Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-20T20:19:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-28T18:23:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-28T18:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Jackeline Maria da Silva.pdf: 1830070 bytes, checksum: cd38a877523b6502d8430c98e1cfa370 (MD5) Previous issue date: 2017-02-23 / FACEPE / Dekkera bruxellensis pertence à família Saccharomycetaceae e é considerado um parente distante de Saccharomyces cerevisiae. Esta levedura, principalmente na sua forma anamorfa Brettanomyces bruxellensis, é um importante contaminante da produção de vinho. O objetivo deste estudo foi comparar a fisiologia de linhagens da levedura Dekkera bruxellensis isoladas da produção de vinho e de álcool combustível quanto ao metabolismo de diferentes açúcares potencialmente utilizados como substrato industrial. Para isso, 30 isolados de Dekkera bruxellensis foram avaliados quanto à habilidade de assimilação respiratória e fermentativa de monossacarídeos e dissacarídeos, a diversidade fenotípica relacionada à repressão catabólica pela glicose, e a assimilação de diferentes açúcares, tais como glicose, sacarose e celobiose sob condição anaeróbica. Diferenças entre os perfis de assimilação respiratória foram observadas para cada isolado. As mais altas velocidades de crescimento foram encontradas em meio com glicose, frutose e sacarose 0,32 h⁻¹, 0,30 h⁻¹ e 0,30 h⁻¹, respectivamente, em aerobiose pelos isolados de destilaria. Em maltose e galactose, as maiores taxas de crescimento foram respectivamente, 0,21 h⁻¹ e 0,27 h⁻¹, alcançadas por isolados de destilaria e de vinícola, e em celobiose e lactose, as maiores taxas foram respectivamente, 0,20 h⁻¹e 0,15 h⁻¹, alcançados pelos isolados de destilaria. A presença do repressor catabólico 2-deoxiglicose no meio com galactose e maltose inibiu o crescimento de todos os isolados de vinho, diferentemente de alguns isolados de etanol que apresentaram resistência a este composto. A adição de Antimicina A nos meios de cultura alterou o crescimento apenas dos isolados de vinícola. Em anaerobiose estrita, os isolados de destilaria alcançaram velocidades de crescimento iguais a 0,44 h⁻¹; 0,40 h⁻¹e 0,26 h⁻¹ em glicose, sacarose e celobiose, respectivamente. A capacidade de assimilação de diferentes açúcares pelos isolados de D. bruxellensis frente às diversas condições testadas mostram a diversidade fenotípica encontrada dentro desta espécie. Além disso, os dados podem colaborar para explicação da capacidade adaptativa dessa espécie em diferentes ambientes industriais cujas fontes alternativas de carbono estejam presentes. Do ponto de vista biotecnológico, estudos com isolados de D. bruxellensis podem ser voltados para a produção de etanol de segunda geração, cujo um dos substratos é a celobiose, açúcar dos quais linhagens selvagens de S. cerevisiae não são capazes de assimilar. / Dekkera bruxellensis belongs to the family Saccharomycetaceae and is considered a distant relative of Saccharomyces cerevisiae. This yeast, mainly in its anamorphic form Brettanomyces bruxellensis, is an important contaminant of wine production. The aim of this study was to compare the physiology of strains Dekkera bruxellensis yeast isolated from wine production and ethanol on the metabolism of different sugars potentially used as industrial substrate. To this, 30 isolates of Dekkera bruxellensis were assessed for fermentative and respiratory assimilation ability monosaccharides and disaccharides, phenotypic diversity related to catabolite repression by glucose and the assimilation of different sugars, such as glucose, sucrose and cellobiose under anaerobic conditions. Differences between the profiles of respiratory assimilation were observed for each isolate. The highest growth rates were found in glucose, fructose and sucrose 0.32 h⁻¹, 0.30 h⁻¹and 0.30 h⁻¹, respectively, in aerobiosis by distillery isolates. In maltose and galactose, the highest growth rates were respectively 0.21 h⁻¹ and 0.27 h ⁻¹, reached by distillery and wine isolates, and in cellobiose and lactose, the highest rates were 0, 20 h⁻¹ and 0.15 h⁻¹, reached by distillery isolates. The presence of the 2-deoxyglucose catabolic repressor in the medium with galactose and maltose inhibited the growth of all the wine isolates, unlike some ethanol isolates were resistant to this compound. The addition of Antimycin A in the culture media