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51	Untersuchungen von inter- und intramolekularen Interaktionen des globalen Regulators AbrB und dessen Antirepressors AbbA Neubauer, Svetlana 16 January 2014 (has links) Aus den frühen Bindungsstudien des globalen Regulators AbrB mit der ausgedehnten phyC-Promotorregion von Bacillus amyloliquefaciens FZB45 konnte ein mehrstufiger kooperativer Bindungsprozess abgeleitet werden. Dabei verlangt die AbrB-vermittelte Repression von phyC nach Integrität zweier großer Bindungsstellen, ABS1 und ABS2, die 162 bp voneinander entfernt liegen. In der vorliegenden Arbeit wurden die ersten Echtzeitkinetiken zur DNA-AbrB-Interaktion mittels der Oberflächenplasmonresonanz (SPR) gemessen und analysiert. AbrB zeigte hohe Affinitäten zu den 40 bp langen Oligonukleotiden, die den beiden Bindungsstellen entstammen. Dabei verursachten alle Oligonukleotide der ABS2 und nur eine kurze Region innerhalb der ABS1 bei der Bindung von AbrB Konformationsänderungen im Protein und in der DNA (CD - Zirkulardichroismusspektroskopie) und wiesen eine Kooperativität von 2 / In previous binding studies it could be demonstrated that a global regulator AbrB and the extensive phyC promoter region of Bacillus amyloliquefaciens FZB45 interact in a complex manner. AbrB binding is a multistep cooperative process. The integrity of both binding sites, ABS1 and ABS2, which are separated by 162 bp, is crucial for the AbrB-mediated repression of phyC. This work presents the first real-time binding kinetics of the AbrB-DNA interaction using surface plasmon resonance (SPR). AbrB exhibited high affinities to all analyzed 40-bp oligonucleotides that were derived from the ABSs of phyC. All parts of the ABS2, but only a small region within ABS1, were bound cooperatively to AbrB with a stoichiometry of 2 DNA to 1 AbrB tetramer and with 2 Mutagenese AbrB AbbA phyC-Promotor Protein-DNA-Interaktion Bacillus amyloliquefaciens FZB45 Oberflächenplasmonresonanz (SPR) Echtzeitbindungskinetiken positive Kooperativität negative Kooperativität Hill-Koeffizient Gleichgewichtskonstante der Dissoziation Zirkulardichroismus (CD) chemische Interferenzfootprints Röntgenkleinwinkelstreuung (SAXS) Alaninsubstitution Gelretardationsassays (EMSA) in vitro Transkription mutagenesis AbrB AbbA phyC-promoter protein-DNA interaction Bacillus amyloliquefaciens FZB45 surface plasmon resonance (SPR) real-time binding kinetics positive cooperativity negative cooperativity Hill-coefficient equilibrium dissociation constant circular dichroism (CD) chemical interference footprints small angle X-ray scattering (SAXS) alanine substitution gel retardation assays (EMSA) in vitro transcription 570 Biowissenschaften, Biologie 32 Biologie WG 4050 ddc:570

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