Monocytes are professional antigen presenting cells (APC). They serve as precursors of macrophages and dendritic cells (DC). We have used cytopathic (cp) and non-cytopathic (ncp) Bovine Viral Diarrhea Viruses (BVDV) to determine the genes and proteins expression levels in bovine monocytes. Four specific aims were accomplished in this study. The first aim was to assess the baseline expression of the proteins involved in professional antigen presentation in bovine monocytes. The results showed that the differential detergent fractionation (DDF) approach can provide interpretable and meaningful functional information in bovine monocytes. The second aim was to evaluate the role of in vitro cp and ncp BVDV infection in the expression of the selected bovine genes involved in professional antigen presentation. The results showed that both BVDV could escape innate immune responses by modulating toll-like receptor (TLR) gene expression, followed by pro-inflammatory, type I interferon (IFN), Th1/Th2 type cytokine genes expression, and decreasing the expression levels of CD80/CD86 in professional APC. The third objective was to determine how the two biotypes affect selective antigen uptake, receptor-mediated endocytosis and non-selective uptake, macropinocytosis in bovine monocytes. The results indicated that bovine monocytes use macropinocytosis for a bulklow uptake of soluble antigens. The final aim was to characterize protein profiles in peripheral blood monocytes infected with cp BVDV isolate in vitro. Comparative profiling of the membrane and cytosolic proteins related to professional antigen presentation were assessed. The results showed that 47 bovine proteins, involved in immune function of professional APC have been significantly altered after cp BVDV infection. Overall, we hypothesize that by modulating expression levels of multiple proteins and genes related to immune responses BVDV could significantly compromise immune defense mechanisms resulting in uncontrolled immune activation or suppression.

As doenças respiratórias são consideradas um sério problema de sanidade, causando grandes perdas econômicas devido aos altos índices de morbidade e mortalidade, sendo responsáveis por 10 a 40% das mortes em animais adultos e por 17% das mortes durante o período perinatal. O objetivo deste trabalho foi determinar a ocorrência de agentes e buscar associações entre agentes e a broncopneumonia e a associação de sinais clínicos com os agentes presentes. Foram avaliados clinicamente e os dados coletados em ficha própria 96 animais de dois rebanhos da região de Bragança Paulista e Mococa ambas no Estado de São Paulo. Sangue total e lavado traqueobrônquico instilado em haste flexível e o restante da alíquota criopreservada, foram colhidos em animais jovens e adultos, com e sem raça definida e a ocorrência dos principais agentes etiológicos virais (BVDV, VSRB e BoHV) e bacterianos (Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida e micoplasma sp.) causadores de broncopneumonia em bovinos foram pesquisadas. Dos cultivos bacterianos específicos, as aliquotas criopreservada apresentaram 12/96 amostras positivas para mollicutes enquanto os cutivos utilizando as hastes foram 11/96 amostras positivas para P. multocida. No cultivo da P. multocida também foram encontradas Bacillus sp., Staphylococcus sp., Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae sem que houvesse a ocorrência de M. haemolytica. PCR foi utilizada para detectar a classe mollicutes (68/96) e as espécies M. bovis (2/68), M. dispar (26/68) e M. mycoides subsp. mycoides (0/68). A técnica de vírus neutralização mostrou os seguintes resultados: 31/56 animais soreagentes para BVDV, 35/57 com BoVH e 54/58 com VSRB. Para análise estatística foi utilizado o teste do qui-quadrado em blocos ao acaso. Houve associação entre a presença de broncopneumonia em animais com BVDV (P=0,080) e com P. multocida (P=0,076). Animais da raça holandesa foram associados a presença de broncopneumonia (p= 0,095). Jovens com menos de 12 meses foram associados a presença de mollicutes (P=0,0177). A presença de som submaciço a percussão do gradil toráxico foi associado a ausência de mollicutes (P=0,025). A ausência de M. dispar foi associado a presença de sibilo (P=0,076) e de estertor úmido (P=0,046) na ausculta pulmonar. Houve uma chance maior de 5,5 vezes de apresentar tosse na presença de P. multocida enquanto na sua ausência hà uma maior chance dos animais apresentarem secreção mucosa (7,3) e mucopurulento (5,8), som submaciço (9,6), crepitação fina (13) e estertor úmido (5). Houve associação entre a ausência de M. bovis e a presença de som claro a percussão do gradil toráxico dos bovinos examinados. / Respiratory diseases are considered a serious problem of sanity, causing huge economic losses due to high rates of morbidity and mortality, accounting for 10-40% of deaths in adults and 17% of deaths during the perinatal period. The objective of this study was to determine the occurrence of agents and seek associations between agents and bronchopneumonia and the association of clinical signs with these agents. They were evaluated clinically and data collected in own record 96 animals of two herds of Bragança Paulista region and Mococa both in São Paulo. Whole blood and washed tracheobronchial were harvested in young and adult animals, Holstein and undefined breed and the occurrence of major viral etiologic agents (BVDV, BRSV and BoHV) and bacterial (Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida and Mycoplasma sp.) causing bronchopneumonia in cattle were surveyed. The specific bacterial cultures showed positive samples Mollicutes 12/96 and 11/96 samples positive for P. multocida. In the cultivation of P. multocida were also found Bacillus sp., Staphylococcus sp., Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa and there was no occurrence of M. haemolytica. PCR was used to detect the class Mollicutes (68/96) and the species M. bovis (2/68), M. dispar (26/68) and M. mycoides subsp. mycoides (0/68). The virus neutralization technique showed the following results: 31/56 animals BVDV positive, 35/57 and 54/58 with BoVH with BRSV. Statistical analysis was performed using the chi-square test in blocks. There is an association between bronchopneumonia in animals and the presence of BVDV (p = 0.080) and P. multocida (P = 0.076). Holstein animals were associated with the presence of bronchopneumonia (p = 0.095). Calves under 12 months were associated with the presence of Mollicutes (P = 0.0177). The sound submassive present during percussion of the thoracic cage was associated with the absence of Mollicutes (P = 0.025). The absence of M. dispar was associated with presence of wheezing (P = 0.076) and wet rattle (P = 0.046) in lung auscultation. There was a greater chance of 5.5 times to present cough in the presence of P. multocida as in its absence there is a greater chance of the animals show mucous secretion (7.3) and mucopurulent (5.8), submassive sound (9.6 ), thin crackling (13) and wet rattle (5). There was an association between the absence of M. bovis and the presence of clear sound of chest cage percussion of the examined cattle.