altered the growth of only the wine isolates. In strict anaerobiosis the isolates of distillery reached growth rates equal to 0.44 h ⁻¹; 0.40 h ⁻¹ and 0.26 h ⁻¹ in glucose, sucrose and cellobiose, respectively. The capacity of assimilation of different sugars by D. bruxellensis isolates against the different conditions tested shows the phenotypic diversity found within this species. Moreover, the data can corroborate to explain the adaptive capacity of this species in different industrial environments whose alternative carbon sources are present. In biotechnological point of view, studies with isolated D. bruxellensis may be facing a second-generation ethanol, which one of the substrates is a cellobiose, sugar from which wild strains of S. cerevisiae are not able to assimilate

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:19:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Honorio_GabrielaMishima_M.pdf: 16277013 bytes, checksum: 73f9785117f349cdba2639c4ef397184 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-13T19:46:18Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Michellangelo Nunes da Silva.pdf: 2117434 bytes, checksum: d85805b4fffcc0cf9857c274d15e1ca5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-13T19:46:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Michellangelo Nunes da Silva.pdf: 2117434 bytes, checksum: d85805b4fffcc0cf9857c274d15e1ca5 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / FACEPE / Leveduras pigmentadas destacam-se nos processos biotecnológicos devido aos metabólitos produzidos com funções fisiológicas importantes, contribuindo com a resposta imune e tratamento de doenças. Assim, com o objetivo de detectar bioprodutos dessas leveduras e avaliar o potencial antifúngico foi desenvolvido além de técnicas in vitro, um modelo experimental de candidíase vaginal. Leveduras pigmentadas da Micoteca URM foram revisadas por critérios taxonômicos clássicos, moleculares e por espectrometria de massa. Testes de sensibilidade envolvendo o bioproduto de leveduras e antifúngicos comerciais foram realizados frente a isolados clínicos de Candida albicans. O isolado com menor concentração inibitória mínima foi selecionado para o modelo experimental. Fêmeas Wistar albinas, com peso médio de 230g, foram mantidas em temperatura controlada, umidade e fotoperíodo. A pre-disposição à infecção ocorreu por antibioticoterapia. A candidiase vaginal foi reproduzida atraves da inoculado de suspensão (106 UFC/mL) e C. albicans e após cinco dias foram tratadas com subproduto por via intravaginal. As leveduras pigmentadas foram autenticadas como Rhodotorula mucilaginosa. Entre outras substâncias, o acido oleico foi produzido com destaque pelas leveduras, sobretudo no isolado URM 6683. Apos os testes foi verificado a sensibilidade dos isolados de C. albicans tanto in vitro quanto no tratamento de candidíase vaginal. A aplicação de especies de Rhodotorula na biotecnologia representa uma importante opção na promoção à saúde. / Pigment include yeasts in biotechnology processes is due to metabolites produced with important physiological functions contributing to the immune response and treatment of diseases. Thus, in order to detect and evaluate byproducts of the yeast antifungal potential was developed in vitro techniques well as an experimental model of vaginal candidiasis. URM Culture Collection of pigmented yeasts were reviewed by classical taxonomic criteria, and molecular mass spectrometry. Sensitivity tests involving byproduct of yeast and commercial antifungal were performed against clinical isolates of Candida albicans. Isolated with lower minimum inhibitory concentration was selected for the experimental model. Albino Wistar rats, weighing 230g, were maintained under controlled temperature, humidity and photoperiod. The pre-disposition to the infection resulted from antibiotic therapy. Vaginal candidiasis is reproduced through the suspension for inoculation (106 CFU/mL) C. albicans and five days later were treated intravaginally byproduct. Pigmented yeasts were certified as Rhodotorula mucilaginosa. Among other substances, oleic acid was produced especially by yeasts, especially in isolated URM 6683. After testing it was found the sensitivity of the isolates of C. albicans both in vitro and in treatment vaginal candidiasis. The application of species of Rhodotorula biotechnology is an important option in health promotion.

Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-20T18:31:48Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-20T18:31:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Melyna Chaves Leite.pdf: 1697174 bytes, checksum: 6f7bcace46236ca853b000bd01b6072b (MD5) Previous issue date: 2016-02-24 / CNPQ / As infecções fúngicas invasivas causadas por leveduras representam causa frequente de óbito, especialmente em pacientes de Unidades de Terapia Intensiva. Apesar de Candida albicans ser a mais comum, espécies emergentes de Candida, tem surgido como importante causa de infecções graves, além de se mostrarem resistentes aos tratamentos. Dentre as mais importantes causas desta infecção, destaca-se a formação de biofilme. O biofilme, conjunto de microrganismos envolvidos numa matriz polimérica extracelular de carboidratos, proteínas e ácidos nucleicos, pode se aderir a tecido vivo e superfície inerte como os dispositivos médicos. Deste modo, conduz importantes repercussões clínicas, uma vez que vem sendo verificado aumento da resistência à terapia antifúngica e da habilidade das células em resistir às defesas do sistema imune. Assim, o objetivo da pesquisa foi avaliar leveduras emergentes quanto à formação de biofilme analisando arquitetura e resposta antifúngica. Foram analisadas 15 leveduras emergentes provenientes de amostras clínicas e estocadas na Micoteca URM, Universidade Federal de Pernambuco, Brasil. As culturas foram autenticadas por características morfofisiológicas e proteômica/MALDI-TOF MS. A avaliação do biofilme foi por redução do XTT (quantitativo) e então, selecionados quanto a maior capacidade de formação. A arquitetura foi avaliada em discos de cateteres, analisados em 24 e 48 horas por microscopia de varredura. Foram realizados tratamento anti-biofilme com anfotericina B e fluconazol seguindo o protocolo do M27-A3 baseado em testes de sensibilidade com células planctônicas. As leveduras testadas formaram biofilme, destacando-se o isolado clínico de C. ciferri do qual, não há relatos quanto a este potencial de virulência. Na sensibilidade antifúngica, houve mudança no perfil entre células planctônicas e as agregadas, as quais se mostram mais resistente. Diante do alto potencial de virulência verificado nos isolados, é necessário a busca por novas substâncias como futura alternativa terapêutica de candidíase invasiva. / Invasive fungal infections caused by yeast are a frequent cause of death, especially in patients of Intensive Care Units. Although Candida albicans is the most common, emerging species of Candida, it has emerged as a major cause of serious infections, in addition to being resistant to treatments. Among the most important causes of this infection is the biofilm formation. Biofilm, a collection of microorganisms involved in an extracellular polymeric matrix of carbohydrates, proteins and nucleic acids, can adhere to living tissue and inert surfaces such as medical devices. Thus, it has important clinical repercussions, since it has been verified increased resistance to antifungal therapy and the ability of cells to resist immune system defenses. Thus, the objective of the research was to evaluate emerging yeasts regarding biofilm formation analyzing architecture and antifungal response. Fifteen emerging yeasts from clinical samples and stored at the URM Micoteca, Federal University of Pernambuco, Brazil, were analyzed. The cultures were authenticated by morphological and proteomic characteristics / MALDI-TOF MS. The evaluation of the biofilm was by reduction of the XTT (quantitative) and then, selected for the greater capacity of formation. The architecture was evaluated in catheter discs, analyzed in 24 and 48 hours by scanning microscopy. Antibiofilm treatment with amphotericin B and fluconazole following the M27-A3 protocol based on sensitivity tests with planktonic cells was performed. The yeasts tested formed a biofilm, with a clinical isolate of C. ciferri, of which there are no reports of this virulence potential. In the antifungal sensitivity, there was a change in the profile between planktonic cells and aggregates, which are more resistant. In view of the high potential of virulence in isolates, it is necessary to search for new substances as a future therapeutic alternative for invasive candidiasis.

