Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Priscilla Brito Oliveira (priscilla.b.oliveira@gmail.com) on 2009-10-02T19:50:55Z No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Penna.pdf: 27353851 bytes, checksum: bbf1994ee5120417f554eacd85b1fef4 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-10-05T13:19:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Penna.pdf: 27353851 bytes, checksum: bbf1994ee5120417f554eacd85b1fef4 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-10-05T13:19:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda Penna.pdf: 27353851 bytes, checksum: bbf1994ee5120417f554eacd85b1fef4 (MD5) Previous issue date: 2007 / Os mecanismos envolvidos na modificação do reparo ósseo em diabéticos ainda permanece pouco elucidado. Assim, esse estudo investigou a expressão de reguladores do metabolismo ósseo receptor ativador de NFkB (RANK), RANK ligante (RANKL) e osteoprotegerina (OPG), através da imunohistoquímica e RT-PCR, em sítios de fratura óssea de ratos diabéticos. Foram realizadas fraturas ósseas fechadas em tíbias esquerdas de ratos controle e com diabetes induzido pelo aloxano. A análise histomorfométrica dos sítios de fratura após 7 dias revelaram que os ratos diabéticos (db) apresentaram menor formação óssea e de cartilagem em comparação com o grupo controle. Paralelamente, o número de células RANK e RANKL positivas foi reduzido no grupo diabético. Além disso, células OPG positivas apresentaram-se significantemente diminuídas no grupo diabético comparado ao grupo controle (p=0,05). Entretanto, a razão RANKL/OPG foi similar no grupo controle (0,074) e diabético (0,099) nesse período. Após 14 dias, o número de células RANKL e OPG positivas e a expressão de RNAm desses marcadores foi maior no grupo controle (p=0.008). Apesar de menores níveis, a razão RANKL/OPG no grupo diabético (1,29) foi maior do que no grupo controle (0,90), o que sugere o favorecimento dos mecanismos de reabsorção óssea. Os resultados obtidos demonstram a expressão de marcadores da atividade de formação/remodelação de tecidos duros em sítios de fratura. Modificações no balanço da expressão de RANKL/OPG pode contribuir para o retardo do reparo de fraturas associado ao estado diabético. ____________________________________________________________________________________ ABSTRACT / To clarify the mechanisms of altered bone reapair in diabetic state, we investigate the RANK, RANKL and OPG expression by immunohistochemistry and RT-PCR in the fracture sites of diabetic rats. A closed fracture was performed on the anatomical left tibia in rats either healthy or made diabetic by alloxan. Histomorphometric analysis of fracture site at 7 days after fracture revealed that diabetic rats (db) have significantly lesser bone and cartilage formation at fracture site in comparison with controls. Parallel with this, the number of RANK and RANKL positive cells were slighly decreased in db group. Furthermore, OPG+ cells were significantly lower in db than control (p=0.05). However, the RANKL/OPG ratio was similar in control (0.074) and db (0.099) at this time. At day 14, the numbers of RANKL and OPG positive cells and the mRNA expression for these markers were increased in control group (P=0.008). Despite lower levels, the RANKL/OPG ratio in db group (1.29) was greater than in controls (0.90) what suggets a favoring of pro-resorptive pathways. Our results demonstrate the expression of consistent markers of hard tissue formation/remodeling activities in sites of fractures. The imbalance of RANKL/OPG expression may contribute to the delay of fracture repair during diabetes course.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2015-04-15T01:48:12Z No. of bitstreams: 1 Helder Barreto Valiense.pdf: 6195492 bytes, checksum: 0c44c8301e9be92ae81a9c8a0cb6688b (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-15T01:48:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Helder Barreto Valiense.pdf: 6195492 bytes, checksum: 0c44c8301e9be92ae81a9c8a0cb6688b (MD5) Previous issue date: 2013 / Para o tratamento e recuperação de defeitos ósseos que podem ter diferentes etiologias como traumas, infecções e malformações, uma série de estudos científicos visando à produção de materiais com características biológicas foi realizada ao longo desses anos. Diversos tipos de biomateriais são comumente utilizados na busca da regeneração óssea tanto no campo da medicina como também na odontologia, independente da sua origem - quer seja homógena, xenógena ou mesmo sintéticos. Por apresentar similiariedade e composição química próximo do tecido ósseo natural, a hidroxiapatita vem sendo largamente estudada, principalmente sua composição sintética, visto que a isenta de questões religiosas bem como risco de transmissão de doenças ou mesmo resposta imunológica. Mudanças na composição da hidroxiapatita, com o intuito de otimizar sua capacidade osteocondutora favorecendo a biodegradaçãosão motivos de estudo. O presente estudo pretende discutir as possíveis alterações catiônicas e aniônicasda hidroxiapatita, variações de temperatura, sua influência na morfologia do substrato formado e seu possível efeito modulador como biomaterial. Aqui deveria entrar a conclusão da sua revisão, como por exemplo a substituição por íons Sr, carbonato torna o material mais bioabsorvível, etc.

