Em anos recentes, surgiram numerosos casos de intoxicação alimentar envolvendo patógenos emergentes. Estes casos levaram a um aumento da preocupação com a preservação dos alimentos minimamente processados e com a segurança alimentar. Este fato está induzindo a pesquisa por inibidores para estes patógenos e fatores para prolongar a vida de prateleira de produtos alimentícios. Entre as novas alternativas na preservação está a utilização de peptídeos antimicrobianos produzidos por bactérias. No presente trabalho uma bactéria identificada como Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolada de solos de mata Atlântica de Santa Catarina foi selecionada dentre outros microrganismos e sua capacidade de produzir antimicrobianos foi avaliada. O extrato bruto da cultura do isolado LBM 5006 foi caracterizado, sendo ativo contra importantes bactérias patogênicas e deteriorantes como Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Erwinia carotovora, Escherichia coli, dentre outras. Houve maior produção do antimicrobiano quando a bactéria foi propagada em caldo infusão de cérebro e coração (BHI) a 37o C durante 48 h. Após concentração, a atividade antimicrobiana resistiu ao tratamento com enzimas proteolíticas. A atividade antimicrobiana foi verificada em pHs ácidos, sendo inibida em pH 9 e 10. O extrato foi purificado por meio de cromatografia de gel filtração e extração com butanol. O teste qualitativo de ninidrina, juntamente com a espectroscopia de infravermelho e ultravioleta, feitos com a substância purificada revelou que o antimicrobiano possui natureza protéica. O antimicrobiano apresentou um efeito bacteriostático contra 106 UFC/mL de Listeria monocytogenes na concentração de 25 AU/ml. / In recent years, an increase in food poisoning cases involving emerging pathogens have been described. These cases have increased the preoccupation with the preservation of minimally processed food products and food safety. This fact is leading the research for inhibitory substances and for factors to extend the shelflife of food products. Among the new preservation alternatives is the utilization of antimicrobial peptides produced by bacteria. In present work a bacterium identified as Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 isolated from Atlantic Forest soils of Santa Catarina was selected among other microorganisms and its capacity to produce antimicrobials was evaluated. The crude culture supernatant of the strain LBM 5006 was characterized, being active against important pathogenic and spoilage bacteria like Listeria monocytogenes, B. cereus, E. carotovora, E. coli, among other. Maximum production of antimicrobial activity was observed when the bacteria was propagated in Brain Heart Infusion (BHI) at 37o C for 48 h. After concentration, the antimicrobial activity was resistant to proteolytic enzymes. Antimicrobial activity was verified in acid pHs, but it was lost at pH 9 and 10. The supernatant was purfied by gel filtration chromatography and butanol extraction. The qualitative ninhydrin test, together with infrared and ultraviolet spectroscopy of purified substance revealed that the antimicrobial has a peptide moiety. A dose of 25 UA/mL caused a bacteriostatic effect against 106 UFC/mL Listeria monocytogenes.

Orientador: Ricardo Antonio Ferreira Rodrigues / Resumo: O manejo eficiente do solo pode provocar mudanças benéficas na qualidade física, química e microbiológica do solo refletindo em alta produtividade de grãos de milho. O nitrogênio (N) é o nutriente mais exigido pela planta de milho. A aquisição de fertilizantes nitrogenados pode ser responsável por 50% dos custos variáveis da lavoura. Dessa forma, a utilização de bactérias diazotróficas é considerado uma fonte alternativa economicamente viável e sustentável para aquisição desse nutriente por meio da fixação biológica de N por esses microrganismos. Em vista do exposto, o objetivo deste trabalho foi verificar o desenvolvimento, componente produtivo e produtividade de grãos de milho sob diferentes manejos de solo e inoculado via foliar por Azospirillum brasilense e/ou Bacillus amyloliquefaciens. O experimento foi conduzido durante o ano agrícola de 2016/17 em um Latossolo Vermelho distroférrico localizado na Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão (FEPE) – Setor de Produção Vegetal pertencente à Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira, município de Selvíria - MS. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, esquema de faixas. Foram estabelecidos 12 tratamentos com 4 repetições. Os tratamentos foram constituídos por 3 tipos de sistemas de manejo do solo: Sistema convencional (SC), cultivo mínimo (CM) e sistema plantio direto (SPD). Os tratamentos de inoculação via foliar de bactérias diazotróficas consistiram em: Azospirillum brasilense (AB), Bacillus amylol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Efficient soil management can lead to beneficial changes in the physical, chemical and microbiological quality of the soil, reflecting high yields of corn grains. Nitrogen (N) is the nutrient most required by the corn plant. The acquisition of nitrogen fertilizers can account for 50% of the variable costs of the crop. Thus, the use of diazotrophic bacteria is considered an economically viable and sustainable alternative source for the acquisition of this nutrient through the biological fixation of N by these microorganisms. In view of the above, the objective of this research was to verify the development, productive component and productivity of corn grains under different soil management and foliar inoculation by Azospirillum brasilense and / or Bacillus amyloliquefaciens. The experiment was conducted during the agricultural year of 2016/17 in a Distroferric Red Oxisol located at the Teaching, Research and Extension Farm (FEPE) - Vegetable Production Sector belonging to the Faculty of Engineering of Ilha Solteira, Selvíria - MS. The experimental design was a randomized complete block design. Twelve treatments with four replicates were established. The treatments were constituted by 3 types of soil management systems: Tillage (SC), minimum tillage (CM) and notillage (SPD). The treatments of foliar inoculation of diazotrophic bacteria consisted of: Azospirillum brasilense (AB), Bacillus amyloliquefaciens (BA), Azospirillum brasilense + Bacillus amyloliquefaciens (AB + BA) and... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

v, 132 p. leaves : photos., graphs, tables ; 31 cm. / Title page, contents and abstract only. The complete thesis in print form is available from the University Library. / Thesis (Ph.D.)--Dept. of Biochemistry, University of Adelaide, 1978

Thesis (Ph.D.)--Dept. of Biochemistry, University of Adelaide, 1978.

Universiẗat, Diss., 2002--Stuttgart.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:29:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 257755.pdf: 25607035 bytes, checksum: 1cda68e05297814ff7edf3f79e43a74f (MD5) / Alguns microrganismos possuem a capacidade de produzir substâncias que podem influenciar no desenvolvimento de outros microrganismos. Desde os anos 50 é relatada a capacidade de várias espécies de bactérias do gênero Bacillus de produzir substâncias com atividade antimicrobiana como peptídeos, também denominados de bacteriocinas e enzimas como a subtilisina, subtilina, as proteases e as termolisinas. Muitos desses peptídeos e enzimas têm sido caracterizados bioquimicamente e geneticamente. Embora sejam conhecidas, a função estrutural, a biossíntese e modo de ação de alguns peptídeos antimicrobianos e enzimas, muitos aspectos desses compostos ainda permanecem desconhecidos. Frente a essa realidade, o presente estudo investigou a atividade antibacteriana e antifúngica e a toxicidade in vitro e in vivo do extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10. O extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 foi obtido por técnicas de precipitação de proteínas, centrifugação, diálise e esterilização por filtração. A padronização das análises toxicológicas e de atividade antibacteriana e antifúngica foi realizada pela determinação da concentração de proteínas do extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10. O ensaio de atividade antibacteriana e antifúngica foi realizado pela técnica de difusão em poços. Dentre os diferentes indicadores utilizaram-se bactérias Gram-positivas (Listeria monocytogenes NCTC 098630, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Enterococcus faecalis ATCC 29212), Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Enterobacter aerogenes ATCC 13048 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), fungos (Aspergillus fumigatus ATCC 9197 e Penicillium commune J 238) e leveduras (Rhodotorula muscilaginosa J 350, Pichia anomala DSM 70255 e Kluveromyces marxianus ATCC 16045). O extrato bruto foi testado nas concentrações de 5, 20, 40, 60 e 80 g de proteínas, em ambos os ensaios de atividade antimicrobiana. Para avaliar a toxicidade do extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 foram utilizados ensaios in vitro (genotoxicidade) e in vivo (toxicidade aguda em ratos e camundongos e toxicidade de doses repetidas em camundongos). A investigação da genotoxicidade com células VERO ATCC-CCL 81 foi realizada pelo ensaio Cometa, utilizando-se 60, 80 e 100 g de proteínas do extrato bruto. Para análise toxicológica aguda em ratos Wistar (Rattus norvegicus), utilizou-se um grupo de 10 animais (5 machos e 5 fêmeas) tratado com o extrato bruto, por gavagem oral, com a dose de 2.000µg/kg (dose máxima recomendada). Os animais foram pesados no início e no final do experimento e observados por 14 dias quanto aos possíveis sinais de toxicidade (morte, coma, convulsão, prostração, ataxia, tremores, alteração na pele ou pêlo, alteração nas mucosas, diarréia e salivação). Para análise toxicológica aguda em camundongos Swiss (Mus musculus), utilizou-se