Submitted by Fernanda Rodrigues de Lima (fernanda.rlima@ufpe.br) on 2018-08-23T22:02:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-30T19:09:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T19:09:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilberto Henrique Teles Gomes Da Silva.pdf: 1461753 bytes, checksum: c17c5c29241b95c71a94f9ae937992f6 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / CAPES / A levedura Dekkera bruxellensis é um micro-organismo muito adaptado aos processos de fermenta-ção alcoólica industrial, sendo encontrada em indústrias que realizam a produção de cerveja, vinho e etanol combustível. Na maioria desses processos, incluindo a produção de bioetanol, D. bruxel-lensis é considerada uma levedura contaminante, pois compete com Saccharomyces cerevisiae pe-los substratos industriais, ocasionando redução no rendimento e produtividade etanólica. Apesar disso, D. bruxellensis é capaz de produzir etanol, mesmo que em menor produtividade e, assim, apresenta potencial de uso industrial. Um dos problemas associados à baixa produtividade deve estar relacionado com o elevado fluxo metabólico para a produção de acetato citosólico a partir do acetaldeído, que desvia o carbono que seria utilizado para produção de etanol. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar o metabolismo do acetaldeído como ponto de ramifi-cação no metabolismo fermentativo de D. bruxellensis. Para isso, a atividade da enzima aceltaldeído desidrogenase (AldH) foi bioquimicamente inibida pelo uso do composto disulfiram (DSF) em dife-rentes formulações do meio de cultivo. Os dados mostraram que D. bruxellensis é mais resistente ao DSF do que S. cerevisiae, sendo a concentração de 100 µM inibitória para ambas as leveduras. A adição de acetato ao meio contendo glicose promoveu pequeno, porem significativo aumento no crescimento de S. cerevisiae, sendo moderadamente tóxico para D. bruxellensis. Juntamente com os dados de crescimento em galactose e glicerol, isso mostra que D. bruxellensis é capaz de exportar acetato da mitocôndria para o citoplasma na ausência de AldH. A adição dos agentes antioxidantes glutationa e N-acetilcisteína bloqueou completamente o efeito tóxico da adição de DSF, mostrando que o acúmulo de acetaldeído induz estresse oxidativo nas leveduras. Quando utilizado nos ensaios de fermentação, DSF promoveu aumento inicial do fluxo glicolítico com consequente aumento na produção de etanol e, paradoxalmente, de acetato. / Dekkera bruxellensis is a microorganism highly related to industrial fermentation processes, especially in brewing, winemaking and fuel ethanol industries. In most of these processes, including the production of bioethanol, D.bruxellensis is considered a contaminant yeast, since it competes with Saccharomyces cerevisiae for the industrial substrates, resulting in low ethanol yield and pro-ductivity. Nevertheless, D. bruxellensis is able to produce ethanol, showing potencial for industrial use. One of the problems associated with low productivity must be related to the high metabolic flux towards the production of cytosolic acetate from acetaldehyde, which deviates the carbon from ethanol fermentation. In this context, the present study aimed to study the metabolism of acetalde-hyde as a branch point in the fermentative metabolism of D. bruxellensis. Therefore, the activity of the enzyme aceltaldehyde dehydrogenase (AldH) was biochemically inhibited by the use of disul-firam compound (DSF) in different formulations of the culture medium. The data showed that D. bruxellensis is more resistant to DSF than S. cerevisiae, with a inhibitory concentration of 100 μM for both yeasts. Addition of acetate to the medium containing glucose promoted a small but signifi-cant increase in S. cerevisiae growth, being somewhat toxic to D. bruxellensis. Together with the growth data on galactose and glycerol, this shows that D. bruxellensis is able to export acetate from the mitochondria to the cytoplasm in the absence of AldH. The addition of the antioxidant agents glutathione and N-acetylcysteine completely blocked the toxic effect of the addition of DSF, show-ing that the accumulation of acetaldehyde induces oxidative stress in the yeast. When used in the fermentation tests, DSF promoted initial increase in glycolytic flow with a consequent increase in the production of ethanol and, paradoxically, of acetate.

Orientador: Maria Luiza Moretti Branchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:05:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moreira_LucianaSarmento_M.pdf: 615387 bytes, checksum: 42dae5da9ccb25a99c7957261e5866ca (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: O crescente aumento de casos de candidemia nas últimas décadas vem sendo um fato preocupante devido a diversos fatores, e dentre eles destacam-se a mortalidade, o aumento de casos de espécies não-albicans como causadoras de candidemia, e a crescente emergência da resistência de leveduras aos antifúngicos. Para o tratamento da candidemia, temos como drogas mais usadas a anfotericina B (ANF), o itraconazol (ITZ), o fluconazol (FCZ), a 5-fluorocitosina (5-FC), como também as combinações de ANF com FCZ ou 