Orientador : Antônio Emídio Dias Feliciano Silva / Resumo: RESUMO O objetivo deste trabalho foi avaliar a campo a eficiência dos escores visuais de conformação de carcaça, precocidade de terminação e musculosidade (C.P.M.) na predição da precocidade da atividade sexual, em novilhas Nelores. O trabalho foi realizado na Fazenda Santa Rosa, município de Xinguara, sudeste do estado do Pará, latitude 7,10o ao W, longitude 49o ao S. O clima da região é o equatorial superúmido, tipo amazônico com temperaturas médias anuais de 26 o C, umidade relativa do ar = 78% e pluviosidade de 2000 mm/ano. Os animais foram manejados em pastagens de Brachiaria brizantha, em sistema rotacionado, recebendo sal mineralizado ad libitum. Foram utilizadas 283 novilhas, as quais foram avaliadas na desmama (oito meses de idade), quanto ao peso corporal (PESO8), escores visuais de conformação de carcaça (C8), de precocidade de terminação (P8) e de musculosidade (M8). Aos 15 meses de idade, ou seja, no início da estação de monta, as novilhas foram reavaliadas quanto ao peso corporal (PESO15), escores visuais de conformação de carcaça (C15), de precocidade de terminação (P15) e de musculosidade (M15). Ainda, foram realizadas avaliações dos escores reprodutivos: ovário (OVÁRIO), útero (ÚTERO), tamanho (VULVA) e cor da vulva (COR), além de tamanho do corpo: comprimento (COMP), altura (ALTURA) e comprimento do UMBIGO. Foram avaliados ainda o peso (P_MÃE) e ano de nascimento da mãe (ANO), idade à prenhez (IDA_PREN) e parição (IDA_PAR) das novilhas. Houve correlação, de magnitude intermediária (r = 0,27 a 0,40), entre os escores de avaliações visuais de conformação de carcaça, precocidade de terminação e musculosidade aos oito e 15 meses de idade, indicando que estas avaliações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The objective of this work was to evaluate in Nellore heifers raised on pasture the efficiency of visual scores of carcass conformation, the carcass termination and muscular precocity (C.P.M.) to predict the precocious onset of sexual activity. The work was conducted at Santa Rosa farm, Xinguara community, localized on southeast Para state at 7.10o W latitude and 49o S longitude. The climate are Amazonian - equatorial, characterized by median temperature of 26º C, relative humidity = 78% and high rain incidence (2000mm/year). The animals were raised using rotating system and receiving mineral salt ad libitum. The 283 heifers used in this work were evaluated at weaning (eight month of age) for body weight (PESO8), visual scores of carcass conformation (C8), and terminal carcass (P8) and musculature (M8) precocity. At 15 month of age, matting beginning, the heifers were reevaluated for body weight (PESO15), visual score of carcass conformation (C15), and terminal carcass (P15) and musculature (M15) precocity. It was still realized reproductive scores of ovary (OVARIO), uterus (UTERO), the size (VULVA) and color (COR) of external genitalia, beside of body sizes: length (COMP), height (ALTURA) and umbilical length (UMBIGO). It was still considerate the weight (P_MAE) and year of dam birth (ANO), and pregnancy (IDA_PREN) and parturition (IDA_PAR) of the heifers. The statistics showed a median intensity correlation (r = 0.27 to 0.40) between visual scores of carcass conformation, carcass termination and muscular precocity at eight and 15 month of age. These indicate that the two evaluations may be done together or separately, once the measures at eight-month point to those of 15 month of age. However, for a security selection of the animals, it is recommended to use the both evaluations. Considering the reproductive characteristics, only the OVARIO showed a... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Ciro Moraes Barros / Banca: Marcelo Marcondes Senedo / Banca: Marcelo Fábio Gouveia Nogueira / Banca: Cezinande de Meira / Resumo: O objetivo foi avaliar, em vacas Nelore, a influência da fase da onda folicular na qualidade e quantidade dos oócitos recuperados, através da OPU (ovum pick-up), assim como a produção de blastocistos. Todos os animais (n=10) receberam em dia aleatório do ciclo estral um implante auricular de progestágeno (Crestar) e uma aplicação de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Estrogin) com o objetivo de sincronizar a onda folicular. Após sete dias o implante foi retirado e foi aplicada uma dose de 2ml de um análogo da PGF2 (Preloban®). Após de 24 hs as doadoras foram submetidas à aspiração do folículo dominante (AFD) sendo então este momento considerado dia 0. Após a AFD, as doadoras foram submetidos a OPU nos dias 3, 5, 7, e 9 (Grupo D3, D5, D7 e D9) da nova onda