A agropecuária familiar brasileira produz 70% da alimentação da população, possuindo importante papel social e econômico neste país. Os assentamentos do Pontal do Paranapanema produzem alimentos que são ofertados ao estado de São Paulo, sendo atividade leiteira a mais importante. As doenças infecciosas reprodutivas dos bovinos, causados por Leptospira spp., Herpes Virus Bovino Tipo 1(BoHV-1), Diarreia Viral Bovina (BVD), agentes da classe Mollicutes são importantes para a rentabilidade das produções agropecuárias do mundo inteiro. Dados epidemiológicos nos assentamentos do estado de São Paulo não existem. Este estudo teve como objetivo analisar a prevalência das enfermidades reprodutivas bacterianas e virais em bovinos de leite criados nos assentamento de Presidente Epitácio e Mirante do Paranapanema. Todos os animais foram submetidos ao exame específico do sistema reprodutivo e colheram-se amostras de soro e swab vaginal. A prevalência para BoHV-1, BVDV, Leptospira spp., e classe Mollicutes foi de 69,05%, 57,74%, 58,93% e 50%, respectivamente. Foi observado uma relação entre vacas multíparas e a presença de BoHV-1 e Leptospira spp. Foi observado também uma relação de animais com retenção de placenta com a presença de bactérias da classe Mollicutes e animais reagentes a anticorpos contra Leptospira spp. A prevalência destas enfermidades prova a existência destas em assentamentos na região do Pontal do Paranapanema, faz-se necessário o desenvolvimento de programas de políticas públicas para o monitoramento desta região / Brazilian\'s family settlements are responsible for 70% of total population feeding. It has an important social and economic role in Brazil. Settlements from Pontal do Paranapanema offering feed to the state of São Paulo and milk production is the most important activity. Bovine reproduction infectious diseases caused by Leptospira spp., Bovine Herpesvirus Type 1(BoHV-1), Bovine viral Diarrhoea (BVD) and Mollicutes are important to the dairy cattle industry all over the world. Epidemiological datas from settlements located in the state of São Paulo are not available. The aim of this study was to evaluate the prevalence of bacterial and viral reproductive infectious diseases dairy cattle raised in settlements from Presidente Epitácio e Mirante do Paranapanema. Specific physical examination of reproduction female system was performed and after that vaginal swabs samples and serum samples were collected. The prevalence of BoHV-1, BVDV, Leptospira spp., and Mollicutes was 69,05%, 57,74%, 58,93%, and 50%, respectively. An association between multiparous cows and the presence of BoHV-1 and Leptospira spp., was detected. Also an association between females with retained placenta and Mollicutes and cows with antibodies against Leptospira spp. was observed. The results showed the presence of reproduction diseases in settlements in Pontal do Paranapanema and it is necessary the development of public politics programs to control them

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Calves born persistently infected (PI) with non-cytopathic bovine viral diarrhea virus (ncpBVDV) frequently develop a fatal gastroenteric illness called mucosal disease (MD). From animals affected by MD, both the original virus (ncpBVDV) and an antigenically identical, yet cytopathic virus (cpBVDV) can be isolated. Cytopathic BVDVs are originated from the ncp counterparts by diverse genetic mechanisms, all leading to the expression of the non-structural polypeptide NS3 as a discrete protein. In contrast, ncpBVDVs express only the large precursor polypeptide, NS2-3, which contains the NS3 sequence within its carboxy-terminal half. The investigation of the mechanism leading to NS3 expression in 41 cpBVDV isolates is reported. An RT-PCR strategy was designed to detect insertions within the NS2-3 gene and/or duplication of the NS3 gene two common mechanisms of expression of NS3. RT-PCR amplification revealed insertions in the NS2-3 gene of three cp isolates, being the inserts similar in size to that present in the cpBVDV NADL strain. Sequencing of one such insert revealed a 296 nucleotide sequence, with a central core of 270 putative aminoacid sequence highly homologous (98%) to the NADL insert, a sequence corresponding to the cellular J-Domain gene. Another cpBVDV isolate contained a duplication of the NS3 gene downstream from the original locus. In contrast, no detectable NS2-3 insertions nor NS3 gene duplications were observed in the genome of 37 cp isolates. These results demonstrate that cleavage of NS2-3 without bulk RNA insertions nor NS3 gene duplications seems to be a frequent mechanism leading to NS3 expression and BVDV cytopathology. / Bezerros nascidos persistentemente infectados (PI) com o biótipo não citopático (ncp) do vírus da Diarréia Viral Bovina (BVDV) freqüentemente desenvolvem uma doença gastroentérica