Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:03:39Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MaianaDaCostaVieira.pdf: 1165024 bytes, checksum: 10e6a641296143d116c43c04e9471744 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:03:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_MaianaDaCostaVieira.pdf: 1165024 bytes, checksum: 10e6a641296143d116c43c04e9471744 (MD5) Previous issue date: 2014-03-28 / Nanotechnology in recent years has found many applications in different areas, one of them being the food industry. The Salvia hispanica L., or chia, has been studied mainly due to the quality of its oil, which is composed predominantly by polyunsaturated fatty acids, important for the prevention or amelioration of several metabolic disorders of the metabolic syndrome. Due to its polyunsaturated structure, the fatty acids are highly prone to oxidation, leading to undesirable flavors and odors in the enrichment of food. Milk proteins have important functional properties, including their ability to bind to hydrophobic molecules and, to some extent, retard the oxidation, which allows them to serve as excellent materials for encapsulation. To improve the stability of chia oil and maintain the nutritional value in food products as well as to improve the sensory characteristics of food (color, flavor, odor and texture), the aim of this study was to develop a cereal bar containing nanocapsules of casein chia seed oil. The nanocapsules were prepared using interfacial deposition of casein in a solution of Milli-Q ® water. The chia oil was obtained commercially (Sap Brazius ®) and used at a concentration of 0.3%. The oil was dissolved in ethanol and added to the casein solution under agitation at 40° C for 2 hours. The samples were obtained in triplicate and left at room temperature at 40 °C and 4 °C for 90 days. After the storage period, the samples were analyzed at 30, 60, and 90 days, characterized by determining the pH, particle diameter, polydispersity index (PI) and zeta potential. The samples left at room temperature and 40 °C presented precipitation of the suspension after 30 days, not remaining stable. However, the samples left at 4 °C had an initial pH of 6.63 ± 0.06, particle diameter 213 ± 57 nm 22.4 , PI 0.27 ± 0.15 and zeta potential of - 35.9 ± 4.45 mV. After 90 days, we observed a pH of 6.53 ± 0.06, a particle diameter of 215.68 ± 24 nm, PI 0.15 ± 0.055, and zeta potential of -33.2 ± 6.45 mV. The encapsulation efficiency was 86.53 % ± 4.73, showing to be a good method to nano-encapsulate oils and prevent their oxidation. Five cereal bars have been developed (without oil , with 5% chia oil, and 1 % , 5 % and 10 % suspension of nanocapsules, respectively) and we evaluated the chemical composition (moisture , protein, fat , crude fiber , ash and carbohydrates ) and sensory analysis of the cereal bars developed . The total energy value was 361.9 ± 18.4 kcal / 100g , 14.3 ± 1.3 % moisture , 7.2 ± 0.46 % protein , 9.7 ± 2.54 % lipid , 6.0% ± 2.9 % fiber , 1.3 % ash ± 0.14 and 61.6 ± 2.9 % carbohydrate. All cereal bars had an acceptability index greater than 70 % for the different attributes (color, odor, flavor and texture), proving to be satisfactory, with good potential for consumption, having a value of approximately R$ 2.50, which would be compatible with the market. / A nanotecnologia nos últimos anos tem encontrado inúmeras aplicações em diferentes áreas, sendo uma delas a indústria de alimentos. A Salvia hispanica L. ou chia vem sendo estudada principalmente devido à sua qualidade do óleo, onde os principais constituintes são os ácidos graxos poli-insaturados, importantes para a prevenção ou melhoria de diversos distúrbios metabólicos da síndrome metabólica. Devido à sua estrutura poli-insaturada, os ácidos graxos são altamente propensos à oxidação levando a indesejáveis sabores e odores no enriquecimento de produtos alimentares. As proteínas do leite possuem importantes propriedades funcionais, incluindo a sua capacidade para ligarem-se as moléculas hidrofóbicas e de certa forma retardar a oxidação, o que lhes permite servir como materiais excelentes para o encapsulamento. Para melhorar a estabilidade do óleo de chia e manter o valor nutricional em produtos alimentares, bem como melhorar as características sensoriais dos alimentos (cor, sabor, odor e textura), o objetivo deste trabalho foi desenvolver uma barra de cereal contendo nanocápsulas de caseína com óleo de semente chia. As nanocápsulas foram preparadas por deposição interfacial da caseína em uma solução de água Milli-Q®. O óleo de chia foi obtido comercialmente (Seiva Brazius®) e utilizado na concentração de 0,3%. O óleo foi dissolvido em etanol e adicionado à solução da caseína em agitação contínua a 40 ºC, durante 2 horas. As amostras foram realizadas em triplicatas e deixadas em temperatura ambiente, a 40 ºC e a 4 ºC durante 90 dias. Após o período de armazenamento as amostra foram analizadas em 30, 60 e 90 dias, caracterizadas através da determinação do pH, diâmetro das partículas, índice de polidispersão (IP) e potencial zeta. As amostras deixadas em temperatura ambiente e a 40 ºC após 30 dias houve precipitação da suspensão, não permanecendo estável. Já as amostras deixadas a 4ºC apresentou um pH inicial de 6,63 ± 0,06, diâmetro de partículas de 213, 57 ± 22,4 nm, IP de 0,27 ± 0,15 e potencial zeta de - 35,9 ± 4,45 mV. Após 90 dias pH de 6,53 ± 0,06, diâmetro de patículas de 215,68 ± 24 nm, IP de 0,15 ± 0,055 e potencial zeta de -33,2 ± 6,45 mV. A eficiência de encapsulação foi de 86,53% ± 4,73, se mostrando um bom método para nanoencapsular óleos e prevenir a oxidação dos mesmos Foram desenvolvidas cinco barras de cereias (sem oléo, com 5% de óleo de chia, e com 1%, 5% e 10% com suspensão de nanocápsulas respectivamente) e avaliou-se a composição química (umidade, proteínas, lipídios, fibra bruta, cinzas e carboidratos) e análise sensorial das barras de cereais desenvolvidas. O valor energético total foi de 361,9 ± 18,4 Kcal / 100g, 14,3 ± 1,3% de umidade, 7,2 ± 0,46% de proteínas, 9,7 ± 2,54% de lipídios, 6,0% ± 2,9% de fibras, 1,3 ± 0,14% de cinzas e 61,6 ± 2,9% de carboidratos. Todas as barras de cereais tiveram um índice de aceitabilidade maior que 70% para os diferentes atributos (cor, odor, sabor e textura), se mostrando satisfatório, tendo um bom potencial para consumo, tendo um valor aproximado de R$ 2,50, o que seria compatível com o mercado.