Made available in DSpace on 2015-10-10T02:04:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475655-Texto+Completo-0.pdf: 1136903 bytes, checksum: 1a2ad879662fb2a0203c2418ab7dc36f (MD5) Previous issue date: 2015 / Liver fibrosis is a complex disease that is caused by inappropriate tissue repair due to the deposition of connective tissue. When a chronic lesion affects the liver, regenerative response fails and hepatocytes are replaced with abundant extracellular matrix (ECM). The imbalance between production and degradation of ECM will result in the accumulation of proteins that change normal liver architecture, and thus its functionality. The main source of ECM is the activated hepatic stellate cell (HSC). In order, to clarify possible therapeutic approaches to the disease, the this work aimed to evaluate the possible antifibrotic action of Pluchea sagitallis (Lam. ) Cabrera on an activated HSC immortalized lineage (GRX). Our results demonstrated that the P. sagittalis aqueous extract at 0. 039 and 0. 078 mg/mL concentrations was able to reduce cell growth and proliferation. Regarding to oxidative stress evaluation, there was no statistically significant difference between the treated group and the control. Staining with OilRed-O (ORO) showed a statistically significant increase in intracellular lipid content after 5 days of treatment, exerting in vitro effect on the GRX phenotypic change of activated towards the quiescent state. These results were confirmed by colorimetric quantification of lipid content. Regarding the TGF-β1 and collagen production, there were no statistically significant differences observed between the groups. In conclusion, the P. sagittalis aqueous extract reduces the growth and proliferation of GRX cells and induces the reversal of activated towards a quiescent phenotype. There was no decrease in cell proliferation either by necrosis or by apoptosis via activation of the senescence. Thus, our data suggest that the extract showed an antifibrotic effect, possibly by activating phenotype reversal. / A fibrose hepática apresenta uma patogênese complexa causada por reparo tecidual inadequado devido à deposição de tecido conectivo. Quando um dano crônico acomete o fígado, a resposta regenerativa falha e os hepatócitos são substituídos por matriz extracelular (ECM) excedente. Assim, o desequilíbrio entre a degradação e a produção de ECM acarretará no acúmulo dessas proteínas que alteram a arquitetura normal do fígado e, consequentemente, sua funcionalidade. A principal fonte de ECM é a célula estrelada hepática (HSC) ativada. Sendo assim, na tentativa de elucidar possíveis abordagens terapêuticas para a doença, o objetivo desse trabalho foi avaliar a possível ação antifibrótica do extrato aquoso de Pluchea sagitallis (Lam. ) Cabrera sobre uma linhagem imortalizada de HSC ativadas (GRX). Nossos resultados demonstraram que as concentrações de 0,039 e 0,078 mg/mL do extrato aquoso de P. sagitallis foram capazes de diminuir o crescimento e a proliferação celular. Quanto à avaliação do estresse oxidativo, não foi observada diferença estatisticamente significativa entre o grupo tratado e controle. A coloração com oil red (ORO) mostrou aumento significativo do conteúdo lipídico intracelular após 5 dias de tratamento, indicando efeito in vitro sobre a mudança fenotípica em linhagem GRX, do estado ativado para o estado quiescente. Esses resultados foram confirmados pela quantificação colorimétrica de lipídios. Em relação à produção de TGF-β1 e colágeno total, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos. Concluindo, o extrato aquoso da P. sagittalis diminuiu o crescimento e a proliferação das células GRX e induziu a reversão do fenótipo ativado para quiescente.A diminuição na proliferação celular não ocorreu nem por necrose nem por ativação da apoptose e senescência. Sendo assim, nossos resultados sugerem que o extrato apresenta um efeito antifibrótico, possivelmente pela via que ativa a reversão do fenótipo.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000430842-Texto+Completo-0.pdf: 2935464 bytes, checksum: 65b5bce8dd872e39bf663fce3ac30b27 (MD5) Previous issue date: 2011 / Nature as a source of inspiration has been shown to have a great beneficial impact on the development of new computational methodologies. In this scenario, analyses of the interactions between a protein target and a ligand can be simulated by biologically inspired algorithms. In this work, bioinspired algorithms, evolutionary algorithms specially, are applied to molecular docking simulations that can be used in the search for new drugs. These docking algorithms were applied to sirtuins, which compose an important family of proteins, nicotine adenine dinucleotide (NAD) deacetylases that regulate gene silencing, transcriptional repression, recombination, the cell apoptosis division cycle, chromosomal stability, and cellular responses to DNA-damaging agents. These proteins are emerging as molecular targets for pharmaceutical development of drugs for treating human diseases. On the basis of the structural importance of these proteins, in this work we carried out the molecular homology modeling of human SIRT1, using Thermotoga maritima Sir2 crystallographic structure as