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Estudo comparativo do efeito do ultra-som terapêutico de 1MHz com frequência de repetição de pulso a 100 Hz e 16 Hz no reparo de osteotomia por escareação em tíbia de rato / Comparative study of the 1 MHz with pulse frequency repetition of 100 Hz and 16 Hz therapeutic ultrasound effect in rat tibia healing after osteotomy

Douat, Estela Sant'Ana Vieira 20 September 2004 (has links)
O objetivo deste trabalho foi comparar o efeito do ultra-som terapêutico de 1 MHz, nas freqüências de repetição de pulso de 100 Hz e 16 Hz (0,5 W/'CM POT.2' SATA), no processo de reparo de tíbia após osteotomia experimental. Neste trabalho foram utilizados 40 ratos machos albinos Wistar, divididos em 4 grupos experimentais: referência, controle, tratados com ultra-som terapêutico de 100 Hz (UST100) e 16 Hz (UST16). Os animais foram submetidos à fratura cirúrgica por escareação e, após 24 h, iniciou-se o tratamento com ultra-som terapêutico, por 6 dias consecutivos, durante 3 min ao dia. No 7° dia pós-cirúrgico foi realizada coleta de sangue através de punção cardíaca para quantificação dos níveis de fosfatase alcalina, em seguida os animais foram submetidos à eutanásia, a tíbia fraturada foi removida, radiografada e fixada para análise histológica. Para determinar a significância das diferenças observadas foi utilizada análise de variância (ANOVA). Os diâmetros da lesão da tíbia foram significativamente menores nos grupos UST100, UST16, respectivamente, em comparação ao grupo controle. O nível de fosfatase alcalina foi significativamente diferente nos grupos experimentais. A densidade de matriz óssea, fibroblastos, macrófagos, neutrófilos, linfócitos e vasos sangüíneos foram significativamente diferentes entre os grupos, indicando que o tratamento com ultra-som induziu o reparo ósseo. O tratamento com UST acelerou a fase aguda da recuperação óssea, sendo que, o UST com freqüência de repetição de pulso de 100 Hz demonstrou ser mais eficaz / The aim of this work was to compare the 1 MHz with pulse frequency repetition of 100 Hz and 16 Hz therapeutic ultrasound effect (0.5 W/'CM POT.2' SATA) in the repair process of the experimental tibia osteotomy. In this work we used 40 male albino Wistar rats divided into 4 experimental groups: reference; control; 100 Hz (UST100) and 16 Hz (UST16) therapeutic ultrasound-treated. The rats undergone bone surgical fracture and the ultrasound treatment started 24 h after the surgery, the treatment lasted for 6 days, during 3 min a day. The blood was sampled by cardiac punction for alkaline phosphatase level quantification at the 7th day after surgery, than the animals were euthanized, the fractured tibia was removed, analyzed by radiography and fixed for histological analysis. The statistical significance of the analyzed parameters was tested with the ANOVA test. The diameter of the tibia lesion decreased significantly in the UST100 and UST16 groups, respectively, as compared to the control group. The blood alkaline phosphatase level was significantly different among experimental groups. The bone matrix, fibroblasts, macrophages, neutrophils, lymphocytes, and blood vessels densities were significantly different among experimental groups, indicating that the ultrasound treatment induced the bone repair. The UST treatment accelerated the acute phase of bone recovery and UST with pulse repetition frequency of 100 Hz was the most effective treatment
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Avaliação volumétrica de um procedimento de elevação do seio maxilar bilateral, utilizando uma cerâmica bifásica porosa: estudo clínico randomizado com avaliação após 4 meses de cicatrização / Volumetric evaluation of bilateral maxillary sinus augmentation procedure using a biphasic porous ceramic: randomized clinical study with review after 4 months of healing

Machado, Ricardo Quirico Pinheiro 07 October 2014 (has links)
