Os objetivos foram: identificar a microbiota fúngica e a ocorrência de aflatoxinas em cultivar de amendoim, identificar a microbiota fúngica do solo e correlacionar os resultados obtidos com os níveis de atividade de água encontrados. As amostras (solo e amendoim) foram provenientes de: Jaboticabal, Rosália, Tupã e Cafelândia (SP). A microbiota fúngica do solo revelou que o fungo do gênero Penicillium foi o mais frequente (52,1 %) nas quatro regiões durante as duas coletas (após a emergência das plantas e duas semanas antes do arranquio). Dentro do gênero Aspergillus, A. flavus foi a espécie mais frequente (13,5 %). A microbiota fúngica dos grãos e das cascas, das quatro regiões, nas duas coletas (duas semanas antes do arranquio e após o arranquio), demonstrou maior frequência de isolamento do fungo do gênero Fusarium (70,2 %). Do gênero Aspergillus, a espécie A. flavus foi a mais frequente (9,8 %). A análise de aflatoxinas revelou a presença de aflatoxinas em 5 % das amostras de grãos analisadas. Nas cascas, 13,75 % das amostras apresentaram contaminação por aflatoxinas. / The objectives were: to identify the mycoflora and the occurrence of aflatoxins in a peanut variety, identify the soil mycoflora and compare the acquired results with the levels of water activity found. The samples (peanut and soil) were collected from: Jaboticabal, Rosália, Tupã and Cafelândia (SP/Brazil). The mycoflora of the soil revealed that the genus Penicillium was the most frequent (52.1 %) in the four regions during the two trials (after the emergence of the plants and two weeks before the uprooting). Within the genus Aspergillus, A. flavus was the most frequent specie (13.5 %). The mycoflora of the kernels and peanut hulls, from the four regions in the two trials (two weeks before the uprooting and after the uprooting), demonstrated greater frequency of isolation of the genus Fusarium (70.2 %). Within the genus Aspergillus, A. flavus was the most frequent specie (9.8 %). The analysis of aflatoxins revealed the presence of aflatoxins in 5 % of the kernels samples analyzed. In peanut hulls, 13.75 % of the samples presented aflatoxin contamination.

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gasperini_AlessandraMarcon_M.pdf: 1292764 bytes, checksum: fcbdfc6ab370ac6744e8002a57b4a69e (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O fungo Aspergillus flavus é responsável pela degradação de alimentos, além de produzir aflatoxinas que são reconhecidas como potentes carcinógenos. Atualmente, frente ao aumento acelerado de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos e à pressão dos consumidores pela substituição destes por produtos naturais, a busca de novos antimicrobianos a partir de óleos essenciais (OE) tem se tornado uma opção promissora. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade de 13 OE, provenientes de plantas medicinais e aromáticas no controle do crescimento de A. flavus CCT 0614 e produção das aflatoxinas AFB1 e AFB2. Ensaios in vitro realizados pelo teste da microdiluição mostraram que os OE de Cinamommum burmanii (MIC 0,2 mg.mL-1) e Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata e T. vulgaris (MIC 0,5 mg.mL-1) apresentaram elevada ação anti ¿ A. flavus. Em relação à produção de biomassa seca pelo fungo na presença dos OE, nas concentrações correspondentes a de mínima concentração inibitória (MIC) e 2xMIC, houve diminuição significativa em relação ao controle (p > 0,05). A avaliação do crescimento radial de A. flavus quando submetido à ação dos compostos voláteis (AV) do OE de C. burmanii a 0,2 mg.mL-1 mostrou inibição total até 336 h. Por outro lado, os OE de E. caryophyllata, T. vulgaris e C. citratus reduziram o crescimento radial do fungo quando incorporados ao meio de cultura e quando submetidos a ação dos voláteis. Os OE mais ativos foram analisados através de CG-EM, que permitiu identificar nos óleos compostos conhecidos pela ação antimicrobiana. Em seguida, o OE de C. citratus foi selecionado para estudo dos efeitos sobre a produção de aflatoxinas por A. flavus, quantificada por CLAE-FL. Os resultados mostraram que o OE de C. citratus foi capaz de reduzir a produção de AFB1 em 95% quando incorporado ao meio a 0,5 mg.mL-1, enquanto houve um aumento de cerca de 53% na produção da micotoxina a 0,25 mg.mL-1, após o mesmo período. Não foi detectada a presença da AFB2. Os resultados deste trabalho indicam que os OE estudados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. flavus