o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 por gavagem oral, numa única administração, nas doses de 5, 50, 500 e 5.000 g/kg a 80 camundongos (40 machos e 40 fêmeas, contendo 10 animais por grupo). Outros 20 camundongos (10 machos e 10 fêmeas) receberam veículo (salina, NaCl 0,9%), pela mesma via. Para análise toxicológica de doses repetidas em camundongos Swiss (Mus musculus) utilizou-se o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 administrado por gavagem oral, por um período de 90 dias nas doses de 50, 500 e 5.000 g/kg em 120 animais (60 machos e 60 fêmeas, contendo 20 animais por grupo). Outros 40 camundongos (20 machos e 20 fêmeas) receberam veículo (salina, NaCl 0,9%), pela mesma via. Constatou-se nos ensaios de atividade antimicrobiana que o extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10 não apresentou atividade contra os bolores e as leveduras nas concentrações testadas, e somente apresentou atividade antibacteriana frente Listeria monocytogenes NCTC 098630. O extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 não foi genotóxico para células VERO na concentração de 60µg/ml, porém apresentou genotoxicidade nas concentrações de 80 e 100µg/ml. Na análise toxicológica aguda em ratos a dose letal 50 (DL50) foi superior a 2.000µg/kg. Na análise toxicológica aguda em camundongos, o extrato bruto apresentou boa tolerabilidade e reduzidos efeitos tóxicos agudos importantes, com DL50 superior a 5.000µg/kg. Já na análise toxicológica de doses repetidas, a non toxic adverse effect level (NOAEL) para o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 situa-se entre as doses de 50 e 500 g/kg. Os resultados indicam que o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 apresenta um grande potencial como conservador natural de alimentos, dada sua marcante atividade antilisterial e sua relativa segurança toxicológica. Some microorganisms are able to produce substances that can influence the growth of other microorganisms. The ability of various bacterial species of the genus Bacillus to produce substances with antimicrobial activity such as peptides, also called bacteriocins, and enzymes such as subtilisin, subtilin, proteases and thermolysins has been reported since the 1950's. Many of these peptides and enzymes have been characterized biochemically and genetically. Although the structural function, biosynthesis and mode of action of some antimicrobial peptides and enzymes have been identified, many aspects of these compounds are still unknown. The present study investigated the antibacterial and antifungal activity and the in vitro and in vivo toxicity of the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10. The antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was obtained by techniques of protein precipitation, centrifugation, dialysis and sterilization through filtration. The standardization of the toxicological analysis, and antibacterial and antifungal activity was realized by determining the concentration of proteins in the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10. The assay of antibacterial and antifungal activity was done by agar diffusion technique in wells. Among the different indicators were used the Gram-positive bacteria (Listeria monocytogenes NCTC 098630, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Enterococcus faecalis ATCC 29212), Gram-negative (Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Enterobacter aerogenes ATCC 13048 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), molds (Aspergillus fumigatus ATCC 9197 and Penicillium commune J 238), and yeasts (Rhodotorula muscilaginosa J 350, Pichia anomala DSM 70255 and Kluveromyces marxianus ATCC 16045). The crude extract was tested in concentrations of 5, 20, 40, 60 and 80 g of protein in both assays of antimicrobial activity. To evaluate the Bacillus amyloliquefaciens R 10 antibacterial crude extract's toxicity were used in vitro (genotoxicity) and in vivo (acute toxicity in rats and mice and repeated doses toxicity in mice) assays. The research of the genotoxicity with VERO ATCC-CCL 81 cells was made by Comet assay, using 60, 80 e 100 g of protein of the crude extract. To the acute toxicological analysis in rats Wistar (Rattus norvegicus), were used one group with 10 animals (5 males and 5 females) treated with the crude extract by oral gavage, with dose of 2,000µg/kg (maximum dose recommended). The animals were weighed at the beginning and at the end of the experiment, and observed during 14 days as the possible toxicity signs (death, coma, convulsions, prostration, ataxy, tremors, skin or hair alterations, mucous alteration, diarrhea and salivation). To the acute toxicological analysis in Swiss mice (Mus musculus), the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was used by oral gavage, in a single administration, in doses of 5, 50, 500 and 5,000 g/kg to 80 mice (40 males and 40 females, with 10 animals per group). Other 20 mices (10 males and 10 