5-FC que visam favorecer a terapia. Porém, atualmente, ainda pouco se sabe a respeito das respostas clínicas dadas por Candida sp. ás terapias utilizadas quando comparadas com testes de suscetibilidade in vitro. Os testes padronizados para estudar a suscetibilidade de Candida sp. in vitro não avaliam as células individualmente, e sim uma população celular. O sistema automatizado Bio-Cell Tracer ® (BCT®), surge como uma nova ferramenta complementar para o estudo da dinâmica da formação de hifas, pseudo-hifas e germinação de conídios e de respostas quanto a suscetibilidade aos antifúngicos. Neste trabalho, utilizamos o BCT® para avaliar o crescimento de cepas de Candida albicans frente aos seguintes antifúngicos: FCZ, 5-FC e ANF, além das combinações 5-FC/ANF e FCZ/ANF em adições com tempos simultâneos e seqüenciais. O sistema BCT® consiste de uma base para placas, microscópio, digitalizador de imagem e computador com programa que permitiu o acompanhamento do crescimento automático das extremidades das pseudo-hifas estudadas. Os resultados para Candida albicans obtidos com o teste de resistência ao FCZ, encontrados no BCT® foram correspondentes àqueles utilizando o teste padrão de microdiluição em caldo (NCCLS A27), sugerindo diferentes classes de taxas de inibição que poderiam ser agrupadas como valores associados a suscetibilidade e resistência. Os estudos com drogas combinadas, em tempos seqüenciais, revelou que a cepa (UN 219) apresentou comportamento de antagonismo para a combinação de FCZ/ANF, dado que diferiu do encontrado na microdiluição em caldo. Neste caso, a possibilidade de monitoramento de hifas, pseudo-hifas pode permitir maior versatilidade e induzir respostas biológicas antes não encontradas nos testes in vitro. Este estudo contribuiu com novas informações a respeito de um sistema automatizado para análise de pseudo-hifas e germinação de conídios, que pode vir a ser utilizado no desenvolvimento de novas estratégias para uma rápida determinação de suscetibilidade antifúngica de C. albicans ou de outros fungos patogênicos / Abstract: Candida species are opportunistic fungal pathogens that are often the causative agents of infections in immunocompromised patients. amphotericin B (AMPH), itraconazole (ITCZ), fluconazole (FLCZ) and 5-flucytosine (5-FC) are the principal drugs used on the treatment of candidemic patients. However, in some cases, the clinical responses of Candida are different from those obtained with the in vitro susceptibility tests. Moreover, the standard methods of monitoring the susceptibility of Candida to antifungal agents are unable to evaluate single cells, true hyphae or pseudohyphae forms. Thus, new techniques developed to measure the growth rate of true hyphae or pseudohyphae forms in vitro could contribute to better understand the dynamics of the formation of these invasive structures and the response of the organism to antifungal agents. Here we describe the application of an automated system (Bio-Cell Tracer® - BCT®) to examine the responses of Candida albicans to AMPH, FLCZ, 5-FC, as well as AMPH/FLCZ and AMPH/5-FC combinations, in simultaneous and distinct addiction times. The BCT® consists of a culture vessel, a microscope and a image analyzer with a computer program system that traces the growth of a hyphal tip automatically. The results obtained using the BCT® system were correspondent to those using the standard MIC (NCCLS A27) assay on the detection of susceptibility and resistance in clinical isolates and reference samples. The combinatory studies show an antagonistic pattern on the UN 219 strain, differently from the MIC studies. The possibility of tracing pseudohyphae structures allows a larger versatility and biological responses not found on the other tests. This work contributed with new information about an automated system for analysis of pseudohyphal structures, that may be used on the development of new strategies for a rapid and reliable assessment of antifungal susceptibility in Candida albicans or other infectious species / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Orientadores: Angelica Zaninelli Schreiber, Anibal E. Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T00:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cavalheiro_RenataAlves_M.pdf: 4268889 bytes, checksum: 5376f92a4294a0902998a087e75a9a41 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Nos últimos 15 anos, as infecções sistêmicas por patógenos fiíngicos oportunistas vêm aumentando assustadoramente. Entretanto, as alternativas terapêuticas continuam restritas. Em busca de novos alvos para alternativas terapêuticas, este trabalho busca conhecer melhor o metabolismo de algumas leveduras. Assim, foram estabelecidas curvas de crescimento para Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Cândida parapsilosis ATCC 22019 e Cryptococcus neoformans ATCC 90112, e determinados os tempos para início da fase exponencial, metabolicamente mais ativa. Para os estudos, necessita-se de células permeáveis a íons, assim, avaliou-se a produção de esferoplastos, com a determinação dos tempos de contato com a enzima específica para cada espécie. Avaliando mitocôndrias in situ e isoladas