D95°c= 1,66 min and Z= 11,98° C. The most heat-resistant 3 months old mold survived 11 0°C/1 Omin and was also identified as Neosartorya fischeri with D95°c= 1,96 min e Z= 16,29° C. The kinects parameters were realized using Alderton & Snell (1970) methodology becouse both molds present non logaritmical behavior. The process used was able to eliminate the mold contamination and its presence was not detected in the final product or in the final product after 3 months of shelf life. Nevertheless, molds like Neosartorya fischeri may survive the juice pasteurization process of 90-92°C/30 seconds commonly used in industry, because of the high heat-resistance of this mold / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Este trabalho objetivou avaliar o efeito da ingestão de Sclerotinia. sclerotiorum através do experimento in vivo para analisar o potencial mutagênico, bem como realizar caracterização preliminar do extrato aquoso de S. sclerotiorum. Por meio dos resultados da Espectrometria de Massas e Ressonância Magnética Nuclear foi possível verificar a presença do manitol e da trealose (205,07; 365,11 e 381,08 m/z). No teste do micronúcleo o extrato foi capaz de induzir danos (243,48 a 439,13 % aumento de MNPCE) e potencializar os efeitos genotóxicos/citotóxicos da DXR (210,26 a 236,75 % aumento de MNPCE). Pela análise dos resultados do teste do cometa, percebeu-se que os extratos não exerceram efeito lesivo/protetor das atividades da DXR. Os resultados para estresse oxidativo mostraram que a DXR não elevou os níveis de MDA e GSH. Pelos resultados conclui-se que o extrato aquoso não causou quebras no DNA, porém pode ter exercido os efeitos lesivos observados pelo MNPCE por outros mecanismos, não associados à fragmentação de DNA. / This study evaluated the effect of intake of Sclerotinia sclerotiorum by in vivo experiment to examine the mutagenic potential, well as perform preliminary characterization of the aqueous extract of S. sclerotiorum. Through the results of mass spectrometry and nuclear magnetic resonance was possible to verify the presence of mannitol and trehalose (205,07; 365,11 and 381,08 m/z). The extract was able to induce damage when was analyzed by micronucleus test (from 243.48 to 439.13 % increase MNPCE) and increase the genotoxic / cytotoxic DXR from (210.26 to 236.75 % increase MNPCE). The comet assay results showed that the extracts didn´t cause harmful effect/protective of DXR activities. The results for oxidative stress showed that DXR didn´t increase the levels of MDA and GSH. From the results it is concluded that the aqueous extract didn´t cause break in DNA, but may have had detrimental effects that was observed by MNPCE by other mechanisms, not associated with DNA fragmentation. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais - FAPEMIG

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-06Bitstream added on 2014-06-13T18:50:06Z : No. of bitstreams: 1 mantovani_jd_me_rcla.pdf: 608682 bytes, checksum: a54bf7e58ae584d42606324be70cd136 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A associação entre formigas cortadeiras da tribo Attini e micro-organismos é reconhecidamente vasta. No presente trabalho verificou-se a presença de variados táxons de fungos relacionados às operárias da formiga cortadeira Atta laevigata. Operárias foram coletadas do interior do ninho e na trilha de forrageio,nas cidades de Rio Claro e Bauru, e parte dessas formigas passaram por um procedimento de limpeza para retirada de micro-organismos externos ao corpo e a outra parte não foi submetida à lavagem.Dos dois grupos o DNA foi extraído e amplificado para a região rRNA ITS de fungos. Essa região foi sequenciada e utilizada na identificação de unidades taxonômicas moleculares operacionais (MOTUs). Cinquenta táxons moleculares foram identificados, sendo vinte contaminantes eventuais, facilmente removíveis pela limpeza, e 30 simbiontes internos ou mais fortemente aderidos ao corpo das operárias. Dentre esses 30 táxons, quatro (Cladosporium cladosporioides, Epicocum sp., Hypocrea virens e Nigrospora sp.) foram identificados nas duas localidades geográficas e em grande quantidade, sendo candidatos a simbiontes mais estáveis e funcionais das formigas. Entre os demais táxons prospectados houve grande frequência de Trichosporon chiarelli e Coriolopsis rigida. Esse trabalho demonstroua ampla capacidade das formigas adquirirem e transportarem uma variada microbiota e consiste num passo inicial para elucidar o papel dos fungos associados ao corpo de A. laevigata / There is a deep and widely known association among Attini ants and microorganisms. In this paper it was investigated the presence of various taxa of fungi related to the Attini leaf-cutter antAtta laevigata. Leafcutter ants were collected from inside the nests and foraging trails in two different localities (Rio Claro and Bauru), and they were washed in order to remove external microorganisms from their bodies. Leafcutters which have not been washed also were used. Ant DNA was extracted and purifiedand the fungal rRNA ITS region was