females) received the vehicle (saline, NaCl 0.9%), through the same route. To the repeated doses toxicological analysis in Swiss mice (Mus musculus) the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was administrated by oral gavage during 90 days in doses of 50, 500 and 5,000 g/kg in 120 animals (60 males and 60 females, in groups of 20 animals). Other 40 mice (20 males and 20 females) received the vehicle (saline, NaCl 0.9%), through the same route. It was verified in the antimicrobial activity assays that the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 didn't present activity against molds and yeasts in the tested concentrations, and only presented antibacterial activity against Listeria monocytogenes NCTC 098630. The antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was not genotoxic to VERO cells at concentration of 60µg/ml, but showed genotoxicity at concentration of 80 and 100µg/ml. In the acute toxicological analysis in rats the letal dose 50 (DL50) was higher than 2,000µg/kg. In the acute toxicological analysis in mice, the crude extract presented good tolerability and litle important acute toxic effects with DL50 higher than 5,000µg/kg. In the repeated doses toxicological analysis, a non toxic adverse effect level (NOAEL) for the antibacterial crude extract is between the doses of 50 and 500 g/kg. The results showed that the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 presents a great potential as a natural food preservative, due to its notable antilisterial activity, and its relative toxicological security.

Bacteriocinas são peptídeos pequenos sintetizados por bactérias que possuem propriedades antimicrobianas. O presente estudo teve por objetivos identificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolado de solo da Mata Atlântica, Santa Catarina, Brasil. A produção da substância antimicrobiana tem início na fase exponencial de crescimento e sua atividade máxima ocorre na fase estacionária. O efeito do cocultivo de B. amyloliquefaciens com diferentes bactérias na produção do antimicrobiano foi investigado. O cultivo de células de Escherichia coli intactas ou inativadas pelo calor com a cepa produtora aumentou a síntese da substância antimicrobiana. A bacteriocina LBM 5006 apresentou amplo espectro de ação, produzindo atividade antagonista contra bactérias, fungos e amebas patogênicas. O modo de ação contra células de Listeria monocytogenes e Paenibacillus larvae foi bactericida e bacteriolítico. Atividade esporicida foi observada contra esporos de P. larvae após tratamento com 1600 UA mL-1. Efeitos amebistático e amebicida contra trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga com a consequente lise celular foram observados. A bacteriocina não teve efeito inibitório em células Vero nas concentrações que foram efetivas contra as amebas. A substância antimicrobiana foi isolada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel filtração e extração com 1-butanol. O espectro ultravioleta foi típico de um polipeptídeo e o infravermelho indicou a presença de ligações peptídicas e grupamentos acil na sua estrutura. Análises por espectroscopia de massas indicaram que B. amyloquefaciens LBM 5006 produziu dois peptídeos antimicrobianos, com 1058 Da e 1464 Da, correspondentes a peptídeos tipo-iturina e tipo-fengicina, respectivamente. / Bacteriocins are small peptides synthesized by bacteria which have antimicrobiall properties. This study aimed to identify and characterize a bacteriocin produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolated from soil of Mata Atlântica, Santa Catarina, Brazil. It has been observed that the antimicrobial substance production starting at the exponencial grown phase and maximum activity occur at stationary phase. The effect of different bacteria on the production of antimicrobial activity by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 was investigate. It was concluded that the presence of intact or thermally inactivated cells of Escherichia coli enhanced the synthesis of antimicrobial peptides by B. amyloliquefaciens strain. Bacteriocin LBM 5006 showed broad spectrum of action, producing antagonistic activity against bacteria, fungi and pathogenic amoebas. The mode of action against Listeria monocytogenes and Paenibacillus larvae was bactericidal and bacteriolytic. Sporicidal activity was observed against P. larvae spores after treatment whit 1600 AU mL-1. Amoebicidal and amoebistatic effects were detected against throphozoites of Acanthamoeba poliphaga and cell lysis. The bacteriocin had no inhibitory effect on Vero cells at concentrations that were effective against amoebas.The antimicrobial substance was isolated by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography and 1-butanol extraction.The ultraviolet spectrum was typical of a polypeptide and the infrared spectrum indicates the presence of peptide bonds and acyl group(s) in its structure. Mass spectroscopy analysis indicated that B. amyloliquefaciens LBM 5006 produces two antimicrobial peptides, with main peaks at m/z 1058 Da and 1464 Da, corresponding to iturinlike and fengycin-like peptides, respectively.