folicular. Foram realizadas quatro fases (Fase 1, 2, 3 e 4) onde os animais foram trocados de grupo a cada fase, de forma que cada animal foi submetido aos quatro tratamentos. A cada fase o protocolo era iniciado com dois dias de intervalo entre um grupo e outro, iniciando pelo grupo D9 e na seqüência os grupos D7, D5, D3, desta forma todas as doadoras foram aspiradas no mesmo dia, porém com a onda folicular em dias diferentes. O objetivo deste delineamento foi para que as aspirações fossem efetuadas no mesmo dia, de forma que os oócitos recuperados fossem maturados, fertilizados e cultivados in vitro numa mesma sessão de PIV. Duas hipóteses foram testadas: 1- O número de oócitos viáveis recuperados seria maior na fase inicial da onda folicular (dia 3) ou logo após a divergência folicular (dia 5) do que obtidos em períodos mais tardios da fase de dominância (dias 7 e 9). 2- Os oócitos aspirados no início da onda folicular (dia 3 ou 5) teriam melhor competência e produziriam maior número de blastocistos do que oócitos obtidos no final da onda (dias 7 e 9), pois estes estariam num grau de atresia avançado. Não houve diferença no número... / Abstract: The objective of this experiment was to evaluate in Nelore cows the influence of the moment of the follicular wave in the quality and amount of the recovered oocytes, through the OPU, (ovum pick-up), as well as the production of blastocysts. All the animals (n=10) received in random day of the estrous cycle an auricular progestogen implant (Crestar) and was administered of 2mg of estradiol benzoate (Estrogin) with the objective of synchronizing the follicular wave. After seven days the implant was removed and a dose of 2ml of an analogous of PGF2 was administrated (Preloban®). After 24 hours the donors were submitted later of the dominant follicle aspiration (DFA) being then this moment considered day 0. After DFA the donors were submitted to OPU after on the 3, 5, 7, and 9 days (Groups D3, D5, D7 and D9) of the new follicular wave. Four sessions were accomplished (sessions 1, 2, 3 and 4) where the animals were changed from group to each phase, so that each animal it was submitted to the four treatments. To each phase the protocol was begun with two days of interval among a group and other, beginning for the group D9 and in the sequence the groups D7, D5, D3, this way all of the donors were aspirated in the same day, however with the follicular wave in different days. The objective of this outline was so that the aspirations were made in the same day, so that the recovered oocytes they went maturated, fertilized and development in vitro in a same session of IVP. Two hypotheses were tested: 1 - the number of recovered viable oocytes would be larger numerical in the initial phase of the wave follicular (day 3) or soon after the follicular divergence (day 5) of those obtained in later periods of the dominancy phase (days 7 and 9). 2 - The oocytes aspirated in the beginning of the follicular wave (day 3 or 5) they would be better competent and they would produce larger number of blastocysts than oocytes obtained in the end of the wave ... / Doutor

Orientador: Ciro Moraes de Barros / Banca: Mário Binelli / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: Objetivou-se com o presente estudo avaliar, em vacas Nelore no período pós-parto inicial, se o aumento farmacológico nas concentrações plasmáticas de estradiol no período pré-ovulatório e/ou "priming" de progesterona (P4) precedendo a ovulação, induzida por tratamentos hormonais, seriam capazes de diminuir a liberação de PGF2 induzida pela administração de ocitocina e, conseqüentemente, evitar a lise prematura do corpo lúteo formado após a primeira ovulação. Vacas Nelore lactantes (n = 30) foram divididas aleatoriamente em 3 Grupos: RTB/GPE (n = 10), RTB/GPE/eCG (n = 10) e RTB/GPG/eCG (n = 10). Em estágio aleatório (D-8, 40 a 70 dias pós-parto), os animais do grupo RTB (remoção temporária do bezerro, 48 h antes do início dos tratamentos)/GPE (GnRH - Prostaglandina - Benzoato de Estradiol) receberam 50 g de um análogo do GnRH (lecirelina, IM, Gestran plus ). Sete dias mais tarde (D-1) os animais receberam injeção de um agente luteolítico (250 g de d-cloprostenol, IM, Prolise ) e no dia 0 (D0) foi administrado 1,0 mg de benzoato de estradiol (BE, IM, Estrogin ). No grupo RTB/GPE/eCG os animais, além de serem tratados com o protocolo GPE, receberam 400 UI de eCG (IM, Novormon ), logo após a administração do agente luteolítico (D-1). No grupo RTB/GPG/eCG, os animais foram tratados de acordo com o protocolo RTB/GPE/eCG, exceto que no lugar do BE foi administrada uma segunda dose de GnRH (50 g de lecirelina, IM) no D0. Em todos os animais foram realizados exames ultra-sonográficos dos ovários (Aloka SSD-500, probe de 7,5 MHZ) e coletas sanguíneas nos dias das aplicações hormonais, com a finalidade de classificar os grupos de acordo com a presença ou ausência de altas concentrações de P4 ("priming" de P4) antes da ovulação do folículo dominante. O desafio com ocitocina (OT, 50 UI, IV, Univet )... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of the present study was to evaluate, in early postpartum anestrus of Nelore cows, if the increase of estradiol plasma concentrations in pre-ovulatory period and/or high concentrations of progesterone (P4) preceding ovulation (P4 priming), induced by hormonal treatment, reduces endogenous releasing of PGF2 and, consequently, prevents premature lysis of corpus luteum formed after ovulation. Nelore lactating cows (40 to 70 d postpartum, n = 30), were randomly divided into 3 Groups: GPE (n = 10), GPE/eCG (n = 10) and GPG/eCG (n = 10). At random stage of the estrous cycle (D-8), the animals of GPE group (GnRH - Prostaglandin - Estradiol Benzoate) were treated with a GnRH agonist (50 g lecirelin, IM, Gestran Plus ). Seven days later (D-1) the cows received a luteolytic dose of PGF2a (250 g d-cloprostenol, IM, Prolise ), and on day 0 (D0) 1.0 mg of estradiol benzoate (EB, IM, Estrogin ). Cows from GPE/eCG group received the GPE treatment associated with 400 IU of eCG (IM, Novormon ) on D-1, right after PGF2a administration. The GPG/eCG group was similar to GPE/eCG, except that EB was replaced with a second dose of GnRH (50 g lecirelin, IM). Ovarian ultrasonography were performed (Aloka 500 SSD with a 7.5 MHZ transducer) and blood samples were collected at the days of hormones administration, in order to classify the groups based upon the presence or absence of progesterone (P4 priming), before ovulation. All animals were challenged with oxitocin (OT, 50 IU, IV, Univet ) 6, 9, 12, 15 and 18 days after BE (RTB/GPE and RTB/GPE/eCG groups) or GnRH (RTB/GPG/eCG group) administration and blood samples were collected before and 30 minutes after oxitocin challenge. Moreover, the calves were removed from the cows, during 48 h before the beginning of the treatments. ANOVA was used to estimate the effect of treatment, P4 priming and interactions in the discrete (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Orientador: José Buratini Júnior / Resumo: Estudos recentes indicam o envolvimento do FGF-8 no controle do desenvolvimento folicular. O FGF-8 ativa preferencialmente o FGFR-3c e o FGFR-4, cuja expressão em folículos antrais ainda não foi determinada. No presente estudo, avaliou-se a expressão do FGFR-3c e -4 em células da teca e da granulosa de folículos antrais bovinos. e testou-se a hipótese de que a expressão destes genes é regulada durante o desenvolvimento fo!icular antral bovino. Ovários bovinos foram obtidos em matadouro local, folículos maiores que 5mm foram dissecados e medidos, células da teca e da granulosa foram separadas e o RNA total extraído. As concentrações de estradiol e de progesterona do fluido folicular foram determinadas por radioimunoensaio. Folículos com progesterona acima de 100ng/mL foram considerados atrésicos e excluídos da análise. Os folícu!.os restantes foram agrupados de acordo com a concentração de estradiol como se segue: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20100; e (d) >100ng/mL. Além disso, os folículos foram divididos em três grupos de acordo com o tamanho: (a) 5-7; (b) 8-10 e (c) >10mm. Folículos inteiros entre 2 e 4mm de diâmetro foram incluídos na análise da expressão do FGFR-4. A expressão do FGFR-3c e FGFR-4 foi examinada por RT-PCR semiquantitativo com iniciadores espécie-específicos. O RT-PCR semiquantitativo foi validado pela escolha de números de ciclos de PCR e quantidade de RNA dentro da fase linear da curva de amplificação. A intensidade das bandas foi analisada por densitometria computadorizada. Em células da granulosa, houve correlação positiva entre a expressão do FGFR-3c e a concentração de estradiol no fluido folicular, em sintonia com níveis mais altos de RNAm em grupos com maiores concentrações de estradiol, e também aumentou com o diâmetro folicular. Em células da teca, a expressão do FGFR-3c também foi detectada,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Recent studies indicate the involvement of FGF-8 in the control of follicular development. FGF-8 preferentially activates FGFR-3c and FGFR-4, although the expression of these receptors has not been investigated in bovine antral follicles yet. In the present work, FGFR-3c and -4 gene expression was assessed in theca