fatal, chamada de Doença das Mucosas (DM). Dos animais afetados pela DM é possível isolar o vírus original não-citopático (BVDVncp) e um vírus antigenicamente idêntico, porém citopático (BVDVcp). Os BVDVcps são gerados a partir do vírus original ncp por diversos mecanismos genéticos, que resultam na expressão da proteína não-estrutural NS3 como uma proteína individual. Em contrapartida, os BVDVncp expressam somente a proteína precursora NS2-3, que contém a seqüência da NS3 no seu terço carboxi-terminal. Este trabalho relata a investigação dos mecanismos genéticos associados com a expressão da NS3 em 41 isolados citopáticos de BVDV. Uma estratégia de RT-PCR foi delineada para detectar inserções no gene da NS2-3 e/ou duplicações no gene da NS3, dois mecanismos freqüentes de expressão da NS3. Amplificação do genoma dos 41 isolados por RT-PCR revelou a presença de inserções no gene da NS2-3 em três isolados, de tamanho similar a inserção presente na cepa de BVDVcp NADL. O seqüenciamento da inserção de um isolado revelou uma seqüência de 296 nucleotídeos, com uma região central de 270 nucleotídeos altamente homóloga (98%) com a inserção da cepa NADL, que corresponde a uma seqüência do gene celular J-Domain. Outro isolado de BVDVcp contém uma duplicação do gene da NS3 na direção 3 da sua posição original. Em 37 isolados cp não foram detectadas inserções na NS2-3 ou duplicações da NS3. Esses resultados demonstram que a clivagem da NS2-3 sem a presença de inserções de RNA ou duplicações do gene da NS3 parecem ser mecanismos frequentes de expressão da proteína NS3 e citopatologia no BVDV.

A agropecuária familiar brasileira produz 70% da alimentação da população, possuindo importante papel social e econômico neste país. Os assentamentos do Pontal do Paranapanema produzem alimentos que são ofertados ao estado de São Paulo, sendo atividade leiteira a mais importante. As doenças infecciosas reprodutivas dos bovinos, causados por Leptospira spp., Herpes Virus Bovino Tipo 1(BoHV-1), Diarreia Viral Bovina (BVD), agentes da classe Mollicutes são importantes para a rentabilidade das produções agropecuárias do mundo inteiro. Dados epidemiológicos nos assentamentos do estado de São Paulo não existem. Este estudo teve como objetivo analisar a prevalência das enfermidades reprodutivas bacterianas e virais em bovinos de leite criados nos assentamento de Presidente Epitácio e Mirante do Paranapanema. Todos os animais foram submetidos ao exame específico do sistema reprodutivo e colheram-se amostras de soro e swab vaginal. A prevalência para BoHV-1, BVDV, Leptospira spp., e classe Mollicutes foi de 69,05%, 57,74%, 58,93% e 50%, respectivamente. Foi observado uma relação entre vacas multíparas e a presença de BoHV-1 e Leptospira spp. Foi observado também uma relação de animais com retenção de placenta com a presença de bactérias da classe Mollicutes e animais reagentes a anticorpos contra Leptospira spp. A prevalência destas enfermidades prova a existência destas em assentamentos na região do Pontal do Paranapanema, faz-se necessário o desenvolvimento de programas de políticas públicas para o monitoramento desta região / Brazilian\'s family settlements are responsible for 70% of total population feeding. It has an important social and economic role in Brazil. Settlements from Pontal do Paranapanema offering feed to the state of São Paulo and milk production is the most important activity. Bovine reproduction infectious diseases caused by Leptospira spp., Bovine Herpesvirus Type 1(BoHV-1), Bovine viral Diarrhoea (BVD) and Mollicutes are important to the dairy cattle industry all over the world. Epidemiological datas from settlements located in the state of São Paulo are not available. The aim of this study was to evaluate the prevalence of bacterial and viral reproductive infectious diseases dairy cattle raised in settlements from Presidente Epitácio e Mirante do Paranapanema. Specific physical examination of reproduction female system was performed and after that vaginal swabs samples and serum samples were collected. The prevalence of BoHV-1, BVDV, Leptospira spp., and Mollicutes was 69,05%, 57,74%, 58,93%, and 50%, respectively. An association between multiparous cows and the presence of BoHV-1 and Leptospira spp., was detected. Also an association between females with retained placenta and Mollicutes and cows with antibodies against Leptospira spp. was observed. The results showed the presence of reproduction diseases in settlements in Pontal do Paranapanema and it is necessary the development of public politics programs to control them