template. Furthermore, we also performed a virtual screening procedure for SIRT1 model against two databases. One based on a nicotinamide derivatives and the other composed of molecules from Sigma-Aldrich vendor. Based on the virtual screening results we used the lowest free binding energy (Plant Score) molecules to select the bet hits. We employed a Similarity Ensemble Approach Tool (SEA) for assessing the ligand structure and protein pharmacological activity relationships. Our results indicate some molecules presented high affinity against SIRT1, which suggest new of SIRT1 inhibitors. These molecules show a high number of pharmacological activity references. Our results suggest new compounds for development of SIRT1 inhibitors with potential therapeutic application. / A natureza como fonte de inspiração provou ter grande impacto benéfico no desenvolvimento de novas metodologias computacionais. Neste cenário, análises de interações entre uma proteína alvo e um ligante podem ser simuladas por algoritmos inspirados biologicamente (BIA). Neste trabalho, os algoritmos inspirados biologicamente, especialmente algoritmos evolutivos, são aplicados a simulações de docking molecular, que podem ser usadas na busca de novos fármacos. Estes algoritmos de docking foram aplicados a sirtuínas, que compõem uma importante família de proteínas - desacetilases dependentes de NAD - que regulam o silenciamento genético, inibição transcricional, estabilidade cromossômica, ciclo de divisão celular e apoptótico e resposta célular a agentes causadores de danos no DNA. Essas proteínas tem sido alvos moleculares emergentes no desenvolvimento farmacêutico de medicamentos para o tratamento de doenças humanas. Em função da importância estrutural das proteínas, neste trabalho foi realizada a modelagem por homologia molecular de SIRT1 humana, utilizando-se a estrutura cristalográfica de Sir2 de Thermotoga maritima como modelo. Além disso, foi aplicado o procedimento de virtual screening para a SIRT1 modelada contra duas bases de dados. Uma foi baseada em estruturas derivadas da nicotinamida e outra composta por moléculas da Sigma-Aldrich. Com base nos resultados obtidos no virtual screening, foram utilizados os acoplamentos com valores mais baixos de energia livre de ligação (Plant Score) para a seleção das melhores moléculas. Foi empregada a Similarity Ensemble Approach Tool (SEA), uma abordagem estratégica para analisar as relações entre as estruturas e a atividade farmacológica. Os resultados indicam que algumas moléculas apresentaram alta afinidade com a SIRT1, sugerindo novos inibidores de SIRT1, e essas moléculas mostram um elevado número de referências de atividades farmacológicas. Nossos resultados sugerem novos compostos inibidores de SIRT1 que apresentam potencial aplicação terapêutica.

Made available in DSpace on 2015-06-26T02:29:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000471145-Texto+Completo-0.pdf: 569 bytes, checksum: eb2876b2ade6978e29977d58295e97ea (MD5) Previous issue date: 2015 / Glioblastoma multiform (GBM) is a highly aggressive tumor of the central nervous system and has a few available therapies. In GBM, proinflammatory signaling pathways, such as STAT3 and NF-κB are aberrantly activated and associated with cell proliferation, survival, invasion and resistance to chemotherapy. Therefore, inhibition of these pro-inflammatory pathways has been suggested as a strategy to combat malignant cells. Resolvins of D-series promote resolution of inflammation by decreasing the activation of NF-κB. The Resolvin D2 (RvD2) is derived from a double sequence of docosahexaenoic acid lipoxygenation, which is derived from the essential fatty acid Omega-3. Our hypothesis is that the resolvins, by direct or indirect inhibition of pro-inflammatory pathways, could compromise the survival and growth of glioma. Our goal is to assess the role of RvD2 and its precursor 17 (R) HDHA (HR17) on tumor cell proliferation and survival in murine glioma model. For this, murine glioma cell line (GL261) was treated in vitro with RvD2 and HR17, and cell death and proliferation were evaluated. Furthermore, the effect of RvD2 and HR17 was evaluated in vivo after GL261 brain implantation; histopathological characteristics and immunohistochemistry for activated caspase-3 were evaluated to. It was found that RvD2 GL261 induces apoptosis in vitro. Furthermore, in vivo treatment of RvD2 and HR17 increased the number of tumor cells positive for activated caspase-3, although not alter tumor area. Interestingly, the HR17 treatment reduces tumor mitotic index in vivo. These results suggest that RvD2 and HR17 have a potential role in the induction of apoptosis in murine glioma cells. / Glioblastoma multiforme (GBM) é um tumor altamente agressivo do Sistema Nervoso Central e possui poucas terapias disponíveis. Em GBM, vias de sinalização pró-inflamatórias, como da STAT3 e NF-κB, são aberrantemente ativadas e associadas com a proliferação celular, sobrevivência, invasão e resistência à quimioterapia. Por conseguinte, a inibição dessas vias próinflamatórias tem sido sugerida como uma estratégia para combater as células malignas. As resolvinas da série D promovem resolução da inflamação diminuindo a ativação de NF-κB. A Resolvina D2 (RvD2) deriva de uma sequencia de dupla lipoxigenação do ácido docosahexaenóico, o qual é derivado do ácido graxo essencial Omega-3. Nossa hipótese é que as resolvinas, por inibição direta ou indireta de vias pró-inflamatórias, poderiam comprometer a sobrevivência e o crescimento do glioma. Nosso objetivo consiste em avaliar o papel da RvD2 e de seu precursor 17(R)HDHA (HR17) sobre a proliferação de células tumorais e sobrevivência em um modelo de glioma murino. Para isso, a linhagem de células de glioma murino (GL261) foi tratada in vitro com RvD2 e HR17, e amorte celular e proliferação foram avaliadas. Além disso, o efeito de RvD2 e HR17 foi avaliado in vivo após o implante de GL261 no cérebro, avaliando-se características histopatológicas e a imunohistoquímica para caspase-3 ativada. Verificou-se que RvD2 induz apoptose de GL261 in vitro. Além disso, o tratamento de RvD2 e HR17 in vivo aumentou o número de células tumorais positivas para caspase-3 ativada, embora não alterassem a área do tumor. Curiosamente, o tratamento HR17 reduz o índice mitótico tumoral in vivo. Estes resultados sugerem que RvD2 e HR17 têm um potencial papel na indução de apoptose em células de glioma murino.

Made available in DSpace on 2015-06-10T02:05:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470158-Texto+Completo-0.pdf: 900834 bytes, checksum: c9822e05947627069fb5b4fc9d1f6005 (MD5) Previous issue date: 2015 / The international market for essential oils has an annual turnover of 1. 8 billion dollars, yet the Brazilian participation in this market is only 0. 1%. The vast biodiversity found in Brazil, although still little explored in relation to the chemical composition of its flora, places the country in a very promising position in terms of increasing its future participation in the essential oils market. Basil (Ocimum basilicum L. ) is a widely cultivated aromatic plant due to its medicinal properties. The importance of this species lies in the plant architecture, coloration and morphology of its leaves and flowers, in addition to the chemical composition of its essentials oils, giving specific aromas and having various uses in the culinary, perfume and pharmaceuticals industries. In this study, two experiments were performed with the aim of studying germination in simulated hypergravity and open-air cultivation, to evaluate the growth of the basil, its yield and essential oil composition. The extraction of the essential oils was carried out by steam distillation in a Clevenger apparatus. Quantitative and qualitative evaluation of the compounds was performed by gas chromatography coupled to a mass spectrometer detector (GC/MS). The mean values for germination under the effect of hypergravity simulation in protocols 1, 2 and 3 ranged from 81% to 87%. After this stage, the seeds exposed to simulated hypergravity were cultivated in the open-air and the fresh basil leaves were collected after 90 days to obtain the essential oils. The overall yield of oil was 0. 2mL to 0. 3mL and the essential oil was 0. 3% to 0. 4%. The largest and most predominant compound in this research was eugenol, ranging from 46% to 62%, with the second largest being linalool, which ranged from 22% to 28%. Further research in this area is essential to understand the real impact of simulated hypergravity on basil, and its effect on auxins and gene expression. / O mercado internacional de óleos essenciais movimenta anualmente 1,8 bilhões de dólares e a participação brasileira nesse mercado é de apenas 0,1%. A grande biodiversidade brasileira, ainda pouco explorada em relação à composição química de sua flora, coloca o Brasil numa situação muito promissora para aumentar sua participação futura no mercado de óleos essenciais. O manjericão (Ocimum basilicum L. ) é uma planta aromática largamente cultivada, devido à suas propriedades medicinais. A importância dessa espécie está na arquitetura da planta, na coloração e na morfologia das folhas e flores, além da composição química de seus óleos essenciais, originando aromas específicos e tendo utilização variada na gastronomia, perfumaria e indústria farmacêutica. Nesse trabalho, foram realizados dois experimentos, com o objetivo de estudar a germinação por hipergravidade simulada e o cultivo a céu aberto para avaliar o crescimento do manjericão, rendimento e a composição do óleo essencial. A extração do óleo essencial foi feita por arraste a vapor em aparelho Clevenger. A avaliação quantitativa e qualitativa dos compostos foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a um detector de massas (CG/MS). As médias de germinação deste trabalho foram de 81% a 87%. Após essa etapa, as sementes sob efeito de hipergravidade simulada foram cultivadas a céu aberto e, depois de 90 dias, foram coletadas folhas frescas de manjericão para obter óleos essenciais. O rendimento total de óleo foi de 0,2 mL a 0,3 mL e de óleo essencial de 0,3%. a 0,4%. O composto majoritário e predominante em nossas pesquisas foi o eugenol, variando entre 46% a 62%, e o segundo maior composto foi o linalol, que ficou entre 22% a 28%. Pesquisas nessa área são essenciais para entender o real impacto da hipergravidade simulada no manjericão, seu efeito na auxina e sua expressão gênica.