and granulosa cells from bovine antral follicles and the hypothesis that FGFR-3c and -4 gene expression is regulated during antral follicle development in cattle was tested. Bovine ovaries were obtained at a local abattoir, follicles greater than 5mm in diameter were dissected and measured, granulosa and theca cells were separated, and total RNA extracted. Estradiol and progesterone concentrations were measured in the follicular fluid by RIA. Follicles with progesterone levels above 100ng/mL were considered atretic and excluded from the analysis. Remaining follicles were grouped according to estradiol concentration as follows: (a) <5; (b) 5-20; (c) >20-100; and (d) >100ng/mL. In addition, follicles were divided into three groups according to size: (a) 57; (b) 8-10 and (c) >10mm. Whole follicles at 2-4mm in diameter were included in the analysis of FGFR-4 gene expression. FGFR-3c and FGFR-4 gene expression was examined by semi-quantitative RT-PCR using bovine specific primers. Semiquantitative RT-PCR was validated by choosing number of PCR cycles and amount of RNA within the linear range of the amplification curve. Band intensities were analyzed by computerized densitometry. In granulosa cells, FGFR-3c expression was positively correlated with estradiol concentration in the follicular fluid in agreement with higher mRNA levels in groups with higher estradiol concentrations, and also increased with follicle size. In theca cells, FGFR-3c gene expression was also detected but did not change with follicle size or estradiol concentration. For FGFR-4, gene expression was restrict...(Complete abstract click eletronic access below) / Doutor

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: José Buratini Junior / Banca: Marcelo Fabio Gouveia Nogueira / Banca: Andrey Borges Teixeira / Banca: Maura Elena Ortiz D'Ávila Assumpção / Resumo: Objetivou-se com o presente trabalho avaliar a expressão das isoformas (M1 a M4) do receptor de LH (LHR) em células da granulosa de folículos 8,5 mm de diâmetro obtidos de novilhas cíclicas (grupo NC) ou de vacas superestimuladas (grupo VSE), na raça Nelore. As novilhas cíclicas (n=4) foram submetidas à sincronização da ovulação e em seguida monitoradas por ultra-sonografia transretal, até serem abatidas no terceiro ou quinto dia após a ovulação. As vacas do grupo VSE (n=5) foram submetidas à superestimulação ovariana (protocolo P-36 modificado) e ovariectomizadas 36 horas após a remoção da fonte de progesterona. A expressão das isoformas do LHR (M1 a M4) foram calculadas como valores relativos à expressão do GAPDH. Verificou-se menor expressão do gene do LHR no grupo VSE quando comparado ao grupo NC (6,5±0,35 e 28,96±0,4, respectivamente; Bonferroni, p<0,02). Quando os dados dos grupos NC e VSE foram analisados conjuntamente, obteve-se maior expressão das isoformas M1 (27,22±0,19) e M3 (28,37±0,22) quando comparadas com as isoformas M2 (6,46± 0,38) e M4 (5,05±0,43, Bonferroni, p<0,02). No grupo NC, a expressão do LHR foi mais intensa nos folículos coletados no quinto dia (12 mm de diâmetro, 38,1±0,03) quando comparados aos obtidos no terceiro dia (8,75 mm, 22,6±0,03, Bonferroni, p<0,01) após a ovulação. Estes resultados são indicativos de que o tratamento superestimulatório com Folltropin® em vacas Nelore diminuiu a expressão do LHR nas células da granulosa, aumentou as concentrações intrafoliculares de progesterona, reduziu a razão E2/P4, e que a expressão das isoformas M1 e M3 foi mais abundante do que as M2 e M4 tanto nas novilhas cíclicas quanto nas vacas superestimuladas. / Abstract: The aim of the present work was to evaluate in the Nelore breed the gene expression of LH receptor isoforms (M1 to M4) in granulosa cells of follicles 8.5 mm diameter from cycling heifers (CH) and superestimulated cows (SC). The cycling heifers (n=4) were submitted to synchronization of ovulation and afterwards evaluated by transrectal ultrasonography until the third and fifth days after ovulation, when the animals were slaughtered to obtain the ovaries and follicles. The SC group (n=5) were submitted to ovarian superstimulation (modified Protocol P-36) and ovariectomized 36 hours after removal of progesterone source. The results of the isoforms expression (M1 to M4) were calculated as GAPDH expression. There was a lower expression of LH receptor gene in SC group as compared to CH group (6.50±0.35 and 28.96±0.40, respectively, Bonferroni, p<0.02). When data of both groups were analyzed together, there was a higher expression of M1 (27.22±0.19) and M3 (28.37±0.22) isoforms when compared to M2 (6.46± 0.38) and M4 (5.05±0.43, Bonferroni, p<0.02). In CH group, LHR expression was more intense in follicles obtained in the fifth day (12 mm diameter, 38.1±0.03) when compared to those obtained on third day (8.75 mm, 22.6±0.03, Bonferroni, p<0.01) after ovulation. The results indicated that superstimulatory treatment with FSH in Nelore cows decreased LH receptor expression in granulosa cells, it increased the concentrations progesterone intrafolliculares, it reduced the reason E2/P4, and that M1 and M3 isoforms expression were more abundant than M2 and M4 in both cycling and superstimulated animals. / Doutor

