Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós- Graduação em Ciências Médicas, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-09-13T12:55:37Z No. of bitstreams: 1 2013_GustavoBrunoMota.pdf: 1130895 bytes, checksum: bf36e61221f4bf212369de5140a3bbd9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-08T14:25:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_GustavoBrunoMota.pdf: 1130895 bytes, checksum: bf36e61221f4bf212369de5140a3bbd9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-08T14:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_GustavoBrunoMota.pdf: 1130895 bytes, checksum: bf36e61221f4bf212369de5140a3bbd9 (MD5) / A adição de soro nos meios de maturação in vitro (MIV) de complexos cumulus-oócito (CCOs) é pratica comum em laboratórios de pesquisa e comercias. A adição de fatores de crescimento ou hormônios nos meios de MIV tem sido uma alternativa ao uso de soro além de proporcionar um maior conhecimento das necessidades dos gametas em condições in vitro. A insulina é um hormônio anabólico e possui efeitos sinérgicos ao FSH melhorando o Crosstalk células do cumulus-oócito. Objetivou-se neste trabalho avaliar a adição de insulina em doses crescentes em meio Alpha MEM livre de soro contendo FSH, utilizando como parâmetros de avaliação a taxa de maturação nuclear, a quantificação de transcritos associados ao metabolismo, competência oocitária e estresse celular além do desenvolvimento embrionário. Os CCOs selecionados foram distribuídos aleatoriamente entre os cinco tratamentos de MIV: T1 (controle): TCM199 + 10% SFB (TCM); T2: Alpha-MEMB (A-MEM i0); T3: Alpha-MEMB + 1ng/mL insulina (A-MEM i1); T4: Alpha-MEMB + 10ng/mL insulina (A-MEM i10); T5: Alpha-MEMB + 100ng/mL insulina (A-MEM i100). Não houve diferença entre os tratamentos para oócitos encontrados no estágio intermediário (metáfase I à telófase I) ao término da MIV. Porém, o tratamento controle apresentou menor percentual de oócitos imaturos que os demais tratamentos, assim como maior taxa de oócitos em Metáfase II (MII) que os tratamentos A-MEM i0, A-MEM i1, A-MEM i10. O tratamento A-MEM i100 apresentou percentual de oócitos em MII semelhante ao tratamento controle. O RNAm total foi extraído de três pools de oócitos maturados nos tratamentos em meio Alpha MEM (4 tratamentos) e usados para gerar cDNA. A abundância relativa dos transcritos GDF9, GLUT1, PRDX1 e HSP70.1 foi analisada por Real Time-PCR utilizando A-MEMi0 com calibrador. Maior quantidade de transcrito GDF9 foi encontrada em meio A-MEMi0 que os demais tratamentos. Não houve diferença na quantidade relativa do transcrito GLUT1 entre os tratamentos. O transcrito PRDX1 foi menos expresso em A-MEMi10 e A-MEMi100 do que A-MEMi0. HSP70.1 foi menos expresso em oócitos maturados em meio A-MEMi1, A-MEMi10 e A-MEMi100. Na etapa de FIV, CCOs dos 5 tratamentos foram maturados, fertilizados e os possíveis zigotos cultivados in vitro por oito dias. As taxas de clivagem foram obtidas 48h após inicio do cultivo e as taxas de blastocistos oito dias após fecundação. As taxas de clivagem foram semelhantes entre todos os tratamentos. Apenas o meio A- MEMi100 apresentou maior taxa de produção de blastocistos comparado ao meio A-MEMi0. Todas as demais comparações não apresentaram diferença entre si. Em conclusão, a adição de 100ng/mL de insulina em meio Alpha MEM aumenta a produção de embriões. Além disso, a insulina é capaz de diminuir a expressão de transcritos associados ao estresse celular causado em condições de cultivo in vitro. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The addition of serum on in vitro maturation medium (IVM) of cumulus-oocytes complexes (COCs) is common practice in research and commercial laboratories. The addition of growth factors or hormones in IVM media has been an alternative to the use of serum to providing a better understanding of the needs of the gametes on in vitro conditions. Insulin is an anabolic hormone with FSH synergistic effects to improve the crosstalk oocyte-cumulus cells. The objective of this study was to evaluate the addition of insulin in increasing doses in Alpha MEM medium serum free plus FSH, using as evaluation parameters to nuclear maturation rate, quantification of transcripts associated with metabolism, cellular stress and oocyte competence and production of embryos. The COCs were randomly distributed among the five IVM treatments: T1 (control): TCM199 + 10% FCS (TCM), T2: Alpha-MEMB (A-MEM i0), T3: Alpha-MEMB + 1ng/mL insulin ( A-MEMi1), T4: Alpha-MEMB + 10ng/mL insulin (A-MEM i10), T5: Alpha-MEMB + 100ng/ml insulin (A-MEM i100). There was no difference between treatments for oocytes found in the intermediate stage (metaphase I to telophase I) at the end of IVM. However, the control treatment showed the lowest percentage of immature oocytes than the other treatments, as well as higher rate of oocytes in metaphase II (MII) that treatments A-MEM i0, A-MEM i1, A-MEMi10. The A-MEM i100 percentage of MII oocytes was similar to control. Total mRNA was extracted from three pools of oocytes matured in Alpha MEM medium treatments (4 treatments) and used to generate cDNA. The relative abundance of transcripts GDF9, GLUT1, PRDX1 and HSP70.1 was analyzed by Real-Time PCR using A-MEMi0 as calibrator. Greater amount of GDF9 transcript was found in the A-MEMi0 than the other treatments. There was no difference in the relative amount of the transcript GLUT1 between treatments. The PRDX1 transcript was downregulated in A-MEMi10 and A-MEMi100. HSP70.1 was downregulated in oocytes matured