Made available in DSpace on 2015-06-12T02:08:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000470271-Texto+Completo-0.pdf: 601264 bytes, checksum: 631a8bec7a15cd2f97fae4e0bb07768a (MD5) Previous issue date: 2015 / The esophageal and oral tumors are classified as the most frequent malignancies in Brazil. Esophageal cancer is the eighth most common in the world and oral cancer is ranked as the 5th among malignant neoplasms affecting man in Brazil. The lipopolysaccharide (LPS) are characteristic compounds of the cell wall of gram-negative bacteria. They are able to regulate gene expression of pro-inflammatory cytokines by binding to toll-like receptor 4 (TLR4) via NF-kB pathway. Recent studies show that LPS can increase the migration ability of cell lines of human esophageal cancer HKESC-2 by increasing its binding properties. In the meantime, it has not been tested the effect of LPS on esophageal cancer cells OE19 and OE21 and human oral carcinoma HN30. Thus, this study aimed to determine the action of LPS compounds on the proliferation and viability of cell lines of human esophageal cancer and human oral carcinoma HN30.Were used as treatment LPS for OE19 and OE21 cell lines and the PgLPS (lipopolysaccharide of Porphyromonas gingivalis) for HN30 cell line. Cell viability was assessed using the MTT assay and cell counting. The TLR4 expression by real-time PCR was also evaluated. LPS at higher concentrations decreased significantly cell viability in both cell lines, adenocarcinoma (OE19) and squamous esophageal carcinoma (OE21) at different times of treatment. In addition, both cell lines, OE19 and OE21, expressed TLR4 receptor. Taken together, our data demonstrated that LPS at high concentrations might contribute to tumor death, in agreement with previously data. / Os tumores de esôfago e de boca estão classificados como as neoplasias malignas mais frequentes no Brasil. O câncer de esôfago é o oitavo mais comum no mundo e o câncer de boca é classificado como o 5º dentre as neoplasias malignas que afetam o homem no Brasil. Os lipopolissacáridos (LPS) são compostos característicos da parede celular de bactérias gram-negativas. Eles são capazes de regular a expressão de genes de citocinas pró-inflamatórias, através da ligação ao receptor toll-like 4 (TLR4) via NF-kB. Estudos recentes mostram que o LPS pode aumentar a habilidade de migração de linhagens célulares de câncer de esôfago humano HKESC-2 através do aumento de suas propriedades de adesão. Entretanto, ainda não foi testado o efeito do LPS sobre as células de câncer de esôfago e de carcinoma oral humano HN30. Deste modo, este estudo teve como objetivo determinar a ação dos compostos de LPS (derivado de bactérias) sobre a proliferação e viabilidade de linhagens celulares de câncer de esôfago humano, e de carcinoma oral humano. Foram utilizados como tratamento o LPS para as linhagens OE19 e OE21 e o PgLPS (lipopolissacarídeo da Porphyromonas gingivalis) para a linhagem HN30.A viabiliadade celular foi avaliada utilizando o ensaio MTT e contagem celular. Também foi avaliada a expressão do receptor TLR4 por PCR em tempo real. LPS em concentrações mais elevadas reduziu significativamente a viabilidade celular em ambas as linhagens celulares de câncer de esôfago, o adenocarcinoma (OE19) e o carcinoma de células escamosas (OE21) em diferentes tempos de tratamento. Além disso, ambas as linhagens celulares, OE19 e OE21, expressaram o receptor TLR4. Avaliados em conjunto, os nossos dados demonstram que o LPS em concentrações elevadas pode contribuir para a morte tumoral, de acordo com dados prévios.