Orientador: Ciro Moraes Barros / Banca: Roberto Sartori Filho / Banca: Ronaldo Luiz Ereno / Resumo: Objetivou-se com o presente trabalho verificar em doadoras da raça Nelore, o uso de pLH em substituição à eCG, no último dia do tratamento superestimulatório P-36. Vinte e cinco vacas foram distribuídas em 4 grupos: P- 36 (controle), P-36/eCG, P-36/LH2 e P-36/LH4. Todos os animais receberam os quatro tratamentos superovulatórios de forma alternada ("cross-over"). Em dia aleatório do ciclo estral (D0), as doadoras receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,0 g de progesterona (DIV) e benzoato de estradiol (2 mg, via IM). No grupo controle, os animais foram superestimulados com pFSH (via IM, dose total = 133 mg) duas vezes ao dia em doses decrescentes do D5 ao D8, enquanto que no grupo P-36/eCG, P-36/LH2 e P-36/LH4 as duas últimas doses de FSH foram substituídas por eCG (totalizando 400 UI via IM) ou pLH (totalizando 2 mg e 4 mg, via IM), respectivamente. Todas as vacas foram tratadas com d-cloprostenol (150 μg, via IM) no dia 7, e o DIV foi removido 36 h após a administração do análogo da prostaglandina F2a. No dia 9, a ovulação foi induzida com 12,5 mg de pLH (via IM,) e as doadoras foram inseminadas em tempo fixo 12 e 24 h após a aplicação de pLH. A coleta de embriões foi realizada no dia 16. Os dados foram analisados por ANOVA considerando vaca como efeito aleatório (Proc Mixed do SAS), após transformação da variável resposta quando necessário. Observou-se diferença no número de CL quando comparado o grupo eCG (19,2±2,4) com os grupos LH2 (12,7±2,0) e LH4 (12,3±1,5; p<0,05). Além disso, a taxa de ovulação tendeu a ser menor quando comparados os grupos LH2 e eCG (50,6 e 67,8%, respectivamente; p=0,06). Entretanto, não houve diferença significativa (p>0,05) no número de embriões viáveis entre os grupos P-36 (3,3±0,7), P-36/eCG (4,5±0,5), P-36/LH2 (3,7±0,8) e P-36/LH4 (4,2±1,0). Conclui-se que a substituição de eCG por pLH no último ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objective of this study was to evaluate the use of pLH in replacement of eCG on the last day of P-36 superstimulatory treatment in Nelore donors. Twenty-five Nelore cows were randomly allocated in four groups: P-36 (Control), P-36/eCG, P-36/LH2, and P-36/LH4. All animals underwent four treatments in a crossover design. At a random stage of the estrous cycle (D0), donors received an intravaginal device (IVD) containing 1.0 g of progesterone and estradiol benzoate (2.0 mg, i.m.). Control group cows were superestimulated with decreasing doses of pFSH (133 mg, i.m.). In P-36/eCG, P-36/LH2 and P-36/LH4 the last two doses of pFSH were replaced by 2 doses of eCG (200 IU each dose, i.m.) or pLH, (1 and 2 mg each dose, i.m) respectively. All animals were treated with PGF2a (150 μg d-cloprostenol) on D7, and the IVD was removed after 36 h. Ovulation was induced with 12.5 mg of pLH (i.m.) on D9 and all animals received fixed-time artificial insemination (FTAI) 12 and 24 h after pLH. Embryo flushing was performed on D16. Data were analyzed by ANOVA (Proc Mixed, SAS). There was a significant difference in the number of CL in eCG group (19.2±2.4) when compared to LH2 (12.7±2.0) and LH4 groups (12.3±1.5; p<0.05). Morover, there was a tendency of lower ovulation rate in LH2 when compared to eCG group (50.6 and 67.8%, respectively; p=0.06). However there was no difference in viable embryo yield among groups P-36 (3.3±0.7), P- 36/eCG (4.5±0.5), P-36/LH2 (3.7±0.8) and P-36/LH4 (4.2±1.0); P>0.05. In conclusion eCG can be replaced by pLH, in the last day of P-36 protocol, without affecting the production of viable embryos in Nelore cows / Mestre