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:25:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_JulioHenriqueHartmann.pdf: 2243165 bytes, checksum: dd94af85066e93f95365876d2a3c7e82 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_JulioHenriqueHartmann.pdf: 2243165 bytes, checksum: dd94af85066e93f95365876d2a3c7e82 (MD5) Previous issue date: 2014-11-28 / In this work we examined theoretically via computer simulation of first principles, the interaction of graphene with the molecules of resveratrol and quercetin. To do this, use the Density Functional Theory and the pseudopotential method as implemented in the SIESTA computer code. Resveratrol is an antioxidant drug and several studies have highlighted and proven the benefits of resveratrol health. This has been shown flavonoid chemopreventive, antioxidant, antiplatelet, antifungal, anti-inflammatory, cardioprotective, among others. Quercetin is the main flavonoid present in the human diet and its therapeutic properties have been studied in recent decades, highlighting the potential antioxidant, anticarcinogenic and its protective effects on renal, cardiovascular and hepatic systems, and also has antimicrobial activity. However, these two drugs are very unstable. In this regard, the main motivation is to use graphene with these two drug molecules to overcome the instability of the same, because of the properties of graphene Its primary is exactly be electrochemically stable. Our results show that the most stable configuration for the binding energy of quercetin with graphene was 0.93 eV and resveratrol value found for the binding energy was 0.53 eV indicating the occurrence of weak interaction through physical adsorption. Analyzing the band structure of the interacting systems, we found that no significant changes occur in the electronic properties compared to pure graphene. The stability of the molecules was improved due to charge transfer and the decrease of the total energy of the molecules. / Neste trabalho analisamos, teoricamente, via simulação computacional de primeiros princípios, a interação do grafeno com as moléculas de resveratrol e quercetina. Para isso, utilizamos a Teoria do Funcional da Densidade e o método de pseudopotenciais conforme implementados no código computacional SIESTA. O resveratrol é um fármaco antioxidante e vários estudos têm destacado e comprovado os benefícios do resveratrol à saúde. Este flavonóide tem demonstrado propriedades quimiopreventivas, antioxidantes, antiplaquetárias, antifúngicas, anti-inflamatórias, cardioprotetoras, entre outras. A quercetina é o principal flavonóide presente na dieta humana e suas propriedades terapêuticas têm sido estudadas nas últimas décadas, destacando-se o potencial antioxidante, anticarcinogênico e seus efeitos protetores aos sistemas renal, cardiovascular e hepático, sendo que possui também atividade antimicrobiana. Entretanto, estes dois fármacos são bastante instáveis. Neste sentido, a principal motivação do trabalho é utilizar o grafeno com estas duas moléculas de fármacos para suprir a instabilidade das mesmas, pois uma das propriedades precípuas do grafeno é justamente ser eletroquimicamente estável. Nossos resultados mostram que para as configurações mais estáveis, a energia de ligação da quercetina com o grafeno foi de 0,93 eV e para o resveratrol o valor encontrado para a energia de ligação foi de 0,53 eV indicando a ocorrência de interação fraca por meio de adsorção física. Analisando a estrutura de bandas dos sistemas interagentes, observamos que não ocorrem alterações significativas nas propriedades eletrônicas quando comparadas com o grafeno puro. Em relação à estabilidade das moléculas houve uma melhora devido à transferência de carga, à diminuição da energia total das moléculas e ao fato de que não houve alteração significativa na geometria dos sistemas.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:32:52Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_GuilhermeMachadoDoCarmo.pdf: 2147674 bytes, checksum: 6db50f6c5cba00b3abea6c659b4a8c51 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_GuilhermeMachadoDoCarmo.pdf: 2147674 bytes, checksum: 6db50f6c5cba00b3abea6c659b4a8c51 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / This study aimed to verify the stability and toxicological profile in Wistar rats of nanocapsules containing mangiferin (NCM). Three batches of NCM were produced and stored at three different temperatures (room temperature, 2 to 8 °C and 40 °C). Particle size, zeta potential, drug content and pH were analyzed (at 0, 15, 30, 60 days) in order to evaluate the stability. Regarding the toxicological profile, a subchronic treatment of 24 days was applied. Two administration routes (orally and intraperitoneally) were evaluated. The animals were divided into 5 groups (n=8). After the period of 24 days, the animals were killed, the blood was collected for hematological and biochemical analysis, the organs were removed for histological analysis. After the storage, it could be observed that NCM stored in room temperature and 2 - 8 °C remained with their original particle size, zeta potential, polydispersity index and pH for 60 days. NCM stored at 40 °C, it could be observed a significantly increase in the particle size after 15 days, however zeta power and polydispersity index remained unchanged. The hematological analysis showed a significant increase (p<0.001) in total leukocytes in the groups white nanocapsules (BNCs) and NCM, and a significant decrease (p<0.01) in hemoglobin concentration and hematocrit in the group NCM after the intraperitoneal administrations. The biochemical analysis showed a significant increase (p<0.001) in the serum levels of urea and a significant decrease (p<0.001) in the serum levels of uric acid in the groups BNCs and NCM after the intraperitoneal administration. The histological analysis showed that only the group BNCs presented an inflammatory infiltrate of lymphocytes in the liver. It was also observed an inflammatory process in the abdominal cavity of the groups BNCs and NCM, after intraperitoneal administration. It was not observed significant changes in hematological, biochemical and histological analysis after the oral administration. In conclusion, the treatment of NCM for oral route did not cause toxicity according to the evaluated parameters and was considered safe for the use during 24 day period. However, the intraperitoneal route was not appropriate for administrating Eudragit nanocapsules. / O objetivo deste estudo foi realizar a estabilidade e o perfil toxicológico em ratos Wistar de nanocápsulas com mangiferina (NCM). Foram produzidos três lotes de NCM e armazenado em temperaturas distintas (temperatura de 25 °C, temperatura de 2 a 8 °C e temperatura de 40 °C), o tamanho de partícula, índice de polidispersão, potencia zeta, teor do fármaco e o pH foram analisados (0, 15, 30, 60 dias) para a avaliação da estabilidade. Para avaliar a o perfil toxicológico foi realizado um tratamento subcrônico de 24 dias. Para isto foi realizado o tratamento por duas vias de administração (via oral e via intraperitoneal), os quais foram divididos em 5 grupos com n=8. Após o período de 24 dias os animais foram mortos por decapitação, o sangue foi recolhido para as análises hematológicas e bioquímicas, os órgãos foram retirados para as analises histológicas. Após a realização da estabilidade foi observado que NCM armazenadas em temperatura de 25 °C e em temperatura de 2 a 8 °C mantiveram seus diâmetros de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta e pH ao longo do período analisado. Entretanto, NCM armazenadas em temperatura de 40 °C demonstraram um aumento significativo do tamanho de partícula após 15 dias a sua produção e mantiveram inalterados o índice de polidispersão, o potencial zeta e o pH. As análises hematológicas demonstraram um aumento significativo (p<0,001) nos leucócitos totais nos grupos Branco Nanocápsulas (BNCs) e NCM, e uma redução significante (p<0,01) na concentração de hemoglobina e no hematócrito no grupo NCM após o tratamento intraperitoneal. Nas análises bioquímicas foi observado um aumento significativo (p<0,001) dos níveis séricos de ureia, uma redução (p<0,001) dos níveis plasmáticos de ácido úrico nos grupos BNCs e NCM após o tratamento intraperitoneal. As análises histológicas demonstraram que apenas o fígado do grupo BNCs foi constatado infiltrado inflamatório de linfócitos aleatório leve no tratamento oral e que na parede abdominal dos grupos BNCs e NCM foi verificado um processo inflamatório após o tratamento intraperitoneal. No entanto não foram observadas diferenças significativas nas análises hematológicas, bioquímicas e histológicas após a administração oral. No entanto, a via intraperitoneal não é apropriada para administração de nanocápsulas com Eudragit.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:38:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CatianeBisogninAlves.pdf: 1685484 bytes, checksum: f55dbdb3d23dcf00e605bf4bcddc7bb7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:38:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_CatianeBisogninAlves.pdf: 1685484 bytes, checksum: f55dbdb3d23dcf00e605bf4bcddc7bb7 (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Statins are cholesterol-lowering agents due to the inhibition of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A (HMG-CoA) reductase. Recent studies have shown pleiotropic effects for statins, such as anti-epileptic effect in rodents. Quinolinic acid (QA) is an endogenous glutamate analog that may be involved in the etiology of epilepsy and is related to disturbances on glutamate release and uptake. The nanoparticles have become an important focus of therapeutic research on brain because they are an especially effective form of drug delivery. Therefore, considering the therapeutic potentials of nanocapsules, in the present study the protective effect of simvastatin in nanoencapsulated (SN) or free form (SF) is evaluated in QA-induced seizures in rats. Male adult Wistar rats (250-300 g) were pretreated orally during 21 days with control formulation (drug-unloaded NCs, CF), SN or SF at 1 mg/kg/day. After pretreatment, rats were infused with 4 μL of 239.2 nmol QA at right lateral brain ventricle and observed for behavioral changes during 10 min. Twenty four hours after seizures, rats were evaluated for locomotion, balance, gait and memory. CF had pH 6.75 ± 0.19, particle diameter of 213.91 ± 19.96 nm, polydispersity index of 0.167 ± 0.05 and zeta-potential values were -16,28 ± 7,90. SN had pH 6.68 ± 0.25, particle diameter of 215.25 ± 30.58 nm, polydispersity index of 0.151 ± 0.07 and zeta potential values were -16.13 ± 8.19 mV. The body weight of rats did not change during the treatment period. The pretreatment com SN or SF did not change the seizures or number of death following QA infusion. In the group CF + QA the number of rats with fall in the Beam Balance task was higher than Naive group, effect prevented by SN and SF. The groups CF + Sal and SF + QA showed a reduced number of rearings in the Open Field test, besides the increased stride length in the Footprint test. Rats infused with SF + QA had impairment of memory in the Avoidance Inhibitory Memory task and SN or SF did not change this damage effect. Altogether, the present results exhibit that simvastatin in nanoencapsulated or free form at the dose 1 mg/kg/day administered for 21 days was not able to protect rats against the behavioral damages induced by QA in rats (with exception on balance parameter). Another strategies need to investigate to better evaluate the effect of nanocapsules against cerebral damage induced by QA. / As estatinas são agentes de redução de colesterol devido à inibição da 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) redutase. Estudos