de C. albicans ATCC 90028, testes bioquímicos apontaram a presença de uma proteína desacopladora, confirmada por munodetecção. Foi também possível sugerir a presença desta proteína em Candida krusei ATCC 6258. Pode-se relatar a presença de vacúolo ácido nas células de Candida albicans ATCC 90028 e sugerir sua presença nas células de Candida krusei ATCC 6258. A cepa de C. albicans ATCC 90028 também possui um P-type W ATPase sensível a ortovanadato e insensível a bafilomicina e não possui trocador ea2+j W, por sua vez, C. krusei possui um P-type W ATPase insensível a bafilomicina, sensível a ortovanadato e um trocador Ca2+1'Ir. Características como uma cadeia alternativa para a transferência de elétrons, de oxidase alternativa e proteínas desacopladoras, são potencias alvos para estudos de alternativas terapêuticas para tratamento de infecções por estes agentes. Maior aprofundamento dos estudos aqui iniciados, poderão trazer grandes contn"buições para um melhor conhecimento do metabolismo destes agentes infecciosos / Abstract: In the last 15 years, opportunistic systemic fungal are increasing. However, the therapeutical alternatives are still restricted. In search of new targets for therapeutical drugs, this work proposes to understand better the metabolism of some yeasts. Growth curves of Candida albicans ATCC 90028, Candida krusei ATCC 6258, Candida parapsilosis ATCC 22019 and Cryptococcus neoformans ATCC 90112 was performed and the middle of the exponential phase of growth was determinated. For metabolic studies, is necessary to obtain permeable cells, withouth cell wa11. In order to have spheroplasts, the time of contact with the specific enzyme for each specie was evaluated. Biochemical tests, evaluating in situ and isolated C. albicans ATCC 90028 mitochondria showed the existence of an uncoupling protein, confumed by imunodetection. It was also possible to suggest the presence of this protein in Candida krusei ATCC 6258. Also can be related an acid vacuole in Candida albicans ATCC 90028 and suggest its presence in C. krusei ATCC 6258 cells. C.albicans ATCC 90028 strain also possess a P-type W ATPase sensible to orthovanadate and insensible to bafilomycin and does not have an Ca2+ Ilr exchanger, in turn, C. krusei A TCC 6258 possess a P-type W ATPase insensible to bafilomicin, sensible to ortovanadate and a ea2+1lr exchanger. Characteristics as an alterna tive chain to electrons transference, alternative oxidase and uncoupling proteins are potential targets to alternative therapeutic studies for treatment of infections caused by these agents. More studies in addition to these initiated here, will be of great contnoution for a better knowledge of these infectious agents / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-04-18T18:04:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-18T18:04:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Rafael Barros de Souza.pdf: 1547796 bytes, checksum: f616604f41e0fde5d0278a8232ac2c12 (MD5) Previous issue date: 2012-08-24 / CNPQ / Apesar dos grandes avanços para melhorar as características das variedades de cana-de-açúcar, pouco se sabe sobre o impacto da qualidade do caldo da cana-de-açúcar no processo de fermentação industrial, mais especificamente sobre o metabolismo fermentativo da levedura. No presente trabalho analisamos a relação entre a variação da composição mineral do caldo de cana e a capacidade fermentativa das células de Saccharomyces cerevisiae, determinando a cinética de consumo de sacarose e produção de etanol e glicerol, bem como o efeito cumulativo desses minerais ao longo de reciclos fermentativos. Foram utilizados meios de fermentação suplementados com os principais macro e micronutrientes encontrados no caldo de cana de açúcar. Entre os minerais avaliados todos os meios suplementados apresentaram um resultado superior ao meio padrão (meio controle), exceto o meio com cobre. Os meios com maior influência no rendimento em etanol foram os meios com ureia, magnésio e manganês que apresentaram um aumento de 18,4% em relação ao meio padrão. O meio com cobre apresentou o menor valor em comparação a todos o meios analisados, contudo, sem diferenciar na viabilidade celular. Esses resultados sugerem que de fato os minerais desempenham importantes papeis no metabolismo fermentativo das células de S. cerevisiae e que determinados minerais como nitrogênio na forma de ureia, magnésio e manganês são mais significativos para o aumento do rendimento em etanol do que os outros minerais. / Despite great advances to improve the characteristics of the varieties of sugar cane, less is known about the impact of the sugar cane juice quality in the fermentation industry, more specifically on the fermentative metabolism of yeast. In this study we analyzed the relationship between variation of mineral composition of sugarcane juice and fermentative ability of Saccharomyces cerevisiae cells, determining the kinetics of sucrose intake and ethanol and glycerol production, as well as the cumulative effect of these minerals along recyclings fermentation. Fermentation media were supplemented with the main macro and micro nutrients found in sugar cane juice. Among the minerals examined all media supplemented showed a superior result to the standard medium (control medium), except the medium with excess copper. The medium with the greatest influence on the yield of ethanol was medium with urea, magnesium and manganese in which showed an 18.4% increase over the standard medium. The medium with copper with the lowest value compared to all the medium types, however, no difference in cell viability. These results suggest that in fact the minerals play important roles in the fermentative metabolism of the S. cerevisiae cells and that certain minerals, such as nitrogen as urea, magnesium and manganese are the most significant increase in ethanol yield than other minerals.