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3225.pdf: 1637039 bytes, checksum: 969ba87438287b6ff0e25502e04da8b1 (MD5) Previous issue date: 2010-06-22 / Universidade Federal de Minas Gerais / Fractures of delayed consolidation and fractures with non-union are commonly found in medical practice and are associated with high morbidity and mortality. Within this context, biochemical and biophysical resource have been studied in an attempt enhance bone healing. Among these may be highlighted the use of low level laser therapy (LLLT) and low intensity pulsed ultrasound (LIPUS). Several studies suggest that both resources are able to stimulate osteogenesis at the fracture site, promoting a greater deposition of bone mass and accelerating the process of bone healing. However, despite a series of biomechanical and radiographic evidence of the effectiveness of LLLT and LIPUS in the bone repair, the celullar and molecular mechanisms that regulate and modulate the acceleration of the fracture consolidation are unknown. So the main purpouse of the present work was to measure the effects of LLLT and LIPUS in the expression of osteogenic genes during the process of bone healing and to extend prior histological description after a bone created defect on of the tibiae in rats. For the study 90 male Wistar rats were underwent surgery for creation of bone defects in both tibias. The animals were randomly distributed into three groups: control group ( bone defect without treatment), bone defect treated with LLLT and bone defect treated with LIPUS. Each group were divided into 3 different subgroups (n=10) that received 3,6 and 12 sessions of treatment, and after 24 hours of each session was the euthanasia of animals on days 7, 13 and 25 days after surgery, respectively at each treatment session. Both tibias were removed and subjected to protocols for histological analysis and gene expression analysis by real time real time PCR. Was observed in the qualitative histological analysis that the animals treated with LLLT showed a greater area of new bone formation within 7, 13, 25 days. Furthermore, morphometric analysis demonstrated increased bone tissue only in animals treated with LLLT in 13 and 25 days. It was verified an increase in mRNA levels of BMP4 in the 13 days of the LLLT group and the ALP, Runx2 and BMP4 in 25 days after the application of LLLT and LIPUS, and the mRNA of ALP was more expressed in the LLLT group . We conclude that LLLT stimulates bone formation by increasing the mRNA expression of BMP4 in the 13 days and the ALP in the 25 days. / Fraturas de difícil consolidação e fraturas com não-união óssea são comumente encontradas na prática médica e estão associadas a altos índices de morbidade e mortalidade. Dentro deste contexto, recursos biofísicos e bioquímicos têm sido estudados na tentativa de minimizar o tempo de consolidação óssea. Dentre estes, podem ser destacados o uso do laser terapêutico de baixa intensidade (LLLT) e do ultrassom pulsado de baixa intensidade (LIPUS). Vários estudos sugerem que ambos os recursos são capazes de estimular a osteogênese no local da fratura, promovendo uma maior deposição de massa óssea e acelerando o processo de consolidação. No entanto, apesar de existir uma série de evidências radiográficas e biomecânicas da efetividade do LLLT e do LIPUS no processo de reparo ósseo, os mecanismos celulares e moleculares envolvidos nestes eventos são desconhecidos. Com isso, este projeto tem o objetivo de analisar os efeitos do LLLT e do LIPUS na expressão de genes relacionadas à formação óssea durante o processo de reparo ósseo e avaliar o calo ósseo através de análise histológica, em defeitos ósseos induzidos em tíbias de ratos. Foram utilizados ratos Wistar submetidos à cirurgia para a confecção de defeitos ósseos em ambas as tíbias. Os animais foram divididos em grupo controle (defeito ósseo sem tratamento), defeito ósseo tratado com LLLT e defeito ósseo tratado com LIPUS. Esses foram divididos em 3 subgrupos (n=10), que receberam 3, 6 e 12 sessões de tratamento e nos dias 7, 13, e 25, respectivamente, ocorreu a eutásia dos animais, sendo realizada 24 horas após a última sessão de tratamento. Ambas tíbias foram retiradas e submetidas aos protocolos de análise histológica e análise da expressão gênica por meio de PCR em tempo real. Foi observado na análise histológica qualitativa que os animais tratados com LLLT apresentaram uma maior área de tecido ósseo neoformado no período de 7, 13, 25 dias. Além disso, a análise morfométrica demonstrou aumento de tecido ósseo somente nos animais tratados com LLLT nos períodos de 13 e 25 dias. Foi verificado um aumento dos níveis de mRNA da BMP4 no período intermediário do grupo LLLT e da ALP, BMP4 e RUNX2 no período de 25 dias após a aplicação do LLLT e LIPUS, sendo que o mRNA da ALP mostrou-se mais expresso no grupo LLLT. Concluímos que o LLLT estimula a formação óssea pelo aumento da expressão do mRNA da BMP4 no período intermediário e da ALP no período tardio.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o reparo ósseo em defeitos de tamanho não crítico tratados com enxerto de matriz orgânica de osso bovino medular em bloco ou de osso cortical em microgrânulos de 0,25-1,0mm (ambos materiais Gen-Ox®- Baumer-SA Brasil). Foram confeccionados defeitos ósseos de 6mm de diâmetro por 8mm de profundidade usando trefina cirúrgica, em ambas epífises distais dos fêmures de coelhos machos Nova Zelândia, sendo 15 defeitos preenchidos com matriz óssea em bloco (grupo experimental I), 15 com matriz óssea em microgrânulos (grupo experimental II) e 15 com coágulo sanguíneo (controle). Os animais de cada grupo foram mortos 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. As epífises foram coletadas, fixadas e radiografadas usando o sistema de radiografia digital Digora e filmes periapicais convencionais. As imagens digitais (modos positivo e negativo) e as radiografias convencionais foram avaliadas por dois examinadores através de escores. Após isso, as epífises foram desmineralizadas com EDTA e incluídas em parafina. Foram