in A-MEMi1, A-MEMi10 and MEMi100. In step IVF, COCs were matured of the five treatments. Cleavage rates were obtained 48 hours after the beginning of cultivation and blastocyst rates eight days after fertilization. Cleavage rates were similar among all treatments. The A-MEMi100 showed the highest blastocyst production compared to A-MEMi0. All other comparisons showed no difference. In conclusion, the addition of 100ng/ml insulin in MEM Alpha medium increases the production of embryos, however smaller doses tested did not promote increased. Moreover insulin is able to decrease the expression of transcripts related to cellular stress caused by in vitro culture conditions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-10-10T15:09:37Z No. of bitstreams: 1 2013_LidiadosSantosPereira.pdf: 4102262 bytes, checksum: 9a6e3ff147d2c0bf78c11d8fac8c63b2 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-10T15:35:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_LidiadosSantosPereira.pdf: 4102262 bytes, checksum: 9a6e3ff147d2c0bf78c11d8fac8c63b2 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-10T15:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_LidiadosSantosPereira.pdf: 4102262 bytes, checksum: 9a6e3ff147d2c0bf78c11d8fac8c63b2 (MD5) / A transferência nuclear de células somáticas ou clonagem é um técnica que permite produzir um indivíduo geneticamente igual a um outro indivíduo adulto. Esta técnica abre inúmeras possibilidades para a medicina e para a reprodução animal. Porém, existem inúmeros relatos de problemas associados à clonagem. A taxa de perda nos períodos embrionário e fetal ainda é muito alta quando comparado a outras biotécnicas, além disso, há uma maior incidência de hidropisias e distocias, diminuindo a eficiência e aumentando o custo da técnica. Os animais que vem a termo frequentemente apresentam uma síndrome chamada de macrossomia e apresentam dificuldades de adaptação à vida extrauterina e por isso muitas vezes vem a óbito. No presente trabalho realizou-se necropsia e coleta de fragmentos de órgãos para avaliação histopatológica de 69 bezerros clonados, destes, 28 foram abortados e 41 com óbito neonatal. As principais alterações observadas foram no fígado, rins e pulmões tanto nos animais abortados quanto com óbito neonatal. No fígado, 85% dos animais avaliados apresentaram degeneração hepática. Nos rins identificou-se a presença de um pigmento acastanhado no interior dos túbulos corticais em aproximadamente 90% das amostras avaliadas, a presença deste pigmento não relatada anteriormente em animais clonados. Nos pulmões o achado que mais chamou atenção foi o grande número de animais que apresentaram lesões características de pneumonia (55%). Alterações nestes órgãos foram cruciais para que os animais viessem a óbito. Isto aconteceu, sobretudo devido a problemas na adaptação ao ambiente extrauterino e em decorrência de infecções adquiridas no período neonatal. Os achados encontrados no presente trabalho denotam a necessidade de investigação anatomopatológica detalhada de animais clonados que não foram viáveis, na tentativa de mapear as anormalidades apresentadas por estes animais. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The somatic-cell nuclear transfer or cloning is a technique that allows a donor adult individual to produce another genetically identical individual. This technique opens numerous possibilities for medicine and animal reproduction. However, several reports describe cloning-associated issues. Embryo and fetal loss is still very high when compared to other techniques, furthermore, there is high incidence of dystocia and hydrops, which decreases efficiency and increases costs. Animals that come to term often exhibit a syndrome called macrosomia and have difficulties in adapting to life outside the uterus and death is a common consequence. In this study 69 (28 aborted and 41 neonatal death) cloned bovines were submitted to gross and histopathological examination. The main findings were in the liver, kidneys and lungs from both aborted and neonatal animals. In the liver, 85% of the animals evaluated showed hepatic degeneration. Kidney was identified the presence of a pigment brownish within the cortical tubules in approximately 90% of the samples, the presence of this pigment does not reported previously cloned. In the lungs the finding that more attention was the large number of animals showing lesions characteristic of pneumonia (55%). These changes were crucial for the animals to come to death. This was mainly due to problems in adapting outside the uterus and infections in the neonatal period. Further investigation focusing on anatomic pathology changes are necessary to map the abnormalities in cloned animals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, Departamento de Ciências Biológicas, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-11-13T11:59:08Z No. of bitstreams: 1 2013_SidneyAlcantaraPereira.pdf: 1340037 bytes, checksum: 4a58ba17e732e4c9ca008fa9bb9e3fbb (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-13T13:38:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_SidneyAlcantaraPereira.pdf: 1340037 bytes, checksum: 4a58ba17e732e4c9ca008fa9bb9e3fbb (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-13T13:38:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_SidneyAlcantaraPereira.pdf: 1340037 bytes, checksum: 4a58ba17e732e4c9ca008fa9bb9e3fbb (MD5) / Na tentativa de melhorar os índices da produção in vitro de embriões (PIVE) em bovinos, várias substâncias têm sido utilizadas