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-09-18T14:46:21Z No. of bitstreams: 1 2008_RafaelGianellaMondadori.pdf: 5571322 bytes, checksum: 0abb914927b73636e03ad52aba0bff72 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2010-06-28T13:47:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_RafaelGianellaMondadori.pdf: 5571322 bytes, checksum: 0abb914927b73636e03ad52aba0bff72 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-28T13:47:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_RafaelGianellaMondadori.pdf: 5571322 bytes, checksum: 0abb914927b73636e03ad52aba0bff72 (MD5) Previous issue date: 2008-06 / Os bubalinos apresentam grande potencial para serem utilizados tanto em propriedades com baixa como alta aplicação de tecnologia de produção, por ser uma espécie rústica e que produz principalmente leite com alto valor de mercado. Porém, devido às características inerentes a espécie, a aplicação de biotécnicas da reprodução que visam multiplicar animais de alto valor genético não tem demonstrado bons resultados. Assim sendo, o presente trabalho visou conhecer as características ultra-estruturais do desenvolvimento do gameta feminino da espécie. Para isto foram utilizados ovários e complexos cumulus-oócito (CCOs) de búfalas, devidamente processados para microscopia eletrônica de transmissão e microscopia óptica. Foi observado que os gametas e folículos pré-antrais dos bubalinos são menores que os bovinos e possuem conteúdo lipídico (que se acumula gradativamente) bastante superior a esses. Os bubalinos apresentaram menor número de folículos pré-antrais nos ovários, além disso, houve uma predominância de folículos classificados como primários em detrimento dos primordiais e secundários. Outro fator que pode impactar a aplicação de biotecnologias como a punção folicular, bem como a biosegurança é o fato da zona pelúcida dos oócitos bubalinos ser aparentemente mais frágil e conter mais fendas que a dos bovinos. A maturação citoplasmática dos bubalinos foi caracterizada pela migração de organelas para a região cortical do oócito. Somando-se a essa característica o fato que houve aumento do espaço perivitelínico e a diminuição gradativa do contato entre as células do cumulus oophorus e o oócito conforme a maturação evolui. Por fim, o presente trabalho confirmou que a possível alteração química sofrida pelos lipídeos durante o processo de maturação in vitro ocasiona uma modificação de seu aspecto ultra-estrutural no início do período de maturação. Ressalta-se o fato que também foi comprovado que, com as devidas modificações no sistema de produção in vitro de embriões, é possível obter-se embriões viáveis de búfalas, mesmo na contra estação. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The rusticity and milk production with high market value make possible to Buffalos be bred in low or highly technified production system. On the other way, some species’ inherent characteristics make difficult to apply reproductive biotechniques to multiply animals (mainly females) with high genetic potential. Considering this, the present research established the ultrastructural characteristics of female gamete development. To achieve the objective, buffalo cumulus-oocyte complexes (COCs) and ovaries were properly processed to light and transmission electron microscopy. The buffalo oocyte and preantral follicles were smaller than bovine ones and have higher lipid content (progressive accumulation). The specie also shows a lower number of preantral follicles in the ovaries, as well as, the number of primary is superior to primordial and secondary follicles. Other described factors which affects the application of ovum pick-up technique, other than the biosecurity, is the apparently fragile aspect of zona pellucida and the presence of fissures in its surface. Buffalo oocyte cytoplasmic maturation was characterized by organelle migration to cortical region. In addition, as the maturation progress, the perivetilline space increased in size and it is possible to observe a progressive reduction on granulosa cells and oocyte connections. In conclusion, the present research confirmed that the chemical modifications possibly suffered by oocyte lipids during in vitro maturation period, cause an alteration in its ultrastructural aspect. It is also important to note that is possible, with some modifications on in vitro embryo production systems, to produce buffalo embryo in seasonal anoestrous.