As doenças respiratórias são consideradas um sério problema de sanidade, causando grandes perdas econômicas devido aos altos índices de morbidade e mortalidade, sendo responsáveis por 10 a 40% das mortes em animais adultos e por 17% das mortes durante o período perinatal. O objetivo deste trabalho foi determinar a ocorrência de agentes e buscar associações entre agentes e a broncopneumonia e a associação de sinais clínicos com os agentes presentes. Foram avaliados clinicamente e os dados coletados em ficha própria 96 animais de dois rebanhos da região de Bragança Paulista e Mococa ambas no Estado de São Paulo. Sangue total e lavado traqueobrônquico instilado em haste flexível e o restante da alíquota criopreservada, foram colhidos em animais jovens e adultos, com e sem raça definida e a ocorrência dos principais agentes etiológicos virais (BVDV, VSRB e BoHV) e bacterianos (Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida e micoplasma sp.) causadores de broncopneumonia em bovinos foram pesquisadas. Dos cultivos bacterianos específicos, as aliquotas criopreservada apresentaram 12/96 amostras positivas para mollicutes enquanto os cutivos utilizando as hastes foram 11/96 amostras positivas para P. multocida. No cultivo da P. multocida também foram encontradas Bacillus sp., Staphylococcus sp., Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae sem que houvesse a ocorrência de M. haemolytica. PCR foi utilizada para detectar a classe mollicutes (68/96) e as espécies M. bovis (2/68), M. dispar (26/68) e M. mycoides subsp. mycoides (0/68). A técnica de vírus neutralização mostrou os seguintes resultados: 31/56 animais soreagentes para BVDV, 35/57 com BoVH e 54/58 com VSRB. Para análise estatística foi utilizado o teste do qui-quadrado em blocos ao acaso. Houve associação entre a presença de broncopneumonia em animais com BVDV (P=0,080) e com P. multocida (P=0,076). Animais da raça holandesa foram associados a presença de broncopneumonia (p= 0,095). Jovens com menos de 12 meses foram associados a presença de mollicutes (P=0,0177). A presença de som submaciço a percussão do gradil toráxico foi associado a ausência de mollicutes (P=0,025). A ausência de M. dispar foi associado a presença de sibilo (P=0,076) e de estertor úmido (P=0,046) na ausculta pulmonar. Houve uma chance maior de 5,5 vezes de apresentar tosse na presença de P. multocida enquanto na sua ausência hà uma maior chance dos animais apresentarem secreção mucosa (7,3) e mucopurulento (5,8), som submaciço (9,6), crepitação fina (13) e estertor úmido (5). Houve associação entre a ausência de M. bovis e a presença de som claro a percussão do gradil toráxico dos bovinos examinados. / Respiratory diseases are considered a serious problem of sanity, causing huge economic losses due to high rates of morbidity and mortality, accounting for 10-40% of deaths in adults and 17% of deaths during the perinatal period. The objective of this study was to determine the occurrence of agents and seek associations between agents and bronchopneumonia and the association of clinical signs with these agents. They were evaluated clinically and data collected in own record 96 animals of two herds of Bragança Paulista region and Mococa both in São Paulo. Whole blood and washed tracheobronchial were harvested in young and adult animals, Holstein and undefined breed and the occurrence of major viral etiologic agents (BVDV, BRSV and BoHV) and bacterial (Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida and Mycoplasma sp.) causing bronchopneumonia in cattle were surveyed. The specific bacterial cultures showed positive samples Mollicutes 12/96 and 11/96 samples positive for P. multocida. In the cultivation of P. multocida were also found Bacillus sp., Staphylococcus sp., Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa and there was no occurrence of M. haemolytica. PCR was used to detect the class Mollicutes (68/96) and the species M. bovis (2/68), M. dispar (26/68) and M. mycoides subsp. mycoides (0/68). The virus neutralization technique showed the following results: 31/56 animals BVDV positive, 35/57 and 54/58 with BoVH with BRSV. Statistical analysis was performed using the chi-square test in blocks. There is an association between bronchopneumonia in animals and the presence of BVDV (p = 0.080) and P. multocida (P = 0.076). Holstein animals were associated with the presence of bronchopneumonia (p = 0.095). Calves under 12 months were associated with the presence of Mollicutes (P = 0.0177). The sound submassive present during percussion of the thoracic cage was associated with the absence of Mollicutes (P = 0.025). The absence of M. dispar was associated with presence of wheezing (P = 0.076) and wet rattle (P = 0.046) in lung auscultation. There was a greater chance of 5.5 times to present cough in the presence of P. multocida as in its absence there is a greater chance of the animals show mucous secretion (7.3) and mucopurulent (5.8), submassive sound (9.6 ), thin crackling (13) and wet rattle (5). There was an association between the absence of M. bovis and the presence of clear sound of chest cage percussion of the examined cattle.

