PASSOS, M.J. Efeito da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e do Hormônio Folículo Estimulante (FSH) sobre o desenvolvimento de folículos ovarianos bovinos. 2012. 239 f. Dissertação (MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2012. / Submitted by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-01T12:13:07Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Approved for entry into archive by Djeanne Costa (djeannecosta@gmail.com) on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T15:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_mjpassos.PDF: 1449315 bytes, checksum: 7fe646701a8e49c19398e06093742c0d (MD5) Previous issue date: 2012 / This study aims to 1) evaluate the effect of BMP-15 and FSH, alone or in different combinations on the in vitro development, survival and antrum formation of bovine secondary follicles and 2) quantify the levels of mRNA expression for BMP-15 receptors (BMPR-IB and BMPR-II), FSH receptor and Kit Ligand in follicles grown in vivo and in vitro. With regard to culture, secondary follicles were microdissected and cultured for twelve days in α-MEM+ alone, or supplemented with BMP-15 and/or FSH, alone or in various associations. After culture, follicular diameter were evaluated, viability and rate of antrum formation. For the analyzes gene expression, by real time PCR, were used follicles cultured in the different treatments for comparisons of the levels of mRNA. After the culture period it was found that the association of BMP+FSH (0-12) stimulated a significant increase in follicular diameter in relation to other treatments (p<0.05), as well as stimulated the formation of antral cavity more effectively the control (MEM) and BMP-15 alone (p<0.05). However, for survival, after 12 days treatment BMP+FSH (0-12) significantly reduced follicular viability when compared to other treatments (p<0.05). The results showed that the levels of mRNA for BMP receptor type I (BMPR-IB) were significantly higher in follicles cultured with MEM when compared to other treatments, while levels of mRNA for the receptor type II (BMPR-II) did not differ between treatments. The highest levels of mRNA for the FSH receptor were detected in follicles cultured with BMP-15 alone. In conclusion, this study demonstrated that combination of BMP-15+FSH (D0-D12) accelerates the growth of bovine preantral follicles cultured for 12 days, but this effect reduces the follicular viability, affecting the ultrastructural integrity of the follicles. Furthermore, the addition of BMP alone increased expression levels of RNAm for FSHR after 12 days of culture , showing that BMP-15 and FSH may contribute significantly to the in vitro development of preantral follicles cultured for 12 days in this specie. / Este trabalho tem como objetivo 1) avaliar o efeito da BMP-15 e do FSH, sozinhos ou em diferentes associações sobre o crescimento, sobrevivência e formação de antro em folículos secundários bovinos e 2) avaliar os níveis de expressão do RNAm para os receptores de BMP-15 (BMPR-IB e BMPR-II) em folículos crescidos in vitro. Com relação ao cultivo, folículos secundários foram microdissecados e cultivados por doze dias em α-MEM+ sozinho, ou suplementado com BMP-15 e/ou FSH, sozinhos ou em diferentes associações. Após o cultivo, foram avaliados o diâmetro folicular, a viabilidade e a taxa de formação de antro. A análise de expressão gênica foi realizada por PCR em tempo real, utilizando folículos cultivados nos diferentes tratamentos, para comparações dos níveis de RNAm. Após o período de cultivo verificou-se que a utilização da BMP+FSH (0-12) estimulou um aumento significativo no diâmetro folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05), bem como estimulou a formação da cavidade antral de forma mais efetiva que o controle (MEM) e a BMP-15 sozinha (p<0,05). No entanto, em relação à sobrevivência, após12 dias o tratamento BMP+FSH (0-12) reduziu significativamente a viabilidade folicular em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Os resultados mostraram que os níveis de RNAm para o receptor de BMP-15 do tipo I (BMPR-IB) foram significativamente maiores nos folículos cultivados com MEM quando comparado aos demais tratamentos, enquanto que os níveis de RNAm para o receptor do tipo II (BMPR-II) não diferiram entre os tratamentos. Os maiores níveis de RNAm para o receptor de FSH foram detectados em folículos cultivados com BMP-15 sozinha. Em conclusão, este estudo demonstrou que a combinação de BMP-15 + FSH durante todo o período de cultivo (D0-D12) acelera o crescimento de folículos pré-antrais bovinos cultivados por 12 dias, mas este efeito reduz a viabilidade folicular, afetando a integridade ultra-estrutural dos folículos. Além disso, a adição de BMP isoladamente aumentou os níveis de expressão de RNAm para FSHR após 12 dias de cultivo,mostrando que BMP-15 e FSH podem contribuir significativamente para o desenvolvimento in vitro de folículos pré-antrais cultivados por 12 dias nesta espécie.