amplified. PCR products were cloned and sequenced in order to identify fungal species based on the operationalmolecular taxonomic unit (MOTU) criteria. As a result, 50 fungal species were recognized; 20 of them were identified as casual contaminants and as 30 were found as symbionts more tightly adhered to ant body. Four out of these 30 symbionts (Cladosporium cladosporioids, Epicocum sp., Hypocrea virens and Nigrospora sp.) were identified in the two geographic localities and in large quantity. Thus, these are candidates to a more stable and functional symbionts of the ants. There were large quantity of the Trichosporon chiarelli and Coriolopsis rigida among the prospected ants. This paper shows the enhanced capacity of the ants to acquiring and transporting a varied of fungi and it is in an initial point to elucidate the role of fungi associated to the body ofA. laevigata / FAPESP: 11/04053-6

Orientador: Maurício Bacci Júnior / Coorientador: André Rodrigues / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Fernando Dini Andreote / Resumo: A associação entre formigas cortadeiras da tribo Attini e micro-organismos é reconhecidamente vasta. No presente trabalho verificou-se a presença de variados táxons de fungos relacionados às operárias da formiga cortadeira Atta laevigata. Operárias foram coletadas do interior do ninho e na trilha de forrageio,nas cidades de Rio Claro e Bauru, e parte dessas formigas passaram por um procedimento de limpeza para retirada de micro-organismos externos ao corpo e a outra parte não foi submetida à lavagem.Dos dois grupos o DNA foi extraído e amplificado para a região rRNA ITS de fungos. Essa região foi sequenciada e utilizada na identificação de unidades taxonômicas moleculares operacionais (MOTUs). Cinquenta táxons moleculares foram identificados, sendo vinte contaminantes eventuais, facilmente removíveis pela limpeza, e 30 simbiontes internos ou mais fortemente aderidos ao corpo das operárias. Dentre esses 30 táxons, quatro (Cladosporium cladosporioides, Epicocum sp., Hypocrea virens e Nigrospora sp.) foram identificados nas duas localidades geográficas e em grande quantidade, sendo candidatos a simbiontes mais estáveis e funcionais das formigas. Entre os demais táxons prospectados houve grande frequência de Trichosporon chiarelli e Coriolopsis rigida. Esse trabalho demonstroua ampla capacidade das formigas adquirirem e transportarem uma variada microbiota e consiste num passo inicial para elucidar o papel dos fungos associados ao corpo de A. laevigata / Abstract: There is a deep and widely known association among Attini ants and microorganisms. In this paper it was investigated the presence of various taxa of fungi related to the Attini leaf-cutter antAtta laevigata. Leafcutter ants were collected from inside the nests and foraging trails in two different localities (Rio Claro and Bauru), and they were washed in order to remove external microorganisms from their bodies. Leafcutters which have not been washed also were used. Ant DNA was extracted and purifiedand the fungal rRNA ITS region was amplified. PCR products were cloned and sequenced in order to identify fungal species based on the operationalmolecular taxonomic unit (MOTU) criteria. As a result, 50 fungal species were recognized; 20 of them were identified as casual contaminants and as 30 were found as symbionts more tightly adhered to ant body. Four out of these 30 symbionts (Cladosporium cladosporioids, Epicocum sp., Hypocrea virens and Nigrospora sp.) were identified in the two geographic localities and in large quantity. Thus, these are candidates to a more stable and functional symbionts of the ants. There were large quantity of the Trichosporon chiarelli and Coriolopsis rigida among the prospected ants. This paper shows the enhanced capacity of the ants to acquiring and transporting a varied of fungi and it is in an initial point to elucidate the role of fungi associated to the body ofA. laevigata / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:04:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7523_1.pdf: 2350468 bytes, checksum: 72ad4a741028a348bc5725a9d32c1bb0 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Este trabalho objetivou investigar o potencial biotecnológico de Curvularia lunata UFPEDA885/URM6179 na produção de enzimas lignolíticas e biossurfactante utilizando óleo diesel como substrato. Para seleção deste fungo, utilizou-se ácido gálico e solução de Manachini acrescida de óleo diesel (2%), seguida da quantificação de lacase (LaC), lignina peroxidase (LiP) e manganês peroxidase (MnP). Posteriormente, realizou-se planejamento fatorial completo 32 variando pH e temperatura, para otimização da produção das enzimas lignolíticas e avaliou-se o efeito do pH e temperatura na atividade e estabilidade enzimática. Para a produção de biossurfactante, realizou-se um delineamento composto central rotacional 24 variando: inóculo, NH4NO3, MnSO4H2O e CuSO45H2O. Inoculou-se o fungo em meio mineral Bushnell Haas modificado, acrescido de 2% de óleo diesel, onde foram avaliados: tensão