Viruses are etiologic agents of a great number of diseases of human beings and animals. However, there are only a little amount antiviral medicines available that is almost exclusively used in human health. Several studies have demonstrated that propolis has biological activities against virus, bacteria and fungi. Its chemical composition is diverse varying according to season, plants available and collection. The antiviral activity of ethanolic extracts of propolis have already been described for some human viruses. The aim of this study was to evaluate the antiviral activity of propolis ethanolic extracts against two viruses causing respiratory disease in small animals, the feline calicivirus (FCV) and canine adenovirus 2 (CAV-2), and also the bovine diarrheal disease virus (BVDV).Two samples of ethanolic extracts of propolis were used; one obtained in the lab and another obtained commercially. In order to perform the experiments the MTT test ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) was used to determine the 50% cytotoxic concentration (CC50), the 50% inhibitory concentration (IC50) and, the terapeuthic index (TI=IC50/CC50). The propolis extracts were added to the cell cultures in different moments of the viral infection. They were included before virus inoculation, after virus inoculation, and before and after virus inoculation. The two propolis samples showed similarities in the qualitative analysis but they had small differences in the quantitative analysis. The CC50 of the extracts varied among 251 and 343μg/ml and the commercial extract showed less toxicity. Both extracts demonstrated better antiviral activity when added before virus inoculation and the ITs varied from 6 to 13. The best results were obtained with the propolis extracted in the lab. The BVD was the virus showing the greater sensitivity to the ethanolic extracts in the conditions applied. Taken all the data together, it can be concluded that the ethanolic extract of propolis has a potential for future use as a medicine in the therapy of respiratory disease caused by CAV-2, and, also, that the action mechanisms on BVDV should be better evaluated in detail regarding the hepatitis C virus (HCV). / Os vírus são os agentes etiológicos de um grande número de enfermidades em seres humanos e animais, no entanto, há um pequeno número de fármacos antivirais disponíveis para o uso que é feito quase exclusivamente na medicina humana. Estudos demonstram que a própolis apresenta variada atividade biológica frente a vírus, bactérias e fungos. Sua composição química é bastante diversa, podendo variar conforme a época, vegetação e área de coleta. A atividade antiviral de extratos aquosos e etanólicos de própolis já foi descrita para alguns vírus humanos. O presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade antiviral do extrato de própolis frente a dois vírus causadores de doença respiratória em pequenos animais, o calicivírus felino (FCV) e o adenovírus canino tipo 2 (CAV-2), e também ao vírus da diarréia viral bovina (BVDV). Foram testadas neste experimento duas amostras de extrato etanólico de própolis, uma delas obtida comercialmente e a outra extraída no laboratório. Para realizar este estudo utilizou-se o método colorimétrico do MTT (3-(4,5 dimetiltiazol-2yl)-2-5-difenil-2H tetrazolato de bromo), através do qual determinou-se a concentração citotóxica a 50% (CC50), concentração inibitória a 50% (IC50) e o índice terapêutico (IT=IC50/CC50). Os extratos de própolis foram adicionados ao cultivo celular em diferentes momentos da infecção viral. Estes foram incluídos antes da inoculação viral, depois da inoculação viral, e antes e depois da inoculação viral. As duas amostras de própolis apresentaram similaridades na análise qualitativa e pequenas diferenças na análise quantitativa. A CC50 destes extratos variou de 251 a 343μg/ml sendo que o extrato comercial apresentou-se ligeiramente menos tóxico. Ambos os extratos demonstraram melhor atividade antiviral quando adicionados anteriormente à inoculação viral apresentando ITs que variaram de 6 a 13. Os melhores resultados foram obtidos com o própolis extraído no laboratório. O BVDV foi o vírus que demonstrou maior sensibilidade ao extrato etanólico de própolis nas condições experimentais aplicadas. Levando-se em consideração os resultados obtidos, pode-se concluir que o extrato etanólico de própolis apresenta potencial para futura utilização como fármaco no tratamento de doenças respiratórias causadas pelo CAV2 e que o mecanismo de ação sobre o BVDV deve ser avaliado com maiores detalhes com vistas ao vírus da hepatite C (HCV).

