Submitted by Regina Correa (rehecorrea@gmail.com) on 2016-09-19T20:45:09Z No. of bitstreams: 1 DissDESS.pdf: 3515899 bytes, checksum: 79693b6b1e1d324fada28f6444eec538 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-23T14:08:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissDESS.pdf: 3515899 bytes, checksum: 79693b6b1e1d324fada28f6444eec538 (MD5) / Approved for entry into archive by Ronildo Prado (ronisp@ufscar.br) on 2016-09-23T14:08:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissDESS.pdf: 3515899 bytes, checksum: 79693b6b1e1d324fada28f6444eec538 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T14:19:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissDESS.pdf: 3515899 bytes, checksum: 79693b6b1e1d324fada28f6444eec538 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / This work describes the synthesis and characterization of complexes cis-[Ru (phen)2(L)2]2+, where phen = 1,10-phenanthroline; L = 3,4-diaminopyridine and 4-aminopyridine, as well results for in vitro AD diagnosis and treatment. The complexes are soluble and stable in aqueous solution, display absorption (max = 480 nm;  = 9500 mol-1 L cm-1) and emission (em = 650 nm;  = 129 ns, 1.3 ns) in the region visible, and Stokes shift about 5000 cm-1. The luminescence of the complexes was incorporated into the cytoplasm of Neuro 2a cells, and showed no apparent damage of cell membrane integrity, morphology, and cytoxicity (IC50 >> 50 M). The inhibitory activity of complexes was evaluated for human recombinant acetylcholinesterase (hAChE) and butyrylcholinesterase from human serum (hBuChE) using the spectrophotometric method proposed by Ellman. The complexes are 4-fold more potent to hAChE than hBuChE, and the Lineweaver-Burk analysis indicated a reversible and mixed-type inhibition for both complexes. The antioxidant capacity of complexes was evaluated from the analysis of hydroxyl radical scavenging, and using the stable radicals 2,2- diphenil-1-picrylhydrazyl (DPPH•) and the 2,2-azinobis-3ethylbenzothiazoline- 6-sulphonate (ABTS•+). The complex cis-[Ru(phen)2(3,4-Apy)2]2+ showed a great antioxidant ability against the tested radicals. We used the luminescence of complexes to monitor in real time the self-aggregation of A with the FLIM technique. Under the same experimental conditions, the complexes bind to A1- 40 and to central hydrophobic core A15-21, but not to A22-35, that lacks the apolar Val18 and Phe20 residues, this indicates that the complexes can recognize and align specific sites of the A peptide. / Este trabalho descreve a síntese e caracterização dos complexos cis- [Ru(phen)2(L)2]2+, em que phen = 1,10-fenantrolina; L= 3,4-diaminopiridina e 4- aminopiridina, assim como resultados in vitro para o diagnóstico e tratamento da DA. Os complexos são estáveis e solúveis em solução aquosa, absorvem (máx = 480 nm,  = 9500 mol-1 L cm-1) e emitem ( em = 650 nm,  = 129 ns; 1,3 ns) na região do visível, e apresentam deslocamento de Stokes na ordem de 5000 cm-1. A luminescência dos complexos foi incorporada no citoplasma de células Neuro 2a, e não apresentaram danos aparentes a integridade da membrana celular, a morfologia e citotoxicidade (IC50 >> 50 M). A atividade inibitória dos complexos foi avaliada para as enzimas acetilcolinesterase recombinante humana (hAChE) e butirilcolinesterase de soro humano (BuChE) empregando o método espectrofotométrico proposto por Ellman. Os complexos são quatro vezes mais potentes na inibição da enzima AChE do que da BuChE, e a análise de Lineweaver-Burk indicou uma inibição reversível e do tipo mista para os dois complexos. A capacidade antioxidante dos complexos foi investigada a partir da análise do sequestro do radical hidroxila, e também empregando os modelos de radicais estáveis DPPH• (2,2-difenil-1picril-hidrazila) e ABTS•+ (2,2'-azinobis- [3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid]). O complexo cis-[Ru(phen)2(3,4- Apy)2]2+ apresentou boa habilidade antioxidante frente aos radicais testados. A luminescência dos complexos foi utilizada para monitorar em tempo real a agregação do A1-40 com o uso da técnica FLIM. Sob as mesmas condições experimentais, os complexos se ligam ao A1-40 e ao centro hidrofóbico A15-21, mas não ao A22-35, no qual os resíduos apolares Val18 e Phe20 estão ausentes, o que indica que os complexos podem reconhecer e alinhar locais específicos do peptídeo A. / Processo n° 2014/07935-8