superficial e os efeitos do pH, temperatura e salinidade (NaCl) na atividade emulsificante e na estabilidade da emulsão. Por fim, verificou-se a toxicidade do biossurfactante e a biorremoção de óleo automotivo em solo arenoso. C. lunata UFPEDA885 foi selecionado como produtor das três enzimas do sistema lignolítico. No planejamento fatorial, observou-se otimização na produção de LaC em nove vezes (1940U/L+4). Esta enzima, apesar de instável nas condições testadas, foi produzida em maior quantidade por C. lunata UFPEDA885, em pH 3,4 a 65ºC. Houve otimização na produção de LiP (1480U/L+6) em 24 vezes, sendo estável, com pH ideal para produção de 6,2 a 65ºC. A maior produção de MnP por C. lunata UFPEDA885 foi 820U/L +3,5, um aumento de cerca de 15 vezes, sendo esta enzima estável, com maior produção em pH de 3,4 a 50ºC. C. lunata UFPEDA 885 produz biossurfactante, reduzindo a tensão superficial até 32,9mN/m. Este fungo é capaz de emulsificar até 98% de óleo automotivo, com elevada estabilidade em diferentes valores de pH, temperatura e salinidade. Houve baixa toxicidade frente a sementes de Cucumis sativa e a CL50 para Artemia salina ocorreu a 25% de extrato bruto do biossurfactante. Por fim, houve remoção de 93,5% de óleo automotivo em solo arenoso pelo extrato bruto produzido. C. lunata UFPEDA885 é indicado para produção de LiP, MnP, biossurfactante e bioemulsificante, utilizando óleo diesel como substrato visando aplicação industrial e na biorremediação

Atualmente, fungos endófitos são alvos de estudo para descoberta de substâncias bioativas com interesse na agricultura, no controle de pragas, na descoberta de novos ativos para uso na terapêutica, entre outros. Assim como toda planta, o Theobroma cacao L. serve de habitat para diversos fungos endófitos que vivem no interior dos tecidos das plantas numa relação de simbiose, mutualismo ou parasitária. No total de 37 linhagens de fungos endófitos isolados do Theobroma cacao L. foram cultivados in vitro e seus extratos brutos foram analisados, sendo que um fungo foi selecionado para investigação das atividades antimicrobiana, antioxidante e antiproliferativa. O fungo endófito Microsphaeropsis sp. CML 1765 apresentou um crescimento e estabilidade satisfatória além de boa atividade antimicrobiana contra S. aureus. Os resultados da concentração inibitória mínima (CIM) do extrato da fermentação de Microsphaeropsis sp ficou entre 62,5 e 125 µg/mL. A análise em CG/EM identificou a composição química do extrato de Microsphaeropsis sp mostrando ser, essencialmente, constituído de ácidos graxos e esteróides. A atividade antioxidante foi determinada através do teste de DPPH e não foi expressiva, possivelmente por não conter compostos fenólicos em sua composição química. A atividade antiproliferativa foi testada frente a nove linhagens de células tumorais e o extrato de Microsphaeropsis sp apresentou seletividade contra células de melanoma (UACC-62) atingindo o TGI (inibição total do crescimento), na concentração de 4 µg/mL. Todas as linhagens atingiram o GI50 (atividade citostática) e LC50 (atividade citocida) nas concentrações de 25 µg/mL e 250 µg/mL, respectivamente. A biodiversidade da natureza abre caminhos para muitos estudos sobre fungos endófitos que são fontes naturais pouco exploradas de metabólitos bioativos, com potencial terapêutico desconhecido. / Nowadays, there is an increasing interest in endophytics fungi research as a source oh bioactive substances that could be applied in agriculture for pest control, and even for the discovery of new drugs. Like any plant, Theobroma cacao L. serves as habitat for diverse fungal endophytes that live within plant tissues in a symbiotic, mutualistic or parasitic. A total of 37 strains of fungal endophytes isolated in Theobroma cacao L. were cultured in vitro and their extracts were analyzed, and a fungus was selected for investigation of the antimicrobial, antioxidant and antiproliferative activities. The fungus endophyte Microsphaeropsis sp. CML 1765 presented a satisfactory growth and stability in addition to good antimicrobial activity against S. aureus. The results of minimum inhibitory concentration (MIC) of the extract from fermented Microsphaeropsis sp were between 62.5 and 125 µg/mL. The chemical composition analysis of the extracts was carried by CG/MS and allowed the identification of fatty acids and steroids as main components. The antioxidant activity was determined using the DPPH test and was not significant, possibly because it contains phenolic compounds in their chemical composition. The antiproliferative activity was tested against nine cancer cell lines and extract Microsphaeropsis sp. showed selectivity against melanoma cells (UACC-62) reaching the TGI (total growth inhibition) at a concentration of 4 µg/mL. The extracts was cytostatic and cytocide for all cell lines at concentration of 25 µg/mL and 250 µg/mL, respectively. The diversity of nature opens the way for studies on fungal endophytes that are natural sources of unexplored bioactive metabolites with therapeutic potential unknown.

