Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-14T17:20:42Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T17:20:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por outros helmintos e asmáticos não infectados. Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4, CD8 e CD14), a ativação celular (CD25 e HLA-DR), as moléculas co-estimulatórias (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 e CD86), ex vivo, e a citocina IL-10 foram avaliados pelo uso de anticorpos monoclonais por citofluorimetria. CMSP estimuladas por 20 horas in vitro com alérgeno (Der p1) foram avaliadas para a expressão intracelular de IL-10. Os resultados foram expressos em percentagem de células positivas (média ± DP) e média de intensidade de fluorescência (MIF) para HLA-DR (média ± DP). A frequência de CTLA-4 em células TCD4+ de asmáticos infectados pelo S. mansoni foi 0,49 ± 0,39%, em asmáticos infectados por outros helmintos foi 0,78 ± 0,25%, enquanto que em asmáticos não infectados foi 0,89 ± 0,56% (p < 0.05). A expressão de CD28 nas células TCD4+ e do seu ligante CD80 em monócitos foi semelhante em todos os grupos, enquanto que a expressão do CD86 foi diferente entre os grupos (95,90 ± 3,47%, 89,66 ± 6,35% e 95,28 ± 4,93%, respectivamente, p < 0,05). A expressão de CD25 em células TCD4+ também não diferiu significativamente entre os grupos (7,45 ± 2,84%, 6,84 ± 2,36% e 7,84 ± 3,38%, respectivamente). Nos indivíduos asmáticos infectados pelo S. mansoni foi observado que as células CD4+ foram as principais produtoras de IL-10, sendo, em percentual, as células CD4+CD25+ as principais produtoras desta citocina. As células TCD8+ juntamente com as CD14+ também representaram importantes fontes de IL-10 nestes pacientes. Conclusões: A principal diferença no estado de ativação celular entre asmáticos com ou sem a infecção pelo S. mansoni foi a maior frequência de células TCD4+ expressando CTLA-4, um marcador de ativação, em asmáticos não infectados. A modulação da resposta imune observada em indivíduos asmáticos cronicamente infectados pelo S. mansoni, envolve mecanismos complexos, que incluem a produção de citocinas, a exemplo da IL-10, e participação de células regulatórias.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-14T17:58:18Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T17:58:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por outros helmintos e asmáticos não infectados. Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4, CD8 e CD14), a ativação celular (CD25 e HLA-DR), as moléculas co-estimulatórias (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 e CD86), ex vivo, e a citocina IL-10 foram avaliados pelo uso de anticorpos monoclonais por citofluorimetria. CMSP estimuladas por 20 horas in vitro com alérgeno (Der p1) foram avaliadas para a expressão intracelular de IL-10. Os resultados foram expressos em percentagem de células positivas (média ± DP) e média de intensidade de fluorescência (MIF) para HLA-DR (média ± DP). A frequência de CTLA-4 em células TCD4+ de asmáticos infectados pelo S. mansoni foi 0,49 ± 0,39%, em asmáticos infectados por outros helmintos foi 0,78 ± 0,25%, enquanto que em asmáticos não infectados foi 0,89 ± 0,56% (p < 0.05). A expressão de CD28 nas células TCD4+ e do seu ligante CD80 em monócitos foi semelhante em todos os grupos, enquanto que a expressão do CD86 foi diferente entre os grupos (95,90 ± 3,47%, 89,66 ± 6,35% e 95,28 ± 4,93%, respectivamente, p < 0,05). A expressão de CD25 em células TCD4+ também não diferiu significativamente entre os grupos (7,45 ± 2,84%, 6,84 ± 2,36% e 7,84 ± 3,38%, respectivamente). Nos indivíduos asmáticos infectados pelo S. mansoni foi observado que as células CD4+ foram as principais produtoras de IL-10, sendo, em percentual, as células CD4+CD25+ as principais produtoras desta citocina. As células TCD8+ juntamente com as CD14+ também representaram importantes fontes de IL-10 nestes pacientes. Conclusões: A principal diferença no estado de ativação celular entre asmáticos com ou sem a infecção pelo S. mansoni foi a maior frequência de células TCD4+ expressando CTLA-4, um marcador de ativação, em asmáticos não infectados. A modulação da resposta imune observada em indivíduos asmáticos cronicamente infectados pelo S. mansoni, envolve mecanismos complexos, que incluem a produção de citocinas, a exemplo da IL-10, e participação de células regulatórias.