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T16:33:25Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 818272 bytes, checksum: b93f482c5170531d886647a1db1ab445 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T16:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 818272 bytes, checksum: b93f482c5170531d886647a1db1ab445 (MD5) Previous issue date: 2015-10-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A produção de etanol combustível pode ser aumentada pelo estabelecimento de novas tecnologias que utilizam subprodutos agroindustriais como matéria-prima. O soro de queijo é um subproduto que pode ser utilizado como substrato para a produção de etanol. A levedura Kluyveromyces marxianus CCT 7735 é capaz de produzir etanol da lactose do soro de queijo, contudo concentrações de etanol superiores a 6% (v/v) afetam o crescimento dessa levedura. Apesar de esse ser o principal entrave para a utilização de Kluyveromyces marxianus em processos de produção de etanol, existem poucas informações sobre os efeitos e respostas adaptativas ao etanol nessa levedura. Recentemente, o transcriptoma dessa levedura cultivada sob estresse por etanol foi obtido, todavia os dados ainda não foram confirmados. Neste trabalho, o transcriptoma foi validado por meio da análise da expressão dos genes que codificam as enzimas transcetolase, hexoquinase, succinato desidrogenase e isocitrato lisase, respectivamente, por PCR em tempo real (qPCR). No intuito de compreender as respostas adaptativas de Kluyveromyces marxianus ao etanol, foi analisado o perfil metabólico desta levedura sob estresse por esse biocombustível. Os metabólitos intracelulares foram analisados por um sistema de cromatografia a gás (GC) acoplado a um espectrômetro de massa (MS). Posteriormente, os metabólitos identificados foram correlacionados com os dados do transcriptoma, também obtido sob estresse por etanol. A análise dos componentes principais indicou que o etanol provocou alterações no perfil metabólico da levedura. O aumento da abundância relativa dos metabólitos ácido nicotínico, alanina, valina, prolina, inositol, gentibiose, melibiose e lactulose parece estar associado às respostas adaptativas ao etanol em Kluyveromyces marxianus CCT 7735. Além disso, a análise do perfil metabólico, juntamente com as informações do transcriptoma, evidenciou que a via glicolítica é inibida pelo etanol e a via das pentoses fosfato e o ciclo do glioxilato são importantes no período de 4 h sob estresse por etanol. / The production of ethanol may be enhanced by setting up new technologies that use agroindustrial by-products as raw material. Cheese whey is a by-product that can be used as a substrate for the production of ethanol. The yeast Kluyveromyces marxianus CCT 7735 is able of producing ethanol from the lactose present in the cheese whey, concentrations higher than 6% (v/v) affect the growth of such yeast, however. Although being the main obstacle for using Kluyveromyces marxianus in ethanol production processes, there is little information on the effects and the adaptive responses to the ethanol on such yeast. Recently, the transcriptome of that yeast, cultivated under stress in the ethanol, has been obtained. Nevertheless, the data have not been confirmed yet. In this work, the transcriptome was validated by analysis of gene expression that encodes the enzym estransketolase, hexokinase, succinato desidrogenase and isocitratolisase, respectively by PCR in real time (qPCR). In order to understand the adaptive responses of Kluyveromyces marxianus to the ethanol, the metabolic profile of this yeast under ethanol stress was analysed. The intracellular metabolites were analysed by a gas chromatography system (GC) coupled with a mass spectrometer (MS). After that, the identified metabolites were correlated to data of transcriptome, which was also obtained under ethanol stress. The analysis of the principal components revealed that ethanol promoted changes in the metabolic profile of this yeast. The increase in the relative abundance of nicotinic acid, alanine, valine, proline, inositol, gentibiose, melibiose and lactulose may be associated with adaptive responses to ethanol in Kluyveromyces marxianus CCT 7735. In addition, the analysis of the metabolic profile together with information of transcriptome revealed that the glycolytic pathway is inhibited by the ethanol, and the phosphate pentose pathway and the glyoxylate pathway are important in the 4-hour period under ethanol stress.