obtidos cortes com 6µm de espessura que foram corados com hematoxilina e eosina e com o Tricrômico de Masson e observados em microscópio óptico. Na análise microscópica, pós 30 dias, o grupo experimental II apresentou algumas partículas de material em reabsorção por células mononucleares e também uma ligeira maior quantidade de osso trabeculado que os outros grupos. Neste período, enquanto os grupos experimentais apresentaram o defeito preenchido completa ou parcialmente com osso trabeculado, o grupo controle apresentou invaginação do tecido conjuntivo para o interior de defeito, apresentando apenas uma estreita faixa de tecido ósseo de arranjo trabecular. Após 90 dias todos os grupos mostraram intensa remodelação do osso trabeculado que foi substituído por osso lamelar. Após 180 dias, em geral, ambos os grupos experimentais e o grupo controle apresentaram um reparo semelhante. Na análise radiográfica não houve diferenças estatisticamente significantes nem intra nem interexaminadores. Também não foram observadas diferenças significantes entre os grupos em todos os períodos avaliados (p>0,05). Dessa forma, pela análise radiográfica o reparo ósseo foi similar em ambos os grupos experimentais e o controle nos períodos de 30, 90 e 180 dias após a cirurgia. Apesar do reparo ser similar em ambos os grupos experimentais e o controle no período de 180 dias pela análise microscópica e em todos os períodos pela análise radiográfica, o uso da matriz óssea desmineralizada em bloco ou microgrânulos evitou a invaginação do tecido conjuntivo para o interior do defeito ósseo nas fases iniciais do reparo. / The aim of this work was to verify the osseous repair in non through-andthrough defects treated with blocks of lyophilized bovine bone organic matrix of cancellous origin or micro granules (0.25-1.0 mm) of lyophilized bovine bone organic matrix of cortical origin (both materials Gen-Ox®- Baumer SA- Brazil). An osseous defect, 6mm in diameter by 8mm in depth, was created in both distal femoral epiphyses of male New Zealand White rabbits using a trephine bur. Fifteen defects were grafted with cancellous blocks (experimental group I), fifteen with cortical micro granules (experimental group II) and fifteen were filled with blood clot (control). The rabbits of each group were sacrificed 30, 90 and 180 days after surgeries. Thereafter, the epiphyses were collected and fixed. Radiographs were taken using the Digora digital radiographic system and conventional periapical films. The radiographic digital images (positive and negative) and the conventional radiographs were evaluated using scores by two examiners. After this, the epiphyses were demineralized with EDTA and embedded in paraffin. Semi-serial 6-µm thick sections were obtained, stained with hematoxylin and eosin and Masson Trichromic and examined under a light microscope. After 30 days the experimental group II presented some particles of bone matrix in resorption by mononuclear cells and a larger amount of primary woven bone than did the other groups. Both experimental groups showed total or partial closure by woven bone while the control group exhibited migration of the connective tissue into the defect area. After 90 days the experimental and control groups showed intense remodelation of neoformed woven bone that was replaced by lamellar bone. Generally, after 180 days both experimental and control groups exhibited a similar pattern of repair. In the radiographic analysis, neither intra-examiners significant differences nor interexaminers significant differences were observed. Also no significant differences among the groups in all evaluated periods were observed (p>0.05). The osseous repair evaluated by digital and conventional radiographs was similar in both experimental groups and control groups in the periods of 30, 90 and 180 days post-surgery. Although the bone formation appeared similar in the experimental and control groups after 180 days by the histological analysis and in all periods by radiographic analysis, the use of lyophilized bovine bone organic matrix in blocks or micro granules avoided the migration of connective tissue into the defect area in the initial phases of the repair.

O processo de reparo do tecido ósseo tem sido alvo de estudos com o intuito de promover uma melhora na qualidade e tempo de reparo. Um elemento que tem sido estudado por alguns grupos é o fluoreto, pois tem sido proposto como terapêutico para osteoporose (Europa). Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar comparativamente o efeito do fluoreto administrado na água de beber sobre o reparo ósseo alveolar de ratos. Neste estudo foram utilizados 4 grupos com ratos Wistar de 80 dias de vida (n=200), os quais receberam água de beber contendo 5, 15 e 50 ppm de fluoreto e água deionizada (controle) durante todo experimento. Esses animais tiveram o incisivo superior direito extraído. Os animais foram eutanasiados 0 hora, 7, 14, 21 e 30 e 60 dias após a extração. Amostras de plasma sanguíneo foram obtidas para análise de concentração de flúor, e a região do alvéolo dental foi coletada para as análises de microscopia (Hematoxilina Eosina e imunoistoquímica) e zimografia (metaloproteinases de matriz 2 e 9 MMP-2 e 9). A análise de concentração de flúor no plasma sangüíneo mostrou maior presença desse elemento no grupo tratado com 50 ppm de F nos períodos de 21 e 30 dias. Na análise histológica foi detectado osso neoformado em todos os animais até 60 dias, porém o grupo de 50 ppm de F apresentou menor formação óssea nos períodos de 14, 21 e 30dias. A análise morfométrica confirmou um aumento na densidade de volume de osso neoformado, entre 7 e 60 dias, nos grupos controle, 5 ppm, 15 ppm e 50 ppm de F, com concomitante diminuição na densidade de volume de coágulo sangüíneo. A expressão de RANK-L e OPG não foi alterada pela exposição crônica ao fluoreto na água de beber durante os períodos estudados (p<0,05). A atividade da MMP-2 foi mais acentuada no período inicial, enquanto a MMP-9 teve maior atividade no período final. Concluiu-se que o F, em altas concentrações