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-07-15T14:44:00Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T14:44:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ICS_ Ricardo Riccio Oliveira.pdf: 1047223 bytes, checksum: a11ba5a84249bbfb0f9f37b69ac237f5 (MD5) / Introdução e Objetivos: Alguns estudos vêm demonstrando que as infecções por helmintos são capazes de inibir a resposta ao teste cutâneo para aereoalérgenos e modificar o curso clínico da asma, e que a IL-10, produzida em altos níveis em infecções pelo Schistosoma mansoni, é capaz de modular a resposta imune do tipo 2 envolvida na patogênese da asma. Os objetivos deste estudo foram avaliar a célula produtora de IL-10, o fenótipo celular e a expressão de moléculas co-estimulatórias em asmáticos infectados pelo S. mansoni, comparando estes resultados com os obtidos de asmáticos infectados por outros helmintos e asmáticos não infectados. Métodos e Resultados: O fenótipo celular (CD3, CD4, CD8 e CD14), a ativação celular (CD25 e HLA-DR), as moléculas co-estimulatórias (CTLA-4, CD28, CD40L, CD80 e CD86), ex vivo, e a citocina IL-10 foram avaliados pelo uso de anticorpos monoclonais por citofluorimetria. CMSP estimuladas por 20 horas in vitro com alérgeno (Der p1) foram avaliadas para a expressão intracelular de IL-10. Os resultados foram expressos em percentagem de células positivas (média ± DP) e média de intensidade de fluorescência (MIF) para HLA-DR (média ± DP). A frequência de CTLA-4 em células TCD4+ de asmáticos infectados pelo S. mansoni foi 0,49 ± 0,39%, em asmáticos infectados por outros helmintos foi 0,78 ± 0,25%, enquanto que em asmáticos não infectados foi 0,89 ± 0,56% (p < 0.05). A expressão de CD28 nas células TCD4+ e do seu ligante CD80 em monócitos foi semelhante em todos os grupos, enquanto que a expressão do CD86 foi diferente entre os grupos (95,90 ± 3,47%, 89,66 ± 6,35% e 95,28 ± 4,93%, respectivamente, p < 0,05). A expressão de CD25 em células TCD4+ também não diferiu significativamente entre os grupos (7,45 ± 2,84%, 6,84 ± 2,36% e 7,84 ± 3,38%, respectivamente). Nos indivíduos asmáticos infectados pelo S. mansoni foi observado que as células CD4+ foram as principais produtoras de IL-10, sendo, em percentual, as células CD4+CD25+ as principais produtoras desta citocina. As células TCD8+ juntamente com as CD14+ também representaram importantes fontes de IL-10 nestes pacientes. Conclusões: A principal diferença no estado de ativação celular entre asmáticos com ou sem a infecção pelo S. mansoni foi a maior frequência de células TCD4+ expressando CTLA-4, um marcador de ativação, em asmáticos não infectados. A modulação da resposta imune observada em indivíduos asmáticos cronicamente infectados pelo S. mansoni, envolve mecanismos complexos, que incluem a produção de citocinas, a exemplo da IL-10, e participação de células regulatórias

INTRODUÇÃO: A Asma Brônquica é caracterizada por obstrução ao fluxo aéreo, reversível ou não, e processo inflamatório pulmonar, caracterizado principalmente por eosinofilia. A persistência da inflamação pode induzir processo de reparo pulmonar associado à redução progressiva da função pulmonar. A recente descrição do sistema colinérgico anti-inflamatório, um mecanismo neural que suprime a resposta imune inata e controla a inflamação por inibição de citocinas proinflammatórias, e a detecção de alguns de seus componentes em células de vias aéreas sugerem uma importante participação deste sistema na fisiopatologia de doenças pulmonares. O principal mediador deste sistema é a acetilcolina (ACh), que é estocada em vesículas sinápticas pelo transportador vesicular de ACh (VAChT), proteína essencial para sua liberação. OBJETIVOS: Avaliar os efeitos da deficiência colinérgica por redução da VAChT nas alterações pulmonares observadas em modelo experimental de inflamação pulmonar induzida pela exposição crônica a ovoalbumina. METODOLOGIA: A redução colinérgica foi induzida pela modificação genética nos níveis de VAChT. Camundongos machos selvagens e mutantes foram submetidos ao protocolo de sensibilização subcutânea com ovoalbumina ou salina nos dias 0, 7 e 14. Após, foram submetidos a desafios inalatórios com ovalbumina a 1% ou inalações de salina por 20 minutos nos dias 26, 27 e 28. No dia 29, foi realizada a avaliação da mecânica pulmonar, da inflamação no lavado broncoalveolar e no tecido e análise histológica de remodelamento e expressão de MMP-9 e TIMP-1 por imunohistoquímica. Também foi quantificado por ELISA níveis de IL-4, IL-10 e de TNF-a no homogenato pulmonar. A análise estatística considerou um p<0,05 como significativo. RESULTADOS: Animais sensibilizados apresentaram hyperresponsividade brônquica, inflamação e edema peribrônquico e deposição de fibras colágenas e elásticas ao redor das vias aéreas comparado ao grupo salina (p<0,05). Além disso houve aumento de IL-4 no homogenato pulmonar e da expressão de MMP-9 e TIMP-1 nas células inflamatórias. Os animais mutantes, independente de serem ou não sensibilizados, apresentaram aumento de TNF-a no pulmão. Os animais mutantes que foram submetidos ao protocolo de sensibilização mostraram aumento da hiperresponsividade brônquica, do eosinófilos, do edema e da deposição de colágeno comparado aos animais selvagens que também foram sensibilizados com ovoalbumina. Estas alterações podem ser atribuídas ao aumento de IL-4 e de MMP-9/TIMP-1 que foi observado nos animais mutantes e sensibilizada em comparação com o os selvagens sensibilizados. Não houve diferença nos níveis de IL-10 nos grupos experimentais. Conclusão: A deficiência colinérgica piora a hiperresponsividade brônquica, a inflamação eosinofílica e o remodelamento, principalmente por interferir com a citocina pró-inflamatória IL-4 e na proporção de MMP-9 e TIMP-1. Estes dados sugerem que a via colinérgica antiinflamatória está envolvida na fisiopatogenia da asma e necessita ser mais investigada / BACKGROUND: Bronchial asthma is characterized by reversible or not airflow obstruction and pulmonary inflammation, mainly characterized by eosinophilia. The persistence of inflammation can induce lung repair process associated with progressive reduction in lung function. Recent evidence of the cholinergic anti-inflammatory system, a neural mechanism that suppresses the innate immune response and control inflammation by proinflammatory cytokines inhibition, and the detection of some of its components in airway cells suggest an important role of this system in pulmonary physiopathology. The main mediator of this system is acetylcholine (ACh), which is stored in synaptic vesicles by vesicular acetylcholine transporter (VAChT), an essential protein for ACh release. AIMS: To evaluate the effects of cholinergic deficiency by VAChT reduction on pulmonary alterations observed in an experimental model of pulmonary inflammation induced by chronic exposure to ovalbumin. METHODS: The cholinergic deficiency was induced by genetic modification on VAChT levels. Wild-type and mutant male mice were submitted to subcutaneous ovalbumin sensitization or saline protocol on days 0, 7 and 14. After, animals were submitted to inhalation challenge with ovalbumin 1% or saline for 20 minutes on days 26, 27 and 28. On day 29, we evaluated the pulmonary mechanics, inflammation in bronchoalveolar lavage and in airways, histological analysis of airway remodeling and the expression of MMP-9 and TIMP-1 by immunohistochemistry. It was also quantified by the levels of IL-4, IL-10 and TNF-a in lung homogenate. The statistical analysis were performed and a p<0.05 was considered significant. RESULTS: Sensitized animals presented bronchial hyperresponsividade, airway inflammation and edema and collagen and elastic fibers deposition of collagen and elastic fibers around the airways compared to saline group (p <0.05). Furthermore, there was an increase of IL-4 in lung homogenate and the expression of MMP-9 and TIMP-1 in inflammatory cells. The mutant animals, regardless the sensitization, showed an increase in lung content of TNF-a. The mutant and sensitized animals showed an increase in bronchial hyperresponsiveness, in eosinophils, edema and collagen deposition in airways compared to the wild type and sensitized animals. These changes can be attributed to increased IL-4 and MMP-9/TIMP-1 that were observed in mutant and sensitized animals. There was no difference in levels of IL-10 in the experimental groups. Conclusion: The cholinergic deficiency worsens bronchial hyperresponsiveness, eosinophilic inflammation, and airway remodeling mainly by interfering with the pro-inflammatory cytokine IL-4 and in MMP-9/TIMP-1 ratio. These data suggest that anti-inflammatory cholinergic pathway is involved in the asthma pathogenesis deserves further investigation

INTRODUÇÃO: A Asma Brônquica é caracterizada por obstrução ao fluxo aéreo, reversível ou não, e processo inflamatório pulmonar, caracterizado principalmente por eosinofilia. A persistência da inflamação pode induzir processo de reparo pulmonar associado à redução progressiva da função pulmonar. A recente descrição do sistema colinérgico anti-inflamatório, um mecanismo neural que suprime a resposta imune inata e controla a inflamação por inibição de citocinas proinflammatórias, e a detecção de alguns de seus componentes em células de vias aéreas sugerem uma importante participação deste sistema na fisiopatologia de doenças pulmonares. O principal mediador deste sistema é a acetilcolina (ACh), que é estocada em vesículas sinápticas pelo transportador vesicular de ACh (VAChT), proteína essencial para sua liberação. OBJETIVOS: Avaliar os efeitos da deficiência colinérgica por redução da VAChT nas alterações pulmonares observadas em modelo experimental de inflamação pulmonar induzida pela exposição crônica a ovoalbumina. METODOLOGIA: A redução colinérgica foi induzida pela modificação genética nos níveis de VAChT. Camundongos