Orientador : Prof. Dr. Carlos Ricardo Soccol / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Tecnologia, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia. Defesa: Curitiba, 14/01/2015 / Inclui referências / Área de concentração: Biotecnologia agroalimentar / Resumo: Durante o processamento via úmida de café os frutos são despolpados e as sementes são submetidas ao processo de fermentação para a retirada do restante da mucilagem aderida ao pergaminho. A fermentação é uma etapa crítica no processamento, devido seu impacto sobre a qualidade final do produto. Este estudo teve como objetivo isolar, selecionar e implementar leveduras para controle e otimização do processo fermentativo de café. Na primeira etapa deste estudo, um total de 144 leveduras foram isoladas e identificadas por métodos moleculares. Pichia fermentans and P. kluyveri foram as espécies dominantes durante o processo, seguido por Candida glabrata, C. quercitrusa, Saccharomyces sp., P. guilliermondii, P. caribbica e Hanseniaspora opuntiae. Uma linhagem da espécie P. fermentans, denominada YC5.2, foi então selecionada devido sua capacidade de (i) resistir as condições de estresse impostas pelo ambiente de fermentação de café, (ii) produzir enzimas pectinolíticas para a aceleração do processo fermentativo e (iii) produzir quantidades significativas de compostos aromáticos (como por exemplo, acetato de etila e acetato de isoamila). Na segunda etapa deste estudo, P. fermentans YC5.2 foi inoculada em condições de campo de fermentação de café e comparada ao processo espontâneo (tratamento controle). Esta levedura mostrou-se apta para dominar o processo fermentativo e aumentou a eficiência do consumo de açúcares da polpa comparado ao tratamento controle. A inoculação da levedura também aumentou a produção de alguns compostos voláteis (como por exemplo, etanol, acetaldeído, acetato de etila e acetato de isoamila) e reduziu a produção de ácido láctico durante o processo fermentativo. Em relação aos grãos obtidos após o processo de torra, os teores de açúcares (glicose e frutose) e ácidos orgânicos (ácidos láctico, acético, cítrico, fumárico e málico) foram estatisticamente semelhantes (p <0,05) em ambos os tratamentos. No entanto, a inoculação provocou um aumento na fração de voláteis oriundos do metabolismo da levedura nos grãos torrados obtidos por este processo. Além disso, a análise sensorial da bebida mostrou que a inoculação produziu um café com características distintas em relação ao tratamento controle, como por exemplo, intensa percepção de sabor de baunilha e notas florais. Em conclusão, o uso de P. fermentans YC5.2 como uma cultura iniciadora para a fermentacão de café mostrou ser uma alternativa viável para melhor controle do processo de fermentação de café visando obter bebidas de sabor diferenciado e com alta qualidade. Palavras-chave: processamento de café, cultura iniciadora, levedura, Pichia fermentans, processamento por via úmida. / Abstract: During wet processing of coffee, the ripe cherries are pulped, then fermented and dried. The fermentation is considered to be a critical step of processing due to its impact on the final quality of the product. This study aimed to isolate, select and implement yeasts in fermentation of coffee beans by the wet method. In the first stage of the study, a total of 144 yeast isolates originating from spontaneously fermenting coffee beans were identified by molecular approaches and screened for their capacity to grow under coffee-associated stress conditions. Pichia fermentans and P. kluyveri were the most frequent isolates, followed by Candida glabrata, C. quercitrusa, Saccharomyces sp., P. guilliermondii, P. caribbica and Hanseniaspora opuntiae. Pichia fermentans YC5.2 strain was selected due to its ability to (i) grow under coffee-associated stress conditions, (ii) produce pectinolytic enzymes and (iii) produce significant amounts of volatile aroma compounds (e.g., ethyl acetate and isoamyl acetate). In the second stage of the study, P. fermentans YC5.2 was inoculated into coffee beans fermentation under field conditions and compared with spontaneous (control) fermentation. This yeast strain prevailed over wild bacteria and yeast populations and increased the efficiency of pulp sugar consumption compared with control. The inoculation also increased the production of specific volatile aroma compounds (e.g., ethanol, acetaldehyde, ethyl acetate, and isoamyl acetate) and decreased the production of lactic acid. In roasted beans, the content of sugars (glucose and fructose) and organic acids (lactic, acetic, citric, fumaric, and malic acids) were statistically (p<0.05) similar for both treatments. However, the inoculated fermentation was shown to influence the volatile fraction of roasted coffee beans by increasing the concentration of yeast-derived metabolites compared to control. Sensory analysis of coffee beverages demonstrated that the use of the YC5.2 strain was favorable for the production of coffee with distinctive sensory profiles, presenting characteristics such as ?vanilla' taste and ?floral' aromas. In conclusion, the use of P. fermentans YC5.5 in wet processing of coffee beans was shown to be a viable alternative for those who seek improved control over the fermentation process and to obtain beverages of distinctive flavor and high quality. Keywords: coffee processing, starter culture, yeast, Pichia fermentans, wet method.