e o OE de C. citratus à produção de AFB1. A possibilidade de aplicação dos OE por AV é uma alternativa atrativa, pelo fato de não afetar as propriedades físicas e sensoriais do alimento / Abstract: The fungus Aspergillus flavus is responsible for damage in foods, and by aflatoxins production that are recognized as potent carcinogens. Currently, due to rapid increase of resistant strains to synthetics antifungal, and consumer pressure to replacing these synthetics compounds by natural products, the search for new antimicrobial from essential oils (EO) has become a promising option. This study aimed evaluate the capacity of 13 EO from medicinal and aromatic plants in the control of growth and aflatoxins B1 and B2 production by A. flavus CCT 0614. In vitro assays performed by microdilution method demonstrated that EO of Cinnamomum burmanii (MIC 0.2 mg.mL-1) and Cymbopogon citratus, C. martinii, C. winterianus, Eugenia caryophyllata and T. vulgaris (MIC 0.5 mg.mL-1) showed strong action anti - A. flavus. In relation to fungal biomass dry weight in the presence of OE in the concentrations corresponding to minimum inhibitory concentration (MIC) and 2xMIC, occurred a significant decrease compared to control (p< 0.05). The radial growth of A. flavus was inhibited totally until 336 h when submitted to the action of the volatile compounds (AV) of C. burmanii at 0.2 mg.mL-1. In contrast, the OE of E. caryophyllata, T. vulgaris and C. citratus reduced the radial growth of the mould when were incorporated to medium (IP) and when used in AV. EO that showed higher action were analysed by CG-MS this allowed identify the compounds known by antimicrobial action. The EO of C. citratus was selected to evaluation of the effects on the aflatoxins production by A. flavus, which was quantified by HPLC-FL. The results showed that C. citratus EO (0.5 mg.mL-1) was able to reduce 95% of AFB1 production, while the production increase about 53% with 0.25 mg.mL-1 after the same period. The presence of AFB2 was not detected. The most active EO were identified by GC-MS, which show the presence of compounds with known antimicrobial activity. The results of this study indicate that the EO studied represent a promising alternative to control the growth and AFB1 production by A. flavus. The possibility of application of EO by AV is an attractive alternative, in view of the fact that it does not affect the physical and sensory properties of food / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Orientador: Marta Cristina Teixeira Duarte / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-26T00:07:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Possari_CamilaKopezky_M.pdf: 2524622 bytes, checksum: e715e6d4f298fb93b3325792c5427282 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A castanha do Brasil (Bertholletia excelsa H.B.K.) é a segunda mais importante fonte extrativista da floresta amazônica. Desta forma, não são utilizados defensivos químicos e a produção da castanha do Brasil é considerada orgânica tendo sua extração ambientalmente correta, porém este baixo nível tecnológico favorece o crescimento de fungos potencialmente produtores de micotoxinas como os do grupo Aspergillus section flavi. Visando reduzir esta contaminação, uma das possibilidades é a utilização de óleos essenciais, que apresentam propriedades antimicrobianas. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antifúngica de 11 óleos essenciais de espécies medicinais e aromáticas sobre cepas aflatoxigênicas de A. flavus, A. nomius e A. arachidicola isoladas de castanha do Brasil. O ensaio de microdiluição mostrou que os óleos que apresentaram melhor atividade antifúngica contra estes os isolados foram Cinnamomum burmannii e Eugenia caryophyllata, com MIC de 250 'mu'g/mL e 500 'mu'g/mL, respectivamente. A inibição do crescimento micelial dos fungos foi melhor quando estes foram submetidos à ação por contato com os óleos essenciais, do que por ação de seus compostos voláteis, sendo as concentrações referentes às de MIC capazes de inibir totalmente o crescimento dos fungos. A produção de aflatoxina por A. flavus foi inibida somente pelo óleo essencial de E. caryophyllata, na concentração de 500 'mu'g/mL. Ensaios in vivo conduzidos com a casca da castanha do Brasil mostraram que o óleo essencial de C. burmannii inibiu o fungo a 500 'mu'g/mL e propiciou maior redução na porcentagem de infecção pelos isolados de A. flavus. Quanto aos isolados de