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Este trabalho tem como objetivo 1) avaliar o efeito da BMP-15 e do FSH, sozinhos ou em diferentes associaÃÃes sobre o crescimento, sobrevivÃncia e formaÃÃo de antro em folÃculos secundÃrios bovinos e 2) avaliar os nÃveis de expressÃo do RNAm para os receptores de BMP-15 (BMPR-IB e BMPR-II) em folÃculos crescidos in vitro. Com relaÃÃo ao cultivo, folÃculos secundÃrios foram microdissecados e cultivados por doze dias em &#945;-MEM+ sozinho, ou suplementado com BMP-15 e/ou FSH, sozinhos ou em diferentes associaÃÃes. ApÃs o cultivo, foram avaliados o diÃmetro folicular, a viabilidade e a taxa de formaÃÃo de antro. A anÃlise de expressÃo gÃnica foi realizada por PCR em tempo real, utilizando folÃculos cultivados nos diferentes tratamentos, para comparaÃÃes dos nÃveis de RNAm. ApÃs o perÃodo de cultivo verificou-se que a utilizaÃÃo da BMP+FSH (0-12) estimulou um aumento significativo no diÃmetro folicular em relaÃÃo aos demais tratamentos (p<0,05), bem como estimulou a formaÃÃo da cavidade antral de forma mais efetiva que o controle (MEM) e a BMP-15 sozinha (p<0,05). No entanto, em relaÃÃo à sobrevivÃncia, apÃs12 dias o tratamento BMP+FSH (0-12) reduziu significativamente a viabilidade folicular em relaÃÃo aos demais tratamentos (p<0,05). Os resultados mostraram que os nÃveis de RNAm para o receptor de BMP-15 do tipo I (BMPR-IB) foram significativamente maiores nos folÃculos cultivados com MEM quando comparado aos demais tratamentos, enquanto que os nÃveis de RNAm para o receptor do tipo II (BMPR-II) nÃo diferiram entre os tratamentos. Os maiores nÃveis de RNAm para o receptor de FSH foram detectados em folÃculos cultivados com BMP-15 sozinha. Em conclusÃo, este estudo demonstrou que a combinaÃÃo de BMP-15 + FSH durante todo o perÃodo de cultivo (D0-D12) acelera o crescimento de folÃculos prÃ-antrais bovinos cultivados por 12 dias, mas este efeito reduz a viabilidade folicular, afetando a integridade ultra- estrutural dos folÃculos. AlÃm disso, a adiÃÃo de BMP isoladamente aumentou os nÃveis de expressÃo de RNAm para FSHR apÃs 12 dias de cultivo,mostrando que BMP-15 e FSH podem contribuir significativamente para o desenvolvimento in vitro de folÃculos prÃ-antrais cultivados por 12 dias nesta espÃcie. / This study aims to 1) evaluate the effect of BMP-15 and FSH, alone or in different combinations on the in vitro development, survival and antrum formation of bovine secondary follicles and 2) quantify the levels of mRNA expression for BMP-15 receptors (BMPR-IB and BMPR-II), FSH receptor and Kit Ligand in follicles grown in vivo and in vitro. With regard to culture, secondary follicles were microdissected and cultured for twelve days in &#945;- MEM+ alone, or supplemented with BMP-15 and/or FSH, alone or in various associations. After culture, follicular diameter were evaluated, viability and rate of antrum formation. For the analyzes gene expression, by real time PCR, were used follicles cultured in the different treatments for comparisons of the levels of mRNA. After the culture period it was found that the association of BMP+FSH (0-12) stimulated a significant increase in follicular diameter in relation to other treatments (p<0.05), as well as stimulated the formation of antral cavity more effectively the control (MEM) and BMP-15 alone (p<0.05). However, for survival, after 12 days treatment BMP+FSH (0-12) significantly reduced follicular viability when compared to other treatments (p<0.05). The results showed that the levels of mRNA for BMP receptor type I (BMPR-IB) were significantly higher in follicles cultured with MEM when compared to other treatments, while levels of mRNA for the receptor type II (BMPR-II) did not differ between treatments. The highest levels of mRNA for the FSH receptor were detected in follicles cultured with BMP-15 alone. In conclusion, this study demonstrated that combination of BMP-15+FSH (D0-D12) accelerates the growth of bovine preantral follicles cultured for 12 days, but this effect reduces the follicular viability, affecting the ultrastructural integrity of the follicles. Furthermore, the addition of BMP alone increased expression levels of RNAm for FSHR after 12 days of culture , showing that BMP-15 and FSH may contribute significantly to the in vitro development of preantral follicles cultured for 12 days in this specie.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.