Inhalt der vorliegenden Arbeit ist die epidemiologische Analyse des Verlaufs der BVD-Bekämpfung in Thüringen in den Jahren 2011 bis 2013 auf Grundlage der BVDV-Verordnung und die Ermittlung von potentiellen Risikofaktoren auf die Länge eines BVDV-Geschehens in BVDV-positiven Herden des Jahres 2011. Ziel der Studie war zudem die Identifizierung relevanter Einflussfaktoren, die zum Abbrechen von Infektionsketten in Rinderbeständen mit BVDV-Infektionen führen, um daraus Empfehlungen für effektive Bekämpfungsmaßnahmen auf Herdenebene ableiten zu können. Im Rahmen einer Fall-Kontroll-Studie wurden durch epidemiologische Befragung von Rinderhaltern mittels strukturierter Fragebögen sowie durch epidemiologische Untersuchungen über die Hi-Tier-Datenbank Parameter zur Herdenstruktur, zum Management, zur BVDV-Bekämpfung und zu Tiergesundheitsparametern erhoben. Die Studie bezog sich auf Rinderhaltungen mit nachgewiesener BVDV-Infektion im Jahr 2011 mit eigener Reproduktion und einer Herdengröße ab 50 Rindern. Die Auswertung der Einflussfaktorenanalyse erfolgte deskriptiv und durch verschiedene multiple logistische Regressionsmodelle. Zudem sind durch Expertenbefragungen auf Grundlage von epidemiologischen Fragebögen von Amtstierärzten und Tierärzten von Rindergesundheitsdiensten Probleme im Vollzug der BVDV-Verordnung ermittelt worden, die statistisch deskriptiv ausgewertet wurden. Zusätzlich erfolgte durch die befragten Tierärzte eine Bewertung von Risikofaktoren für eine BVD-Virusverbreitung zwischen Rinderbeständen und innerhalb einer betroffenen Herde sowie zur Einschätzung von Impfindikationen gegen BVDV. Im Rahmen des bundesweiten obligatorischen Bekämpfungsprogramms sind in Thüringen in den Jahren 2011 insgesamt 656, 2012 gesamt 218 und 2013 130 PI-Tiere detektiert worden. Dabei war eine Absenkung der PI-Tierprävalenz von 0,35 % im ersten Pflichtbekämpfungsjahr auf 0,09 % im Jahr 2013 zu verzeichnen. Zudem konnte die Herdenprävalenz im Vergleich der Jahre 2011 und 2013 von 3,23 % auf 1,25 % vermindert und eine Absenkung der Neuinfektionsrate auf Herdenebene von 1,9 % im Jahr 2011 auf 0,6 % im Jahr 2013 verzeichnet werden. Bezüglich der Herdenstruktur und des Herdenmanagement hatten Rinderherden mit mehr als 200 Tieren über 24 Monate (p = 0,02434) und mit mehr als 500 Rindern über 24 Monate (Vollmodell 1 Pr = 0,0071; reduziertes Modell 1 Pr = 0,00061), Milchviehherden (p = 0,0183) und Herden im gemischten Haltungssystem (p = 0,0272; reduziertes Modell 2 Pr = 0,0292) ein höheres Risiko lang andauernden BVDV-Infektionen ausgesetzt zu sein als kleinere Herden (bis 200 Rinder über 24 Monate) und Mutterkuhherden. Zudem spielt die Art der Aufstallung von Saugkälbern eine Rolle. Hier zeigte eine Haltung in Gruppen bzw. kombiniert als Einzel- und Gruppenhaltung ein höheres BVD-Risiko gegenüber der Einzeltieraufstallung (p = 0,00463; Vollmodell 3 Pr = 0,0104; reduziertes Modell 3 Pr = 0,0059). In ähnlicher Weise erwies sich die grundsätzlich getrennte Haltung des Kalbes vom Muttertier (p = 0,01736) als auch die getrennte Haltung von niedertragenden Kühen und Kälbern (Vollmodell 2 Pr = 0,0429) als Risikofaktor. Betriebe mit bestandseigenem Besamungstechniker (p = 0,0401) wiesen ein höheres Risiko für andauernde BVDV-Infektionsgeschehen auf, insbesondere bei Durchführung anderweitiger Tätigkeiten des Besamungstechnikers im BVDV-positiven Bestand (p = 0,0028) ebenso wie Rinderhalter, die männliche Kälber ab dem 14. Lebenstag verkauften (p = 0,048). Der Tierhandel mit den Faktoren \"Anzahl an Zukaufstieren\", \"Anzahl an Herkunftsbeständen\" und \"Zukauf tragender Tiere\" zeigte einen tendenziellen Einfluss. Hier bedarf es weitergehender Untersuchungen. Parameter der Tiergesundheit wie Standzeiten von PI-Tieren, BVDV-Untersuchungen vor 2011, Impfungen gegen BVDV bzw. der BHV1-Status zeigten keinen Einfluss auf ein BVDV-Herdengeschehen. Die Befragung von Amtstierärzten Thüringens sowie von Tierärzten der beteiligten Rindergesundheitsdienste Deutschlands zeigte Probleme im Vollzug der BVDV-Verordnung auf. Die befragten Experten wiesen auf die teilweise fehlende Motivation der Landwirte, den Status \"BVDV-unverdächtiger Bestand\" anzustreben, und auf Probleme zur Durchsetzung der Entfernung von PI-Tieren und der Umsetzung von Biosicherheitsmaßnahmen hin. Desweiteren werden von ihnen die Unterbindung bzw. Beschränkung des Handels mit tragenden Rindern zur Verhinderung der Verbreitung von BVDV-Virus über unerkannte PI-Feten, eine serologische Überwachung von BVDV-freien Beständen über ungeimpfte Jungtiere und Handelsrestriktionen für Rinderbestände mit BVDV-positiven Tieren gefordert. Schlussfolgernd lässt sich feststellen, dass die Rinderhaltungsstrukturen Thüringens im Falle einer BVD-Infektion sofortige und umfassende betriebsspezifische Maßnahmen erfordern. Diese sollten umfangreiche epidemiologische Analysen beinhalten, unter der besonderen Berücksichtigung der Herdenstruktur und des eingesetzten Personals. Eine serologische Bestandsüberwachung BVDV-freier Bestände wird empfohlen, um einen BVDV-Eintrag frühzeitig zu erkennen. Weiterhin wird empfohlen, im Zuge künftiger Novellierungen der BVD-Verordnung die Entfernung von PI-Tieren noch stringenter zu fassen, kombiniert mit Gesamtbestandsuntersuchungen und einem anschließenden engmaschigen serologischen Bestandsmonitoring.

