The theoretical part of the thesis deals with the chemical composition of cow’s milk, with the description of chosen methods of sample pretreatment and with the description of the used technique ICP-OES. The practical part is aimed at individual preparations of samples and at analysis of chosen chemical elements (Ca, Na, K and Mg). Milk is a really complicated polydisperse system, that’s the reason why the preparation of samples with milk is very important step before the measurement itself. In addition to accuracy choosing the sample adjustment method, other factors such as time, work intensity, or cost need to be considered when. In the thesis a comparison of four selected methods of sample preparation was made: direct analyse of milk, dilution with addition of Triton X-100, wet microwave ashing and destruction of matrix with TMAH (tetramethylammonium hydroxide). Selected elements were analysed with the help of ICP-OES. This diploma thesis builds on the bachelor thesis, which deals with the same problem. Final concentrations were compared with certified values of skimmed powdered milk. Data showed that the most accurate are methods of preparation of wet microwave ashing and destruction of matrix with TMAH. By using these methods, the effect of the dairy matrix that caused problems in the analysis, was largely eliminated. The diluted samples with and without Triton X-100 showed a bigger anomaly of measuring than the mineralization of wet ashing which came to the loss of analyte because of fat elements contained in milk.

Introdução: Com o crescente aumento de hipersensibilidades alimentares e doenças do trato gastrintestinal, o mercado de lácteos vem ampliando a variedade de produtos com diferentes matrizes alimentares. A expansão da criação bubalina no país incentivou o desenvolvimento de produtos derivados do leite bubalino, os quais contém propriedades nutricionais e físico-químicas diferentes da matriz bovina, ganhando maior participação no atual mercado consumidor. As bactérias probióticas são capazes de modular a resposta imune inata e adaptativa de acordo com a cepa, matriz e tecnologia empregada no desenvolvimento do produto. Assim como a modulação imune também pode ser alterada de maneira epigenética por interferência da matriz alimentar empregada. Método: Sendo os microRNAs de leite e leite bubalino homólogos aos do leite humano, foram preparados leites fermentados em matriz bovina e bubalina usando a cepa Bifidobacterium animalis subsp. lactis HN019 com o intuito de identificar a diferença entre o perfil físco-químico, viabilidade da cepa probiótica utilizada, e presença de microRNAs imunomoduladores homólogos com o intuito de verificar se as modificações sofridas nas matrizes bovina e bubalina durante o processo de fermentação por bactérias probióticas teria interferência na presença de miRNAs imunomoduladores e na resposta imune de mucosa. Conclusão: Os resultados obtidos mostraram maior teor de proteínas, sólidos totais e gordura na matriz bubalina em relação a matriz bovina. Enquanto na matriz bubalina fermentada apresentou maior teor de ácidos graxos comparado a matriz bovina fermentada, o perfil de acidificação e pós acidificação foi semelhante em ambas as matrizes. O processo de fermentação em matrizes lácteas distintas, proporcionou modificação do perfil celular imunológico na mucosa intestinal, porém levou a destruição dos miRNAs do processamento térmico, identificando que esta modificação da resposta imune independe dos microRNAs homólogos estudados. / Introduction: With the increasing increase of food hypersensitivity and diseases of the gastrointestinal tract, the dairy market has been increasing the variety of products with different food matrices. The expansion of buffalo breeding in the country encouraged the development of products derived from buffalo milk, which contain different nutritional and physicochemical properties of the bovine matrix, gaining greater participation in the current consumer market. Probiotic bacteria are able to modulate the innate and adaptive immune response according to the strain, matrix and technology employed in product development. Just as immune modulation can also be altered epigenetically by interference of the food matrix employed. Method: Since the microRNAs of milk and buffalo milk were homologous to those of human milk, fermented milks were prepared in bovine matrix and buffalo using the strain Bifidobacterium animalis subsp. Lactis HN019 in order to identify the difference between the physico-chemical profile, viability of the probiotic strain used, and the presence of homologous immunomodulatory microRNAs in order to verify if the modifications suffered in the bovine and buffalo matrices during the fermentation process by probiotic bacteria would interfere with the presence of immunomodulatory miRNAs and the mucosal immune response. Conclusion: The results showed higher protein content, total solids and fat in the buffalo matrix in relation to the bovine matrix. While in the fermented buffalo matrix presented higher content of fatty acids compared to fermented bovine matrix, the profile of acidification and post acidification was similar in both matrices. The fermentation process in distinct milk matrices provided a modification of the immunological cell profile in the intestinal mucosa but led to the destruction of the miRNAs of the thermal processing, identifying that this modification of the immune response is independent of the homologous microRNAs studied.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2015-02-26T14:26:31Z No. of bitstreams: 2 Tese - Gizelda de Siqueira Pedrosa Cardoso - 2014.pdf: 1778576 bytes, checksum: 2498b64eac789a9f7c7e2270a4e23dd0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-03-02T11:38:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Gizelda de Siqueira Pedrosa Cardoso - 2014.pdf: 1778576 bytes, checksum: 2498b64eac789a9f7c7e2270a4e23dd0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-02T11:38:36Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Gizelda de Siqueira Pedrosa Cardoso - 2014.pdf: 1778576 bytes, checksum: 2498b64eac789a9f7c7e2270a4e23dd0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-10-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Milkagroindustrial sector is one of the largest agribusiness systems in the world. Brazil is traditionally a large producer of this noble food and even whey along with the production of cheese. This study aimed to evaluate the physical, chemical and microbiological composition of milk and milk whey, as well as, fresh and mozzarella cheeses stored under different temperature conditions. The experiment was conducted during two different periods of the year 2013. We carried out physico-chemical and microbiological analyzes in milk, and pH measurements, determination of titratable acidity, protein content, electrophoretic profile and microbiological analyzes in milk whey, after 21 days of storage at temperatures at 4±1 ºC and 8±1 ºC. Data were compared using intervals of 95% confidence, built in each time, from the Student t variable, and the analyzes performed using the R version of 3.0.3 software. The results of physical-chemical analysis of milk samples analyzed indicated rates at odds with current legislation. In microbial count, both milk and milk whey studied presented values of non-compliance with legislation. Throughout the storage period, only the whey of fresh cheese, stored at 4±1 ºC showed compliance with the rules for pH and titratable acidity. The average levels of total protein in the whey of cheeses studied at temperatures of 4±1 ºC and 8±1 ºC were in accordance with the rules and, regardless of the type of cheese, no significant differences in protein (p > 0.05 ), was verified throughout the observation period. The electrophoretic profile of milk whey allows observation of a greater concentration in the bands representing up to the seventh day of storage at 09 th to 11th proteins with molecular weights of between 14.4 to 116 kDa in both gels produced. / O setor agroindustrial do leite representa um dos maiores sistemas agroindustriais do mundo. O Brasil é, tradicionalmente, um grande produtor deste nobre alimento e, inclusive de soro lácteo juntamente com a produção de queijo. Objetivou-se avaliar a composição físico-química e microbiológica do leite e dos soros lácteos dos queijos minas frescal e mussarela estocado sob diferentes condições de temperatura. O experimento foi conduzido durante dois períodos distintos do ano de 2013. No leite foram realizadas análises físico-químicas e microbiológicas. Nos soros lácteos, acompanhados por 21 dias de estocagem nas temperaturas de 4±1ºC e 8±1ºC, foram realizadas aferições de pH, determinações da acidez titulável, teor protéico, perfil eletroforético e análises microbiológicas. Os dados foram comparados por meio de intervalos de 95% de confiança, construídos, em cada tempo, a partir da variável t-Student, e as análises realizadas com o software R versão 3.0.3. Os resultados das análises físico-químicas das amostras dos leites analisados indicaram índices em desacordo com a legislação vigente. Na contagem microbiana, tanto o leite como os soros lácteos estudados apresentaram valores de não conformidade com a legislação. Durante todo o período de estocagem, somente o soro do queijo minas frescal, armazenado a 4±1 ºC apresentou conformidade com a legislação para o pH e acidez titulável. Os teores médios de proteína total nos soros dos queijos pesquisados, nas temperaturas de 4±1 ºC e 8±1 ºC apresentaram-se em acordo com a legislação e, independente do tipo de queijo, não apresentaram diferenças significativas de proteínas (p> 0,05), ao longo do período de observação. O perfil eletroforético dos soros lácteos permitiu a observação de uma concentração mais acentuada nas bandas representativas de até o sétimo dia de armazenamento com 09 a 11 proteínas com pesos moleculares entre 14,4 a 116 kDa, em ambos os géis produzidos.

Milk is one of the most consumed fresh food, considered a nutritionally complete product. Veterinary drugs are used in order to increase productivity. However, improper use of these products may result in the presence of residues in milk. This study aims to develop a method for determination of antiparasitic residues in bovine milk using fast liquid-liquid low temperature partitioning (LLE-LTP) method and liquid chromatographic coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). Different classes were studied for antiparasitic, such as macrocyclic lactones, pyrethroids, benzimidazoles, organophosphates, carbamates, among others. The spikes were held comprising the Maximum Residue Limits (MRLs) of each compound at levels 1- 200 ug L-1. For validation step was adopted the following parameters: selectivity, linear range, matrix effect, limits of detection (LOD) and quantitation (LOQ), decision limit (CCα) and detection capability (CCβ), precision, accuracy. The method was considered valid to 55 antiparasitic and presented LOD from 0.03 to 6.0 μg L-1 and LOQ from 1 to 20 ug L-1. Recoveries were between 70 and 120% with RSD ≤ 20%, that were considered acceptable. The proposed method was applied to 15 real samples where all samples presented residues of at least one antiparasitic. Of these, two samples contained cyhalothrin and nicarbazin residues above the MRL. However, the method was efficient in determining antiparasitic residues in bovine milk using LLE-LTP and LCMS/ MS, showing good sensitivity and selectivity. / O leite é um dos alimentos in natura mais consumidos, por ser considerado um produto completo nutricionalmente. A fim de tratar e assegurar a sanidade do rebanho, faz-se uso de medicamentos veterinários. No entanto, a utilização inadequada destes produtos pode acarretar na presença de resíduos destes no leite. Este estudo tem como objetivo desenvolver um método para determinação de resíduos de antiparasitários em leite bovino, empregando método extração líquido-líquido com rápida partição a baixa temperatura (LLELTP) e cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas em série (LC–MS/MS). Avaliou-se diferentes classes de antiparasitários, como lactonas macrocíclicas, piretróides, benzimidazóis, organofosforados, carbamatos, entre outros. As fortificações foram realizadas abrangendo os Limites Máximos de Resíduos (LMRs) de cada composto, em níveis de 1 a 200 μg L-1. Para a etapa de validação do método avaliou-se os seguintes parâmetros: seletividade, faixa linear, efeito matriz, limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ), limite de decisão (CCα), capacidade de detecção (CCβ), precisão e exatidão. O método foi considerado validado para 55 antiparasitários e apresentou valores de LOD de 0,03 a 6,0 μg L-1 e de LOQ de 1 a 20 μg L-1. As recuperações ficaram entre 70 e 120%, e RSD ≤ 20%, sendo considerados aceitáveis. O método proposto foi aplicado em 14 amostras reais, onde todas apresentaram resíduos de pelo menos um antiparasitário. Destas, duas amostras continham resíduos de cialotrina e nicarbazin acima do LMR. O método mostrou-se eficiente na determinação de resíduos de antiparasitários em leite bovino empregando LLELTP e LC–MS/MS, demonstrando boa sensibilidade e seletividade.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1753652 bytes, checksum: 23724be0973af46287264619b5b0e719 (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / This is a data survey from the main commercial mineral supplements for dairy and beef cattle currently available in the Brazilian market. 307 products have been listed, from eight of the leading companies operating in Brazil. The products have been listed in six categories: ready-to-use for beef cattle ; ready-to-use for dairy cattle ; units to produce beef cattle concentrate ; units to produce dairy cattle concentrate ; premix , which must be added to NaCl; and protein salts n order to evaluate their minerals, vitamins, ionophores, yeast, urea and crude protein composition, and compare the mineral levels with the Brazilian legislation (IN12, 2004). The ready to use products do not fulfill the legal specifications for phosphorus level in all products. The same happens in some "premix" products in 1:1 dilution with NaCl, when indicated for dairy cattle. This mineral level is 64.9 % higher in products to produce dairy cattle concentrate , when compared with the same kind of products for beef cattle. The P average for protein salts category is 28.5 g/kg and in order to meet the legal specifications, the ingestion must be considered. When it comes to micro minerals the premix category does not comply with the specifications in Cu , Mn , Zn and Se in 1:1 dilution for dairy cattle. The ready to use category meets all minerals specifications for dairy cattle but it does not for beef cattle, only part of the mineral range. Dairy cattle products to produce concentrate have higher viimicrominerals levels than those used for beef cattle, and the protein salts have lower levels compensated by higher ingestion. The legislation does not detail all animal categories. This fact is associated with some other factors as the large territory and massive herd make the Brazilian market gather around the conditions to group an extensive range of products. Therefore, the current legislation itself is not able to mold products for each mineral supplements situation that can occur in all Brazilian production systems. / Foi realizado um levantamento de dados dos principais suplementos minerais voltados para a bovinocultura leiteira e de corte disponíveis atualmente no mercado brasileiro. Foram listados 307 produtos, de oito das principais empresas desse segmento no Brasil. Os produtos foram elencados em seis categorias: produtos prontos para utilização para gado de corte ; produtos prontos para utilização em gado leiteiro ; núcleos para fabricação de concentrado para gado de corte , núcleos para fabricação de concentrados para gado leiteiro; premix ou produtos a serem misturados ao NaCl; e proteinados. Objetivou-se agrupar as composições de minerais, vitaminas, ionóforos, levedura, ureia e proteína bruta, bem como comparar os níveis minerais dos produtos com a legislação pertinente (IN 12, 2004). Os níveis de P não atendem às especificações da legislação em todos os produtos prontos para uso. Na categoria premix , a diluição em 1:1 com o NaCl não atende à totalidade dos produtos quando a indicação é para bovinos leiteiros. Para os núcleos de fabricação de concentrado, os níveis desse mineral são 64,9% mais altos nos produtos destinados à pecuária leiteira do que nos produtos para corte. Nos proteinados, a média do P ficou em 28,5 g/kg, e seu atendimento às especificações do MAPA depende do consumo. Os teores de microminerais na categoria premix não atendem às especificações para os microminerais Cu, Mn, Zn e Se em diluição de 1:1 para bovinos de leite. Nos produtos prontos para uso em bovinos leiteiros, os níveis mínimos de micros atendem às vespecificações do MAPA; já nos produtos para bovinos de corte, esses níveis não são atendidos em todos os micros. Os núcleos para rações também possuem médias mais altas nos produtos para leite, em comparação aos de corte, e os proteinados possuem médias baixas fato compensado por maiores consumos. Observou-se que a legislação não discorre detalhadamente sobre todas as categorias de animais e que outros fatores, como grande extensão territorial e rebanho massivo, criaram situações para que o mercado brasileiro reunisse uma gama muito extensa de produtos. Assim, a legislação atual, por si só, não é capaz de moldar os produtos destinados à mineralização bovina para atender a todas as situações que ocorrem nos diversos sistemas de produção brasileiros.

Made available in DSpace on 2015-03-26T14:02:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 425125 bytes, checksum: dda98e31d22621b390e8f374215f6249 (MD5) Previous issue date: 2014-06-30 / Brazil has the largest commercial cattle herd in the world; however, the adoption rate of artificial insemination (AI) in the country is still low. This study aimed to characterize the profile of milk and beef cattle producers of the northwest region of the state of Minas Gerais regarding the use of artificial insemination (AI) and see which are the most relevant factors in the perception of producers in the adoption process of artificial insemination. During the months from January to April 2014, 97 milk and beef cattle producers associated to milk cooperatives of the municipalities of northeastern state of Minas Gerais were interviewed. Of those interviewed farmers, 61.3% did not use artificial insemination. The majority (92.48%) of respondents were male and 48.88% were over 53 years of age, with low schooling, incomplete primary education (28.57%) or complete primary education (25.97%). Among the respondents, 66.67% had over 20 years experience in dairy farming. The average matrix by property was 99 and the average size of properties was 73 hectares (ha). The analysis of the data related to the perception of producers was done by classical methods of analysis of textual content, which included the following steps: pre-analytical, analytical and inferential, all in the presence of three technical assessors. Each information was considered a basic context unit (BCU). The units, divided into thematic groups, gave rise to the categories and subcategories appointed by the a posteriori method. In general, it was found that personal motivation is the main determinant for the adoption of AI and is more linked to positive expectations generated by the phenotype of the animals than to economic factors. The prerequisites for adoption of AI are in the background and, among them, manpower, infrastructure and animal handling are highlighted, followed by social influence, evidenced by entities and persons involved in AI and in the ranchers's daily life. Little emphasis on people management and use of scientific knowledge may have affected the adoption of biotechnology, resulting in low utilization. It is also possible to associate the advanced age of farmers to the resistance to the use of reproductive biotechnologies. / O Brasil possui o maior rebanho comercial de bovinos do mundo, entretanto, a taxa de adoção da inseminação artificial (IA) no País ainda é baixa. Objetivou-se caracterizar o perfil dos bovinocultores de leite da região noroeste do estado de Minas Gerais quanto à utilização da inseminação artificial (IA) e verificar quais são os fatores mais relevantes, na percepção dos produtores, no processo de adoção da inseminação artificial. Durante os meses de janeiro a abril de 2014, foram entrevistados 97 bovinocultores de leite associados a cooperativas de leite dos municípios da região noroeste do estado de Minas Gerais. Do total de produtores entrevistados, 61,3% não utilizavam a inseminação artificial. A maioria (92,48%) dos entrevistados era do sexo masculino e 48,88% possuíam mais de 53 anos de idade, com baixo grau de escolaridade, ensino fundamental incompleto (28,57%) ou fundamental completo (25,97%). Entre os entrevistados, 66,67% possuíam mais de 20 anos de experiência na atividade leiteira. A média de matrizes por propriedade foi de 99 e o tamanho médio das propriedades, 73 hectares (ha). A análise dos dados relacionados à percepção dos produtores foi feita por meio de metodologia clássica de análise de conteúdo textual, que incluiu as seguintes etapas: pré-analítica, analítica e inferencial, todas na presença de três técnicos avaliadores. Cada informação foi considerada uma unidade de contexto elementar (UCE). As unidades, divididas em grupos temáticos, deram origem às categorias e subcategorias, nomeadas pelo método a posteriori. De modo geral, verificou-se que a motivação pessoal é o principal fator determinante da adoção da IA e está mais atrelada aos pontos fortes do uso da biotécnica e às expectativas positivas geradas pelo fenótipo dos animais que a fatores econômicos. Os pré-requisitos para adoção da IA estão em segundo plano e, entre eles, destacam-se a mão de obra, a infraestrutura e o manejo animal, seguidos da influência social, evidenciada pelas entidades e pessoas envolvidas na IA e no cotidiano dos pecuaristas. A pequena ênfase na gestão de pessoas e no uso do conhecimento científico pode ter afetado na adoção da biotécnica, resultando em baixa utilização. Ainda é possível associar a idade avançada dos produtores rurais à resistência ao uso de biotecnologias reprodutivas.

The aim of the study was to evaluate the nutritional value and functional properties of several bovine whey proteins concentrate (WPC35 and WPC80), hydrolysate (WPH) and isolate (WPI), casein was used as control. Physicochemical (chemical composition, essential and non-essential aminoacids, minerals) and biological assays were performed to assess the biological quality of proteins and their metabolic responses. After determination of essential and non-essential amino acids, it was found that all protein sources meet the recommendations of FAO/WHO (2007), with the exception of WPC35, probably due to its reduced protein content. The determination of macro and microelements revealed that proteins from bovine milk can be considered not only a source of essential and non-essential amino acids, but also minerals (Ca, Mg and K). Iodine concentration was about one order of magnitude greater for whey proteins and sodium was found in large quantities in these proteins, which can reach 70% and 59% of DRIs, respectively. The biological assay allowed the monitoring of weight gain, food consumption, feed efficiency ratio (FER) and protein intake of animals, evaluate the quality and the metabolic response of protein sources, and the integrity of certain organs and the morphology of the small intestine animals. These studies revealed that all protein sources are of high nutritional value (except WPC35), but larger beneficial biological effects were observed for WPC80, WPH and WPI. Because of the bitter taste of WPH, microencapsulation was made by spray-drying, which significantly improved the taste of panel test (Triangular Test). Considering the presented results, it is concluded that the WPH offers favorable characteristics for use with ingredient in foods for special purposes and that the microencapsulation process yields a significant improvement in flavor, expanding the possibilities for development of foods purposes added hydrolysed proteins, such as infant formula. Some commercial formulations for infants were evaluated with respect to mineral content indicating that the amount of Ca, K and Zn found were considered out of standard of Brazilian law, while the Cu, Mn and Zn levels were very different from those described in label. / O objetivo do estudo foi avaliar o valor nutricional e propriedades funcionais das proteínas do soro de leite bovino concentrado proteico (WPC35 e WPC80), hidrolisado proteico (WPH) e isolado proteico (WPI), além de uma proteína do leite bovino, a caseína, utilizada como controle. Para tanto, foram realizados ensaios físico-químicos (composição centesimal, aminoácidos essenciais e não-essenciais, minerais) e biológicos para avaliar a qualidade proteica e a resposta metabólica das fontes proteicas. Após determinação de aminoácidos essenciais e não-essenciais, foi verificado que todas as fontes proteicas atendem as recomendações estabelecidas pela FAO/WHO (2007), com exceção do WPC35 provavelmente em função do teor reduzido de proteínas. A determinação de macro e microelementos revelaram que as proteínas do leite bovino podem ser consideradas não apenas uma fonte de aminoácidos essenciais e não-essenciais, mas também de minerais (Ca, Mg e K). Para iodo a concentração foi cerca de uma ordem de magnitude superior para as proteínas do soro do leite e sódio foi encontrado em grande quantidade nas proteínas do soro do leite, podendo atingir até 70% e 59% das DRIs, respectivamente. O ensaio biológico permitiu acompanhar o ganho de peso, consumo alimentar, quociente de eficácia alimentar (QEA) e proteína ingerida dos animais, avaliar a qualidade proteica e a resposta metabólica das fontes proteicas, além da integridade de alguns órgãos e histomorfometria do intestino delgado dos animais. Estes estudos revelaram que todas as fontes proteicas são de alto valor nutricional (com exceção do WPC35), mas que maiores efeitos biológicos benéficos foram observados para WPC80, WPH e WPI. Devido ao sabor amargo do WPH, foi feita a microencapsulação por spray-drying, que melhorou de forma significativa o sabor na análise sensorial (Teste Triangular). Considerando-se os resultados apresentados, conclui-se que, o WPH contempla características favoráveis para ser utilizado com ingrediente em alimentos para fins especiais e que o processo de microencapsulação proporcionou uma melhoria significativa no sabor, ampliando as possibilidades de desenvolvimento de alimentos adicionados de proteínas hidrolisadas, tais como fórmulas infantis. Algumas formulações comerciais para lactentes foram avaliadas com relação ao teor de minerais indicando que a quantidade de Ca, K e Zn encontradas foram consideradas fora dos padrões da legislação brasileira, enquanto que os teores de Cu, Mn e Zn determinados foram muito diferentes daqueles descritos no rótulo.

The diploma thesis is dealing with design of analytical method for determination of caseins in cow‘s milk. Capillary electrophoresis was used as separative method. The developed procedure was verified on real samples. Theoretical part gives basic information about caseins. Their chemical and physical properties, structure, way of manufacturing, usage in food industry and non-food applications are described. There are further some nutritional factors mentioned, whose application in cattle nutrition can affect milk composition, especially milk protein concentration. Literary part contains summary of capillary electrophoresis methods used for casein determination. Experimental part describes used separative system, procedure of casein isolation from milk and casein content in individual milk samples. Separation of milk caseins was performed in an untreated fused-silica capillary with dimensions of 50 um i.d. x 96 cm total length (71 cm effective length). Phosphate buffer (10 mM, pH 2,5) served as the background electrolyte. Casein from milk was obtained by isoelectric precipitation at pH 4,6 after adding 10% acetic acid. Product was washed with acetone to remove fat and dried. Total casein yield was the highest in bio-milk (27,04 g/l), the lowest in skim long-life milk (22,04 g/l). The diploma thesis has arisen on the basis of cooperation of Institute of Food Science and Biotechnology, Faculty of Chemistry, Brno University of Technology and Research Institute for Cattle Breeding, Ltd., Department of Animal Nutrition Physiology in Pohořelice.

The diploma thesis, Determination of the caseins by the capillary electrophoresis, is dealing with a creating of the analytical method for a determination of the caseins in cow‘s milk. The capillary electrophoresis was used as a separative method. The developed procedure was optimalized and verified on standards of the caseins and the real samples. The theoretical part gives an information about the compound of cow's milk, caseins, their usage in the food industry and the non-food technologies. There are mentioned some further nutritional factors, whose application in the cattle nutrition can affect the milk composition. The experimental part describes the procedure of the caseins isolation from milk, the used separative system and the determination of the caseins in the lyophilisated samples of milk. The separation was performed in two untreated fused-silica capillaries. Both of them had the same internal diameter: 50 m. The total length of the first capillary was 96 cm (71 cm of effective length) and of the second used capillary 125 cm (effective length 100 cm) The phosphate buffer (10 mM, pH 2,5) served as a basic electrolyte. The diploma thesis has arisen on the basis of the cooperation of the Institute of Food Science and Biotechnology, the Faculty of Chemistry, Brno University of Technology and the Research Institute for Cattle Breeding, Ltd., Department of Animal Nutrition Physiology in Pohořelice.

Bovine milk-derived extracellular vesicles (EVs) hold promises as oral drug delivery systems. Since EV bioavailability studies are difficult to compare, key factors regarding EV uptake and intestinal permeability remain little understood. This work aims to critically study uptake and transport properties of milk-derived EVs across the intestinal barrier in vitro by standardization approaches. Therefore, uptake properties were directly compared to liposomes in intestinal Caco-2 cells. Reliable staining results were obtained by the choice of three distinct EV labeling sites, while non-specific dye transfer and excess dye removal were carefully controlled. A novel fluorescence correction factor was implemented to account for different labelling efficiencies. Both EV and liposome uptake occurred mainly energy dependent with the neonatal Fc receptor (FcRn) providing an exclusive active pathway for EVs. Confocal microscopy revealed higher internalization of EVs whereas liposomes rather remained attached to the cell surface. Internalization could be improved when changing the liposomal formulation to resemble the EV lipid composition. In a Caco-2/HT29-MTX co-culture liposomes and EVs showed partial mucus penetration. For transport studies across Caco-2 monolayers we further established a standardized protocol considering the distinct requirements for EVs. Especially insert pore sizes were systematically compared with 3 µm inserts found obligatory. Obtained apparent permeability coefficients (Papp) reflecting the transport rate will allow for better comparison of future bioavailability testing.