na maturação in vitro (MIV) e no cultivo in vitro (CIV). A suplementação com a combinação de insulina-transferrina-selênio (ITS) e o ácido ascórbico (AA) têm sido associada com a redução na produção de radicais livres nos meios de cultivo celular, sendo uma alternativa para melhorar os resultados da PIVE. O presente estudo visou testar o efeito da presença do ITS e AA durante a MIV e/ou CIV na quantidade e qualidade de embriões PIVE. Complexos cumulus-ovócitos (COCs) foram obtidos de ovários de abatedouro, sendo que os provenientes de folículos de 1-3mm e 6-8mm foram dissecados da córtex ovariana e os de 3-8mm obtidos por aspiração folicular. Para avaliar os estágios da meiose os ovócitos foram corados com lacmóide, e para avaliar o efeito dos tratamentos na produção de embriões foi avaliada a taxa de clivagem (D2), blastocisto (D7), o tamanho dos embriões com auxílio da câmera Motic Images Plus 3.0 e o número total de células pela coloração HOESCH. Os dados de cinética de maturação, desenvolvimento embrionário, e tamanho dos embriões foram analisados pelo teste do Qui-Quadrado (P<0.05), e a contagem do número de células embrionárias pelo teste de Kruskall-Wallis (P<0.05). Inicialmente foi avaliado o efeito do ITS (0,5μg/ml) durante a MIV, durante o CIV e durante a MIV e o CIV. Todos os tratamentos apresentaram taxa de clivagem, produção de blastocisto e qualidade dos blastocistos semelhante ao grupo controle na ausência de ITS (P>0,05). A suplementação do meio com uma associação do ITS e AA por diferentes períodos (12h e 24h) durante a MIV, mostrou que quando realizada nas 12 últimas horas causa um aumento na produção de blastocistos em D7 (51,6%) quando comparado ao grupo controle (39,5%), e aos grupos expostos nas primeiras 12h (40,2%), e nas 24h (41,1%). Apesar do número de células ter sido maior nos embriões do grupo tratado com ITS e AA nas últimas 12h de MIV (143,2±49,9) em relação aos grupos expostos nas primeiras 12h (122,3±46,1), não diferiu (P>0,05) dos grupos controle (131,9±44,7) e do tratado por 24h (124,3±35,3). A cinética de maturação nuclear foi comparada em ovócitos de diferentes competências obtidos de folículos de 1-3 e 6-8mm de diâmetro, e foi observado que as 24h de maturação todos os ovócitos, independente do grupo, tinham completado a meiose sendo que em torno de 90% encontrava-se em estagio de MII. Então, foi investigado o efeito da presença do ITS associado ao AA nas 12 últimas horas da MIV em ovócitos com diferentes graus de competência. O tratamento não afetou (P<0.05) as taxas de clivagem e blastocisto quando ovócitos provenientes de folículos 1-3mm foram utilizados, sendo respectivamente 49,9% e 4,4% e 51,0% e 14,9% para os tratados e não tratados.Conclui-se que a adição de ITS isoladamente não afetou a produção de embriões, mas quando associado ao AA nas 12 últimas horas de maturação melhorou a quantidade e qualidade dos embriões produzidos. Além disso, o uso de ITS e AA durante a MIV não melhorou a competência de ovócitos provenientes de folículos pequenos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / In attempt to improve bovine in vitro embryos production (IVP), several substances have been used during the in vitro maturation (IVM) and in vitro culture (IVC). Supplementation with a combination of insulin-transferrin-selenium (ITS) and ascorbic acid (AA) have been associated with a reduction in free radicals production in cell culture media, being an alternative to improve the results of IVP. The present study aimed to test the effect of ITS and AA during IVM and / or IVC in the quantity and quality of IVP embryos. Cumulus-oocyte complexes (COCs) were obtained from slaughterhouse ovaries. Which were either recovered from Follicles of 1-3mm and 6-8mm dissected from the ovarian cortex, or from aspiration of 3-8mm follicles. . To evaluate the stages of meiosis oocytes were stained with lacmóide, and to assess the effect of treatments on embryo production cleavage rate (D2), blastocyst rate (D7), size of the embryos using the camera Motic Images Plus 3.0 and the total number of cells staining by HOESCH, were evaluated. Data of maturational kinetics, embryonic development, and size of the embryos were analyzed by chi-square test (P<0.05), and embryonic cells number by Kruskal-Wallis test (P<0.05). Initially we investigated the effect of ITS (0.5 mg/ml) during IVM, IVM and IVC and during IVC. All treatments had similar cleavage rate, blastocyst production and embryo quality to the control group (P<0.05). Medium supplementation with a combination of AA and ITS for different periods (12h and 24h) during IVM, showed that when treatment was performed in last 12 h an increase in production D7 blastocysts (51.6%) was observed whem compared the control (39.5%), first 12h (40.2%) and 24h groups (41.1%). Although the number of cells was higher in the group treated with ITS and AA in the last 12h of IVM (143.2 ± 49.9) than in groups exposed in the first 12h (122.3 ± 46.1), it did not differ (P> 0.05) from the control (131.9 ± 44.7) and treated for 24h group (124.3 ± 35.3). The kinetics of nuclear maturation was compared between oocytes of different competence obtained from follicles of 1-3 and 6-8mm diameter, it was observed that the at 24h of maturation every oocyte, around 90% of the oocytes were in MII stage. Then, we investigated the effect of ITS associated with AA in the last 12 hours of IVM in oocytes with different degrees of competence. Treatment did not affect (P<0.05), the cleavage and blastocyst rate when oocytes from follicles 1-3mm were used, being respectively 49.9% and 4.4% and 51.0% and 14.9% for those treated and untreated. It was concluded that the addition of ITS alone did not affect the production of embryos, but when combined with AA in the last 12 hours of maturation improved quantity and quality of embryos produced. Furthermore, the use of AA and ITS during IVM not improve the competence of oocytes from small follicles.