recentes demonstram que as estatinas possuem efeitos pleiotrópicos, como efeito anti-epilético em roedores. Contudo, pequenas quantidades de sinvastatina atravessam a barreira hematoencefálica, sendo necessárias elevadas quantidades do fármaco, gerando os efeitos colaterais indesejáveis, o que poderia ser um problema na sua utilização para o tratamento de doenças que afetam o sistema nervoso central. O ácido quinolínico (AQ) é um análogo endógeno do neurotransmissor glutamato, que está envolvido na etiologia da epilepsia devido a perturbações na liberação e captação de glutamato. As nanopartículas tornaram-se um importante foco de pesquisas terapêuticas para o cérebro, pois é uma forma especialmente eficaz de entrega de fármacos em locais onde há baixa permeabilidade. Portanto, considerando as potencialidades terapêuticas de nanocápsulas, no presente estudo é avaliado o efeito protetor da sinvastatina na forma nanoencapsulada (NS) e livre (SL) no modelo de convulsão induzida por AQ em ratos. Os ratos Wistar adultos machos (250-300 g) foram pré-tratados via oral por 21 dias com nanocápsulas brancas (sem fármaco, NB), NS ou SL, na dose de 1 mg/kg/dia. Após o pré-tratamento, os ratos receberam uma infusão de 4 μL de 239,2 nmol de AQ no ventrículo cerebral lateral direito. Os animais foram observados por 10 minutos para a ocorrência de alterações comportamentais. Vinte e quatro horas após as convulsões, os ratos foram testados quanto locomoção, equilíbrio, marcha e memória. As NB apresentaram um pH 6,75 ± 0,19, diâmetro de partícula de 213,91 ± 19,96 nm, índice de polidispersão de 0,167 ± 0,05 e potencial zeta -16,28 ± 7,90 mV. As NS apresentaram um pH de 6,68 ± 0,25, diâmetro de partícula de 215,25 ± 30,58 nm, índice de polidispersão de 0,151 ± 0,07 e potencial zeta -6,13 ± 8,19mV. Não houve redução do peso corporal dos animais ao longo do tratamento. O pré-tratamento com NS ou SL não causou alteração nas convulsões ou número de mortes ocasionadas pela infusão de AQ. O grupo NB + AQ possui maior número de animais com quedas na tarefa de Equilíbrio na Passarela Elevada, efeito prevenido pelo pré-tratamento com NS ou SL. Os grupos NS + Sal e SL + AQ tiveram uma redução no número de explorações verticais no Campo Aberto, além de apresentarem um aumento no padrão do comprimento da passada no teste de Impressão das Patas. Os ratos tratados com NB + AQ tiveram prejuízo de memória avaliado na tarefa da Esquiva Inibitória, e o pré-tratamento com NS ou SL não preveniu esse efeito. No geral, os resultados demonstram que a sinvastatina nanoencapsulada ou na forma livre na dose de 1 mg/kg/dia administrada por 21 dias não induziu efeitos protetores contra os danos observados após a infusão de AQ (com exceção do equilíbrio). Outras estratégias devem ser exploradas para avaliar o efeito dessas formulações no dano cerebral induzido pelo AQ.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:41:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NathanaJamilleMezzomo.pdf: 2403536 bytes, checksum: a811beb07b8f995e286c3f3f76fad6bd (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:41:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_NathanaJamilleMezzomo.pdf: 2403536 bytes, checksum: a811beb07b8f995e286c3f3f76fad6bd (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Phenylketonuria (PKU) is an inborn error of phenylalanine (Phe) metabolism caused by a deficiency of hepatic phenylalanine hydroxylase enzyme (EC 1.14.16.1 - PAH), which converts Phe tyrosine (Tyr), resulting in hyperphenylalaninemia. Excess Phe compromises the developing brain of affected individuals. Considering the creatine energy and neuroprotective substance, the aim of use it in liposomal form was to increase its concentration in the brain and evaluate parameters of energy metabolism, oxidative stress and behavioral usually changed by excess Phe in PKU patients or hyperphenylalaninemia (HPA) animals. Also, check whether the administrations of nanoparticles could affect non-PAH rats parameters, thus evaluating a neurotoxic action. The ethanol injection method for production of liposomes containing creatine allowed the formation of nanoscale particles with pH around the saline, with an average size of 236.44 nm, a polydispersity index below 0.3, mean zeta potential of -23.9 mV, encapsulation efficiency of 33.65% and creatine content of 93%. The HPA alter the activity of cytosolic and mitochondrial fractions of creatine kinase (CK) in the cerebral cortex and the hippocampus in the mitochondrial fraction, however, did not affect the activity of pyruvate kinase (PK) and adenilato kinase (AK) the analyzed brain structures. The administration of liposomes containing creatine (LCr) possibly prevented the alterations of cytosolic and mitochondrial CK activity in the cerebral cortex of the HPA group. Induction HPA did not change the oxidative stress parameters evaluated in the brain cortex and hippocampus. However, administration of LCr in animals non-HPA, increased levels of GSH antioxidant and superoxide dismutase activity (SOD) and in contrast, stimulated an increased of dihydrodichlorofluorescein oxidation (DCFH) in cerebral cortex. The blank liposomes (LBr) also increased the reduced glutathione (GSH) content in the cerebral cortex. Associated with these results, one can also check the cerebral impairment of the HPA animals through the reduced brain mass, open field test, tail suspension and elevated zero maze. The administration of LCr the HPA animals can partially prevent changes in enzyme activity, as well as the number of rearings improved open field test and the number of head-dipping of the elevated zero maze test. In short, we believe that the LCr may have crossed the blood-brain barrier, since its effects were differentiated administration of free creatine (Cr), thus preventing changes caused by Phe administration on behavioral tests and enzyme activity energy metabolism in the cortex and hippocampus. / A fenilcetonúria (PKU) é um erro inato do metabolismo do aminoácido fenilalanina (Phe) provocado pela deficiência da enzima hepática