pode alterar a dinâmica do reparo ósseo alveolar diminuindo a formação de novo tecido ósseo, associado a um atraso na remissão do coágulo sangüíneo. Proteínas como RANK-L, OPG, MMP-2 e MMP-9 também podem ter sua expressão alterada no tecido ósseo em reparo. / The repair of bone has been investigated with the aim of promoting an improvement in the quality and time of the repair process. One element that has been studied by some groups is fluoride, it has been proposed as a treatment for osteoporosis (Europe). Thus, the objective was to comparatively evaluate the effect of fluoride administered in drinking water on alveolar bone repair in rats. This study used 4 groups of rats of 80 days (n=200), which received drinking water containing 5, 15, and 50 ppm of fluoride, and deionized water (control) throughout the experiment. These animals had their upper right incisor extracted. The animals were euthanized 0 hours, 7, 14, 21 and 30 and 60 days after extraction. Samples of blood plasma were obtained for analysis of fluoride concentration, and the region of the alveolus was collected for microscopic analysis (Hematoxylin eosin and Immunohistochemistry) and zymography (metalloproteinases 2 and 9 MMP-2 and 9). Analysis of fluoride concentration in blood plasma showed a greater presence of this element in the group treated with 50 ppm of F in periods of 21 and 30 days. Histological analysis detected a new bone formed in all animals up to 60 days, but the group of 50 ppm F showed lower bone formation at 14, 21 and 30 days. Morphometric analysis confirmed an increase in the volume density of newly formed bone, between 7 and 60 days in control groups, 5 ppm, 15 ppm and 50 ppm F, with a concomitant decrease in the volume density of blood clot. The expression of RANK-L and OPG was not altered by chronic exposure to fluoride in drinking water during the study period (p<0.05). The activity of MMP-2 was more pronounced in the early period, while MMP-9 had higher activity in the final period. It was conclude that the F, in high concentrations change the dynamics of the alveolar bone repair by decreasing the formation of new bone, associated with a delay in treating the blood clot. Proteins as RNK-L, OPG, MMP-2 and MMP-9 may also have changed in their expression in bone tissue repair.

The alveolar bone repair process may be influenced by several local and systemic factors that include mediators and immune system cells. Among these cells, macrophages are essential to trigger the repair process, and may acquire an inflammatory (M1) or anti-inflammatory and pro-reparative profile (M2). In this context, we evaluated the effects of FTY720 on macrophage polarization towards the M2 profile and its effects on the alveolar bone repair process. In this study, we used 8 weeks old male C57BL / 6 mice (N = 5 / time / group). The animals were divided in FTY720 group receiving the drug orally at a dose of 3mg / kg / 24h during the whole experimental period, and the control group receiving only the equivalent vehicle. All animals were submitted to extraction of the right upper incisor and were evaluated at 0, 1, 3, 7 and 14 days after extraction, followed by computed tomography (CT), histomorphometry, birefringence, immunohistochemical and molecular analyzes (PCRArray). Our results demonstrated that in the 14-day period, the FTY720 group presented higher bone tissue density, higher bone tissue volume (BV), greater tissue volume fraction (BV / TV), greater number and thickness of trabeculae (Tb.1 and Tb.Th, respectively) (p<0.05). In the 14-day period, the FTY720 group had a higher number of osteoblasts and osteoclasts than the control group (p<0.05). Accordingly, the expression of various bone markers such as BMP2, BMP7, ALPL, SOST and RANK had their mRNA expressions increased in the FTY720 group. This increase may be related to the potentiation in the formation of the bone tissue compared to the control group. The levels of FIZZ, ARG2 and IL-10 mRNA increased in the FTY720 group together with the presence of CD206 + cells in the 14 days period, suggesting a participation of M2 macrophages in the potentiation of the alveolar bone repair process. The FTY720 group also showed increased expression levels of CCR2, CCR5, CXCR1, CXCL1, CXCL3, CCL20 and CCL25 mRNA, chemokines and chemokine receptors involved in the recruitment of inflammatory cells and undifferentiated mesenchymal cells (MSCs) most notably was the up CXCL12 up regulation (p<0.05). CXCL12 is responsible in the recruitment of MSCs to the repair site. The increase in CXCL12 expression was accompanied by an increase in CD34 expression over a period of 14 days (p<0.05), indicating a higher presence of MSCs in the repair site. Thus, our results demonstrate that FTY720 favored the process of alveolar bone repair in C57BL / 6 mice, possibly because it increased the expression of markers related to bone tissue development (ALPL, SOST, RANK), tissue repair (CXCL12, CD34) and inflammatory cells (CCR2, CCR5) and apparently in the induction of macrophages to an M2 profile (ARG2, FIZZ). / O processo de reparo ósseo alveolar pode ser influenciado por vários fatores locais e sistêmicos que incluem mediadores e células do sistema imunológico. Dentre essas células, os macrófagos são essenciais para desencadear o processo de reparo, podendo adquirir um perfil inflamatório (M1) ou anti-inflamatório e pró-reparativo (M2). Nesse contexto, avaliamos os efeitos do FTY720 na polarização de macrófagos para o perfil M2 e seus efeitos no processo de reparo ósseo alveolar. Nesse estudo foram utilizados camundongos C57BL/6 (N=5/tempo/grupo), machos, com 8 semanas de idade. Os animais foram divididos em grupo que recebeu o fármaco FTY720 via oral, na dosagem de 3mg/Kg/24h, durante todo o período experimental, e grupo controle que recebeu apenas o veículo em regime equivalente. Todos animais foram submetidos à extração do incisivo superior direito e avaliados nos períodos de 0, 1, 3, 7 e 14 dias pós extração, seguido por análises de tomografia computadorizada (CT), histomorfométrica, birrefringência, imuno-histoquímica e molecular (PCRArray). Nossos resultados demonstraram que no período de 14 dias, o grupo FTY720 apresentou maior densidade de tecido ósseo, maior volume de tecido ósseo (B.V), maior volume de fração de tecido ósseo pelo tecido total (BV/TV), maior número e espessura de trabéculas (Tb.1 e Tb.Th, respectivamente) (p<0.05). Ainda no período de 14 dias, o grupo FTY720 apresentou maior número de osteoblastos e osteoclastos em relação ao grupo controle (p<0.05). Em concordância, a expressão de vários marcadores de tecido ósseo como, BMP2, BMP7, ALPL, SOST e RANK, tiveram suas expressões de mRNA aumentadas no grupo FTY720. Esse aumento pode estar relacionado com a potencialização na formação do tecido ósseo comparado ao grupo controle. Os níveis de mRNA de FIZZ, ARG2 e IL-10, sofreram aumento no grupo FTY720 em conjunto com a presença de células CD206+ no período de 14 dias, podendo sugerir uma participação dos macrófagos M2 na potencialização do processo de reparo ósseo alveolar. O grupo FTY720 também mostrou aumento nos níveis de expressão de mRNA de CCR2, CCR5, CXCR1, CXCL3, CCL20 e CCL25, quimicionas e receptores de quimiocinas envolvidos no recrutamento de células inflamatórias e células mesenquimais indiferenciadas (MSCs) com destaque para o aumento da expressão de CXCL12 (p<0.05), quimiocina responsável no recrutamento de MSCs para o local de reparo. O aumento na expressão de CXCL12 foi acompanhado pelo aumento na expressão de CD34 no período de 14 dias (p<0.05) podendo indicar maior presença de MSCs no sitio de reparo. Assim, os nossos resultados demonstram que o FTY720 favoreceu o processo de reparo ósseo alveolar em camundongos C57BL/6, possivelmente por ter aumentado a expressão de marcadores relacionados com o desenvolvimento do tecido ósseo(ALPL, SOST, RANK), no reparo tecidual (TGF-1, IL-10), no recrutamento de células indiferenciadas (CXCL12, CD34) e células inflamatórias (CCR2, CCR5) e aparentemente na indução de macrófagos para um perfil M2 (ARG2, FIZZ).

Entre as várias terapêuticas propostas para o tratamento da osteoporose, a administração de altas doses de fluoreto é uma alternativa que ainda apresenta controvérsia na literatura. O fluoreto se destaca por influenciar na atividade dos osteoblastos, os quais são responsáveis por mediar a síntese de moléculas que compõem o osso. No entanto, o mecanismo de ação do fluoreto em células do tecido ósseo (osteoblastos, osteócitos e osteoclastos) ainda não está bem esclarecido. Neste trabalho foram utilizados camundongos com diferentes densidades ósseas, sendo 32 da linhagem C57BL/6J (menor densidade óssea) e 32 da linhagem C3H/HeJ (maior densidade óssea) com 60 dias de vida, os quais receberam água deionizada ou água com 50 ppm de fluoreto (na forma de NaF). Realizou-se os procedimentos cirúrgicos extraindo o incisivo superior esquerdo e posteriormente os animais foram eutanasiados 7, 14, 21 e 28 dias após a extração. Imediatamente após a eutanásia, foi removida a peça com alvéolo dental esquerdo. Foram feitas análises descritiva e morfométrica das lâminas obtidas (coloração em Hematoxilina Eosina). Foi utilizada análise ANOVA a quatro critérios seguida da análise de Tukey (p<0,05). Em geral, para todos os grupos, a análise histológica mostrou neoformação óssea à partir das paredes do alvéolo e formação de ilhotas ósseas invadindo o centro dos alvéolos, substituindo o tecido conjuntivo existente. O tecido ósseo neoformado substituiu aos poucos o tecido conjuntivo ao longo dos períodos experimentais, sendo esse fenômeno ligeiramente mais evidente nos camundongos da linhagem C57BL/6J. A análise morfométrica confirmou os achados histológicos em relação à quantidade de tecido ósseo neoformado e mostrou diminuição do tecido ósseo neoformado no último período (28 dias) nos animais C3H/HeJ (grupos controle e experimental). Concluimos que o processo de reparo ósseo alveolar é semelhante nas duas linhagens estudadas, porém apresentam padrão de formação óssea diferentes entre elas. O fluoreto parece influenciar as etapas do processo de reparo alveolar nas duas linhagens, aumentando a quantidade de osso neoformado, no entanto, a linhagem de camundongos C57BL/6J é mais propensa aos efeitos do flúor. / Among the various therapeutic proposals for the osteoporosis treatment, the administration of high doses of fluoride is an alternative that still has controversies in literature. Fluoride is highlighted by influencing the activity of osteoblasts, which are responsible for mediating the synthesis of bone. But, the mechanism of action of fluoride on bone cells (osteoblasts, osteocytes and osteoclasts) is not well understood. This way, this study aims to evaluate the alveolar bone repair in rats under the effect of fluoride (NaF) administered in the water. This work were used four groups of strains C57BL/6J mice (total of 32) and C3H/HeJ (total of 32) for 60 days, which received deionized water or water with 50 ppm of fluoride. The surgical procedures were made by extracting the upper left incisor and then the animals were euthanized 7, 14, 21 and 28 days. Histological analysis (Hematoxylin Eosin staining), by light microscopy, were made. The statistical analysis were made using the statistical test one-way ANOVA complemented by Tukey\'s test (p <0.05). Generally, for all groups, the histological analysis showed a new bone formed from the alveolar walls, replacing the connective tissue. The newly formed bone tissue gradually replaces the connective tissue over time; wich was more evident in C57BL/6J mice. Morphometric analisys confirmed the histological findings of the new bone formed and showed a decrease in the new formed bone in the last period (28 days) of the C3H/HeJ animals. We concluded that the process of alveolar repair is similar when it respects to the stages of repair, however they presents different pattern of new bone formation. The fluoride influences the stages of alveolar repair in both lineages, increasing the amount of bone formed, however the mice lineage of C57BL/6J is more prone to the effects of fluoride.