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006Bitstream added on 2014-06-13T18:46:35Z : No. of bitstreams: 1 pyles_escs_dr_botfmvz.pdf: 345793 bytes, checksum: f8cd21a8887d03897e049aa3fce53820 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo vitrificou-se em OPS ovócitos (Experimentos 1, 2 e 3) e embriões bovinos (Experimentos 4, 5 e 6) em três soluções de vitrificação distintas: Experimentos 1 e 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sacarose; Experimentos 2 e 5) 20%DF + 20%EG + 0,5M sacarose; Experimentos 3 e 6) 20%DF + 20%DMSO + 0,5M sacarose. Os embriões foram vitrificados na presença ou não de citocalasina B. Os ovócitos foram vitrificados ou somente expostos aos crioprotetores imaturos (G0h e G0hexp), ou após 6 horas (G6h e G6hexp), 12 horas (G12h e G12hexp) ou 22 horas de MIV (G22h e G22hexp). Após a exposição ou aquecimento, parte dos ovócitos completou as 22 horas de MIV e foi destinada à PIV, para avaliação da capacidade de se desenvolverem até blastocisto. No restante avaliou-se o estágio de maturação nuclear e a distribuição dos grânulos corticais e das mitocôndrias. Observou-se que a exposição dos ovócitos imaturos (0 ou 6 horas de MIV) aos crioprotetores nos experimentos 1, 2 e 3 resultou em perda substancial de viabilidade, avaliada pelas taxas de clivagem (GC=79,4%; 1G0hexp=37,1%; 1G6hexp=51,1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52,5%; 3G0hexp=36,2%; 3G6hexp=49,8%), o que foi menos notável nos ovócitos expostos após 12 ou 22 horas de MIV (1G12hexp=59,1%; 1G22hexp=71,1%; 2G12hexp=61,5%; 2G22hexp=62,5%; 3G12hexp=58,8%; 3G22hexp=68,6%). A realização da MIV antes da vitrificação foi benéfica. Apesar de nenhuma das soluções de crioprotetores ter sido capaz de promover proteção adequada aos ovócitos submetidos à vitrificação em qualquer momento da MIV, no Experimento 1 foi observada clivagem (1G12h=7,3%; 1G22h=4,2%) indicando que a mistura de crioprotetores EG+DMSO foi a mais eficiente nas condições utilizadas. Entretanto, não houve produção de blastocistos em nenhum experimento. Nos Experimentos 4, 5 e 6 notou-se que em todos os grupos... / In this study bovine oocytes (Experiments 1, 2 and 3) and embryos (Experiments 4, 5 and 6) were vitrified in OPS using 3 different cryoprotectant solutions: Experiments 1 and 4) 20%EG + 20%DMSO + 0,5M sucrose; Experiments 2 and 5) 20%DF + 20%EG + 0.5M sucrose; Experiments 3 and 6) 20%DF + 20%DMSO + 0.5M sucrose. Embryos were vitrified in the presence or not of cytocalasin B. Oocytes were vitrified or just exposed to the cryoprotectant solutions after 0h (G0h and G0hexp), 6h of IVM (G6h and G6hexp), 12h of IVM (G12h and G12hexp) and 22h of of in vitro maturation (IVM) (G22h and G22hexp). Oocytes from groups 0 and 6h were considered immature and from 12 and 22h groups were considered mature. After exposure to cryoprotectants or warming, part of the oocytes that completed 22h of IVM were submitted to IVF to evaluate their developmental ability. Another part of the oocytes were used to evaluate nuclear maturation in the distribution of mitochondria and cortical granules. The results showed that the exposure of immature oocytes (0 and 6 hours of MIV) to cryoprotectants reduce their viability, since cleavage rates of all groups were significantly lower compared to control group (GC=79.4%; 1G0hexp=37.1%; 1G6hexp51.1%; 2G0hexp=33%; 2G6hexp=52.5%; 3G0hexp=36.2%; 3G6hexp=49.8%). This effect was less evident in the groups of mature oocytes submitted to IVM for 12 or 22 hours (1G12hexp=59.1%; 1G22hexp=71.1%; 2G12hexp=61.5%; 2G22hexp=62.5%; 3G12hexp=58.8%; 3G22hexp=68.6%). The previous IVM is beneficial to vitrification. Although none of the cryoprotectant solutions utilized were totally efficient in protecting the oocytes form cryodamage, in Experiment 1 cleavage was observed (1G12h=7.3%; 1G22h=4.2%) indicating that the combination of EG+DMSO was more effective than the other two. However in none of the groups blastocyst was formed. When embryos... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-07Bitstream added on 2014-06-13T20:26:16Z : No. of bitstreams: 1 piagentini_m_dr_botfmvz.pdf: 267759 bytes, checksum: c4056ececa2c37d7a0e0df2a9a4aefa2 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve por objetivo comparar a composição bioquímica e as concentrações de testosterona e progesterona no líquido amniótico de fetos bovino da raça Nelore produzidos por fecundação in vivo, fecundação in vivo com transferência de embrião (TE) e produção in vitro (PIV). Os problemas fetais observados ao momento do parto e pós-parto imediato em animais oriundos de PIV e a escassez de pesquisas que determinem a composição do líquido amniótico associada aos três sistemas de produção embrionária permitiram o desenvolvimento deste trabalho. Utilizaram-se 60 animais divididos em: grupo 01 - vacas Nelore gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (IA) (n=20); grupo 02 - receptoras gestando bezerros Nelore provenientes de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional (n=20); grupo 03 - receptoras de embriões gestando bezerros Nelore originados de inovulações de embriões