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-18Bitstream added on 2014-06-13T20:46:12Z : No. of bitstreams: 1 bastos_mr_dr_botfmvz.pdf: 1007626 bytes, checksum: cd4cb60efd15bc4d0f52bde6fbc01ff2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A função ovariana e as concentrações circulantes dos hormônios reprodutivos e metabólicos foram comparadas em vacas Bos taurus e Bos indicus sob as mesmas condições climáticas e nutricionais. Vacas secas das raças Nelore (n=12) e Holandês Preto e Branco (HPB; n=12) foram mantidas em baias individuais, recebendo dieta de manutenção de acordo com o NRC (2000). O ECC e o PC se mantiveram em 3,1±0,1 e 2,8±0,2 (escala de 1 a 5) e 508±17 e 575±20 kg, para Nelore e HPB, respectivamente. Após 21 dias de adaptação, o estro foi sincronizado e os animais monitorados diariamente durante um intervalo ovulatório, através de ultrassonografia ovariana, usando um transdutor linear de 7,5 MHz. Durante a primeira onda folicular, os exames ultrassonográficos foram realizados duas vezes ao dia. Amostras de sangue foram colhidas uma vez ao dia para dosagens hormonais. Os resultados foram analisados pelo procedimento Mixed do SAS (P<0,05) e apresentados como média dos quadrados mínimos ± EP. Foi observado que 80% das vacas Nelore e 60% das vacas HPB apresentaram três ondas de crescimento folicular durante o ciclo estral. Todas as demais apresentaram duas ondas. O comprimento médio do ciclo estral foi similar entre Nelore e HPB (23 dias; variando de 21 a 26). Foram observadas diferenças substanciais quanto ao número de folículos antrais entre Nelore e HPB. À emergência da onda, o número de folículos de 2 a 5 mm presentes nos ovários foi de 42,7±5,9 para Nelore (variando de 25 a 100) e 19,7±3,2 para HPB (variando de 5 a 40). O desvio folicular ocorreu, em média, 2,3 dias após a ovulação, independente de raça, quando o maior folículo atingiu 7,0±0,2 e 8,9±0,4 mm de diâmetro em Nelore e HPB, respectivamente. O diâmetro máximo do folículo ovulatório (15,7±0,3 vs 13,4±0,3 mm), assim como o volume... / Not available

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-11Bitstream added on 2014-06-13T19:59:05Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_acs_me_botfmvz.pdf: 334076 bytes, checksum: d127d22357b9d6ff54038dd7ce2ceeec (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com o presente trabalho verificar em doadoras da raça Nelore, o uso de pLH em substituição à eCG, no último dia do tratamento superestimulatório P-36. Vinte e cinco vacas foram distribuídas em 4 grupos: P- 36 (controle), P-36/eCG, P-36/LH2 e P-36/LH4. Todos os animais receberam os quatro tratamentos superovulatórios de forma alternada (“cross-over”). Em dia aleatório do ciclo estral (D0), as doadoras receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,0 g de progesterona (DIV) e benzoato de estradiol (2 mg, via IM). No grupo controle, os animais foram superestimulados com pFSH (via IM, dose total = 133 mg) duas vezes ao dia em doses decrescentes do D5 ao D8, enquanto que no grupo P-36/eCG, P-36/LH2 e P-36/LH4 as duas últimas doses de FSH foram substituídas por eCG (totalizando 400 UI via IM) ou pLH (totalizando 2 mg e 4 mg, via IM), respectivamente. Todas as vacas foram tratadas com d-cloprostenol (150 μg, via IM) no dia 7, e o DIV foi removido 36 h após a administração do análogo da prostaglandina F2a. No dia 9, a ovulação foi induzida com 12,5 mg de pLH (via IM,) e as doadoras foram inseminadas em tempo fixo 12 e 24 h após a aplicação de pLH. A coleta de embriões foi realizada no dia 16. Os dados foram analisados por ANOVA considerando vaca como efeito aleatório (Proc Mixed do SAS), após transformação da variável resposta quando necessário. Observou-se diferença no número de CL quando comparado o grupo eCG (19,2±2,4) com os grupos LH2 (12,7±2,0) e LH4 (12,3±1,5; p<0,05). Além disso, a taxa de ovulação tendeu a ser menor quando comparados os grupos LH2 e eCG (50,6 e 67,8%, respectivamente; p=0,06). Entretanto, não houve diferença significativa (p>0,05) no número de embriões viáveis entre os grupos P-36 (3,3±0,7), P-36/eCG (4,5±0,5), P-36/LH2 (3,7±0,8) e P-36/LH4 (4,2±1,0). Conclui-se que a substituição de eCG por pLH no último... / The objective of this study was to evaluate the use of pLH in replacement of eCG on the last day of P-36 superstimulatory treatment in Nelore donors. Twenty-five Nelore cows were randomly allocated in four groups: P-36 (Control), P-36/eCG, P-36/LH2, and P-36/LH4. All animals underwent four treatments in a crossover design. At a random stage of the estrous cycle (D0), donors received an intravaginal device (IVD) containing 1.0 g of progesterone and estradiol benzoate (2.0 mg, i.m.). Control group cows were superestimulated with decreasing doses of pFSH (133 mg, i.m.). In P-36/eCG, P-36/LH2 and P-36/LH4 the last two doses of pFSH were replaced by 2 doses of eCG (200 IU each dose, i.m.) or pLH, (1 and 2 mg each dose, i.m) respectively. All animals were treated with PGF2a (150 μg d-cloprostenol) on D7, and the IVD was removed after 36 h. Ovulation was induced with 12.5 mg of pLH (i.m.) on D9 and all animals received fixed-time artificial insemination (FTAI) 12 and 24 h after pLH. Embryo flushing was performed on D16. Data were analyzed by ANOVA (Proc Mixed, SAS). There was a significant difference in the number of CL in eCG group (19.2±2.4) when compared to LH2 (12.7±2.0) and LH4 groups (12.3±1.5; p<0.05). Morover, there was a tendency of lower ovulation rate in LH2 when compared to eCG group (50.6 and 67.8%, respectively; p=0.06). However there was no difference in viable embryo yield among groups P-36 (3.3±0.7), P- 36/eCG (4.5±0.5), P-36/LH2 (3.7±0.8) and P-36/LH4 (4.2±1.0); P>0.05. In conclusion eCG can be replaced by pLH, in the last day of P-36 protocol, without affecting the production of viable embryos in Nelore cows

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-30Bitstream added on 2014-06-13T19:59:08Z : No. of bitstreams: 1 machado_mf_me_botfmvz.pdf: 479281 bytes, checksum: 19ec0ec3db2b83948f6e0af2012d7f28 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fatores de crescimento fibroblástico têm sido descritos como importantes reguladores locais do desenvolvimento folicular. Recentemente, foi relatada a expressão do FGF-8 e seus receptores, FGFR-3c e -4, em folículos antrais bovinos. O FGF-17 e o FGF-18 pertencem à subfamília do FGF-8 e ativam eficientemente o FGFR-3c e FGFR-4. Objetivando identificar outros FGFs capazes de ativar estes receptores, investigou-se (a) os padrões de expressão do FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos; (b) a regulação da expressão do RNAm do FGF-17 pelo FSH e IGF-1 em células da granulosa; (c) a expressão do RNAm do FGF-17 em oócitos imaturos e maturados in vivo e in vitro, e (d) a expressão das proteínas FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos. Amostras de células da teca e células da granulosa foram obtidas de ovários de vacas de abatedouro e o RNA total destas células foi extraído. As concentrações de estradiol (E2) e progesterona (P4) no fluido folicular foram mensuradas por Radioimunoensaio (RIA) e os folículos agrupados de acordo com a razão E2:P4 intrafoliculares (atrésicos; <0,01, transicionais; 1-0,01 e saudáveis; >1). “Pools” contendo 20 oócitos foram obtidos pela remoção das células do cumulus de complexos cumulus-oócito (CCOs) e o RNA total extraído. A expressão do FGF-17 e do FGF-18 foi investigada por RT-PCR em tempo real e normalizada pela expressão dos controles endógenos GAPDH, CYC-A ou Histona (H2a). Células da granulosa de folículos de 4 a 8 mm foram cultivadas em meio livre de soro fetal e tratadas com FSH (0; 0,1; 1; 10 ou 100 ng/mL) ou IGF-1 (0; 5; 10; 50; 100 ng/mL) para avaliar os efeitos dos tratamentos na expressão do RNAm do FGF-17. A presença das respectivas proteínas foi investigada por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por ANOVA ou testes não-paramétricos quando a distribuição não foi normal.A expressão do RNAm... / Fibroblast growth factors have been described as important local regulators of follicle development. FGF-8 and its receptors, FGFR-3c and FGFR-4, have already been reported in bovine antral follicle. Aiming to identify other FGFs capable to activate this receptors, we assessed (a) the spatial and temporal patterns of FGF-17 and FGF-18 gene expression in bovine antral follicles; (b) FGF-17 mRNA regulation by FSH and IGF-1 in cultured granulosa cells ; (c) FGF-17 mRNA expression in immature oocytes and in vivo and in vitro matured oocytes; and (d) FGF-17 and FGF-18 protein expression in bovine antral follicles. Theca and granulosa cells samples were obtained from abattoir ovaries for total RNA extraction. Estradiol (E2) and progesterone (P4) concentrations were measured by RIA in the follicular fluid. Follicles were grouped according to health status based on the E2:P4 ratio (atretic: <0.01; transitional: 0.01-1; healthy: >1). Pools containing 20 oocytes were obtained by removing cumulus cells of cumulus-oocyte complexes (COCs) and total RNA was extracted. FGF-17 and FGF-18 mRNA expression was examined by semiquantitative real time RT-PCR using GAPDH, CYC-A or histone H2a as controls. Granulosa cells from follicles (4-8 mm) were cultured in serum-free medium supplemented with FSH (0, 0.1, 1, 10, 100 ng/mL) or IGF-1 (0, 5, 10, 50, 100 ng/mL) to assess effects of treatments on FGF-17 mRNA expression. The presence of FGF-17 and FGF-18 proteins was investigated by immunohistochemistry. Data were analized by ANOVA or non-parametric analysis when not normally distributed. FGF-17 mRNA expression was detected predominantly in granulosa cells but also in theca cells, and was higher in atretic follicles. FGF-17 mRNA was also detected in immature oocytes, was reduced in in vivo matured oocytes and absent in in vitro matured oocytes. FSH and IGF-1 inhibited FGF-17 mRNA expression in cultured granulosa... (Complete abstract click electronic access below)