Inhalt der vorliegenden Arbeit ist die epidemiologische Analyse des Verlaufs der BVD-Bekämpfung in Thüringen in den Jahren 2011 bis 2013 auf Grundlage der BVDV-Verordnung und die Ermittlung von potentiellen Risikofaktoren auf die Länge eines BVDV-Geschehens in BVDV-positiven Herden des Jahres 2011. Ziel der Studie war zudem die Identifizierung relevanter Einflussfaktoren, die zum Abbrechen von Infektionsketten in Rinderbeständen mit BVDV-Infektionen führen, um daraus Empfehlungen für effektive Bekämpfungsmaßnahmen auf Herdenebene ableiten zu können. Im Rahmen einer Fall-Kontroll-Studie wurden durch epidemiologische Befragung von Rinderhaltern mittels strukturierter Fragebögen sowie durch epidemiologische Untersuchungen über die Hi-Tier-Datenbank Parameter zur Herdenstruktur, zum Management, zur BVDV-Bekämpfung und zu Tiergesundheitsparametern erhoben. Die Studie bezog sich auf Rinderhaltungen mit nachgewiesener BVDV-Infektion im Jahr 2011 mit eigener Reproduktion und einer Herdengröße ab 50 Rindern. Die Auswertung der Einflussfaktorenanalyse erfolgte deskriptiv und durch verschiedene multiple logistische Regressionsmodelle. Zudem sind durch Expertenbefragungen auf Grundlage von epidemiologischen Fragebögen von Amtstierärzten und Tierärzten von Rindergesundheitsdiensten Probleme im Vollzug der BVDV-Verordnung ermittelt worden, die statistisch deskriptiv ausgewertet wurden. Zusätzlich erfolgte durch die befragten Tierärzte eine Bewertung von Risikofaktoren für eine BVD-Virusverbreitung zwischen Rinderbeständen und innerhalb einer betroffenen Herde sowie zur Einschätzung von Impfindikationen gegen BVDV. Im Rahmen des bundesweiten obligatorischen Bekämpfungsprogramms sind in Thüringen in den Jahren 2011 insgesamt 656, 2012 gesamt 218 und 2013 130 PI-Tiere detektiert worden. Dabei war eine Absenkung der PI-Tierprävalenz von 0,35 % im ersten Pflichtbekämpfungsjahr auf 0,09 % im Jahr 2013 zu verzeichnen. Zudem konnte die Herdenprävalenz im Vergleich der Jahre 2011 und 2013 von 3,23 % auf 1,25 % vermindert und eine Absenkung der Neuinfektionsrate auf Herdenebene von 1,9 % im Jahr 2011 auf 0,6 % im Jahr 2013 verzeichnet werden. Bezüglich der Herdenstruktur und des Herdenmanagement hatten Rinderherden mit mehr als 200 Tieren über 24 Monate (p = 0,02434) und mit mehr als 500 Rindern über 24 Monate (Vollmodell 1 Pr = 0,0071; reduziertes Modell 1 Pr = 0,00061), Milchviehherden (p = 0,0183) und Herden im gemischten Haltungssystem (p = 0,0272; reduziertes Modell 2 Pr = 0,0292) ein höheres Risiko lang andauernden BVDV-Infektionen ausgesetzt zu sein als kleinere Herden (bis 200 Rinder über 24 Monate) und Mutterkuhherden. Zudem spielt die Art der Aufstallung von Saugkälbern eine Rolle. Hier zeigte eine Haltung in Gruppen bzw. kombiniert als Einzel- und Gruppenhaltung ein höheres BVD-Risiko gegenüber der Einzeltieraufstallung (p = 0,00463; Vollmodell 3 Pr = 0,0104; reduziertes Modell 3 Pr = 0,0059). In ähnlicher Weise erwies sich die grundsätzlich getrennte Haltung des Kalbes vom Muttertier (p = 0,01736) als auch die getrennte Haltung von niedertragenden Kühen und Kälbern (Vollmodell 2 Pr = 0,0429) als Risikofaktor. Betriebe mit bestandseigenem Besamungstechniker (p = 0,0401) wiesen ein höheres Risiko für andauernde BVDV-Infektionsgeschehen auf, insbesondere bei Durchführung anderweitiger Tätigkeiten des Besamungstechnikers im BVDV-positiven Bestand (p = 0,0028) ebenso wie Rinderhalter, die männliche Kälber ab dem 14. Lebenstag verkauften (p = 0,048). Der Tierhandel mit den Faktoren \"Anzahl an Zukaufstieren\", \"Anzahl an Herkunftsbeständen\" und \"Zukauf tragender Tiere\" zeigte einen tendenziellen Einfluss. Hier bedarf es weitergehender Untersuchungen. Parameter der Tiergesundheit wie Standzeiten von PI-Tieren, BVDV-Untersuchungen vor 2011, Impfungen gegen BVDV bzw. der BHV1-Status zeigten keinen Einfluss auf ein BVDV-Herdengeschehen. Die Befragung von Amtstierärzten Thüringens sowie von Tierärzten der beteiligten Rindergesundheitsdienste Deutschlands zeigte Probleme im Vollzug der BVDV-Verordnung auf. Die befragten Experten wiesen auf die teilweise fehlende Motivation der Landwirte, den Status \"BVDV-unverdächtiger Bestand\" anzustreben, und auf Probleme zur Durchsetzung der Entfernung von PI-Tieren und der Umsetzung von Biosicherheitsmaßnahmen hin. Desweiteren werden von ihnen die Unterbindung bzw. Beschränkung des Handels mit tragenden Rindern zur Verhinderung der Verbreitung von BVDV-Virus über unerkannte PI-Feten, eine serologische Überwachung von BVDV-freien Beständen über ungeimpfte Jungtiere und Handelsrestriktionen für Rinderbestände mit BVDV-positiven Tieren gefordert. Schlussfolgernd lässt sich feststellen, dass die Rinderhaltungsstrukturen Thüringens im Falle einer BVD-Infektion sofortige und umfassende betriebsspezifische Maßnahmen erfordern. Diese sollten umfangreiche epidemiologische Analysen beinhalten, unter der besonderen Berücksichtigung der Herdenstruktur und des eingesetzten Personals. Eine serologische Bestandsüberwachung BVDV-freier Bestände wird empfohlen, um einen BVDV-Eintrag frühzeitig zu erkennen. Weiterhin wird empfohlen, im Zuge künftiger Novellierungen der BVD-Verordnung die Entfernung von PI-Tieren noch stringenter zu fassen, kombiniert mit Gesamtbestandsuntersuchungen und einem anschließenden engmaschigen serologischen Bestandsmonitoring.