oriundos de doadoras pelo método de aspiração folicular (n=20). No momento do parto, após a visualização das bolsas, colheram-se 15mL de líquido amniótico por punção da bolsa com agulha e seringa adequadas. As amostras foram processadas e analisadas no serviço de laboratório clínico do Departamento de Clínica Veterinária da FMVZ/UNESP de Botucatu-SP e no Laboratório de Endocrinologia do departamento de Reprodução Animal e Radiologia Veterinária. Para análise bioquímica foram utilizados Kits comerciais seguindo a técnica recomendada pelo fabricante. A dosagem hormonal de progesterona (P4) e testosterona (T) foi determinada por meio de radioimunoensaio em fase sólida com a leitura realizada em contador Gama Count Cobra II. Os dados obtidos na avaliação bioquímica e no perfil hormonal foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e, uma vez demonstrada diferença estatística por 22 esse teste aplicou-se o Método de Tukey, com 5% de nível de significância. / The present work had for objective to compare the biochemical composition and the concentrations of testosterone and progesterone in the amniotic fluid of fetuses of the Nelore cows produced by in vivo fecundation, in vivo fecundation at embryo transfer (ET) and in vitro production (IVP). The fetal problems observed at the delivery moment and at the immediate post-partum in animals originating from IVP and the shortage of researches that determine the composition of the amniotic fluid associated to the three systems of embryonic production allowed the development of this work, adding results to the studies that are being done by other researchers with the placenta of IVP animals. Sixty animals were used divided into 3 groups: Group 1 - Nelore cows pregnant with calves conceived by artificial insemination (AI) (n=20); Group 2 – receptor cows pregnant with Nelore calves provement from superovulation of embryo donors (n=20); Group 3 – receptor cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration (n=20). At the delivery moment, after the visualization of the sacs, 15mL of amniotic liquid were collected by puncture. The samples were processed and analyzed in the service of clinical laboratory of the Department of Veterinary Clinic of FMVZ/UNESP of Botucatu-SP and in the Laboratory of Endocrinology of the department of Animal Reproduction and Veterinary Radiology. For biochemical analysis commercial kits were used following the technique recommended by the manufacturer. The hormonal determinaton of progesterone (P4) and testosterone (T) was performed through radioimmunossay (RIA) in solid phase with the reading accomplished in accountant Gama Count Collects II. The data obtained in the biochemical evaluation and in the hormonal profile were submitted to the variance analysis (ANOVA) and, once demonstrated a statistic difference by that method the Tukey test was applied, with a 24 5% of level significancy.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-03-01T17:02:44Z No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-03-09T20:29:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-09T20:29:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 1865058 bytes, checksum: 038ca84fb0206df2d9c2d9e242c09491 (MD5) Previous issue date: 2018-03-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). / O presente estudo objetivou determinar o melhor sistema de cultivo individual a ser utilizado e a quantidade relativa de RNAm de genes candidatos à marcadores de competência em biópsias de células do cumulus (CC) imaturas e maturadas de ovócitos com alta e baixa capacidade de produzir embriões in vitro. Foram realizados dois experimentos, sendo que no primeiro foram testados o efeito de dois tipos de cultivo individual (microgotas 20 μL e Cell Tak) na produção de embriões, o uso de ácido fólico como antioxidante em diferentes concentrações (0, 10, 20, 50 e 500 μM) na produção embrionária e no padrão de metilação de regiões do α- satélite e IGF2 e, o uso de ácido fólico isolado ou conjugado com ITS durante o cultivo em sistema individual na produção e qualidade dos embriões. Já no segundo foi determinada a quantidade relativa de RNAm para os genes GPC4, PTGS2, LUM, ALCAM, FSHR, PGR, GPX3, SERPINE2, HAS2, PRDX3, por PCR em tempo-real (qPCR) em biópsias de CC imaturas e maturadas. As biópsias utilizadas para o qPCR foram agrupadas conforme o resultado da produção de embriões em: CCOs que formaram blastocisto em D7(embrião); CCOs que não clivaram (não clivado) e, CCOs que clivaram, mas que não chegaram a blastocisto (clivado). No primeiro experimento, foi observado que o grupo Cell Tak apresentou menor taxa de clivagem (P≤0,05) e menor produção de embriões (P≤0,05) em D7 e D8 em relação ao grupo controle e microgotas de 20 μL. Em relação às diferentes concentrações de ácido fólico, o grupo 500μM apresentou uma redução nas taxas de clivagem em D6 (P≤0,05) em relação aos demais. Em D7, não houve diferença entre os grupos quando comparados ao grupo controle. Em relação a metilação da região α- Satélite, os grupos Controle, 20 μM e 500 μM apresentaram padrão semelhantes (P>0,05), que era hipometilado. Já para a região do éxon 10 do gene IGF2, o padrão de metilação foi diferente nos grupos 20 μM e 500 μM em relação ao controle (P ≤0,05). Quanto ao uso de ácido fólico e ITS, isolados ou associadosdurante o cultivo individual, foi observado que somente no grupo individual na presença de ITS, produção de embriões foi semelhante ao cultivado em grupo (P>0,05). No segundo experimento, dos 10 genes avaliados nas biópsias de CCs imaturas e maturadas, 2 genes apresentaram diferenças no nível de RNAm entre os grupos. O gene LUM mostrou-se mais expresso (P=0,02), enquanto que FSHR mostrou-se menos expresso (P= 0,09), ambos em CC maturadas de CCOs que desenvolveram em embrião, comparado as do grupo que não desenvolveu embrião. Conclui-se que o cultivo em gotas na presença de ITS proporcionou as melhores taxas de embriões e, que apesar do ácido fólico não afetar a produção altera o padrão de metilação do DNA. A expressão dos genes LUM e FSHR, em CCs maturadas está associada a capacidade do ovócito de formar embrião, podendo ser utilizados como marcadores não invasivos da competência ovocitária. / The present study aimed to determine the best individal culture system to be used in vitro embryo production and to determine the quantity of genes transcrits in immature and matures cumulus (CC) cells biopsies obtained from cumulus-oocytes-complexes (COCs) with high and low capacity to produce embryos. Two experiments were carried out, in the first one the effect of two types of individual culture (microdroplets 20 μL and Cell Tak) on embryo production, the use of folic acid at different concentrations (0, 10, 20, 50 and 500 μM) on embryo production and methylation pattern, and the use of folic acid alone or in combination with ITS during individual culture on embryo production and quality were evaluated. In the second experiment, the relative amount of mRNA for GPC4, PTGS2, LUM, ALCAM, FSHR, PGR, GPX3, SERPINE2, HAS2 and PRDX3 genes was determined by real-time PCR (qPCR) in immature and mature CC biopsies. The biopsies were pooled according to the embryo production results as CCOs that formed blastocyst in D7 (embryo); CCOs that did not cleave (not cleaved) and CCOs that cleaved but did not reach the blastocyst (cleaved). On the first experiment, it was observed that the Cell Tak group presented lower cleavage at D2 and blastocyst rates at D7 and D8 compared to the control and the 20 μL microdroplets groups. Regarding the different concentrations of folic acid, the 500μM group showed lower rates of cleavage and blastocyst at D6 (P≤0.05), compared to the others groups. On D7, no differences were observed between the groups and the control. As for methylation, α-Satellite region, all treatments were similar, (P> 0.05) and presented a hypomethylated pattern. For the exon 10 region of the IGF2 gene, it observed that, the groups exposed to acid folic, either 20 μM or 500 μM, had a difference methylation pattern compared to the control group (P ≤0.05). The results for the use of folic acid and ITS isolated or in combination during individual culture, showed that only the individual group exposed to ITS had similar embryo production to the control group (P> 0.05). In the second experiment, from 10 genes evaluated in CCs biopsies, two genes had differences in mRNA levels. The LUM gene was more expressed (P = 0.02), whereas FSHR was less expressed (P = 0.09) in maturated CC obtained from CCOs that developed into embryo, compared to the ones that did not. It can be concluded that individual culture in microdrops in the presence of ITS gave the highest embryo production and that although folic acid does not increase embryo development it changes their methylation pattern. In addition, the expression of the LUM and FSHR genes in CC is associated with the ability of the oocyte to form an embryo and can used as noninvasive markers of oocyte competence.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-12-17Bitstream added on 2014-06-13T20:59:30Z : No. of bitstreams: 1 paschoal_dm_me_botfmvz.pdf: 1363323 bytes, checksum: f767f2dcabcc3f599b8e36c74c4d096c (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desta dissertação foi avaliar a viabilidade e a resistência à criopreservação após a realização de lipólise química utilizando-se o forskolin. Embriões Bos taurus indicus (OZ) e Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) produzidos in vitro, foram comparados em meio de cultivo contendo ou não soro fetal bovino (SFB). Para o experimento1, 1.052 oócitos de graus I e II foram colhidos de ovários de vacas Bos taurus indicus de abatedouro, dividindo em 7 réplicas. Os oócitos foram maturados em TCM 199 acrescido de SFB, Piruvato de Sódio, FSH, LH e Penicilina/Estreptomicina. A fertilização foi realizada com sêmen de touro Nelore (Bos taurus indicus) ou com sêmen de touro Simental (Bos taurus taurus), em meio HTF acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Cafeína, Heparina, Penicilinamina, Hipotaurina, Epinefrina e Penicilina/Estreptomicina. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa, acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Penicilina/Estreptomicina, suplementado ou não com SFB (Grupo 2,5%SFB e Grupo 0%SFB). No D6 os blastocistos foram novamente divididos em 2 sub-grupos com ou sem adição de 10μM de forskolin (total de 4 grupos - 2,5%SFB, 0%SFB, 2,5%+F e 0%+F). Para o experimento 2 os embriões foram expostos a solução de vitrificação 1 (SV1 = 5M de Etileno Glicol) durante 3 minutos e transferidos para uma gota com 15μL da solução de vitrificação 2 (SV2 = composta por 7M de Etileno Glicol, 0.5M de Galactose e 18% (w/v) de Ficoll 70) sendo, em seguida envasados em palhetas francesas estéreis de 0,25 mL. Para o aquecimento, as palhetas foram mantidas em ar por 8 segundos e depois em água a 37°C por 15 segundos. Como controle dos experimentos, embriões bovinos produzidos in vivo coletados de vacas Nelores foram utilizados. A taxa de clivagem e de produção de blastocisto no experimento 1, não diferiu entre os tratamentos dentro dos grupo... / The main objective of this dissertation was to evaluate the viability and cryotolerance of bovine embryos treated with forskolin to induce chemical lipolysis. In vitro produced Bos taurus indicos (OZ) and Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) embryos were compared in culture conditions containing or not fetal calf serum (FCS). For Experiment 1, 1.052 grade I and II Bos taurus indicos oocytes were obtained from slaughterhouse ovaries and divided in 7 replicates. The oocytes were matured in TCM 199 supplemented with FCS, Sodium Piruvate, FSH, LH and Penicillin/Streptomycin. Fertilization was performed using semen from one Nelore bull (Bos taurus indicos) and one Simental bull (Bos taurus taurus) in HTF medium supplemented with BSA, Sodium Pyruvate, Caffeine, Heparine, Penicilamine, Hipotaurine, Epinephrine and Penicillin/Streptomycin. The presumptive zygotes were cultured in SOFaa with BSA, Sodium Pyruvate and Penicillin/Streptomycin supplemented or not with FCS (Group 2.5%FCS and Group 0%FCS). On day 6 embryos from both groups were divided in two sub-groups containing or not 10μM of forskolin (total of 4 groups - 2.5%FCS, 0%FCS, 2.5%+F and 0%+F). For Experiment 2 the embryos were exposed to a vitrification solution 1 (SV1 = 5M of Ethylene Glycol) during 3 minutes and transferred to a vitrification solution 2 (SV2 = 7M Ethylene Glycol + 0.5M Glucose + 18% Ficoll). While in the SV2 embryos were packaged in 0.25 mL straws, incubated for 1 minute in Liquid N2 vapor and plunged into Liquid N2. For warming the straws were held in air for 8 seconds and plunged in 37oC water bath for 15 seconds. As a control, in vivo produced embryos collected from Nelore cows were used. The cleavage and blastocyst production rates, in Experiment 1, was not different among groups of OZ or OMZT embryos (P>0.05). However, a significant difference was observed in blastocyst production rates when... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-01Bitstream added on 2014-06-13T20:59:35Z : No. of bitstreams: 1 ponchirolli_cb_me_botfmvz.pdf: 354035 bytes, checksum: 36e40571a8b77281cc6690316cdc226b (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As técnicas de produção in vitro de embriões bovinos ainda precisam ser melhoradas em relação às taxas de embriões produzidos e sua qualidade. A adição de fatores de crescimento aos meios de cultivo de embriões bovinos tem sido estudada, com o intuito de melhorar a produção e a qualidade embrionária. O objetivo deste experimento foi testar a adição de GH, IGF-1 e Insulina em duas etapas do processo de produção in vitro: na maturação dos ovócitos e no cultivo dos embriões, visando aumentar as taxas de produção de blastocistos e a qualidade dos embriões produzidos, além de verificar a viabilidade de uma coloração com acridina orange e iodeto de propídeo para avaliação da qualidade dos embriões. No experimento 1, avaliou-se as taxas de clivagem e formação de blastocistos após maturação ovocitária em meio 199 (sais de Earle e L-glutamina e 2,2 mg/ml de bicarbonato de sódio, médium 199, Sigma, Saint Louis, EUA, # M-4530 ), na presença de 10% de SFB, de sódio, 1 mg/ml de 17 estradiol (E2 - Sigma, Saint Louis, EUA, # E-2758), 50 g/ml de hCG (Profasi® 5.000UI), 5 g/ml de FSH (Folltropin-V®, Vetrepharm, Ontário, Canadá), e 75æg/ml de sulfato de gentamicina, suplementado com IGF-1 , GH, Insulina, adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 2 foram avaliadas as taxas de clivagem e formação de blastocistos em meio composto por HTF (Human Tubal Fluid, HTF , Irvane) e BME (Basal Medium Eagle, BME , Sigma, Saint Louis, EUA), na proporção de 1:1 (HTF:BME) acrescido de 0,6% de BSA, 0,01% de Mioinositol e 75 g/ml de gentamicina, incubados em estufa a 38, 5oC, a 5% de CO2 e umidade absoluta, com suplementação de 10% de SFB no dia 3 de cultivo. O meio foi suplementado com IGF-1, GH, Insulina,adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 3, a coloração com acridina orange e iodeto de propídeo foi testada para avaliar a qualidade das estruturas produzidas. / In vitro embryo production techniques in bovines still need to be improved due to the embryo production rate and the quality. The addition of growth factors to the bovine embryo culture medium has been studied due to their effects on the production and embryo quality. The objective of this experiment was to study the addition of GH, IGF-1 and Insulin at two steps of the in vitro embryo production such as oocyte maturation and embryo culture, aiming at to increase the blastocysts rates as well their quality, as evidenced by the viability after staining with acridine orange and propideium iodete. In experiment 1, the cleavage rate and blastocyst production were evaluated after oocyte maturation in medium 199 with Earle's salt, L-glutamine and 2.2 mg/ml sodium bicarbonate, medium 199, Sigma, Saint Louis, USA, # M-4530) plus 10% BFS, 50 æg /ml sodium piruvate, 1 mg/ml estradiol 17 ß (E2 - Sigma, Saint Louis, USA., # E-2758), 50æg/ml hCG (Profasi® 5.000UI), 5 æg/ml FSH (Foltropin-V®, Vetrepharm, Ontário, Canada), and 75æg/ml gentamicin sulfate, supplemented either with IGF-1, GH, Insulin alone or in combination. In experiment 2, the cleavage rate and blastocyst formation were evaluated after in vitro embryo culture in HTF (Human Tubal Fluid, HTF ®, Irvane) and BME (Basal Medium Eagle, BME ®, Sigma), in 1:1 proportion (HTF: BME) plus 0.6% of BSA, 0.01% of Mioynositol and 75 æg/ml of gentamicin sulfate, at 38, 5ºC, 5% of CO2 and absolute humidity atmosphere, supplemented with 10% FCS at day 3 of culture. The medium was supplemented with IGF-1, GH, Insulin alone or in combination. In experiment 3, the acridine orange and propideium iodete stain was used to evaluate the quality of produced morulae produced as in experiment 1 or 2. The number and percentage of cells with DNA fragmentation was used to determine marulae quality.