O reparo ósseo é um processo que consiste na restauração dos tecidos. Ele pode ser facilitado através de enxertos, estimulação bioquímica e estimulação física. Por outro lado, pode ser retardado por endotoxina (lipopolissacarídeo; LPS). O exercício físico exerce efeito benéfico para o osso, porém não é reconhecido o efeito sobre a reparação óssea. Assim, investigamos o efeito do exercício físico sobre a ação do LPS no reparo ósseo, por meio, de dosagens de citocinas plasmáticas, densitometria óssea, análise histológica quantitativa do tecido ósseo neoformado e marcadores imuno-histoquímicos, em animais sedentários e treinados. Os ratos foram divididos em quatro grupos: sedentário salina, sedentário LPS, exercício salina e exercício LPS. O exercício consistiu no treinamento físico na esteira durante quatro semanas. Após o treinamento, os ratos foram submetidos à cirurgia para confecção do defeito ósseo na tíbia direita e 24 horas após a cirurgia o LPS foi administrado na dose de 100 ?g/kg ou 1 ml/kg de salina, intraperitoneal. Finalmente, após 10 dias o sangue e as tíbias direitas foram obtidos para as análises, período em que os animais não foram submetidos ao treinamento físico. Os ratos treinados tiveram menor peso corporal do que os ratos sedentários (P<0,001). O exercício físico exerceu efeito positivo na reparação óssea, aumentando a densidade mineral óssea (P<0,005), o conteúdo mineral ósseo (P<0,005), a neoformação óssea (P<0,005), o colágeno tipo I (P<0,05) e a expressão de osteocalcina (P<0,05). As citocinas plasmáticas não foram detectadas na análise. Esses parâmetros não foram afetados pela administração sistêmica de LPS. Assim, os dados são consistentes com o conceito de que o exercício físico exerce um importante efeito osteogênico, que é mantido durante a inflamação sistêmica aguda induzida por uma única dose de LPS. / Bone repair is a process involved in the restoration of injured tissues. It can be facilitated by grafting, biochemical and physical stimulation. On the other hand, may be delayed by endotoxin (lipopolysaccharide; LPS). Physical exercise exerts beneficial effects on the bone, but is not known its effect on bone repair. Thus, we investigated the effect of exercise on the LPS action on bone repair through plasma cytokine measurements, bone densitometry, quantitative histological analysis for new bone tissue and immunohistochemical markers in sedentary and exercised animals. Rats were divided into four groups: sedentary saline, sedentary LPS, exercise saline and exercise LPS. Exercise consisted in physical training on the treadmill for four weeks. After training, rats underwent surgery for making the bone defect in the right tibia and 24 hours after the surgery LPS was administered at a dose of 100 g/kg or 1 ml/kg saline, intraperitonial. Eventually, blood and right tibias were obtained for analysis after 10 days when rats were not submitted to physical training. Exercised rats had lower body weight than the sedentary rats (P<0,001). The physical exercise had a positive effect on bone repair, increased bone mineral density (P<0,005), bone mineral content (P<0,005), bone formation (P<0,005), type I collagen (P<0,05) and osteocalcin expression (P<0,05). Plasma cytokines were not detected in the analysis. These parameters were not affected by systemic administration of LPS. Thus, our data are consistent with the notion that physical exercise has an important osteogenic effect, which is maintained during acute systemic inflammation induced by exposition to a single dose of LPS.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:10:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:11:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Approved for entry into archive by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-04-23T18:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-23T18:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1221071 bytes, checksum: af5fcfbdfcb431958807ea0716e72ff2 (MD5) Previous issue date: 2017 / O tecido ósseo está em constante remodelação, corrigindo alterações em sua matriz extracelular e mantendo a homeostase local. Quando lesado é capaz de reativar vias ontogenéticas relacionadas ao desenvolvimento ósseo, levando à regeneração tecidual. O desenvolvimento de biomateriais para acelerar o reparo ósseo é essencial para o tratamento de pacientes vítimas de traumas ortopédicos, oncológicos e com doenças congênitas do tecido ósseo. O uso de substâncias que mimetizem sua matriz extracelular, orgânica ou mineral, é uma das modalidades com melhores resultados. O presente estudo teve o objetivo de avaliar a utilização de uma nanopartícula baseada em fosfato contendo estrôncio (NPC-Sr) como estratégia para potencializar a regeneração óssea, isoladamente ou associada ao ácido hialurônico (HY). Para avaliar os efeitos do HY, NPC-Sr e da associação HY+NPC-Sr, foi utilizado modelo de falha óssea não-crítica em tíbia de ratos. Os animais foram separados em quatro grupos: (i) ratos controle/carbopol; (ii) ratos tratados com HY (1%); (iii) ratos tratados com NPC-Sr (0,5 mg/mL) e (iv) ratos tratados com HY+NPC-Sr. Após criar a falha óssea com uso de broca helicoidal, o tratamento foi administrado no local da lesão. No sétimo dia do experimento, os animais foram sacrificados e as tíbias processadas para avaliação histológica e morfométrica com quantificação da porcentagem de trabéculas ósseas. A avaliação morfométrica demonstrou que o tratamento com HY (21,8 ± 2,7%), NPC-Sr (20,4 ± 5,5%) ou HY+NPC-Sr (19,7 ± 3,7) foram capazes de acelerar o processo de reparo ósseo quando comparados ao grupo controle (13,5 ± 2,2%). A análise histológica demonstrou um aumento na formação trabecular nos animais tratados com os materiais, assim como uma maior maturidade do tecido ósseo neoformado. Em ambas as análises, não houve diferença significativa entre os três tratamentos. Com os resultados encontrados podemos concluir que o HY e as NPC-Sr possuem capacidade de acelerar o reparo ósseo em defeitos não-críticos em tíbias de ratos e que a associação dos dois compostos não possui efeito somatório ou deletério. / Bones are constantly been remodeling to repair damages in their extracellular matrix and to maintain local homeostasis. This tissue is able to reactivate ontogenetic pathways related to bone development when it is injured, leading to tissue regeneration. The development of biomaterials able to enhance bone repair is essential for the treatment of patients suffering from orthopedic, oncological and congenital bone diseases. The use of compounds that mimic their organic and mineral extracellular matrix is one of the actual strategies with better results. The aim of this study was to evaluate the use of a phosphate-based nanoparticle (NPC) alone or associated with hyaluronic acid (HY) as a strategy to potentiate bone regeneration. Thus, to evaluate the effects of HY, NPC-Sr and HY+NPC-Sr, a non- critical bone defect model in tibia of rats was used. The animals were separated into four groups: (ii) control/carbopol rats; (ii) HY (1%) treated rats; (iii) NPC-Sr (0.5 mg/mL) treated rats; and (iv) HY+NPC-Sr treated rats. After creating the bone defect using a helical drill, the treatment were given at the injury site. On the seventh day of the experiment, the animals were sacrificed and the tibiae were processed for histological and morphometric evaluation with quantification of the percentage of bone trabeculae. The morphometric analysis showed that treatment with HY (21.8 ± 2.7%), NPC-Sr (20.4 ± 5.5%) or HY+NPC-Sr (19.7 ± 3.7) accelerated the bone repair process when compared to the control group (13.5 ± 2.2%). The histological analysis confirmed this increase in the trabecular formation, as well as the greater maturity of the formed bone tissue in all tested groups. In both analyzes, no significant differences were observed among the three treatments. Thus, we conclude that HY and NPC-Sr have the ability to accelerate the bone repair in non-critical defects in rat tibia and that the association of these two compounds has no additional or deleterious effects / Cpf não encontrado, sem título em inglês

Submitted by GUSTAVO ANTONIO CORRÊA MOMESSO null (gustavomomesso@gmail.com) on 2017-03-15T15:05:39Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Versão biblioteca.pdf: 2891656 bytes, checksum: 32d00fa843678a5c11f3d22ccb35adc1 (MD5) / Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: No campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” foi informado que seria disponibilizado o texto completo porém no campo “Data para a disponibilização do texto completo” foi informado que o texto completo deverá ser disponibilizado apenas 12 meses após a defesa. Caso opte pela disponibilização do texto completo apenas 12 meses após a defesa selecione no campo “Versão a ser disponibilizada online imediatamente” a opção “Texto parcial”. Esta opção é utilizada caso você tenha planos de publicar seu trabalho em periódicos científicos ou em formato de livro, por exemplo e fará com que apenas as páginas pré-textuais, introdução, considerações e referências sejam disponibilizadas. Se optar por disponibilizar o texto completo de seu trabalho imediatamente selecione no campo “Data para a disponibilização do texto completo” a opção “Não se aplica (texto completo)”. Isso fará com que seu trabalho seja disponibilizado na íntegra no Repositório Institucional UNESP. Por favor, corrija esta informação realizando uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-03-21T14:47:27Z (GMT) / Submitted by GUSTAVO ANTONIO CORRÊA MOMESSO null (gustavomomesso@gmail.com) on 2017-03-21T17:21:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Repositório.pdf: 949450 bytes, checksum: 0d220f70d1f6277001ec516a5ce5f739 (MD5) / Rejected by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão do trabalho submetida ao Repositório Institucional UNESP deve conter o texto completo. A equipe do Repositório se encarregará de disponibilizar apenas o conteúdo parcial que segundo a Portaria UNESP 396 de 10 de setembro de 2015 consiste em: Artigo 3º V - conteúdo parcial: as páginas pré-textuais (a folha de rosto, a dedicatória, os agradecimentos, a epígrafe, o resumo na língua vernácula, o resumo em língua estrangeira, as listas de ilustrações, de tabelas, de abreviaturas, de siglas e de símbolos e o sumário), a introdução, a conclusão ou as considerações finais e as referências do trabalho. Lembrando que: é necessário informar no formulário de submissão que a versão do trabalho a ser disponibilizada deve ser a parcial e indicar em quanto tempo a versão integral deverá ser disponibilizada, ao atingir a data limite o sistema automaticamente disponibilizará a versão completa do trabalho. Caso necessite prorrogar o prazo para disponibilização do texto completo, de acordo com o artigo 6º da Portaria UNESP 396: A data para a disponibilização do conteúdo integral poderá ser prorrogada por até mais 2 (dois) anos mediante a apresentação, via ofício, de justificativa pelo Autor ao programa de pós-graduação com no mínimo 90 (noventa) dias de antecedência à data informada para a disponibilização do conteúdo integral. Agradecemos a compreensão. on 2017-03-22T17:03:50Z (GMT) / Submitted by GUSTAVO ANTONIO CORRÊA MOMESSO null (gustavomomesso@gmail.com) on 2017-03-22T22:34:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Versão biblioteca.docx: 11818513 bytes, checksum: c0bb0978539470ada8673b5bac6aeeb6 (MD5) / Rejected by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: A versão final da dissertação/tese deve ser submetida no formato PDF (Portable Document Format). O arquivo PDF não deve estar protegido e a dissertação/tese deve estar em um único arquivo, inclusive os apêndices e anexos, se houver. Por favor, corrija o formato do arquivo e realize uma nova submissão. Agradecemos a compreensão. on 2017-03-24T13:21:06Z (GMT) / Submitted by GUSTAVO ANTONIO CORRÊA MOMESSO null (gustavomomesso@gmail.com) on 2017-03-27T01:31:21Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Versão biblioteca.pdf: 2891656 bytes, checksum: 32d00fa843678a5c11f3d22ccb35adc1 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-03-29T17:17:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 momesso_gac_me_araca_par.pdf: 1050018 bytes, checksum: 78037bbf9643a0ef8536ce47feab0f3d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T17:17:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 momesso_gac_me_araca_par.pdf: 1050018 bytes, checksum: 78037bbf9643a0ef8536ce47feab0f3d (MD5) Previous issue date: 2017-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo objetivou avaliar o reparo ósseo alveolar em ratas osteopênicas tratadas com ranelato de estrôncio. Trinta e três ratas fêmeas com 3 meses de idade foram selecionadas e divididas em 3 grupos experimentais: OVX (animais submetidos à ovariectomia sem tratamento medicamentoso); SHAM (animais submetidos à cirurgia fictícia sem tratamento medicamentoso) e OVX-RE (animais submetidos à ovariectomia e tratados com ranelato de estrôncio). Inicialmente, os animais foram submetidos à cirurgia de ovariectomia bilateral para indução de condição osteopênica. O tratamento medicamentoso iniciou 30 dias após o procedimento cirúrgico com duração até o momento de eutanásia. Trinta dias após o início do tratamento, foi realizado a extração do incisivo superior direito dos animais para posterior avaliação do reparo alveolar. Os animais do grupo descalcificado foram submetidos à eutanásia aos 14 dias após a extração dentária, sendo as amostradas destinadas às análises histológica e imunoistoquímica. Os animais do grupo calcificado foram submetidos à eutanásia aos 60 dias após a extração dentária, sendo as amostras destinadas às análises por microscopia confocal e microtomográfica. Os resultados histológicos evidenciaram que o grupo OVX-RE demonstrou melhor aspecto de neoformação óssea, com trabéculas mais espessas e baixa presença de tecido conjuntivo, comaprado ao grupo OVX. Os resultados imunoistoquímicos demonstraram intensa marcação de OPG para o grupo OVX-RE e intensa marcação de RANKL para o grupo OVX. Já a análise por microscopia confocal evidenciou que o grupo OVX-RE obteve quantidade significativamente maior de marcação para vermelho de alizarina comaprado aos outros dois grupos (Tukey test – P < 0,05). Em relação aos parâmetros microtomográficos, foi possivel observar maiores valores de BV/TV (Tukey test – P > 0.05) e Tb.Th (Tukey test – P < 0.05) e menores valores de Tb.Sp, Po.Tot e Tb.N (Tukey test –P > 0.05) para o grupo OVX-RE. Sendo assim, é possível concluir que o ranelato de estrôncio melhora os aspectos microscópicos e morfológicos do reparo ósseo alveolar em ratas osteopênicas. / This study aimed evaluate alveolar bone healing in osteopenic rats treated with strontium ranelate. Thirty-three three months’s old female rats were selected and diveded into three groups: OVX (animals underwent to ovariectomy with no drug treatment); SHAM (animals underwent to fake surgery with no drug treatment) and OVXSR (animals underwent to ovariectomy treated with strontium ranelate). Firstly, animals undewent to bilateral ovariectomy to induce osteopenic condition. Drug treatment started at 30 days after, during the all experimental period. Thirty days after, it was performed extraction of the right upper incisor tooth, to further evaluation of alveolar healing. Animals from decalcified group were euthanized at 14 days after tooth extraction, and its samples were destinated to histological and immunohistochemestry analysis. Animals from calcified group were euthanized at 60 days and its samples were destinated to confocal microscopy and micro-tomography analysis. Histological results showed that OVX-SR group had the better aspect of new bone formation, with few number of trabecular bone and poor presence of connective tissue compared to OVX group. Immunohistochemestry results showed an intense labeling of OPG for OVX-SR group and intense labeling of RANKL for OVX group. Regarding confocal microscopy analysis, it was possible observed that OVX-SR group showed a significance greater amount of alizarin precipitation compared to another both groups (Tukey test – P < 0.05). About micro-tomographic parameters, OVX-SR group showed high values for BV/TV (Tukey test – P > 0.05) and Tb.Th (Tukey test – P < 0.05) and lower valus for Tb.Sp, Po.Tot and Tb.N (Tukey test –P > 0.05). It was concluded that strontium ranelate improves microscopy and morphologic aspects on alveolar bone healing of osteopenic rats. / FAPESP: 2015/08456-9