Este trabalho testou a hipótese nula de que a utilização de uma cerâmica bifásica porosa (29-33% poros) (GenPhos, Baumer S.A., Mogi Mirim, Brasil) não tem efeito significativo na perda de volume depois da remodelação óssea 4 meses após a elevação da parede do seio maxilar, em comparação ao osso autógeno. Treze pacientes com altura de osso alveolar entre 1 a 5 mm na região mais estreita entre o assoalho do seio maxilar e a crista alveolar foram inclusos neste estudo clínico randomizado. Em um mesmo indivíduo, a diferença foi o tipo de material utilizado em cada um dos seios maxilares, a saber: cerâmica bifásica porosa (experimental, HA+&#x3B2;-TCP, Baumer S.A.) e osso autógeno. Quatro meses após a cirurgia, numa avaliação tomográfica computadorizada, a perda de volume na remodelação óssea foi mensurada. Os dados foram analisados pelo teste t pareado (p<0.05). A porcentagem de manutenção do volume enxertado foi significativamente maior para o GenPhos poroso (91,9±20,5%) quando comparado ao osso autógeno (69,3±5,1%). Estes resultados indicam que o material avaliado é promissor, devido à alta previsibilidade de manutenção do volume no momento da instalação dos implantes. / This study tested the null hypothesis that the use of a porous biphasic ceramics (29-33% pores) (GenPhos, Baumer S.A., Mogi Mirim, Brazil) has no significant effect on loss of bone remodeling volume after 4 months after the maxillary sinus augmentation, compared to autogenous bone. Thirteen patients with alveolar bone height between 1 - 5 mm at the narrowest region between the maxillary sinus floor and the alveolar crest participated in this randomized clinical trial. In the same individual, the difference was the type of material to be used in each of the maxillary sinuses, namely porous biphasic ceramic (experimental, HA + &#x3B2;-TCP, Baumer S.A) and autogenous bone. Four months after surgery, through a computer tomography evaluation, volume loss in bone remodeling was mesured. Data were analyzed by paired t test (p<0.05). The percentage of maintenance of the graft volume was significantly higher for porous GenPhos (91.9± 20.5%) when compared with autogenous bone (69.3±5.1%) These results indicate that the material evaluated is promising, due to the high predictability of maintanence of volume when the implants are installed.
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Bone Enhancement with BMP-2 for Safe Clinical Translation

Kisiel, Marta January 2013 (has links)
Bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) is considered a promising adjuvant for the treatment of bone regeneration. However, BMP-2 delivery in a conventional collagen scaffold needs a high dose to achieve an effective outcome. Moreover, such dosage may lead to serious side effects. The aim of the following thesis was to find clinically acceptable strategies reducing the required dose of BMP-2 by improving the delivery and optimizing the preclinical testing of the new approaches. In all the studies hyaluronic acid (HA) hydrogels was used as a carrier for BMP-2. The HA hydrogel/BMP-2 construct was modified with bioactive matrix components in order to obtain an effective release of BMP-2 and an enhanced bone formation. The most promising were two strategies. In the first one, BMP-2, precomplexed with the glycosaminoglycans dermatan sulfate or heparin prior to loading it into HA hydrogel, protected and prolonged the delivery of the protein, resulting in twofold larger bone formation in comparison to non-complexed BMP-2. In the second strategy, the fibronectin fragment integrin-binding domain (FN) was covalently incorporated into HA hydrogel. The FN remarkably improved the capacity of the material to support the cells attachment and spreading, providing the formation of twice as much bone in comparison to non-functionalized HA hydrogel/BMP-2. Furthermore, the importance of a proper design of the preclinical study for BMP-2 delivery systems was highlighted. Firstly, proper physicochemical handling of BMP-2 showed the improvement in further in vivo activity.  The use of glass storage vials and an acidic formulation buffer was superior to plastic surfaces and physiological pH. Secondly, while regenerative medicine strategy testing required the use of animal models that matched the research questions related to clinical translation, two new animal models were developed. The subperiosteal mandibular and calvarial models in rats were found to be minimally invasive, convenient and rapid solution for the evaluation of a broad range of approaches including bone augmentation, replacement and regeneration. Both models are primarily relevant for the initial testing of the injectable bone engineering constructs.  Those clinically translatable approaches presented here could prove to be a powerful platform for a wider use of BMP-2 in orthopedic, plastic surgery and regenerative medicine research.
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Runx2-Genetically Engineered Skeletal Myoblasts for Bone Tissue Engineering

Gersbach, Charles Alan 10 July 2006 (has links)
Bone tissue engineering is a promising approach to address the limitations of currently used bone tissue substitutes. However, an optimal cell source for the production of osteoblastic matrix proteins and mineral deposition has yet to be defined. In response to this deficiency, ex vivo gene therapy of easily accessible non-osteogenic cells, such as skeletal myoblasts, has become a prevalent strategy for inducing an osteoblastic phenotype. The majority of these approaches focus on constitutive overexpression of soluble osteogenic growth factors such as bone morphogenetic proteins (BMPs). In order to avoid aberrant effects of unregulated growth factor secretion, this work focuses on delivery of the osteoblastic transcription factor Runx2 as an autocrine osteogenic signal under the control of an inducible expression system. The overall objective of this research was to engineer an inducible cell source for bone tissue engineering that addresses the limitations of current cell-based approaches to orthopedic regeneration. Our central hypothesis was that inducible Runx2 overexpression in skeletal myoblasts would stimulate differentiation into a regulated osteoblastic phenotype. We have demonstrated that Runx2 overexpression stimulates transdifferentiation of primary skeletal myoblasts into a mineralizing osteoblastic phenotype. Furthermore, we have established Runx2-engineered skeletal myoblasts as a potent cell source for bone tissue engineering applications in vitro and in vivo, similar to BMP-2-overexpressing controls. Finally, we exogenously regulated osteoblastic differentiation by myoblasts engineered to express a tetracycline-inducible Runx2 transgene. This conversion into an osteoblastic phenotype was inducible, repressible, recoverable after suppression, and dose-dependent with tetracycline concentration. This work is significant because it addresses cell sourcing limitations of bone tissue engineering, develops controlled and effective gene therapy methods for orthopedic regeneration, and establishes a novel strategy for regulating the magnitude and kinetics of osteoblastic differentiation.
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The role of bone morphogenetic protein 2 in SMA-directed angiogenesis during distraction osteogenesis

Cheng, Thomas Wen-Tao 08 April 2016 (has links)
Bone is one of the few organs capable of regeneration after a substantial injury. As the bone heals itself after trauma, the coupling of angiogenesis to osteogenesis is crucial for the restoration of the skeletal tissue. In prior studies we have shown that Bone Morphogenetic Protein 2 (BMP2), a potent agonist for skeletal formation is expressed by vessels making it a prime candidate that links the morphogenesis of the two tissues. To investigate the role of BMP2 in the coordination of vessel and bone formation, we used a tamoxifen inducible Smooth Muscle Actin (SMA) promoter that conditionally expresses Cre recombinases crossed with a BMP2 floxed mouse in order to conditionally delete the BMP2 gene in smooth muscle actin (SMA) expressing cells. Using the mouse femur as our model for bone regeneration, we performed a surgical technique called distraction osteogenesis (DO) where an osteotomy is created followed by distraction or a gradual separation of the two pieces of bone. This primarily promotes intramembranous ossification at the osteotomy site by mechanical stimulation. Tamoxifen treatment started at day 6 and continued throughout the experiment. At post-operative days 3, 7, 12, 17, 24, and 31, we analyzed the bone and vessel formation by plain X-ray, micro-computed tomography (µCT) and vascular contrast enhanced µCT, and quantitative polymerase chain reaction (qPCR) of selective genes. We assessed both the femur and surrounding tissue to obtain qualitative and quantitative assessments for skeletal and vascular formation. Our results demonstrated that the deletion of BMP2 in vascular tissue resulted in a reduction of angiogenesis in vivo followed by a decrease in skeletal tissue development.
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Avaliação da fototerapia laser em fraturas cirúrgicas em tíbia de coelhos submetidas ou não a enxerto ósseo cerâmico bifásico

Aciole, Gilberth Tadeu dos Santos January 2010 (has links)
Submitted by Suelen Reis (suziy.ellen@gmail.com) on 2013-04-23T17:39:54Z No. of bitstreams: 1 Tese - Gilberth Acioli.pdf: 3536665 bytes, checksum: a37b496b111b3eb77680d5e81b8fac30 (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Meirelles(rodrigomei@ufba.br) on 2013-05-08T12:01:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Gilberth Acioli.pdf: 3536665 bytes, checksum: a37b496b111b3eb77680d5e81b8fac30 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-08T12:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Gilberth Acioli.pdf: 3536665 bytes, checksum: a37b496b111b3eb77680d5e81b8fac30 (MD5) Previous issue date: 2010 / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da fotobiomodulação laser (780nm, 50mW, 4x4J/cm2 = 16J/cm2, ϕ 0,5cm2, CW) associada ou não a implante de Enxerto Ósseo Cerâmico Bifásico e Reparação Óssea Guiada através da técnica de histologia, histomorfometria, espectroscopia Raman e Fluorescência laser no reparo de fraturas cirúrgicas fixadas com o sistema de fixação rígida (miniplacas) ou semi-rígida (fio de aço) em tíbias de coelhos. Foram utilizados 27 coelhos Oryctolagus que foram divididos em nove grupos e mantidos em gaiolas individuais em temperatura média de 22°C, ambientação dia/noite, alimentação sólida e água ad libidum. As fraturas foram produzidas sob anestesia geral (Ketamina 0,4ml/Kg IP e Xilazina 0,2ml/Kg IP). No período pós operatório os mesmos receberam em dose única, como terapia antimicrobiana (Pentabiótico 0,2ml/Kg IM) e como terapia antiinflamatória e analgésica (Banamine 0,1ml/Kg IM). Nos grupos II, III, IV e V foram realizadas as fraturas e os cotos ósseos fixados com sistema rígido (FIR). Nos grupos VI, VII, VIII e IX a fratura foi realizada e logo depois fixada com sistema semi-rígido (FISR). Em seguida, foi feita a colocação do enxerto e da membrana nos grupos III, V, VII e IX. Os animais dos grupos IV, V, VIII e IX foram irradiados durante 14 (catorze) dias, a cada 48 horas com uma dose de 16J/cm2, de forma pontual em 4 (quatro) regiões adjacentes a área da fratura óssea (4 x 4J/cm2). Os animais foram sacrificados no 30° dia pós-operatório através de overdose de anestesia geral (Ketamina e Xilazina IP) e administração de Cloreto de Potássio (5ml/Kg, IV). Em seguida os espécimes foram removidos, sendo metade encaminhado para análises histológica e histomorfométrica e a outra metade para análise por espectroscopia Raman. Antes da cirurgia e da morte animal a fluorescência laser foi medida. Histologicamente, observou-se um preenchimento das fraturas por um trabeculado ósseo maduro nos grupos onde houve o uso da associação laser, HATCP e ROG nos grupos tratados com FIR e FISR. Histomorfometricamente verificou-se maior neoformação óssea e maior deposição de colágeno, menor quantidade reabsorção óssea e de infiltrado inflamatório nos grupos nos quais o laser foi associado a HATCP. As análises por fluorescência laser (DIAGNOdent®) e por espectroscopia Raman, observaram-se diferenças significantes entre os grupos (p<0.001) entre os grupos tratados com FIR e FISR. A correlação de Pearson evidenciou uma correlação negativa entre as medidas de fluorescência e deslocamento Raman. Concluiu-se que a fotobiomodulação Laser infravermelho acelerou o reparo de fraturas ósseas e que quando o laser foi associado a HATCP e ROG esta causou aumento da deposição da HAC. Adicionalmente, o uso do DIAGNOdent® como instrumento de biópsia óptica pode ser útil. / Salvador
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Estudo do processo de reparação òssea após implantação do polietileno poroso em defeitos cirúrgicos no osso parietal de ratas diabéticas tratadas com calcitonina /

Claro, Flávio Augusto. January 2002 (has links)
Orientador: José Roberto Sá Lima / Banca: Renato Paulo Chopard / Banca: Eduvaldo Silvino de Brito Marques / Resumo: O propósito deste trabalho foi estudar a reação do tecido ósseo após a implantação de polietileno poroso em defeitos cirúrgicos confeccionados no osso parietal de ratas diabéticas tratadas com calcitonina, mediante análise microscópica. Avaliou-se também a eficiência da aplicação da estreptozotocina na indução do diabete melito em ratos, em dose única de 45mg/Kg, através da utilização de um glicosímetro digital e do exame clínico. Foram utilizadas 27 ratas adultas, divididas em grupo não diabético-controle (C), grupo diabético (D) e grupo diabético tratado com calcitonina (DCa). Os animais do grupo DCa receberam aplicações subcutâneas do hormônio em doses de 16UI/Kg, em dias alternados, desde o pós-operatório imediato até o sacrifício e foram sacrificados após 15, trinta e sessenta dias. Diante dos resultados observados, pode-se concluir que o polietileno poroso foi tolerado pelos tecidos hospedeiros nos animais do grupo C e grupo DCa, provocando reações inflamatórias mais intensas nesse segundo grupo, em todos os períodos de observação. O polietileno poroso não foi tolerado pelos tecidos hospedeiros dos animais do grupo D. Os poros do implante foram preenchidos por um tecido conjuntivo bem vascularizado, conferindo estabilidade ao material no leito receptor, não ocorrendo osteointegração. A calcitonina utilizada nos animais do grupo DCa foi eficaz no tratamento pós-operatório dos animais diabéticos que receberam o polietileno poroso, inibindo o processo de reabsorção e/ou estimulando a neoformação óssea. A estreptozotocina, administrada em dose única de 45 mg/Kg, foi um método eficaz na indução do diabete melito nas ratas, permitindo boas condições de sobrevida. / Abstract: The purpose of this work was to study the reaction of the bone tissue after the porous polyethylene implantation in confectioned surgical defects in the parietal bone of diabetic rats treated with calcitonin, by means of microscopical analysis. The efficiency of a single dose of streptozotocin, 45mg/Kg, in the induction of diabetes mellitus in rats was also evaluated through the use of a digital glicosimeter and the clinical examination. Twenty-seven adult female rats had been used, divided in not diabetic-control (C), diabetic (D) and diabetic treated with calcitonin (DCa) groups. The animals of group DCa had received subcutaneous applications from the hormone in doses of 16U/Kg, in alternated days, since immediate postoperative until the sacrifice, and all the animals had been sacrificed after 15, 30 and 60 days. Ahead of the results, it can be concluded that the porous polyethylene was tolerated by the host tissue in groups C and DCa, disclosing more intense inflammatory response in group Dca. The pores of the implants had been filled with well vascularizated connective tissue, conferring stability to the material in the receiving site, not occurring osteointegration. Calcitonin used in the animals of group DCa was efficient in the postoperative treatment of the diabetic animals that had received the porous polyethylene implants, inhibiting the bone resorption and/or stimulating the bone formation. Streptozotocin, managed in a single dose of 45 mg/Kg, was an efficient method in the induction of the diabetes mellitus in the rats, allowing good conditions of survival. / Mestre
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Estudo do processo evolutivo do reparo ósseo frente ao implante de osso bovino inorgânico e de hidroxiapatita BTCP: análise microscópica em avéolos dentários de ratos / Study of the evolution process of bone repair in face of the implant of inorganic bovine bone and of ?TCP hydroxyapatite: microscopic analysis in rat dental alveoli

Roberta Dias Garcia 14 August 2007 (has links)
Este trabalho avaliou, comparativamente, os fenômenos evolutivos do processo de reparo em alvéolos de ratos preenchidos, após a extração dental, com biomateriaiscomo o osso medular bovino inorgânico, microgranular (0,25-1,00mm) e a hidroxiapatita BTCP densa, sintética, microgranular (0,25-1,00mm), na proporção de 70% de HA e 30% de BTCP. Foram utilizados 48 ratos divididos em 3 grupos, sendo: 12 ratos, grupo I (controle), cujo coágulo sanguíneo serviu de controle; 18 ratos, grupo II (experimental), que receberam o implante de microgrânulos de osso bovino inorgânico e 18 ratos, grupo III (experimental), com implante de microgrânulos de hidroxiapatita, seguido da sutura. Após 7, 15 e 30 dias póscirúrgico, os animais foram mortos, e a hemimaxila direita, contendo o alvéolo dentário em estudo, foi removida. As peças foram desmineralizadas em EDTA, processadas e incluídas em parafina. Foram obtidos cortes de 6 µm de espessura, os quais foram corados com hematoxilina e eosina. Foram feitas análises microscópica descritiva e quantitativa, a qual teve como parâmetros os critérios: infiltrado inflamatório, densidade fibroblástica, densidade angioblástica e neoformação óssea. Os resultados, submetidos aos testes estatístico de Kruskal-Wallis e de Dunn, demonstraram que a HA-BTCP e o osso medular bovino inorgânico desempenharam, igualmente, as funções osteopreenchedora e osteocondutora no processo de reparo alveolar, nos períodos de 7, 15 e 30 dias. / This study comparatively evaluated the evolution phenomena of the process of repairs in rat filled alveoli after dental extraction, with biomaterials such as microgranular (2,25-1,00mm) inorganic bovine medullar bone, and dense microgranular (0,25-1,00mm) synthetic BTCP hydroxyapatite, at the rate of 70% of HA and 30% of BTCP. Forty-eight rats were divided in 3 groups: 12 rats in group I (control), whose blood clot served as control; 18 rats in group II (experimental) that received the microgranular inorganic bovine bone implant and 18 rats in group III (experimental) with microgranular implant of hydroxyapatite followed by suture. Animals were killed 7, 15, and 30 days after surgery and the right hemimaxilla containing the dental alveolus in study was removed. The pieces were demineralized in EDTA, processed and inserted in paraffin. Slots of 6µm of width were obtained and dyed with hematoxylin and eosin. Descriptive and quantitative microscopic analyses were done based on the following criteria: inflammatory infiltration, fibroblastic density, angioblastic density and bone neo-formation. Results were submitted to Kruskal-Wallis and Dunn statistic tests and demonstrated that HA- BTCP and the inorganic bovine medullar bone present similar performance in terms of bonefilling and osteoconduction functions in the process of alveolar repair in the time spans of 7, 15, and 30 days.
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Avaliação volumétrica de um procedimento de elevação do seio maxilar bilateral, utilizando uma cerâmica bifásica porosa: estudo clínico randomizado com avaliação após 4 meses de cicatrização / Volumetric evaluation of bilateral maxillary sinus augmentation procedure using a biphasic porous ceramic: randomized clinical study with review after 4 months of healing

Ricardo Quirico Pinheiro Machado 07 October 2014 (has links)
Este trabalho testou a hipótese nula de que a utilização de uma cerâmica bifásica porosa (29-33% poros) (GenPhos, Baumer S.A., Mogi Mirim, Brasil) não tem efeito significativo na perda de volume depois da remodelação óssea 4 meses após a elevação da parede do seio maxilar, em comparação ao osso autógeno. Treze pacientes com altura de osso alveolar entre 1 a 5 mm na região mais estreita entre o assoalho do seio maxilar e a crista alveolar foram inclusos neste estudo clínico randomizado. Em um mesmo indivíduo, a diferença foi o tipo de material utilizado em cada um dos seios maxilares, a saber: cerâmica bifásica porosa (experimental, HA+&#x3B2;-TCP, Baumer S.A.) e osso autógeno. Quatro meses após a cirurgia, numa avaliação tomográfica computadorizada, a perda de volume na remodelação óssea foi mensurada. Os dados foram analisados pelo teste t pareado (p<0.05). A porcentagem de manutenção do volume enxertado foi significativamente maior para o GenPhos poroso (91,9±20,5%) quando comparado ao osso autógeno (69,3±5,1%). Estes resultados indicam que o material avaliado é promissor, devido à alta previsibilidade de manutenção do volume no momento da instalação dos implantes. / This study tested the null hypothesis that the use of a porous biphasic ceramics (29-33% pores) (GenPhos, Baumer S.A., Mogi Mirim, Brazil) has no significant effect on loss of bone remodeling volume after 4 months after the maxillary sinus augmentation, compared to autogenous bone. Thirteen patients with alveolar bone height between 1 - 5 mm at the narrowest region between the maxillary sinus floor and the alveolar crest participated in this randomized clinical trial. In the same individual, the difference was the type of material to be used in each of the maxillary sinuses, namely porous biphasic ceramic (experimental, HA + &#x3B2;-TCP, Baumer S.A) and autogenous bone. Four months after surgery, through a computer tomography evaluation, volume loss in bone remodeling was mesured. Data were analyzed by paired t test (p<0.05). The percentage of maintenance of the graft volume was significantly higher for porous GenPhos (91.9± 20.5%) when compared with autogenous bone (69.3±5.1%) These results indicate that the material evaluated is promising, due to the high predictability of maintanence of volume when the implants are installed.
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Avaliação in vivo e in vitro do efeito do extrato de própolis em osso alveolar, com e sem contaminação de lipopolissacarídeo bacteriano / In vivo and in vitro effects of propolis extract on alveolar bone, with and without bacterial lipopolysaccharide contamination

Yamba Carla Lara Pereira 20 December 2010 (has links)
A própolis é uma substância resinosa, cujas atividades antibacteriana, antiinflamatória, antiviral, fungicida, imuno estimulante, cicatrizante e de anestésico local tem sido valorizadas no uso clínico. O lipopolissacarídeo (LPS) é reconhecidamente uma endotoxina e pode induzir processos inflamatórios. Os objetivos deste trabalho foram: a) analisar in vitro as seguintes propriedades do extrato de própolis verde: 1) perfil físico químico 2) Concentração Inibitória Mínima (CIM) frente à endotoxina da bactéria gram negativa Escherichia coli; e 3) sua atividade imunorregulatória sobre leucócitos de baço de ratos; b) analisar &Prime;in vivo&Prime; a ação do Extrato Etanólico de Própolis (EEP) 10% e 90% e do Extrato de Própolis Puro (EPP), em alvéolos dentais contaminados ou não com lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano. Para o estudo in vivo 35 ratos foram submetidos às exodontias dos primeiros molares superiores direito e esquerdo, os quais, imediatamente tiveram o alvéolo dental direito contaminado com 0,1µL de lipopolissacarídeo (LPS) (100µg/kg) e o esquerdo sem tal contaminação. Os grupos com (n=7) para cada tratamento, após 2 semanas: GI- Controle Negativo (CN) - sem tratamento; GII- Tratados com Extrato de Própolis puro (EPP) GIII- Tratados com pasta de própolis a 90% (P90); GIV- Tratados com pasta de própolis a 10% (P10); e, GV- Tratado com veículo das pastas (SB) foram analisados. Os alvéolos foram removidos, desmineralizados, processados pela técnica histológica de rotina, submetidos a secções sistematizadas a 6 µm de espessura e corados em H.E. O volume de osso formado, foi avaliado por contagem de pontos, usando um Sistema Teste sobreposto as imagens capturadas com auxílio de uma câmera acoplada a um microscópio. Observada a normalidade dos dados, procedeu-se o teste ANOVA fatorial e Tukey-Kramer test (p<0,05). In vitro determinou-se a propriedade da própolis, sua CIM e atividade imunorregulatória. In vivo os alvéolos dentais contaminados com lipopolissacarídeo bacteriano e tratados com a própolis verde apresentou maior área de osso neoformado, quando comparado aos demais grupos experimentais. O alvéolo não contaminado e tratado com própolis pura mostrou maior área de fibras colágenas. / Propolis is a resinous substance, whose antibacterial, antiinflammatory, antiviral, antifungal, immune stimulant, and local anesthetic wound healing properties has been considered for clinical practice. The lipopolysaccharide (LPS) is recognized as an endotoxin and can induce inflammatory processes. Our objectives were: a) to analyze in vitro the following properties of green propolis extract: 1) physicochemical profile of green propolis sample, 2) Minimum Inhibitory Concentration (MIC) against endotoxin from gram negative Escherichia coli and 3) its immunoregulatory activity using leukocytes from the spleen of mice,. b) analyze in vivo, the action of propolis ethanol extract (EEP) 10% and 90% and Pure Propolis Extract (EPP) in dental alveoli or not contaminated with lipopolysaccharide (LPS) bacterial. For in vivo study, 35 rats were subjected to extractions of maxillary first molars, right and left, which immediately had the right dental socket contaminated with 0.1 µL of lipopolysaccharide (LPS) (100µg/kg) and left without such contamination. They were divided into groups (n = 7) for each sample after 2 weeks, according to the treatment in the right and left alveoli: GI-Negative Control (NC) - no treatment, GII-Treated Pure Propolis Extract (EPP) GIII-Treated folder with propolis 90% (P90), GIV-Treated folder with propolis 10% (P10) and GV-Treated folder with vehicle (SB). The alveoli were removed, demineralized, processed by routine histologic technique, submitted to systematic sections (6 microns) of thick and stained with HE for histological analysis to assess the new bone tissue volume by point counting method, using a Test system on images captured with the aid of a digital camera attached to a microscope. Observed data normality, we proceeded to ANOVA and Tukey-Kramer tests (p <0.05). In vitro, it was determined the propolis properties, CIM and immunoregulatory activity. In vivo, the alveoli contamined with bacterian lipopolysaccharide and treated with green propolis induced higher bone formation when compared to other groups. The non contamined alveoli and treated with pure propolis showed more quantity of collagen fibers.

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