O gênero Pestivirus da família Flaviviridae, compreende vírus de genoma RNA fita simples e polaridade positiva que comumente estão associados a infecções em ruminantes e suídeos. Possui quatro espécies reconhecidas: o vírus da diarreia viral bovina tipo 1 (BVDV-1), o BVDV-2, o vírus da doença da fronteira (BDV) e o vírus da peste suína clássica (CSFV). Além disso, possui possíveis espécies atípicas, sendo o vírus ‘HoBi’-like a mais reconhecida na literatura. Com o objetivo de gerar mais informações acerca da epidemiologia molecular de pestivírus no País e dos mecanismos na evolução de vírus do gênero, o presente trabalho será apresentado sob a forma de seis artigos científicos. Os trabalhos visam a caracterização de pestivírus detectados em bovinos e javalis no Rio Grande do Sul, a identificação de cepas resultantes de provável recombinação homóloga, a análise das variantes virais intrahospedeiro (quasispécies) de animais infectados pelo vírus ‘HoBi’-like, e a comparação da multiplicação in vitro de diferentes cepas de pestivírus em cultivos celulares oriundos de diferentes raças bovinas. No primeiro trabalho, amostras de soro bovino de animais do Rio Grande do Sul foram obtidas junto ao serviço veterinário oficial e submetidas a RT-PCR para detecção de pestivírus seguida de sequenciamento e análise filogenética das amostras positivas, onde 57,6% foram classificadas como BVDV-1 e 42,4% como BVDV-2, sendo constada frequência elevada de BVDV-2 quando comparada a outras regiões no mundo. No segundo trabalho, 40 amostras de javalis cativos obtidas de abatedouro foram testadas utilizando metodologia semelhante a anteriormente mencionada, e foi possível a detecção de uma amostra positiva, que foi classificada como BVDV-2, sendo a primeira evidência molecular do BVDV em javalis na literatura. No terceiro artigo científico, foi pesquisado a ocorrência de recombinação homóloga, utilizando metodologia in silico, em sequências de pestivírus presentes em banco de dados públicos, onde foram descritos novos possíveis eventos de recombinação entre BVDV-1a e BVDV-1b, BVDV-2a e BVDV-2b e CSFV-2.2 com outro genogrupo indefinido. No quarto e quinto trabalhos, animais persistentemente infectados com o vírus ‘HoBi’-like foram gerados experimentalmente e, utilizando RT-PCR seguida de clonagem, sequenciamento e análises in silico, a composição e variações intrahospedeiro das quasispécies virais em circulação foram avaliadas, onde foi possível observar que características individuais do hospedeiro são importantes na seleção de variantes virais e que a nuvem de mutantes aumenta com o passar do tempo, não havando quasispécie dominante. Por fim, no sexto artigo científico, a multiplicação de cepas de BVDV-1a e 1b, BVDV-2a e vírus ‘HoBi’-like foram avaliadas in vitro em células de cultivo primário obtidas de gado europeu, zebuíno e raça mista e comparadas utilizando modelos estatísticos, onde foi possível a observação de ausência de diferenças entre as raças (P=0,88), mas presença de diferença entre indivíduos da mesma raça (P˂0,05). Os resultados aqui apresentados somam informações acerca da epidemiologia molecular, biologia e evolução dos pestivírus, sendo importantes para embasar futuras campanhas de controle e erradicação das doenças causadas por pestivírus. / The genus Pestivirus of the family Flaviviridae, comprises single stranded RNA-viruses that are commonly associated with infections in ruminants and swine. It has four recognized species: bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1), BVDV-2, border disease virus (BDV) and classical swine fever virus (CSFV). It also has putative atypical species where the ‘HoBi’-like virus is the most highlighted in the literature. In order to generate more information about molecular epidemiology of pestiviruses and important mechanisms in the evolution of the virus genus, this work will be presented in six scientific articles form. The works aimed in the characterization of pestivirus detected in cattle and wild boar in Rio Grande do Sul state, identification of strains resulting from putative homologous recombination, analysis of intrahost viral variants (quasispecies) of animals infected with ‘HoBi’-like viruses, and the comparison of in vitro growth of different pestivirus strains in cell cultures derived from different cattle breeds. In the first study, bovine serum samples of cattle from Rio Grande do Sul state were collected by the official veterinary service and submitted to RT-PCR for detection of pestivirus followed by DNA sequencing and phylogenetic analysis of the positive samples, where 57.6% were classified as BVDV-1 and 42.4% as BVDV-2, which revealed high frequency of BVDV- 2 when compared to other regions worldwide. In the second work, 40 captive wild boar lung samples obtained from slaughterhouse were tested using similar methodology described above, and one sample resulted positive and was classified as BVDV-2, which represented the first molecular evidence of BVDV in wild boars. In the third scientific article, the occurrence of homologous recombination was investigated using in silico methods applied to sequences available in public databases, which are described putative new events between BVDV-1a and BVDV-1b, BVDV-2a and 2b and CSFV-2.2 and undetermined genogroup. In the fourth and fifth studies, animals persistently infected with the ‘HoBi’-like viruses were experimentally generated and using RT-PCR followed by cloning, sequencing and in silico analysis, the composition and intrahost variations of viral quasispecies in circulation were evaluated, where it was observed that individual characteristics of the host are important in the selection of viral variants and the mutant clouds increased overtime. Finally, in the sixth scientific article, the growth of BVDV-1a and 1b, and BVDV-2b, ‘HoBi’-like virus strains were evaluated in vitro using primary cell cultures obtained by taurine, indicine and mixed breed cattle using statistical models, it was possible to observe the absence of differences between cattle breeds (P=0.88), but presence of difference between individuals within the breed (P˂0.05). The results presented herein add information about the molecular epidemiology, biology and evolution of pestiviruses, being important to support future control and eradication programs of diseases caused by pestiviruses.