Orientador: Crispin Humberto Garcia Cruz / Banca: Eleni Gomes / Banca: Roberto Alves de Oliveira / Resumo: Os polímeros microbianos extracelulares (exo-biopolímeros) são moléculas que apresentam um grande potencial de aplicação nas indústrias de alimentos, farmacêuticas, petrolíferas, de cosméticos, têxteis, de papéis, tintas, produtos agrícolas entre outras. Como biorremediadores, podem ser utilizados na remoção de metais pesados em ambientes aquáticos poluídos, atuando como agentes de biossorção por meio da acumulação de nutrientes a partir do meio ambiente. O objetivo do trabalho foi a produção de exobiopolímeros a partir de três Ascomicetos endofíticos (Colletotrichum sp., Guignardia sp. e Phomopsis sp.). Foi selecionado o fungo que apresentou a maior produção desse material biológico. Tanto esse exo-biopolímero quanto a biomassa foram avaliados quanto aos seus potenciais de biossorção dos íons metálicos chumbo (Pb+2) e cádmio (Cd+2). Para a obtenção do meio de cultivo utilizado para a produção de exo-biopolímeros, foram testados o meio mínimo de sais de Vogel modificado com diferentes fontes de nitrogênio definidas e glicose como única fonte de carbono. Em seguida, foi realizado um planejamento fatorial 3(3-0) com 27 experimentos em duplicata, onde as variáveis independentes foram o tempo, temperatura de cultivo e a concentração inicial de glicose. O fungo Colletotrichum sp. apresentou a maior produção de exo-biopolímero (5,71 gL-1) utilizando a uréia como fonte de nitrogênio, em cultivo a 28 ºC, 150 rpm e glicose 6 % (p/v) em 192 horas de cultivo. A execução do planejamento fatorial demonstrou que a produção de biomassa seca foi favorecida por faixas de temperatura e concentração inicial de glicose entre 24 e 32 ºC e 35 e 75 gL-1, respectivamente. A produção de exo-biopolímero foi favorecida por faixas de temperatura e concentração... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The microbial extracellular polymer (exo-biopolymers) are molecules that have a great potential for application in the industries of food, pharmaceutical, oil, cosmetics, textiles, paper, paints, agricultural products and others. As bioremediation, can be used in the removal of heavy metals in polluted aquatic environments, acting as agents of bioremediation through the accumulation of nutrients from the environment. Objective of this study was to produce exo-biopolymer from three endophytic Ascomycota (Colletotrichum sp., Guignardia sp. and Phomopsis sp.). Then, was selected the fungus that showed the highest production of exobiopolymer. Both the exo-biopolymer and biomass were assessed for their potential of biosorption of metallic ions lead (Pb+2) and cadmium (Cd+2). To obtain the culture medium used for the production of exo-biopolymers, was tested a minimal medium salts of Vogel modified with different nitrogen sources and glucose defined as the only carbon source. Next, was performed a factorial design 3(3-0) with 27 experiments in duplicate, where the independent variables were the time and temperature of cultivation and the initial concentration of glucose. Colletotrichum sp. had the highest production of exo-biopolymer (5.71 gL-1) using urea as the nitrogen source in cultivation at 28 ºC, 150 rpm, and glucose 6% (w/v) in 192 hours of culture. The implementation of the factorial design showed that the dry biomass production was enhanced by a range of temperatures and initial concentration of glucose between 24 and 32 ºC and 35 and 75 gL-1, respectively. The production of exobiopolymer was favored by a range of temperatures and initial concentration of glucose between 24 and 36 ºC and 35 and 70 gL-1, respectively. In the experiment, the fungus Colletotrichum sp. produced 6.11 gL-1 of... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre