Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-25Bitstream added on 2014-06-13T20:10:38Z : No. of bitstreams: 1 takakura_vf_me_botfm.pdf: 880787 bytes, checksum: 2e3cd9f80db52c6ce5167fafb799c7d5 (MD5) / Ministério da Saúde / A Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos está localizada na cidade de São Carlos, interior do estado de São Paulo. É Serviço de Referência para 5 cidades da região. Durante muitos anos de sua história, a Santa Casa de São Carlos teve como prestador de serviço hemoterápico o Banco de Sangue de São Carlos, um serviço privado, sob responsabilidade técnica de um médico hemoterapêuta da cidade. Em 2006, esse serviço hemoterápico terceirizado foi lacrado pela Vigilância Sanitária Estadual e, em virtude dessa situação, em 2006 a Santa Casa de São Carlos passou a investir recursos para instalar um serviço hemoterápico próprio, que pudesse atender com qualidade as necessidades de transfusão de hemocomponentes na cidade. Contando com recursos da própria Instituição e importantes parcerias como a Câmara Municipal e Rotary Club São Carlos, foi estruturado um projeto em três fases. Em agosto/2006 foi implantada uma Agência Transfusional, ligada ao Hemonúcleo Regional de Araraquara – UNESP; em fevereiro/2008 foi instalada a Unidade de Coleta e Transfusão de São Carlos (UCT), ainda vinculada ao Hemonúcleo Regional de Araraquara e em junho/2009, o Serviço ampliou suas atividades, com três novos laboratórios: Processamento, Imunohematologia e Sorologia, passando a receber o nome de Serviço de Hemoterapia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos, e realizando todo o “ciclo do sangue”. Atualmente, são recebidas cerca de 500 doações mensais. Diante do compromisso com a qualidade dos serviços prestados pela Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos e da evolução para um serviço de maior complexidade em hemoterapia, justificou-se a implantação de um Programa de Gerenciamento da Qualidade, que foi realizado com a colaboração do Hemocentro de Botucatu-SP, através do benchmarking (ferramenta de gestão... / The Irm. Santa Casa de Mis. de Sao Carlos is located in Sao Carlos, in the state of Sao Paulo. It’s a Reference Service for 5 cities. During many years of the history, Santa Casa de Sao Carlos had a service provider hemotherapeutic the Blood Bank of Sao Carlos, a private business, under the technical responsibility of a hematologist in the city. In 2006, this outsourcing service hemotherapeutic was sealed by the State Sanitary Surveillance, and because of this situation, in 2006 the Santa Casa de Sao Carlos started to invest resources to install a service hemotherapeutic own, which could meet the quality requirements for transfusion of blood products in the city. Drawing on resources of the institution itself and major partners such as City Hall and the Sao Carlos Rotary Club, a project was structured in three phases. In August 2006 the Agency was set up a transfusion-linked Hemonúcleo Regional Araraquara - UNESP; February/2008 was installed in the Unit for Collection and Transfusion of Sao Carlos (UCT), still bound to Hemonúcleo Regional Araraquara and in June 2009 , the Service has expanded its activities, with three new laboratories: Processing, Immunohematology and Serology, starting to receive the name Blood Bank of the Irm. Santa Casa de Misericordia de Sao Carlos, and performing all the cycle of blood. Currently, about 500 are received monthly donations.Given the commitment to quality of services provided by the Brotherhood of Santa Casa de Misericordia de Sao Carlos and the evolution to a service of greater complexity hemotherapy was justified for the deployment of a Quality Management Program, which was conducted with Blood Center of Botucatu-SP, through benchmarking (quality management tool, which allows the comparison of performances between organizations and their processes). The study was conducted in four phases: establishing routines... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Rosana Rossi Ferreira / Banca: Roberta Maria Fachini / Banca: Paulo Eduardo de Abreu Machado / Resumo: A Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos está localizada na cidade de São Carlos, interior do estado de São Paulo. É Serviço de Referência para 5 cidades da região. Durante muitos anos de sua história, a Santa Casa de São Carlos teve como prestador de serviço hemoterápico o Banco de Sangue de São Carlos, um serviço privado, sob responsabilidade técnica de um médico hemoterapêuta da cidade. Em 2006, esse serviço hemoterápico terceirizado foi lacrado pela Vigilância Sanitária Estadual e, em virtude dessa situação, em 2006 a Santa Casa de São Carlos passou a investir recursos para instalar um serviço hemoterápico próprio, que pudesse atender com qualidade as necessidades de transfusão de hemocomponentes na cidade. Contando com recursos da própria Instituição e importantes parcerias como a Câmara Municipal e Rotary Club São Carlos, foi estruturado um projeto em três fases. Em agosto/2006 foi implantada uma Agência Transfusional, ligada ao Hemonúcleo Regional de Araraquara - UNESP; em fevereiro/2008 foi instalada a Unidade de Coleta e Transfusão de São Carlos (UCT), ainda vinculada ao Hemonúcleo Regional de Araraquara e em junho/2009, o Serviço ampliou suas atividades, com três novos laboratórios: Processamento, Imunohematologia e Sorologia, passando a receber o nome de Serviço de Hemoterapia da Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos, e realizando todo o "ciclo do sangue". Atualmente, são recebidas cerca de 500 doações mensais. Diante do compromisso com a qualidade dos serviços prestados pela Irmandade da Santa Casa de Misericórdia de São Carlos e da evolução para um serviço de maior complexidade em hemoterapia, justificou-se a implantação de um Programa de Gerenciamento da Qualidade, que foi realizado com a colaboração do Hemocentro de Botucatu-SP, através do benchmarking (ferramenta de gestão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Irm. Santa Casa de Mis. de Sao Carlos is located in Sao Carlos, in the state of Sao Paulo. It's a Reference Service for 5 cities. During many years of the history, Santa Casa de Sao Carlos had a service provider hemotherapeutic the Blood Bank of Sao Carlos, a private business, under the technical responsibility of a hematologist in the city. In 2006, this outsourcing service hemotherapeutic was sealed by the State Sanitary Surveillance, and because of this situation, in 2006 the Santa Casa de Sao Carlos started to invest resources to install a service hemotherapeutic own, which could meet the quality requirements for transfusion of blood products in the city. Drawing on resources of the institution itself and major partners such as City Hall and the Sao Carlos Rotary Club, a project was structured in three phases. In August 2006 the Agency was set up a transfusion-linked Hemonúcleo Regional Araraquara - UNESP; February/2008 was installed in the Unit for Collection and Transfusion of Sao Carlos (UCT), still bound to Hemonúcleo Regional Araraquara and in June 2009 , the Service has expanded its activities, with three new laboratories: Processing, Immunohematology and Serology, starting to receive the name Blood Bank of the Irm. Santa Casa de Misericordia de Sao Carlos, and performing all the "cycle of blood." Currently, about 500 are received monthly donations.Given the commitment to quality of services provided by the Brotherhood of Santa Casa de Misericordia de Sao Carlos and the evolution to a service of greater complexity hemotherapy was justified for the deployment of a Quality Management Program, which was conducted with Blood Center of Botucatu-SP, through benchmarking (quality management tool, which allows the comparison of performances between organizations and their processes). The study was conducted in four phases: establishing routines... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-20T21:20:40Z No. of bitstreams: 1 Kiyoshi Ferreira Fukutani Aplicação de técnicas sorológicas e moleculares....pdf: 8948929 bytes, checksum: 731ecff23760ac556b55cf07dd7c1cc5 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-20T21:20:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kiyoshi Ferreira Fukutani Aplicação de técnicas sorológicas e moleculares....pdf: 8948929 bytes, checksum: 731ecff23760ac556b55cf07dd7c1cc5 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Aplicação do Exame sorológico (ELISA) e do PCR na detecção de Leishmania chagasi em doadores de sangue na cidade de Salvador. A leishmaniose é causada por protozoários do gênero Leishmania e constitui um problema grave de saúde pública na Bahia. A transmissão do protozoário pela transfusão de sangue já foi relatada e existe a possibilidade dos hemoderivados serem um potencial risco para a manutenção da doença. O presente trabalho teve como objetivo avaliar positividade sorológica contra Leishmania e a presença deste parasita no sangue periférico de doadores, na cidade de Salvador, BA. Para estipulando a soroprevalência de leishmaniose em doadores de sangue, foram coletadas amostras de sangue periférico de 700 indivíduos, no Hemocentro da Bahia (HEMOBA/SESAB), de janeiro a setembro de 2010. As amostras foram processadas para a obtenção de plasma e de DNA. A sorologia anti-Leishmania foi feita por ELISA, empregando antígeno solúvel de Leishmania chagasi (SLA). A presença de parasitas foi determinada por PCR qualitativo e por PCR quantitativo (qPCR). A população amostral foi composta por 74.5% de indivíduos masculinos, com média de idade de 34 anos. A partir de uma curva ROC, empregando soros de pacientes com leishmaniose visceral e soros de pacientes residentes em área não endêmica, o ponto de corte para o teste sorológico foi estabelecido em 0,0167 (DO em 405nm). A sorologia anti-Leishmania foi positiva em 5.4% (38/700) das amostras. Destes indivíduos, 73% (28/38) apresentaram amplificação para uma região repetitiva do genoma de Leishmania, empregando-se o PCR qualitativo. Empregando o qPCR, foi possível determinar a presença de parasitas em 0.4% (3/700) amostras e, nestas, a quantificação foi inferior a 10 parasitas. Nossos resultados mostram a prevalência de sorologia anti-Leishmania é de 5.4%, em doadores do HEMOBA/SESAB, similar ao encontrado em outras área onde ocorre a leishmania. / Application of serological examination (ELISA) and PCR detection of Leishmania chagasi infection in blood donors in Salvador. Leishmaniasis is caused by protozoa of the genus Leishmania and is a serious public health problem in Bahia. The transmission of the parasite by blood transfusion has been reported and the possibility of blood products being a potential risk for disease transmission currently exists. This study aimed to evaluate seropositivity against Leishmania and the presence of parasites in peripheral blood from blood donors in Salvador, Bahia. To assess the prevalence of anti-Leishmania antibodies in blood donors, we collected peripheral blood samples from 700 individuals in the Blood Bank of Bahia (HEMOBA/SESAB), from January to September 2010. The samples were processed to obtain plasma and DNA. The anti-Leishmania serology was performed by ELISA employing Leishmania chagasi soluble antigen (SLA). The presence of parasites was determined by qualitative PCR and quantitative PCR (qPCR). The sample population comprised 74.5% of males with a mean age of 34 years. From a ROC curve, using sera from patients with visceral leishmaniasis and sera from patients residing in non-endemic areas, the cutoff for the serologic test was set at 0.0167 (OD at 405nm). The anti-Leishmania serology was positive in 5.4% (38/700) samples. Of these, 73% (28/38) showed amplification of a repetitive region of the genome of Leishmania, using the qualitative PCR. Using the qPCR, we determined the presence of parasites in 0.4% (3 / 700) samples, and in these, the amount was less than 10 parasites. Our results show the prevalence of anti-Leishmania serology is 5.4% in donors, similar to that found in other areas where Leishmania is.

A transfusão de concentrado de hemácias é uma atividade que proporciona muitos benefícios aos pacientes que necessitam aumentar a capacidade de transporte de oxigênio, mas também possui riscos inerentes. A disponibilidade de unidades de concentrado de hemácias compatíveis para pacientes que são fenótipo negativos para antígenos de alta frequência e possuem os respectivos anticorpos, bem como para pacientes com uma complexa combinação de aloanticorpos contra antígenos comuns, permanece como um desafio na medicina transfusional. Painéis nacionais e internacionais de doadores e bancos de unidades de concentrados de hemácias congeladas de doadores raros têm sido estabelecidos para facilitar o fornecimento de hemácias compatíveis para esses pacientes. É previsto que, com o aumento de movimentos populacionais através do mundo e chance em potencial de desenvolvimento de anticorpos raros ou mistura de anticorpos, a necessidade da disponibilidade de doadores de sangue raro continuará no futuro. Em média, 1800 unidades de hemocomponentes de sangue raro são transportadas anualmente para serem transfundidas, podendo este número ser maior devido à dificuldade em manter registro único de todos os dados. Um banco de sangue de fenótipos raros é formado por um sistema de informações e composto pelo cadastro de dados de doadores de sangue fenotipados e genotipados e que apresentam antígenos pouco comuns na população, pelo cadastro de unidades de hemocomponentes congelados e pela possibilidade de busca de doadores compatíveis, após a inserção dos resultados de fenotipagem/genotipagem do receptor. A possibilidade de acesso rápido a um cadastro nacional com informações referentes aos doadores de sangue com fenótipo raro poderá proporcionar vários benefícios, como uma maior rapidez na localização de concentrados de hemácias compatíveis para pacientes aloimunizados e diminuição dos custos para sua triagem. Futuramente, esses dados poderão compor o cadastro mundial de doadores com fenótipos raros, o que aumentariam as chances de se localizar fenótipos compatíveis com esses pacientes. A organização de programas de fenotipagem a nível nacional e a disponibilização destes dados poderão trazer avanços significativos, tanto para reestruturação de laboratórios de imuno-hematologia como para a capacitação técnica dos profissionais que atuam nesta área. Esse cadastro poderá ser utilizado futuramente como estratégia para seleção de concentrado de hemácias a serem congeladas no país. / The transfusion of red blood cells is an activity that provides many benefits to the patients who need to increase the oxygen-carrying capacity, but also has inherent risks. The availability of RBC units compatible for patients who are negative phenotype for high frequency antigens and have their antibodies as well as for patients with a complex combination of alloantibodies against common antigens remains a challenge in transfusion medicine. National and international donor panels and banks of frozen concentrated units of rare donor red blood cells have been established to facilitate the provision of compatible erythrocytes in these patients. It is expected that with the increase of population movements across the globe and likely potential development of rare antibodies or antibody mixture, the need for the availability of rare blood donors will continue in the future. On average, 1800 units of rare blood components are transported annually to be transfused, this number may be higher because of the difficulty in maintaining single record of all data. A rare phenotypes blood bank consists of an information system and consists of the registration of blood donors phenotyped and genotyped data who presenting unusual antigens in the population, the register of frozen blood products units and the possibility of seeking donors compatible, after insertion of the results of phenotyping / genotyping receiver. The possibility of quick access to a national database with information pertaining to blood donors with rare phenotype can provide several benefits, such as greater speed in locating concentrates compatible red blood cells to alloimmunized patients and lower costs for their screening. In the future, these data may select global register of donors with rare phenotypes, which would increase the chances of finding phenotypes consistent with these patients. The organization of phenotyping programs at national level and the availability of these data can bring significant advances for both restructuring immuno-hematology laboratories as for the technical training of professionals working in this area. This register could be used as future strategy for red blood cell selection to freeze in the country.

A transfusão de concentrado de hemácias é uma atividade que proporciona muitos benefícios aos pacientes que necessitam aumentar a capacidade de transporte de oxigênio, mas também possui riscos inerentes. A disponibilidade de unidades de concentrado de hemácias compatíveis para pacientes que são fenótipo negativos para antígenos de alta frequência e possuem os respectivos anticorpos, bem como para pacientes com uma complexa combinação de aloanticorpos contra antígenos comuns, permanece como um desafio na medicina transfusional. Painéis nacionais e internacionais de doadores e bancos de unidades de concentrados de hemácias congeladas de doadores raros têm sido estabelecidos para facilitar o fornecimento de hemácias compatíveis para esses pacientes. É previsto que, com o aumento de movimentos populacionais através do mundo e chance em potencial de desenvolvimento de anticorpos raros ou mistura de anticorpos, a necessidade da disponibilidade de doadores de sangue raro continuará no futuro. Em média, 1800 unidades de hemocomponentes de sangue raro são transportadas anualmente para serem transfundidas, podendo este número ser maior devido à dificuldade em manter registro único de todos os dados. Um banco de sangue de fenótipos raros é formado por um sistema de informações e composto pelo cadastro de dados de doadores de sangue fenotipados e genotipados e que apresentam antígenos pouco comuns na população, pelo cadastro de unidades de hemocomponentes congelados e pela possibilidade de busca de doadores compatíveis, após a inserção dos resultados de fenotipagem/genotipagem do receptor. A possibilidade de acesso rápido a um cadastro nacional com informações referentes aos doadores de sangue com fenótipo raro poderá proporcionar vários benefícios, como uma maior rapidez na localização de concentrados de hemácias compatíveis para pacientes aloimunizados e diminuição dos custos para sua triagem. Futuramente, esses dados poderão compor o cadastro mundial de doadores com fenótipos raros, o que aumentariam as chances de se localizar fenótipos compatíveis com esses pacientes. A organização de programas de fenotipagem a nível nacional e a disponibilização destes dados poderão trazer avanços significativos, tanto para reestruturação de laboratórios de imuno-hematologia como para a capacitação técnica dos profissionais que atuam nesta área. Esse cadastro poderá ser utilizado futuramente como estratégia para seleção de concentrado de hemácias a serem congeladas no país. / The transfusion of red blood cells is an activity that provides many benefits to the patients who need to increase the oxygen-carrying capacity, but also has inherent risks. The availability of RBC units compatible for patients who are negative phenotype for high frequency antigens and have their antibodies as well as for patients with a complex combination of alloantibodies against common antigens remains a challenge in transfusion medicine. National and international donor panels and banks of frozen concentrated units of rare donor red blood cells have been established to facilitate the provision of compatible erythrocytes in these patients. It is expected that with the increase of population movements across the globe and likely potential development of rare antibodies or antibody mixture, the need for the availability of rare blood donors will continue in the future. On average, 1800 units of rare blood components are transported annually to be transfused, this number may be higher because of the difficulty in maintaining single record of all data. A rare phenotypes blood bank consists of an information system and consists of the registration of blood donors phenotyped and genotyped data who presenting unusual antigens in the population, the register of frozen blood products units and the possibility of seeking donors compatible, after insertion of the results of phenotyping / genotyping receiver. The possibility of quick access to a national database with information pertaining to blood donors with rare phenotype can provide several benefits, such as greater speed in locating concentrates compatible red blood cells to alloimmunized patients and lower costs for their screening. In the future, these data may select global register of donors with rare phenotypes, which would increase the chances of finding phenotypes consistent with these patients. The organization of phenotyping programs at national level and the availability of these data can bring significant advances for both restructuring immuno-hematology laboratories as for the technical training of professionals working in this area. This register could be used as future strategy for red blood cell selection to freeze in the country.

Nesta dissertação, foi proposto o desenvolvimento de uma metodologia molecular por PCR em tempo real (qPCR) utilizando pool de DNA para a detecção de alelos que codificam antígenos importantes do sistema de grupo sanguíneo Diego. Esta ferramenta molecular será útil uma vez que são escassos os reagentes sorológicos para detecção desses antígenos e, quando existem, não permitem uma investigação em larga escala devido à pouca confiabilidade e alto custo. O sistema Diego (DI) possui 22 antígenos, sendo o antígeno Diª mais importante na prática transfusional. Eles são carreados pela proteína da Banda 3 que é proteína mais abundante na s hemácias, com 106 cópias. O antígeno possui uma maior prevalência, em indígenas americanos e asiáticos (6%-52%), já que é considerado um marcador antropológico de ancestrais mongóis; no entanto, a incidência desse antígeno tem aumentado dentre outras populações, como em caucasianos e afrodescendentes, e detectado em doadores de sangue, o que pode resultar em aloimunização de pacientes e dificultando o seu manejo terapêutico. Em contrapartida, a frequência do antígeno Dib em todas as populações é extremamente alta (>99,99%) e encontrar o raro fenótipo Di (a+b-) é ainda mais laborioso do que a busca pelo antígeno Diª. Sabe-se ainda muito pouco sobre a frequência dos antígenos Wrª e Wrb nas diferentes populações, mas estimase que a prevalência seja de 0,01% e >99,99% respectivamente. Foram utilizadas 410 amostras de doadores de sangue e 230 amostras de pacientes para genotipagem em qPCR utilizando pool de DNA para detecção dos alelos DI*01, DI*02, DI*02.03 e DI*02.04. A amplificação individualizada foi realizada quando a reação com pool demonstrou a amplificação de um dos alelos de interesse, DI*01 ou DI*02.03. Procedeu-se também com a clonagem dos alelos após à amplificação com as amostras controle, porém, ocorreu somente a clonagem dos alelos DI*02 e DI*02.03. Os fragmentos clonados apresentaram amplificação excelente e serão utilizados como controle positivo em testes moleculares futuros. Não foi possível a clonagem do DI*01 pelo problema da zigozidade da amostra controle. Houve 100% de concordância entre o resultado da genotipagem e as informações de fenotipagem das amostras controle. O alelo DI*01 ocorreu em 0,6% dos doadores de sangue e 1,7% em afrodescendentes, que corresponde a uma frequência genotípica DI*01/DI*02 de 1,2% e 1,3% respectivamente. Procedeu-se com as análises estatísticas comparativas entre o resultado desta pesquisa e de outras na população brasileira sobre os diferentes genótipos para entender se havia uma diferença estatística considerável. Ainda que a frequência para o genótipo DI*01/DI*02 seja mais baixa em doadores e mais alta em afrodescendentes do que o publicado em outros trabalhos brasileiros, a análise dos dados demonstrou que não havia diferença estatística com a maioria deles. A incidência aumentada do alelo DI*01 na população afrodescendente demonstra o aspecto da miscigenação. Conclui-se que a metodologia proposta funciona e tem aplicabilidade imediata em doadores de sangue e na busca de fenótipos raros. A incidência do alelo para Diª em doadores de sangue está abaixo do que um estudo anterior detectou em Ribeirão Preto (COZAC, 2004), que pode ser explicado pelas diferenças no censo populacional entre os estudos e pela coleta de amostra de universitários (62%). Não foram encontrados os genótipos DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 e DI*02.03/DI*02.04 nas populações estudadas. / This work proposed the development of a molecular methodology by Real Time-PCR (qPCR) using DNA pool for the detection of alleles that encode important antigens of the Diego blood group system. This molecular tool will be useful since the serological reagents for the detection of these antigens are scarce and, when they exist, do not allow a large scale investigation due to the low reliability and high cost. The Diego (DI) system has 22 antigens, the Diª antigen is the most important in transfusion practice. They are carried by the Band 3 protein which is the most abundant protein on the erythroid surface, about 106 copies. The antigen has a higher prevalence in american indians and asians (6%-52%), since it is considered an anthropological marker of Mongolian ancestors; however, the incidence of this antigen has increased among other populations, such as in caucasians and afrodescendants, and detected in blood donors, which may result in alloimmunization of patients and make difficult their therapeutic management. In contrast, the frequency of Dib antigen in all populations is extremely high (>99.99%) and finding the rare phenotype Di (a+b-) is even more laborious than the search for Diª antigen. The frequency of Wrª and Wrb antigens in different populations is not well-known, but it is estimated that the prevalence is 0.01% and >99.99% respectively. 410 blood donor samples and 230 patient samples were used for genotyping in qPCR using DNA pool to detect the alleles DI*01, DI*01, DI*02.03 and DI*02.04. The single amplification was performed when the pool reaction demonstrated the amplification of one of the alleles of interest, DI*01 or DI*02.03. The alleles were also cloned after the control samples amplification. Only the cloning of the DI*02 and DI*02.03 alleles occurred, they presented excellent amplification and will be used as positive controls in future molecular tests, it was not possible to clone DI*01 by the control sample zygosity though. There was 100% agreement between the genotyping results and the phenotype information of the control samples. The DI*01 allele occurred in 0,6% of the blood donors and 1,7% in afrodescendants, which corresponds to a genotypic frequency DI*01/DI*02 of 1,2% and 1,3% in respectively. The comparative statistical analyzes between this research results and others in the Brazilian population on the different genotypes was performed to understand if there was a considerable statistical difference. Although the frequency of the genotype DI*01/DI*02 is lower in donors and higher in afrodescendants than that published in other Brazilian studies, data analysis showed that there was no statistical difference with most of them. The increased incidence of the DI*01 allele in the afrodescendant population demonstrates the aspect of miscegenation. It is concluded in this work that the proposed methodology works and has immediate applicability in the screening of blood donors and search for rare phenotypes. The incidence of the allele encoding Di ª antigen in blood donors is below than previously detected in Ribeirão Preto (COZAC, 2004), which can be explained by the differences in the population census between the studies and by the sample collection of university students (62%). The genotypes DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 and DI*02.03/DI*02.04 were not found in the populations studied.

Nesta dissertação, foi proposto o desenvolvimento de uma metodologia molecular por PCR em tempo real (qPCR) utilizando pool de DNA para a detecção de alelos que codificam antígenos importantes do sistema de grupo sanguíneo Diego. Esta ferramenta molecular será útil uma vez que são escassos os reagentes sorológicos para detecção desses antígenos e, quando existem, não permitem uma investigação em larga escala devido à pouca confiabilidade e alto custo. O sistema Diego (DI) possui 22 antígenos, sendo o antígeno Diª mais importante na prática transfusional. Eles são carreados pela proteína da Banda 3 que é proteína mais abundante na s hemácias, com 106 cópias. O antígeno possui uma maior prevalência, em indígenas americanos e asiáticos (6%-52%), já que é considerado um marcador antropológico de ancestrais mongóis; no entanto, a incidência desse antígeno tem aumentado dentre outras populações, como em caucasianos e afrodescendentes, e detectado em doadores de sangue, o que pode resultar em aloimunização de pacientes e dificultando o seu manejo terapêutico. Em contrapartida, a frequência do antígeno Dib em todas as populações é extremamente alta (>99,99%) e encontrar o raro fenótipo Di (a+b-) é ainda mais laborioso do que a busca pelo antígeno Diª. Sabe-se ainda muito pouco sobre a frequência dos antígenos Wrª e Wrb nas diferentes populações, mas estimase que a prevalência seja de 0,01% e >99,99% respectivamente. Foram utilizadas 410 amostras de doadores de sangue e 230 amostras de pacientes para genotipagem em qPCR utilizando pool de DNA para detecção dos alelos DI*01, DI*02, DI*02.03 e DI*02.04. A amplificação individualizada foi realizada quando a reação com pool demonstrou a amplificação de um dos alelos de interesse, DI*01 ou DI*02.03. Procedeu-se também com a clonagem dos alelos após à amplificação com as amostras controle, porém, ocorreu somente a clonagem dos alelos DI*02 e DI*02.03. Os fragmentos clonados apresentaram amplificação excelente e serão utilizados como controle positivo em testes moleculares futuros. Não foi possível a clonagem do DI*01 pelo problema da zigozidade da amostra controle. Houve 100% de concordância entre o resultado da genotipagem e as informações de fenotipagem das amostras controle. O alelo DI*01 ocorreu em 0,6% dos doadores de sangue e 1,7% em afrodescendentes, que corresponde a uma frequência genotípica DI*01/DI*02 de 1,2% e 1,3% respectivamente. Procedeu-se com as análises estatísticas comparativas entre o resultado desta pesquisa e de outras na população brasileira sobre os diferentes genótipos para entender se havia uma diferença estatística considerável. Ainda que a frequência para o genótipo DI*01/DI*02 seja mais baixa em doadores e mais alta em afrodescendentes do que o publicado em outros trabalhos brasileiros, a análise dos dados demonstrou que não havia diferença estatística com a maioria deles. A incidência aumentada do alelo DI*01 na população afrodescendente demonstra o aspecto da miscigenação. Conclui-se que a metodologia proposta funciona e tem aplicabilidade imediata em doadores de sangue e na busca de fenótipos raros. A incidência do alelo para Diª em doadores de sangue está abaixo do que um estudo anterior detectou em Ribeirão Preto (COZAC, 2004), que pode ser explicado pelas diferenças no censo populacional entre os estudos e pela coleta de amostra de universitários (62%). Não foram encontrados os genótipos DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 e DI*02.03/DI*02.04 nas populações estudadas. / This work proposed the development of a molecular methodology by Real Time-PCR (qPCR) using DNA pool for the detection of alleles that encode important antigens of the Diego blood group system. This molecular tool will be useful since the serological reagents for the detection of these antigens are scarce and, when they exist, do not allow a large scale investigation due to the low reliability and high cost. The Diego (DI) system has 22 antigens, the Diª antigen is the most important in transfusion practice. They are carried by the Band 3 protein which is the most abundant protein on the erythroid surface, about 106 copies. The antigen has a higher prevalence in american indians and asians (6%-52%), since it is considered an anthropological marker of Mongolian ancestors; however, the incidence of this antigen has increased among other populations, such as in caucasians and afrodescendants, and detected in blood donors, which may result in alloimmunization of patients and make difficult their therapeutic management. In contrast, the frequency of Dib antigen in all populations is extremely high (>99.99%) and finding the rare phenotype Di (a+b-) is even more laborious than the search for Diª antigen. The frequency of Wrª and Wrb antigens in different populations is not well-known, but it is estimated that the prevalence is 0.01% and >99.99% respectively. 410 blood donor samples and 230 patient samples were used for genotyping in qPCR using DNA pool to detect the alleles DI*01, DI*01, DI*02.03 and DI*02.04. The single amplification was performed when the pool reaction demonstrated the amplification of one of the alleles of interest, DI*01 or DI*02.03. The alleles were also cloned after the control samples amplification. Only the cloning of the DI*02 and DI*02.03 alleles occurred, they presented excellent amplification and will be used as positive controls in future molecular tests, it was not possible to clone DI*01 by the control sample zygosity though. There was 100% agreement between the genotyping results and the phenotype information of the control samples. The DI*01 allele occurred in 0,6% of the blood donors and 1,7% in afrodescendants, which corresponds to a genotypic frequency DI*01/DI*02 of 1,2% and 1,3% in respectively. The comparative statistical analyzes between this research results and others in the Brazilian population on the different genotypes was performed to understand if there was a considerable statistical difference. Although the frequency of the genotype DI*01/DI*02 is lower in donors and higher in afrodescendants than that published in other Brazilian studies, data analysis showed that there was no statistical difference with most of them. The increased incidence of the DI*01 allele in the afrodescendant population demonstrates the aspect of miscegenation. It is concluded in this work that the proposed methodology works and has immediate applicability in the screening of blood donors and search for rare phenotypes. The incidence of the allele encoding Di ª antigen in blood donors is below than previously detected in Ribeirão Preto (COZAC, 2004), which can be explained by the differences in the population census between the studies and by the sample collection of university students (62%). The genotypes DI*01/DI*01, DI*02.03/DI*02.03 and DI*02.03/DI*02.04 were not found in the populations studied.

A utilização das células progenitoras hematopoéticas (CPH) obtidas do sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) apresenta vários benefícios para o transplante de CPH em comparação às células provenientes de outras fontes. Dentre eles, a maior disponibilidade e a maior imaturidade imunológica das CPH, o que permite certa flexibilidade nos critérios de compatibilidade entre doador e receptor e uma menor taxa de reação do enxerto-versus-hospedeiro. A legislação brasileira e órgãos internacionais exigem a realização de vários testes para garantir a qualidade do produto hemoterápico contendo CPH a ser transplantado. O objetivo deste estudo foi confirmar que o teste para quantificação de CPH com elevada atividade da enzima ALDH1(ALDHbr) pode ser considerado um teste de adequado ou seja, é capaz de predizer quais produtos tem melhor capacidade de repopular a medula óssea do recipiente após o transplante. Para isso, foram utilizadas 40 unidades de SCUP coletadas e processadas pelo Banco de Sangue de Cordão Umbilical e Placentário do Cetebio / Fundação Hemominas. As unidades foram processadas por método automatizado e amostras do creme leucocitário (buffy coat) foram coletadas para a realização da quantificação de células ALDHbr, quantificação de células CD34+, ensaio clonogênico (CFU), hemograma e cálculo do total de células nucleadas (TCN). A citometria de fluxo foi utilizada para a quantificação das CPH ALDHbr e CD34+ e das subpopulações CD45dim e CD38+. Outras informações como idade materna, idade gestacional e sexo do recém-nascido também foram coletadas para descrição das unidades. Para verificar a viabilidade da utilização do teste de ALDH pelos BSCUP foi realizado o levantamento do seu custo. A capacidade funcional das CPH em proliferar e se diferenciar em tecido hematopoético foi avaliada por meio do ensaio clonogênico. Detectou-se correlação entre a quantidade de células ALDHbr e o número de colônias no ensaio clonogênico (p<0,001), entre o número de células ALDHbr e de células CD34+ (p=0,001) e entre o número de colônias no ensaio clonogênico e o número de células CD34+ (p<0,001). A imunofenotipagem mostrou que 46,25% das células ALDHbr eram CD45dimCD38+CD34+. Os dados sugerem que a quantificação de células ALDHbr em unidades de SCUP pode ser considerada teste adequado, de baixo custo, de execução simples, rápida e menos dependente do operador em relação ao ensaio clonogênico. / The use of the umbilical cord blood cells presents numberless benefits when compared to the cells from different sources. Among them, the ease of availability, the bigger immunological immaturity, which allows some flexibility in the compatibility between donor and receptor and less induction of reaction of graft-versus-host. The Brazilian legislation and international organizations demand the practice of various tests to guarantee the quality of the product to be transplanted. The aim of this research was to confirm that the test used to quantify ALDHbr cells can be considered a power test, meaning that it tests the ability to repopulate the bone marrow after transplant. For this study, it has been used 40 units of SCUP collected and processed by the Cetebio Umbilical Cord Blood Bank - Fundação Hemominas. The units were processed by the automatized method and the samples of the final product (buffy coat) were collected for the quantification of ALDHbr cells, quantification of CD34+ cells, clonogenic essay (CFU), hemogram and the total number of nucleated cells (TNC). It was used the flow cytometry to perform ALDH and CD34+ tests. Besides that, it was also performed the association of antibodies anti-CD34, anti-CD45 and anti-CD38 for the immunophenotyping of the units. Other information such as maternal age, fertilization age and the newborn gender were also collected for description of the units. In order to verify the viability of the use of the ALDH test by BSCUP its costs were calculated, as well as of the clonogenic essay. The results showed a significant correlation between ALDHbr cells and the clonogenic essay (p<0.001), between ALDHbr and CD34+ cells (p=0,001) and between the clonogenic essay and the quantification of CD34+ cells (p<0,001). The immunophenotyping revealed that 46,25% of ALDHbr cells were CD45dimCD38+CD34+. The data indicated that the quantification of ALDHbr cells in the SCUP units can be considered a powerful and low cost procedure, of easier and quicker execution and less operator dependent.

A coleta de sangue de cordão umbilical e placentário (SCUP) é uma atividade delegada ao enfermeiro, abrindo um novo campo de atuação para esse profissional que se configura em um novo processo de trabalho e na inserção de mais um procedimento no contexto da assistência obstétrica. O objetivo deste estudo foi compreender a vivência de enfermeiras no exercício da atividade de coleta de amostras de SCUP para armazenamento de células progenitoras hematopoiéticas. Trata-se de um estudo descritivo com abordagem metodológica qualitativa. Os referenciais teórico e metodológico adotados neste estudo foram o Interacionismo Simbólico e a Teoria Fundamentada nos Dados. Participaram do estudo nove enfermeiras que atuam na atividade de coleta de SCUP para bancos de sangue de privados e públicos. Os dados foram obtidos por meio de entrevistas que foram gravadas e transcritas. A experiência da enfermeira que exerce a atividade de coleta de SCUP é compreendida pelas categorias: ACEITANDO A PROPOSTA DE TRABALHO, TENDO ATRIBUIÇÕES A CUMPRIR, PREPARANDO-SE PARA PROCEDER A COLETA DE SCUP, ENCONTRANDO CONDIÇÕES FAVORÁVEIS PARA REALIZAR A COLETA DE SCUP, UTILIZANDO ESTRATÉGIAS PARA GARANTIR A COLETA DE SCUP, ENCONTRANDO CONDIÇÕES DESFAVORÁVEIS PARA REALIZAR A COLETA DE SCUP, PROCEDENDO À COLETA DE SCUP, CONCLUINDO A COLETA DE SCUP e AVALIANDO O TRABALHO REALIZADO. Trabalhar como um profissional tendo de se inserir em um contexto desconhecido com profissionais que atuam em equipe nas diversas maternidades, coloca a enfermeira coletadora frente a situações que exigem rápida adaptação para que realize a coleta de SCUP, atendendo todas as recomendações exigidas para a coleta desse material. Um dos aspectos evidenciados e merecedor de destaque é o fato da enfermeira coletadora deparar-se com dificuldades referentes ao relacionamento com a equipe que presta assistência obstétrica; esta necessita compreender e incorporar em seu processo de trabalho no contexto da assistência ao parto que a enfermeira coletadora de SCUP presta serviço ao BSCUP público ou privado. Apesar das dificuldades relatadas pelas enfermeiras coletadoras no desenvolvimento de sua atividade, percebe-se que elas se encontram motivadas a continuar atuando nesse novo campo, seja pela remuneração, seja pela percepção de estar realizando uma atividade que beneficiará o tratamento de doenças. Vale ressaltar que este estudo poderá ajudar aos profissionais envolvidos no contexto do parto e nascimento a entenderem a atividade de coleta e a compreenderem que a equipe multiprofissional deve atuar em prol de um objetivo comum, além de serem informados a respeito do potencial que as células-tronco vêm mostrando no tratamento de doenças hematológicas / The umbilical cord blood (UCB) collection is an activity delegated to the nurse, opening a new field of action for this professional who is set on a new process of work and the insertion of a further procedure in the context of obstetrical care. The objective of this study was to understand the experience of nurses in the exercise of the activity of collecting samples of UCB for storage hematopoietic progenitor cells. This is a descriptive study with qualitative approach. The benchmarks theoretical and methodological used in this study were the Interacionism Symbolic and Grounded Theory. Were involved in the study nine nurses who serve in the activity of UCB collection for blood banks, on private and public institutions. The data were obtained through interviews that were recorded and transcribed. The experience of the nurse who carries out the activity of UCB collection is understood by the categories: ACCEPTING THE WORK PROPOSAL, HAVING TASKS TO DELIVER, PREPARING TO PROCEDER THE UCB COLLECTION, FACING FAVOURABLE CONDITIONS TO PROCEDURE THE UCB COLLECTION, USING STRATEGIES TO ASSURE THE UCB COLLECTION, FACING UNFAVOURABLE CONDITIONS TO PROCEDURE THE UCB COLLECTION, DOING THE UCB COLLECTION PROCEDURE, FINALIZING THE UCB COLLECTION PROCEDURE and UNALIZING THE WORK CARRIED. Working as a professional who needs to take part into an unknown context with other professionals who works together in various maternity, puts the nurse through situations that require quick adaptation to develop the UCB collection, attending all the recommendations required for the material collection. One of the aspects highlighted and worthy of note is the fact the nurse encounter themselves with difficulties relating to the relationship with the team that provides obstetrical care, which needs to understand and incorporate in the process of work in the context of assistance for delivery that the nurse provides service to coord bank. Despite the difficulties reported by nurses who develop this activity, is known that they are motivated to continue working in this new field, by the remuneration or by the perception of performing an activity that will benefit the treatment of diseases. This study may help the professionals involved in the obstetrical care to understand the activity of UCB collection and that the multiprofessional team should work towards a common goal, besides being informed about the potential that stem cells come showing in the treatment of hematological diseases

O maior consumo de concentrados de hemácias está relacionado a pacientes que enfrentam procedimentos cirúrgicos. A solicitação de reserva de concentrados de hemácias para cirurgia em quantidades muito além do necessário sobrecarrega a Agência Transfusional, configura desperdício de recursos humanos, danos ao erário e prejuízo ao paciente, haja vista que muitos hemocomponentes são reservados para cirurgias, mas poucos são utilizados. A dificuldade no transporte e armazenamento dos hemocomponentes em condições adequadas fora da Agência Transfusional é fato que agrava essa situação e aumenta o desperdício, pois muitos hemocomponentes são solicitados, não são utilizados e retornam ao Serviço de Hemoterapia sem condições de serem reintegrados ao estoque. Tendo em vista que o Hospital de Base do Distrito Federal é a unidade hospitalar com o maior quantitativo em solicitação de reservas de concentrados de hemácias, e por ser recomendável que cada Serviço de Hemoterapia desenvolva seu protocolo específico e personalizado, o objetivo desse estudo é criar um manual de reserva de concentrados de hemácias para procedimentos invasivos, com o quantitativo de hemocomponentes a serem reservados para cada tipo de cirurgia, visando promover o uso racional do sangue no referido hospital. Para isso foi realizado um levantamento dos dados de cirurgias realizadas no Hospital de Base do Distrito Federal nos meses de fevereiro a julho de 2015. Em cada cirurgia foi analisado se houve solicitação e utilização de reserva de hemocomponentes. Com os dados obtidos foi calculado o índice de pacientes transfundidos para cada tipo de cirurgia, sendo confeccionado o manual, que consiste em um quadro com a conduta hemoterápica a ser adotada em cada tipo de cirurgia, se nenhuma, ou realização de tipagem e pesquisa de anticorpos irregulares, ou realização de prova de compatibilidade e reserva de concentrado de hemácias. Foi calculada a quantia aproximada de recursos com insumos que seria economizada caso fosse adotada a conduta sugerida no ano estudado. Para que o manual seja efetivamente aplicado tanto no momento de realizar a solicitação da reserva quanto no momento de preparar a reserva, deve haver uma sistemática de implantação do manual no ambiente hospitalar, com orientações quanto ao correto preenchimento do tipo de cirurgia no mapa cirúrgico e na requisição de reserva ao Banco de sangue. É importante a reavaliação periódica e comparação das solicitações de reservas de concentrados de hemácias para cirurgias eletivas com o cenário do ano anterior. O sucesso na implementação deste manual depende da compreensão e colaboração de uma equipe multidisciplinar de cirurgiões, anestesistas e colaboradores da Agência Transfusional. / Optimizing blood ordering and transfusion has been largely discussed because of patient\'s safety and money constraints. The highest use of red blood cells in a hospital is related to surgical procedures. The preoperative blood order in quantities much higher than necessary, overloads the Blood bank, which configures wasted human resources, wasted public resources and can cause injury to the patient. In most hospitals many blood components are reserved for surgeries, but few are used. The difficulty in transporting and storing the blood components in suitable conditions outside the Blood bank aggravates this situation and increases the costs. Many blood components are requested but not used and return to the blood transfusion service without conditions to be reintegrated into the stock. Considering that Hospital de Base of the Federal District Brazil is the one with the highest quantity of preoperative crossmatching orders in our state, the purpose of this study was to create a maximum blood ordering schedule (MBOS) for elective surgeries. MBOS has been established since 1977 and should be based on recommendation that each hospital may develop for its specific needs. This MBOS should recommend the maximum packed red blood cell quantity to be reserved for each type of surgery, aiming to promote the rational use of blood in the hospitals. For that, a survey of the data of surgeries performed at the Hospital de Base was carried out from February to July 2015. For each surgery, we analyzed if there was a request and use of a packed red blood cell. With the data obtained, the index of patients transfused for each type of surgery was calculated, and the manual was elaborated, consisting of a chart with hemotherapy decision to be adopted in each type of surgery. The manual included 3 types of recommendations for blood bank staff: none, type and screen only, or crossmatch units of packed red blood cells. The approximate amount of resources that would be saved if the suggested strategy were adopted in 2015 were also calculated. The idea is to have a systematic implementation of the manual in the hospital considering the moment of ordering blood products and the moment of adopting the strategy proposed at the blood bank. Some improvements are needed such as guidelines with suggestions including the complete and accurate filling of the surgical map (exact type of surgery) and implementation of a better blood ordering system with more information about patients and surgeries. This kind of manual most be reviewed periodically since surgical procedures can change over time with new techniques been included in the therapeutic strategies. The success in implementing this manual depends on the consent and collaboration of a multidisciplinary team including surgeons, anesthesiologists, and blood bank staff.