A. nomius e A. arachidicola, a menor porcentagem de infecção foi obtida após tratamento com o óleo essencial de E. caryophyllata na concentração de 1000 'mu'g/mL. Os óleos de E. caryophyllata e C. burmanni mostraram ser alternativas naturais para controle do crescimento de A. flavus, A. nomius e A. arachidicola e da produção de aflatoxinas por A. flavus, através da ação na redução da contaminação fúngica das castanhas do Brasi / Abstract: The Brazil nut (Bertholletia excelsa H.B.K.) is the second most important forest source of the Amazon rainforest. Thus, no chemical pesticides are used and the production of Brazil nuts is considered organic and an environmentally friendly extraction. However, this low technological level favors the growth of potentialy mycotoxin producing fungi such as Aspergillus section flavi. In order to reduce this contamination, one possibility is the use of essential oils that exhibit antimicrobial properties. The objective of this study was to evaluate the antifungal activity of 11 essential oils of medicinal and aromatic species on aflatoxigenics strains of Aspergillus flavus, A. nomius and A. arachidicola isolated from Brazil nuts. The microdilution assay showed that the oils from Cinnamomum burmannii and Eugenia caryophyllata presented the best antifungal activity against all isolates, with MIC of 250 'mu'g/mL and 500 'mu'g/mL, respectively. The inhibition of mycelial growth of the fungi was better when submitted to action by contact than by action of oils volatile compounds, with concentrations of MIC able to completely inhibit the growth of fungi. The aflatoxin production was inhibited only by E. caryophyllata essential oil at a concentration of 500 'mu'g/mL . In vivo assays conducted with shells of Brazil nut showed that the essential oil of C. burmannii at 500 'mu'g/mL provided greater reduction in the percentage of infection by A. flavus isolates. As the isolates of A. nomius and A. arachidicola, the infection rate was lower after the treatment with the essential oil of E. caryophyllata in the concentration of 1000 'mu'g/mL. The essential oils of E. caryophyllata and C. burmannii showed to be natural alternatives for controlling the growth of A. flavus, A. nomius and A. arachidicola and aflatoxin production by A. flavus, through the reduction of the fungal contamination of Brazil nuts / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PolianadeOliveiraCoelho-Dissertacao.pdf: 591748 bytes, checksum: 0ee9a76f737829a2f58b8fd626dbacca (MD5) Previous issue date: 2010-09-17 / Aflatoxins are hepatotoxic, immunosuppressive, mutagenic, carcinogenic and teratogenic metabolites produced by Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus. They are found in various kinds of food, especially grains, and are widely used in the manufacture of animal feed. Aflatoxin B1 has the highest toxic power, and its most important metabolite, aflatoxin M1, is eliminated mainly via the milk. The limit values of aflatoxin accepted by Brazilian legislation are 50 ppb for animal feed, and 0.5 µg/L and 5.0 µg/L, for liquid and powdered milk, respectively. Young people are great milk consumers, and thereby milk toxicity becomes an important public health issue. This study evaluated the fungal microbiota and incidence of aflatoxin M1 in the milk of goats raised in three farms, located in the south of Minas Gerais and Mogiana Paulista region. The culture medium Rose-Bengal Sabouraud agar was used to evaluate food fungal microbiota. The presence of aflatoxin B1 was assessed by thin layer chromatography. Aflatoxin M1 in milk was determined by immunoaffinity column cleanout with high performance liquid chromatography (HPLC). In addition, meteorological conditions were surveyed in the regions studied to measure the pluviometric index, the average temperature and relative humidity of air, where the periods of higher incidence of fungi and toxins were found in feed and milk. Two feed samples were collected: concentrate and fodder, with four replications, in two different seasons (rains and drought). Milk samples were also collected, with four replications. Two experiments were conducted: one in the rainy season; another in drought. Their statistical design was completely randomized and factorial . The Tukey test was applied at the 5% significance level. The results showed that the improved methods were efficient to detect aflatoxin: thin layer chromatography, in feed; and high performance liquid