fenilalanina hidroxilase (EC 1.14.16.1 - PAH), que converte Phe em tirosina (Tyr), resultando em hiperfenilalaninemia. O excesso de Phe compromete o desenvolvimento cerebral dos indivíduos afetados. Considerando a creatina uma substância energética e neuroprotetora, o objetivo de utilizá-la na forma lipossomal foi o de aumentar sua concentração no cérebro e avaliar parâmetros do metabolismo energético, do estresse oxidativo e comportamentais, normalmente alterados pelo excesso de Phe em pacientes PKU ou em animais com hiperfenilalaninemia (HPA). Além de verificar se as administrações das nanopartículas poderiam afetar os parâmetros de ratos não-HPA, avaliando dessa forma uma ação neurotóxica. O método de injeção de etanol utilizado para a produção dos lipossomas contendo creatina permitiu a formação de partículas nanométricas com pH próximo ao da salina, com tamanho médio de 236,44 nm, índice de polidispersão abaixo de 0,3, potencial zeta médio de -23,9 mV, eficiência de encapsulação de 33,65 % e teor de 93 %. A HPA alterou a atividade das frações citosólica e mitocondrial da creatinacinase (CK) no córtex cerebral e na fração mitocondrial no hipocampo, porém, não afetou a atividade da piruvatoquinase (PK) e adenilatoquinase (AK) nas estruturas cerebrais estudadas. A administração de lipossomas contendo creatina (LCr), possivelmente preveniu as alterações da atividade da CK citosólica e mitocondrial no córtex cerebral dos grupo HPA. A indução a HPA não alterou os parâmetros de estresse oxidativo avaliados no córtex cerebral e hipocampo. No entanto, a administração de LCr nos animais não-HPA, aumentou os níveis do antioxidante glutationa reduzida (GSH) e a atividade da superóxido dismutase (SOD) e em contrapartida, estimularam uma maior oxidação de diclodihidrofluoresceína (DCFH) em córtex cerebral. Os lipossomas brancos (LBr) também elevaram a concentração de GSH no córtex cerebral. Associado a esses resultados, pode-se também verificar o comprometimento cerebral dos animais HPA por meio da redução da massa cerebral, testes de campo aberto, suspensão da cauda e labirinto zero elevado. A administração de LCr nos animais HPA, pode prevenir parcialmente alterações das atividades enzimáticas, assim como melhorou o número de levantamentos do teste de campo aberto e o número de espiadas do teste labirinto zero elevado. Em suma, acreditamos que os LCr possam ter atravessado a barreira sangue-cérebro, uma vez que seus efeitos foram diferenciados da administração da creatina livre (Cr), conseguindo prevenir alterações causadas pela administração de Phe sobre o testes comportamentais e a atividade de enzimas do metabolismo energético do córtex e hipocampo.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:45:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_BetinaMuller.pdf: 2340597 bytes, checksum: 9b2e7abafe20d9c76ebb8713b0789f07 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:45:32Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_BetinaMuller.pdf: 2340597 bytes, checksum: 9b2e7abafe20d9c76ebb8713b0789f07 (MD5) Previous issue date: 2015-03-23 / Carbon nanotubes (CNT) have unique properties that are of great interest to the biotechnology area. The idea of using CNTs as carriers of drugs, adjuvants for vaccines and biosensors, is attracting great interest from the scientific community. However, the biocompatibility and toxicity in vitro and in vivo of these structures need to be investigated. Thus, the aim of this study was to investigate the cytotoxicity caused by carbon nanotubes multi-walled (MWCNT) in peritoneal macrophages isolated from C57BL/6 mice and the secondary line RAW 264.7. To perform the in vitro test, cultured cells were treated with concentrations of 1 mg/mL and 5mg/mL MWCNT and 1μg/mL of lipopolysaccharide (LPS). The control group of cells with culture medium were cultured in DMEM medium supplemented with 10% fetal bovine serum (FBS) and the negative control at 100 mϻ hydrogen peroxide. The cells remained in treatments for periods of 24 and 48 hours. Then was determined cell viability through the exclusion method using trypan blue, which remained around 70%. After the biochemical cytotoxicity tests were conducted using the release of lactate dehydrogenase (LDH) in the cell supernatant, allowing to note that the concentrations of MWCNT were unable to cause any damage to the cell membrane, as well as any cytotoxic effect. These results confirm the microscopic images, which do not show cell death caused by MWCNT at these concentrations. The citotoxicity caused by MWCNT was evaluated by the measurement of nitric oxide (NO) and the gene expression of TNF-α and IL-1β. In these tests it was revealed that the toxicity was present in cells treated with the secondary line MWCNT, which did not have an increase in NO production and gene expression of cytokines analyzed. / Os nanotubos de carbono (NTC) apresentam propriedades exclusivas que são de grande interesse para a área de biotecnologia. A idéia de se utilizar NTCs como carreadores de fármacos, adjuvantes para vacinas e biosensores, vem despertando grande interesse da comunidade científica. No entanto, a biocompatibilidade e toxicidade in vitro e in vivo dessas estruturas precisam ser investigadas. Com isso, o objetivo desse trabalho foi investigar a citotoxicidade causada pelos nanotubos de carbono de paredes múltipla (NTCPM) em macrófagos peritoneais isolados de camundongos C57BL/6, e macrófagos da linhagem secundária RAW 264.7. Para a realização dos testes in vitro, as células tratadas foram cultivadas com as concentrações de 1mg/mL e 5mg/mL de NTCPM, e 1μg/mL de lipopolissacarídeo (LPS). As células do grupo controle com meio de cultura foram cultivadas com meio de cultura DMEM suplementado a 10% de soro bovino fetal (SBF), e o controle negativo com 100 mϻ de peróxido de hidrogênio. As células permaneceram em tratamentos pelos períodos de 24 e 48 horas. Em seguida foi determinado a viabilidade celular, através do método de exclusão pelo azul tripan, a qual permaneceu em torno de 70%. Após foram conduzidos os testes bioquímicos de citotoxicidade através da liberação da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante celular, o que possibilitou observar que as concentrações dos NTCPM utilizadas não foram capazes de causar nenhum dano na membrana celular, assim como nenhum efeito citotóxico. Estes resultados confirmam as imagens microscópicas, as quais não mostram a morte celular causada pelos NTCPM nestas concentrações. A toxicidade causada pelos NTCPM foi avaliada através da dosagem do óxido nítrico (NO) e pela expressão gênica das citocinas TNF-α e IL-1β. Nesses testes foi possível perceber que a citotoxicidade não se fez presente nas células da linhagem secundária tratadas com NTCPM, as quais não tiveram um aumento da produção de NO e na expressão gênica das citocinas analisadas.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T19:56:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LeonardoQuintanaSoaresLopes.pdf: 1473450 bytes, checksum: eb7d00c9d4a740c17c2d7fd0ee98c234 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T19:56:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LeonardoQuintanaSoaresLopes.pdf: 1473450 bytes, checksum: eb7d00c9d4a740c17c2d7fd0ee98c234 (MD5) Previous issue date: 2015-03-20 / The American Foulbrood Disease (AFB) is a fatal larval bee disease. The etiologic agent is the bacteria Paenibacillus larvae, being highly contagious due to the capacity of this microorganism to form spores. The treatment involves incineration of all contaminated materials, leading to high losses. The Glycerol Monolaurate (MLG) is a compound with a known antimicrobial potential, however its use is impaired due to the low solubility in water and the high melting point. In this context, the nanostructuration of some drugs offers advantages like better stability and solubility, increasing effectiveness and reducing toxic effects. The present study aimed to produce, characterize and evaluate the antimicrobial activity, the toxicity in bees and the ecotoxicity of MLG nanoparticles. The nanoparticles produced showed a diameter of 209.9 nm, polidispersion index of 0.044 and zeta potential of -23.4 mV. The study of the stability parameters showed that even after 120 days, the system was stable. The images of transmission electronic microscopy showed the nanometric size and spherical forms. The determination of inhibitory and bactericidal concentration showed that is necessary 142.8 μg/ml of the formulation (MLG nanoparticle) to obtain a bacteriostatic effect and of 285 μg/ml to obtain a bactericidal effect. The assay in bees showed that the free compound has a high toxicity while the nanoparticles showed a low toxic effect, reducing the number of dead bees. When analyzed the ecotoxicity, the springtail test soil results in high toxicity of the free compound, while the nanostructured formulation didn’t influence in mortality either in reproduction of organisms, showing that nanocapsules aren’t toxic to the ecosystem. Concluding, the developed formulation shows positive results in the action to combat AFB beyond not cause damage in bees and in soil, and can be future alternative to the treatment or prevention of AFB. / A American Foulbrood Disease (AFB) é uma doença fatal que acomete as abelhas em seu estado larval. Seu agente etiológico é a bactéria Paenibacillus larvae, sendo altamente contagiosa devido à capacidade de esse microrganismo formar esporos. O tratamento atualmente envolve a incineração de todos os materiais contaminados levando a grandes prejuízos. O monolaurato de glicerol (MLG) é um composto com um conhecido potencial antimicrobiano, entretanto, seu uso é prejudicado devido ao seu baixo grau de solubilidade em água e o seu alto ponto de fusão. Neste contexto, a nanoestruturação de fármacos oferece vantagens como aumento de estabilidade em ambientes adversos, melhora as questões de solubilidade, aumentando a eficácia e reduzindo os efeitos tóxicos. O presente estudo teve como objetivo produzir, caracterizar e avaliar a atividade antimicrobiana, toxicidade em abelhas e ecotoxicidade de nanocápsulas contendo MLG. As nanocápsulas produzidas apresentaram um diâmetro médio de 209,9 nm, índice de polidispersão 0,044 e potencial zeta de -23,4 mV. O estudo de parâmetros de estabilidade mostrou que mesmo passados 120 dias, o sistema se manteve estável. As imagens geradas por microscopia eletrônica de transmissão mostraram o tamanho nanométrico além de formas características esféricas. A determinação da concentração inibitória e bactericida mínima mostrou que são necessários 142,8 μg/ml da formulação (Nanocápsulas de MLG) para se obter um efeito bacteriostático e de 285,7 μg/ml para obtenção de um efeito bactericida. O ensaio nas abelhas mostrou que o composto livre possui uma alta toxicidade, enquanto que as nanocápsulas apresentaram um efeito pouco tóxico, reduzindo o número de abelhas mortas. Quando avaliada a ecotoxicidade, o teste no solo com colêmbolos resultou em uma alta toxicidade do composto livre, enquanto que a formulação nanoestruturada não influenciou na mortalidade nem na reprodução dos organismos, mostrando que as nanocápsulas não são tóxicas para o ecossistema. Concluindo, a formulação desenvolvida apresenta resultados positivos em sua ação no combate da AFB além de não causar dano às abelhas e ao solo, podendo ser uma alternativa futura para o tratamento ou prevenção da AFB.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T20:02:22Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LilianeMedianeiraMayerPossani.pdf: 1773175 bytes, checksum: 0fea418092d5f10f54b9e5790226b20b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:02:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_LilianeMedianeiraMayerPossani.pdf: 1773175 bytes, checksum: 0fea418092d5f10f54b9e5790226b20b (MD5) Previous issue date: 2015-03-26 / Herpes is a condition caused by Herpes Simplex Virus types 1 (HSV-1) and 2 (HSV-2) which largely affects the global population. Both species can be transmitted through direct contact with infected lesions or biological fluids such as saliva and genital fluids. However, asymptomatic carriers can also transmit and excrete virus. Control of herpes is accomplished through the use of antiviral drugs, however, its extensive use has led to the emergence of resistant virus strains, particularly in immunocompromised patients. Because of that the development of an effective vaccine will not only control the disease, but also its etiologic agent. HSV-1 is an enveloped DNA viruses, and in this envelope there are viral glycoproteins that are responsible for the process of entering into the host cell. The mainly glycoproteins are B (gB) glycoprotein D (gD), glycoprotein H (gH) and glycoprotein L (gL). Glycoprotein B is the most studied protein and the reason for that is because its sequence is conserved among all herpesviruses and also is essential for the cell infection process. In this glycoprotein there is a fragment of 8 amino acid residues referred SSIEFARL. It is an immunodominant peptide responsible for inducing a strong T cell response upon infection process. This peptide is poorly immunogenic when adminstered without protection and or adjuvant. Thus, the nanobiotechnology can help for the development of a potent adjuvant to protect SSIEFARL and increase its immunogenicity. For this propouse, the production of previous developed polymeric nanocapsules (NCPs) with aqueous core was otimized and its physical and chemical parameters determined. After otimization, the encapsulation efficiency of SSIEFARL was evaluated and the interaction/compatibility of unloaded NCPs with cell in vitro were also determined. The NCPs presented unimodal distribution, low PDI (0.23±0.03), mean diameter of 267.5±51.6 and zeta potential -29.6±2.2, pH 7.2±0.3. The analyzes showed that 98% (97.7±1.5) of the particles in the sample were in the nanoscale and the a concentration of NCPs 6,07x1010/cm3. In vitro tests showed no cytotoxicity, and unload NCPs and in vivo tested suggest a cell migration to the site of injection and draning to the reagional lymph nodes, suggesting some adjuvant propertie. Taken together, the data suggest that the NCPs can be used in the development of an adjuvant system for the protection of SSIEFARL and development of a vaccine against HSV-1. / A herpes é uma patologia causada pelo Herpes Simplex Vírus dos tipos 1 (HSV-1) e 2 (HSV-2) que afeta grande parte da população mundial. Ambas as espécies podem ser transmitidas através de contato direto com lesões ou fluidos biológicos infectados, como saliva e fluidos genitais. No entanto, portadores assintomáticos também podem excretar e transmitir os vírus. O controle da herpes é realizado através do uso de medicamentos antivirais, porém seu uso extensivo, levou ao aparecimento de linhagens de vírus resistentes, principalmente em pacientes imunocomprometidos. Esse fato torna imprescindível o desenvolvimento de uma vacina que seja eficaz não só no controle da doença, mas também de seu agente etiológico. O HSV-1 é um vírus de DNA envelopado e, nesse envelope estão ancoradas glicoproteínas virais que são responsáveis pelo processo de entrada na célula hospedeira, sendo as principais glicoproteína B (gB), glicoproteína D (gD), glicoproteína H (gH) e glicoproteína L (gL). A gB é um dos principais alvos nas pesquisas por ser uma sequência conservada em todos os herpesvírus e essencial no processo de infecção da célula alvo. Nessa glicoproteína, há um fragmento constituído por 8 resíduos de aminoácidos denominado SSIEFARL. Trata-se de um peptídeo imunodominante responsável por induzir forte resposta de células T no processo de infecção. Porém, esse peptídeo, quando administrado livre, é fracamente imunogênico. Sendo assim, busca-se na nanobiotecnologia, o desenvolvimento de um adjuvante potente para proteger o peptídeo e aumentar sua imunogenicidade. Para isso, nanocápsulas poliméricas (NCPs) de núcleo aquoso previamente desenvolvidas, tiveram sua produção otimizada e seus parâmetros físico-químicos avaliados. Após o estabelecimento das condições ótimas de produção, foram analisados o encapsulamento do SSIEFARL e testes para verificar a interação das NCPs brancas com cultura celular. As NCPs apresentaram distribuição unimodal, baixo PDI (0,23 ± 0,03), diâmetro médio de 267,5±51,6 e potencial zeta -29,6±2,2, com pH 7,2±0,3. As análises mostraram que aproximadamente 98% (97,7±1,5) das partículas presentes na amostra estão na escala nanométrica em uma concentração de 6,07x1010 NCPs/cm3. Os testes in vitro não evidenciaram citotoxicidade, e as NCPs brancas apresentaram capacidade de induzir migração celular ao local da injeção com tendência à drenagem dessas células aos linfonodos, sugerindo bom efeito adjuvante. A partir desses resultados pode-se sugerir que as NCPs podem ser utilizadas no desenvolvimento de um sistema adjuvante para a proteção do SSIEFARL e desenvolvimento de uma vacina contra o HSV-1.

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-16T20:15:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RodrigoGripaMadalosso.pdf: 2302258 bytes, checksum: fa35fdc256607b2346f7635273a0d2c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:15:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_RodrigoGripaMadalosso.pdf: 2302258 bytes, checksum: fa35fdc256607b2346f7635273a0d2c1 (MD5) Previous issue date: 2015-08-07 / The soybeans in Brazil stands out as a major grain grown throughout the country both in the economic and social point of view, as nutritional. However, there are several limiting factors for its production, such as diseases caused by nematodes, primarily the species of the genus Meloidogyne sp. that prevent the production in infested areas. In order to find new alternatives for protection and control of this disease, this study aimed to determine the nematicide activity of Melaleuca alternifolia oil in its pure form and associated with the solid lipid nanocarriers. Appropriate methodologies were employed in 24 well microtiter plates for determination of nematicidal activity in vitro and in vivo. It was found that both the pure essential oil as its form nanostructured showed nematicidal potential in vitro, however, at different times of action. The nematicide action of nanoparticles has also been observed in vivo at different times. All concentrations showed activity and results similar action with the Abamectin, the conventional treatment. In this sense, this paper presents for the first time the action nanoparticles containing M. alternifolia in the treatment / prevention of infections Melodogyne sp .. / A soja se destaca no Brasil como um dos principais grãos cultivados em todo território nacional tanto no ponto de vista econômico e social, quanto nutricional. Entretanto, vários são os fatores limitantes para sua produção, como por exemplo, as doenças causadas por fitonematóides, principalmente, as espécies do gênero Meloidogyne sp. que inviabilizam a produção nas áreas infestadas. A fim de encontrar novas alternativas de proteção e controle desta doença, o presente trabalho teve por objetivo determinar a atividade nematicida do óleo de Melaleuca alternifolia em sua forma pura e associado à nanocarreadores lipídicos sólidos. Empregaram-se metodologias adaptadas em placas de poliestireno de 24 poços para determinação da atividade nematicida in vitro e in vivo. Verificou-se que tanto o óleo essencial puro quanto a sua forma nanoestruturada apresentaram potencial nematicida in vitro, no entanto, em tempos diferentes de ação. A ação nematicida das nanopartículas também foi observada in vivo em diferentes tempos. Todas as concentrações apresentaram atividade e resultados similares de ação com a Abamectina, o tratamento convencional. Neste sentido, o presente trabalho apresenta pela primeira vez a ação de nanopartículas contendo M. alternifolia no tratamento/prevenção de infecções por Melodogyne sp..

Submitted by MARCIA ROVADOSCHI (marciar@unifra.br) on 2018-08-17T11:20:26Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissetacao_ArianeSchneiderColusso.pdf: 1387386 bytes, checksum: ca5b21fd4ec8eb3de7d6668c214ecd67 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-17T11:20:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissetacao_ArianeSchneiderColusso.pdf: 1387386 bytes, checksum: ca5b21fd4ec8eb3de7d6668c214ecd67 (MD5) Previous issue date: 2016-01-08 / The trans-anethole (TA) is an aromatic compound found in large amounts in the essential oil of various plants, for example, fennel, anise. Due to low water solubility, many phytochemicals, such as trans-anethole, are poorly absorbed. The nanoencapsulation provide the possibility of improving the stability of these class of substances, altering pharmacokinetics and biodistribution. This study aimed to produce trans-anethole containing nanocapsules (NCTA), characterizing them by parameters such as: stabilishment of pH, distribution of average particle size, polydispersity, zeta potential, efficiency of encapsulation and spectrophotometry UV-visible (UV-VIS). To evaluate the stability of nanocapsules applying Vieira method (2014); to analyze the toxicity in vitro using the MTT reduction test MTT-formazan, cytogenetic analysis and comet assay. Verify the antioxidant activity in vitro of the nanocapsules produced by TBARS assay and catalase (CAT) and, finally, the reduction test of DPPH. The NCTA indicated pH 4.78, average diameter of 218 nm and average polydispersity index of 0.14, which implies homogeneity in the distribution of particle size of the samples. The average zeta potential of the samples was -28.5 mV, which is a value considered appropriate to prevent aggregation and precipitation of the nanostructures. The validation of the methodology presented satisfactory values for all parameters. The NCTA formulation obtained an excellent TA association rate (Schaffazick et al. 2003), showing stability for 60 days and no cytotoxicity or genotoxicity. The NCTA and the TA did not presented antioxidant activity in the studied concentrations. It was observed that the TA, in their highest concentration, caused increase in CAT activity. There was not lipid peroxidation when used NCTA, in its highest concentration, compared to the control, which indicates greater protection of assets, reducing the possible cell damage. / O trans-anetol (TA) é um composto aromático encontrado em grande quantidade no óleo essencial de várias plantas, por exemplo, erva-doce, anis. Pela baixa solubilidade em água muitos fitoquímicos, como o trans-anetol, são pouco absorvidos, sendo a nanoencapsulação a possibilidade de melhorar a estabilidade destes, alterando a farmacocinética e a biodistribuição. Este estudo teve como objetivo produzir nanocápsulas contendo trans-anetol (NCTA), caracterizá-las através de parâmetros como: determinação de pH, distribuição do tamanho médio de partícula, índice de polidispersão, potencial zeta, eficiência de encapsulação e espectrofotometria de UV-visível (UV-VIS). Avaliar a estabilidade das nanocápsulas conforme o método de Vieira (2014), analisar a toxicidade in vitro por meio de testes de redução do MTT em MTT-formazan, análise citogenética e teste do cometa. Verificar a ação antioxidante in vitro das nanocápsulas produzidas através do ensaio TBARS e catalase (CAT), e teste de redução do radical DPPH. As NCTA apresentaram pH de 4,78, diâmetro médio de 218 nm e índice de polidispersão médio de 0,14, indicando a homogeneidade na distribuição de tamanho de partícula das amostras. O potencial zeta médio das amostras foi de -28,5 mV, valor este considerado adequado para manter o sistema sem agregação e precipitação das nanoestruturas. A validação da metodologia apresentou valores satisfatórios para todos os parâmetros analisados. A formulação de NCTA obteve uma excelente taxa de associação do TA, conforme Schaffazick et al. (2003), demonstrou estabilidade durante 60 dias e não demonstrou citotoxicidade nem genotoxicidade. As NCTA e o TA não apresentaram atividade antioxidante nas concentrações estudadas. Observou-se que o TA, na sua maior concentração testada, causou aumento da atividade da CAT. Não ocorreu peroxidação lipídica quando utilizada NCTA na sua maior concentração, comparado ao controle, indicando maior proteção do ativo, reduzindo os possíveis danos celulares.