machos selvagens e mutantes foram submetidos ao protocolo de sensibilização subcutânea com ovoalbumina ou salina nos dias 0, 7 e 14. Após, foram submetidos a desafios inalatórios com ovalbumina a 1% ou inalações de salina por 20 minutos nos dias 26, 27 e 28. No dia 29, foi realizada a avaliação da mecânica pulmonar, da inflamação no lavado broncoalveolar e no tecido e análise histológica de remodelamento e expressão de MMP-9 e TIMP-1 por imunohistoquímica. Também foi quantificado por ELISA níveis de IL-4, IL-10 e de TNF-a no homogenato pulmonar. A análise estatística considerou um p<0,05 como significativo. RESULTADOS: Animais sensibilizados apresentaram hyperresponsividade brônquica, inflamação e edema peribrônquico e deposição de fibras colágenas e elásticas ao redor das vias aéreas comparado ao grupo salina (p<0,05). Além disso houve aumento de IL-4 no homogenato pulmonar e da expressão de MMP-9 e TIMP-1 nas células inflamatórias. Os animais mutantes, independente de serem ou não sensibilizados, apresentaram aumento de TNF-a no pulmão. Os animais mutantes que foram submetidos ao protocolo de sensibilização mostraram aumento da hiperresponsividade brônquica, do eosinófilos, do edema e da deposição de colágeno comparado aos animais selvagens que também foram sensibilizados com ovoalbumina. Estas alterações podem ser atribuídas ao aumento de IL-4 e de MMP-9/TIMP-1 que foi observado nos animais mutantes e sensibilizada em comparação com o os selvagens sensibilizados. Não houve diferença nos níveis de IL-10 nos grupos experimentais. Conclusão: A deficiência colinérgica piora a hiperresponsividade brônquica, a inflamação eosinofílica e o remodelamento, principalmente por interferir com a citocina pró-inflamatória IL-4 e na proporção de MMP-9 e TIMP-1. Estes dados sugerem que a via colinérgica antiinflamatória está envolvida na fisiopatogenia da asma e necessita ser mais investigada / BACKGROUND: Bronchial asthma is characterized by reversible or not airflow obstruction and pulmonary inflammation, mainly characterized by eosinophilia. The persistence of inflammation can induce lung repair process associated with progressive reduction in lung function. Recent evidence of the cholinergic anti-inflammatory system, a neural mechanism that suppresses the innate immune response and control inflammation by proinflammatory cytokines inhibition, and the detection of some of its components in airway cells suggest an important role of this system in pulmonary physiopathology. The main mediator of this system is acetylcholine (ACh), which is stored in synaptic vesicles by vesicular acetylcholine transporter (VAChT), an essential protein for ACh release. AIMS: To evaluate the effects of cholinergic deficiency by VAChT reduction on pulmonary alterations observed in an experimental model of pulmonary inflammation induced by chronic exposure to ovalbumin. METHODS: The cholinergic deficiency was induced by genetic modification on VAChT levels. Wild-type and mutant male mice were submitted to subcutaneous ovalbumin sensitization or saline protocol on days 0, 7 and 14. After, animals were submitted to inhalation challenge with ovalbumin 1% or saline for 20 minutes on days 26, 27 and 28. On day 29, we evaluated the pulmonary mechanics, inflammation in bronchoalveolar lavage and in airways, histological analysis of airway remodeling and the expression of MMP-9 and TIMP-1 by immunohistochemistry. It was also quantified by the levels of IL-4, IL-10 and TNF-a in lung homogenate. The statistical analysis were performed and a p<0.05 was considered significant. RESULTS: Sensitized animals presented bronchial hyperresponsividade, airway inflammation and edema and collagen and elastic fibers deposition of collagen and elastic fibers around the airways compared to saline group (p <0.05). Furthermore, there was an increase of IL-4 in lung homogenate and the expression of MMP-9 and TIMP-1 in inflammatory cells. The mutant animals, regardless the sensitization, showed an increase in lung content of TNF-a. The mutant and sensitized animals showed an increase in bronchial hyperresponsiveness, in eosinophils, edema and collagen deposition in airways compared to the wild type and sensitized animals. These changes can be attributed to increased IL-4 and MMP-9/TIMP-1 that were observed in mutant and sensitized animals. There was no difference in levels of IL-10 in the experimental groups. Conclusion: The cholinergic deficiency worsens bronchial hyperresponsiveness, eosinophilic inflammation, and airway remodeling mainly by interfering with the pro-inflammatory cytokine IL-4 and in MMP-9/TIMP-1 ratio. These data suggest that anti-inflammatory cholinergic pathway is involved in the asthma pathogenesis deserves further investigation