chromatography, in milk. The good quality of the goat milk was confirmed by the absence of aflatoxin in the samples. However, the qualitative analysis of Aspergillus cultures revealed that of the 64 samples analyzed, 22,6% were contaminated by aflatoxin B1. / As aflatoxinas são metabólitos tóxicos produzidos por Aspergillus flavus e Aspergillus parasiticus com efeitos hepatotóxicos, imunossupressores, mutagênicos, carcinogênicos e teratogênicos. Estão presentes em vários alimentos, principalmente nos grãos, sendo amplamente utilizados na fabricação de rações animais. A aflatoxina B1 é a de maior poder tóxico e o seu metabólito é eliminado principalmente no leite, sendo o de maior importância a aflatoxina M1. Os limites aceitos pela legislação brasileira são de 50 ppb de aflatoxinas para alimentos destinados a animais e de 0,5 µg/L e 5,0 µg/L de aflatoxina M1 para leite fluido e em pó, respectivamente. Devido à sua toxicidade, principalmente em indivíduos mais jovens, que são os maiores consumidores de leite, tornam-se um importante problema de saúde pública. Os objetivos deste trabalho foram avaliar a microbiota fúngica e a incidência de aflatoxina B1 em alimentos consumidos por cabras e a incidência de aflatoxina M1 em leite de cabras criadas em 3 propriedades localizadas na região do Sul de Minas Gerais e Média Mogiana Paulista. Os alimentos foram avaliados quanto à microbiota fúngica utilizando-se Ágar Sabouraud Rosa de Bengala. A detecção de aflatoxinas B1 foi avaliada pela técnica de cromatografia em camada delgada, enquanto, no leite, primeiramente foi feita a extração e purificação em colunas de imunoafinidade, sendo a detecção de aflatoxina M1 avaliada utilizando-se a cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Aliado a estes levantamentos, foi realizada uma análise das condições meteorológicas das regiões de Minas Gerais e São Paulo, aferindo-se o índice pluviométrico, a temperatura média e a umidade relativa do ar onde foram verificadas e comparadas as épocas de maior incidência de fungos e suas toxinas nos alimentos e no leite. Foram colhidas amostras de dois alimentos (concentrado e volumoso) com quatro repetições e em duas épocas diferentes (chuva e seca) e amostras de leite também com quatro repetições em cada época. O delineamento estatístico foi inteiramente casualizado (DIC) em esquema fatorial e foi utilizado o teste Tukey com 5% de nível de significância. Os resultados obtidos revelaram que a otimização das referidas metodologias de cromatografia em camada delgada para análise de aflatoxina em rações e de HPLC no leite caprino mostraram-se eficientes. Em todas as amostras de leite caprino, não foi detectada a presença de aflatoxinas, demonstrando a boa qualidade do leite quanto à contaminação por essas toxinas. Porém, após a análise qualitativa da toxigenicidade das culturas da espécie do gênero Aspergillus, observou-se que, das 64 amostras de rações analisadas, 22,6 % encontravam-se contaminadas com aflatoxina B1.

Aspergillus flavus is the most common causal agent of aflatoxin contamination of food and feed. However, aflatoxin-producing potential varies widely among A. flavus genotypes with many producing no aflatoxins. Some non-aflatoxigenic genotypes are used as biocontrol agents to prevent contamination. Aflatoxin biosynthesis genes are tightly clustered in a highly conserved order. Gene deletions and presence of single nucleotide polymorphisms (SNPs) in aflatoxin biosynthesis genes are often associated with A. flavus inability to produce aflatoxins. In order to identify mechanisms of non-aflatoxigenicity in non-aflatoxigenic genotypes of value in aflatoxin biocontrol, complete cluster sequences of 35 A. flavus genotypes from Africa and North America were analyzed. Inability of some genotypes to produce aflatoxin resulted from deletion of biosynthesis genes. In other genotypes, non-aflatoxigenicity originated from SNP formation. The process of degeneration differed across the gene cluster; genes involved in early biosynthesis stages were more likely to be deleted while genes involved in later stages displayed high frequencies of SNPs. Comparative analyses of aflatoxin gene clusters provides insight into the diversity of mechanisms of non-aflatoxigenicity in A. flavus genotypes used as biological control agents. The sequences provide resources for both diagnosis of non-aflatoxigenicity and monitoring of biocontrol genotypes during biopesticide manufacture and in the environment.