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-22T02:17:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O elevado índice de morbidade em função da contaminação dos alimentos tem aumentado a necessidade do uso de metodologias alternativas para conservação dos mesmos. Nesse sentido, essa pesquisa teve como objetivo: i) descrever uma revisão sobre a ação de antimicrobianos naturais produzidos por microrganismos para conservação de alimentos; ii) avaliar a qualidade microbiológica de ostra Crassostrea gigas produzida e comercializada em diferentes áreas da região litorânea de Florianópolis # SC; iii) Estudar a atividade antimicrobiana do extrato bruto produzido por Bacillus amyloliquefaciens potencializado pela ação do pH e da concentração de sal em estudos simulados in vitro, com intuito de utilizá-la como inibidor de Listeria monocytogenes em ostras. Com a revisão concluiu-se que as substâncias antimicrobianas, em geral, são uma das opções em um mosaico de possíveis mecanismos para controlar bactérias patogênicas e deteriorantes em alimentos. Tudo indica que conservadores naturais, particularmente em adição ou combinação sinergística com outros fatores e técnicas, têm um papel importante na industria de alimentos, garantindo segurança ao consumidor. Para verificar a qualidade microbiológica das ostras, durante o ano de 2003, 90 (noventa) amostras de ostras da espécie Crassostrea gigas foram analisadas, sendo que 45 delas foram coletadas junto a estabelecimentos comerciais destinados à venda de frutos do mar e 45 amostras diretamente no local de cultivo. De acordo com os resultados, Víbrio cholerae, Víbrio parahaemolyticus e Salmonella sp. não foram encontrados em nenhuma das amostras. Apenas uma amostra apresentou 80 UFC/g de estafilococos coagulase positiva, as demais amostras apresentaram <10 UFC/g. Com o resultado das análises de coliformes a 35ºC e coliformes a 45 ºC, evidencia-se contaminação tanto no local de cultivo quanto no local de venda, nas três áreas analisadas. Escherichia coli foi encontrada em 4 amostras analisadas do local de cultivo, demonstrando uma ocorrência de 9 %. Já nos estabelecimentos comerciais, foi encontrada uma ocorrência de 35,5 % (16/45). A ação do extrato bruto produzido por Bacillus amyloliquefaciens em diferentes concentrações de proteína (0,0; 5,0; 40; 80 µg/mL) sobre o inóculo de 106 UFC.mL-1 de Listeria monocytogenes, foi verificada em caldo TSB-YE previamente ajustado para pH 4,0; 6,1; 8,0; e concentrações de NaCl para 0; 2,5; 4,5 % p/v, resultando em uma análise fatorial completa de 36 curvas de comportamento microbiano. Os ensaios foram realizados à temperatura de 25 ºC em estufa DBO, por até 50 horas. Os resultados obtidos indicam que ocorreu uma ação sinérgica entre pH, concentração de sal e extrato bruto, demonstrando uma potencialização da ação antimicrobiana. A melhor ação foi observada quando se utilizou 80 µg/mL de extrato bruto da substância antimicrobiana, pH 4,0 e 4,5 % de concentração de sal, onde ocorreu uma redução de aproximadamente cinco ciclos logarítmicos da cultura de Listeria monocytogenes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-20T09:05:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 190198.pdf: 319726 bytes, checksum: 4424164a6a9c8da6c638d1fc8438ba76 (MD5) / Neste trabalho, avaliou-se a atividade antimicrobiana de substância produzida por Bacillus amyloliquefaciens sobre a microbiota do mexilhão Perna perna cultivado na praia do Sambaqui, na cidade de Florianópolis. Para a realização dos testes de inibição realizaram-se 3 coletas nas quais as amostras de mexilhão foram submetidas inicialmente a Contagem Padrão em Placas para microrganismos psicrotróficos. Para a obtenção do extrato, as culturas estoques de B. amyloliquefaciens foram centrifugadas e saturadas. Após nova centrifugação, o precipitado foi ressuspendido em tampão fosfato, dialisado e esterilizado por filtração. As bactérias isoladas do mexilhão foram cultivadas sobre placas de TSA onde foram feitos 2 poços de 5mm de diâmetro nos quais adicionou-se 80mL da solução inibidora. Foi observada a formação ou não de halos de inibição ao redor dos poços. Das 39 colônias isoladas, 9 apresentaram halos de inibição e foram identificadas como Bacillus sp, Aerococcus viridians, Acinetobacter spp., Corynebacterium spp e Staphylococcus epidermidis. Foi possível verificar que a substância produzida por B. amyloliquefaciens teve uma discreta ação sobre a microbiota do mexilhão Perna pena quando aplicada diretamente na carne do mesmo, apresentando um comportamento bacteriostático. Os gêneros Bacillus sp, Aerococcus viridians, Acinetobacter spp., Corynebacterium vitarumen, apresentaram mudança da cor do indicador do meio Niven modificado, sugerindo a formação de compostos alcalinos.