Made available in DSpace on 2015-10-21T01:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475810-Texto+Completo-0.pdf: 380863 bytes, checksum: d1fcdd6e53d6287f6c48e59678eb0404 (MD5) Previous issue date: 2015 / After the proceeding of a transplant, it is of huge concem the use of all therapeutic resource available in order to prevent graft rejection. The incidence and severity of acute rejection have been reduced along time due to the development of new immunosuppressive agents such as cyclosporin, tacrolimus, mycophenolate mofetil (MMF), specific polyclonal and monoclonal antibodies. Mofetil mycophenolate (MMF) is a prodrug active only after its hydrolysis to mycophenolic acid (MPA). Once it, has a large variability on inter-individual response, an increasing need of therapeutic monitoring arises. This will permit an individualization of MMF therapy, optimizing immunosuppression and minimizing potential toxic effects. The aim of pharmacogenetics is to evaluate the association between individual genetic characteristics and different responses to the same therapeutic regimen. When considering immunosuppressive drugs, genetic changes on a single nucleotide (single nucleotide polymorphisms - SNPs) of genes encoding proteins involved in transport or drug metabolism may affect patient’s response to therapy. UDP-glucuronosyltransferases (UGTs) belong to a group of enzymes involved in phase II reactions, responsible for the detoxification of endogenous and exogenous substrates. UGT1A9 is of particular interest once it is the primary enzyme involved in the metabolism of the MPA. This enzyme is encoded by the UGT1A9 gene. In the present study, we investigated the effect of UGT1A9 c. 98T>C (rs72551330; g. 87289T>C) allelic variants on MMF metabolism in 39 renal transplant volunteers. MPA levels were measured by high pressure liquid chromatography using ultraviolet detection (HPLC/UV). The analysis of c. 98T>C polymorphism was performed by polymerase chain reaction (PCR), followed by fragment purification and sequencing. All investigated individuals showed having the same polymorphism genotype (c. 98TT) evaluation of variants or genotype influence on plasma levels of MPA and MPAG was not possible, even though different levels were observed in the study. / Ao realizar um transplante, é de fundamental importância que, seja utilizado todo o arsenal terapêutico disponível e cuidados para evitar a rejeição do enxerto. A incidência e a intensidade da rejeição aguda têm sido reduzidas graças ao uso de fármacos imunossupressores, como ciclosporina, tacrolimus, micofenolato de mofetil (MMF), anticorpos monoclonais e policlonais. O MMF é um pró-fármaco com atividade após sua hidrólise a ácido micofenólico (MPA). No entanto, possui grande variabilidade inter-individual de resposta e por isso é crescente a importância da realização de seu monitoramento terapêutico, o qual permite individualizar a dose de MMF e otimizar a imunossupressão, minimizando os potenciais efeitos tóxicos. A farmacogenética estuda a relação entre as características genéticas do indivíduo e as diferentes respostas a uma mesma terapia farmacológica. No caso de fármacos imunossupressores, alterações genéticas de um único nucleotídeo (single nucleotide polymorphisms - SNPs) em genes que codificam proteínas envolvidas no transporte ou no metabolismo do fármaco podem modificar a resposta do paciente à terapêutica. As UDP-glucuronosiltransferases (UGTs) pertencem a um grupo de enzimas envolvidas na fase II, responsável pela detoxificação de substâncias endógenas e exógenas. A UGT1A9 é de especial interesse por ser a principal enzima envolvida no metabolismo do ácido micofenólico. Esta enzima é codificada pelo gene UGT1A9. No presente estudo, foi investigado o efeito das variantes alélicas de UGT1A9 c. 98T>C (rs72551330; g. 87289T>C) no metabolismo de MMF em 39 pacientes voluntários transplantados renais. Foram dosados os níveis de MPA por cromatografia líquida de alta eficiência utilizando detecção com ultravioleta (HPLC/UV) e a análise do polimorfismo c. 98T>C do gene UGT1A9 foi realizada utilizando reação em cadeia de polimerase (PCR), seguida de purificação do fragmento e sequenciamento. Todos os indivíduos investigados apresentaram o mesmo genótipo (c. 98TT) para este polimorfismo, não possibilitando a avaliação da influência das variantes ou genótipos deste polimorfismo sobre os níveis plasmáticos de MPA e MPAG, apesar de níveis diversos destes compostos terem sido identificados nos pacientes.