Orientador: Vera Aparecida de Oliveira Tiera / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Banca: Iêda Aparecida Pastre Fertonani / Resumo: O presente trabalho descreve a síntese, caracterização e o estudo do mecanismo da atividade antimicrobiana de derivados anfifílicos de quitosana contra o fungo Aspergillus flavus. As quitosanas utilizadas nas sínteses foram obtidas pela desacetilação heterogênea de quitosana comercial. O derivado hidrofílico foi obtido pela reação de quitosana com cloreto de 2-cloro-N,N-dietilaminoetil (DEAE). O grau de substituição (GS) de grupos DEAE inseridos na cadeia polimérica foi determinado utilizando-se as técnicas de Ressonância Magnética Nuclear de Hidrogênio (RMN¹H) e Espectroscopia de absorção na região do Infravermelho (FTIV), obtendo-se 40% de substituição (QD 40% DEAE). Em seguida, a quitosana-DEAE foi degradada com nitrito de sódio para obtenção de polímeros com diferentes massas moleculares (Mw). As massas moleculares foram determinadas por Cromatografia de Permeação em Gel (GPC), e os valores obtidos foram 8 - 25 - 60 - 116 e 136 kDa respectivamente. Na sequência, as quitosanas de diferentes Mw foram alquiladas com dodecilaldeído seguido pela redução com borohidreto de sódio, obtendo-se derivados com ~20% de conteúdo hidrofóbico caracterizados por RMN¹H e FTIV. O comportamento em solução dos derivados anfifílicos foi estudado utilizando Espectroscopia de Fluorescência, e os resultados mostraram que em baixas concentrações os derivados de quitosana se auto-associam formando domínios hidrofóbicos. A agregação ocorre a partir da concentração de agregação crítica (CAC) que... / Abstract: This study describes the synthesis, characterization and the study of mechanism and antimicrobial activity of chitosan derivatives against the fungus Aspergillus flavus. Chitosan was obtained by the heterogeneous deacetylation of commercial chitosan. The hydrophilic derivative was obtained by reaction of chitosan with 2-chloro-N, N-diethylaminoethyl (DEAE) chloride. The degree of substitution (GS) of DEAE groups was determined using the techniques of Nuclear Magnetic Resonance of Hydrogen (NMR¹H) and Absorption Spectroscopy in the Infrared region (FTIV), obtaining 40% of substitution. Afterwards, samples of the obtained derivative were degraded with sodium nitrite to obtain polymers with different molecular weights (Mw). Molecular weights were determined by Gel Permeation Chromatography (GPC), and the obtained values were 8 - 25 - 60 - 116 and 136 kDa respectively. Subsequently, chitosans with different molecular masses were alkylated with dodecyl aldehyde followed by reduction with sodium borohydride to provide ~ 20% hydrophobic content that was characterized by NMR¹H. The solution behavior of the amphiphilic derivatives was studied using Fluorescence Spectroscopy, and the results showed that at low concentrations, chitosan derivatives form self-assembled particles with hydrophobic domains. Derivatives self-aggregate at the critical aggregation concentrations (CAC), which were shown to be dependent on the molecular mass and degree of substitution by hydrophobic groups ... / Mestre

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In questa tesi di dottorato sono stati indagati i punti critici legati ai fattori biotici e abiotici che possono influenzare la crescita del fungo Fusarium verticillioides, produttore di fumonisine in mais. le fumonisine sono metaboliti secondari prodotte da funghi appartenenti al genere Fusarium e sono state classificate come possibili cancerogene per l’uomo e per gli animali. Gli argomenti trattati nei vari capitoli sono stati: parametri ecologici che condizionano la crescita e l’accumulo di fumonisine nelle prime fasi post raccolta e durante lo stoccaggio; relazione che intercorre tra aw, umidita’ relativa e tipo di ibrido; controllo con mezzi chimici e biologici in campo e in vitro su F. verticillioides e A. flavus. / The aim of this work was to collect missing information about critical point related to abiotic and biotic factors that can influence the growth of Fusarium verticillioides in maize and the consequent production of fumonisins in kernels. Fumonisins are secondary metabolites reported as toxigenic in humans and animals. Issues treated are: variables influencing growth and toxin accumulation during post-harvest and storage; the relationship between aw, relative humidity and type of hybrids; chemical and biological control of F. verticillioides e A. flavus in field and in vitro.

Thèse de doctorat : Sciences et techniques de l'environnement : Paris 12 : 2005. / Version électronique uniquement consultable au sein de l'Université Paris 12 (Intranet). Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. : 227 réf.

The combined effect of Modified Atmosphere Packaging (MAP) involving gas packaging, oxygen absorbent and other environmental factors to control aflatoxin production by Aspergillus flavus and Aspergillus parasiticus in both synthetic media and peanuts were studied using a process optimization technique termed Response Surface Methodology (RSM). Regression analysis of the data indicated that water activity (a$ sb{ rm w}$), pH, storage temperature, initial concentration of headspace oxygen and inoculum level were all highly significant factors (p 0%). These changes in the barrier characteristics influenced the headspace gas composition within the product and under modified atmospheres hence the level of aflatoxin detected in these stored products. / In conclusion, this study has shown that the combined effect of several "barriers" can be used in conjunction with low oxygen modified atmosphere and high barrier packaging films to inhibit or reduce aflatoxin to safe and acceptable levels, particularly at abusive temperatures encountered during storage.