Bacteriocinas são peptídeos pequenos sintetizados por bactérias que possuem propriedades antimicrobianas. O presente estudo teve por objetivos identificar e caracterizar uma bacteriocina produzida por Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolado de solo da Mata Atlântica, Santa Catarina, Brasil. A produção da substância antimicrobiana tem início na fase exponencial de crescimento e sua atividade máxima ocorre na fase estacionária. O efeito do cocultivo de B. amyloliquefaciens com diferentes bactérias na produção do antimicrobiano foi investigado. O cultivo de células de Escherichia coli intactas ou inativadas pelo calor com a cepa produtora aumentou a síntese da substância antimicrobiana. A bacteriocina LBM 5006 apresentou amplo espectro de ação, produzindo atividade antagonista contra bactérias, fungos e amebas patogênicas. O modo de ação contra células de Listeria monocytogenes e Paenibacillus larvae foi bactericida e bacteriolítico. Atividade esporicida foi observada contra esporos de P. larvae após tratamento com 1600 UA mL-1. Efeitos amebistático e amebicida contra trofozoítos de Acanthamoeba polyphaga com a consequente lise celular foram observados. A bacteriocina não teve efeito inibitório em células Vero nas concentrações que foram efetivas contra as amebas. A substância antimicrobiana foi isolada por precipitação com sulfato de amônio, cromatografia de gel filtração e extração com 1-butanol. O espectro ultravioleta foi típico de um polipeptídeo e o infravermelho indicou a presença de ligações peptídicas e grupamentos acil na sua estrutura. Análises por espectroscopia de massas indicaram que B. amyloquefaciens LBM 5006 produziu dois peptídeos antimicrobianos, com 1058 Da e 1464 Da, correspondentes a peptídeos tipo-iturina e tipo-fengicina, respectivamente. / Bacteriocins are small peptides synthesized by bacteria which have antimicrobiall properties. This study aimed to identify and characterize a bacteriocin produced by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006, isolated from soil of Mata Atlântica, Santa Catarina, Brazil. It has been observed that the antimicrobial substance production starting at the exponencial grown phase and maximum activity occur at stationary phase. The effect of different bacteria on the production of antimicrobial activity by Bacillus amyloliquefaciens LBM 5006 was investigate. It was concluded that the presence of intact or thermally inactivated cells of Escherichia coli enhanced the synthesis of antimicrobial peptides by B. amyloliquefaciens strain. Bacteriocin LBM 5006 showed broad spectrum of action, producing antagonistic activity against bacteria, fungi and pathogenic amoebas. The mode of action against Listeria monocytogenes and Paenibacillus larvae was bactericidal and bacteriolytic. Sporicidal activity was observed against P. larvae spores after treatment whit 1600 AU mL-1. Amoebicidal and amoebistatic effects were detected against throphozoites of Acanthamoeba poliphaga and cell lysis. The bacteriocin had no inhibitory effect on Vero cells at concentrations that were effective against amoebas.The antimicrobial substance was isolated by ammonium sulfate precipitation, gel filtration chromatography and 1-butanol extraction.The ultraviolet spectrum was typical of a polypeptide and the infrared spectrum indicates the presence of peptide bonds and acyl group(s) in its structure. Mass spectroscopy analysis indicated that B. amyloliquefaciens LBM 5006 produces two antimicrobial peptides, with main peaks at m/z 1058 Da and 1464 Da, corresponding to iturinlike and fengycin-like peptides, respectively.