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003Bitstream added on 2014-06-13T19:38:35Z : No. of bitstreams: 1 abba_mg_me_botfmvz.pdf: 1923585 bytes, checksum: d645e9211eb4ff458af0d7ba8fcf5468 (MD5) / Estudamos comparativamente a avaliação do ganho de peso corpóreo, altura da cernelha, características da carcaça e qualidade da carne em bezerros submetidos à castração pelos métodos de burdizzo e Barburtsyan (castração russa). Foram utilizados 48 animais, gerados de coito natural, nascidos de parto eutócico, com idades entre 01 e 15 dias, provenientes de: fêmeas Nelore X touro ½ Simental ½ Nelore (NS), e vacas ¾ Nelore + ¼ Simental X touros das raças Limousin (LN); Brangus (BN) e Simental (SN).Após exame clínico os animais, considerados hígidos, foram distribuídos, em número de 12 por grupo (4 NS, 3 LN, 3 BN e 2 SN), randomicamente na composição dos quatro grupos experimentais a saber: grupo um (G1), machos orquiectomizados pelo método da castração russa; grupo dois (G2), o mesmo do grupo G1 acrescido, a partir do 4o. mês de idade, da administração, mês-a-mês, pela via subcutânea, de 10 mL de modificador orgânico (Modificador Orgânico Leivas Leite ®); grupo três (G3), controle; grupo quatro (G4), animais castrados com burdizzo, aos 13 meses de idade. Todos os bezerros receberam aleitamento natural até o 7o. mês e as avaliações, de ganho de peso corpóreo e altura foram feitas, cada 30 dias, até o abate que ocorreu quando os animais atingiram 19 meses de idade.As características observadas após o abate foram: peso da carcaça quente (PCQ), escore de acabamento de gordura (EAG), pH da carcaça resfriada (pHC) área de olho de lombo (AOL), espessura da gordura do músculo “longissimus dorsi” (EG) e maciez da carne (MC).Os resultados revelaram que: no ganho de peso e crescimento dos animais não houve diferença significativa (P=0,10) entre os grupos; na análise da maciez da carne, realizada pelo método de Warner Bratzler, o G2 apresentou melhor resultado. / We comparativily study the evaluation of corporeal weight profit whiters height, carcass characteristics and meat quality in steers submitted to castration for the methods of Burdizzo and Barburtsyan (Russian castration); 48 animals, generated of natural coitus had been used, born of natural childbirth, with ages between 01 and 15 days, proceeding from: females Nelore X bull ½ Simental ½ Nelore (NS), and cows ¾ Nelore + ¼ Simental X bulls of the Limousin races (LN); Brangus (BN) and Simental (SN) After clinical examination the animals, considered sanitaries, had been distributed, in number of 12 for group (4 NS, 3 LN, 3 BN and 2 SN),, at random, in the composition of four experimental groups to know: group one (G1), males orchiectomyzed for the method of the Russian castration; group two (G2), the same of the G1 group increased of administration,, from 4o. month of age, month by month, for the subcutaneous way, of 10 mL of organic modifier (Organic Modifier Leivas Leite ®); group three (G3), control; group four (G4), animals castrated with burdizzo, in 13 months of age. All steers had sucked natural milk until 7o. month and evaluations, of corporeal weight and height profit had been made, each 30 days, until slaughter, that occurred when animals had reached 19 months of age. The characteristics observed after slaughter had been: hot carcass weight (PCQ), fat finishing props up (EAG), cooled carcass pH (pHC) loin beef eye area (AOL), thickness of “longissimus dorsi” muscle fat (EG) and meat tenderness (MC). The results had disclosed that: in weight and growth profit of the animals it did not have significant difference (P = 0,10) between the groups; in the analysis of meat tenderness, carried through the method of Warner Bratzler, the G2 presented better results.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim e Alvarenga / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Resumo: O objetivo desta dissertação foi avaliar a viabilidade e a resistência à criopreservação após a realização de lipólise química utilizando-se o forskolin. Embriões Bos taurus indicus (OZ) e Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) produzidos in vitro, foram comparados em meio de cultivo contendo ou não soro fetal bovino (SFB). Para o experimento1, 1.052 oócitos de graus I e II foram colhidos de ovários de vacas Bos taurus indicus de abatedouro, dividindo em 7 réplicas. Os oócitos foram maturados em TCM 199 acrescido de SFB, Piruvato de Sódio, FSH, LH e Penicilina/Estreptomicina. A fertilização foi realizada com sêmen de touro Nelore (Bos taurus indicus) ou com sêmen de touro Simental (Bos taurus taurus), em meio HTF acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Cafeína, Heparina, Penicilinamina, Hipotaurina, Epinefrina e Penicilina/Estreptomicina. Os prováveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa, acrescido de BSA, Piruvato de Sódio, Penicilina/Estreptomicina, suplementado ou não com SFB (Grupo 2,5%SFB e Grupo 0%SFB). No D6 os blastocistos foram novamente divididos em 2 sub-grupos com ou sem adição de 10μM de forskolin (total de 4 grupos - 2,5%SFB, 0%SFB, 2,5%+F e 0%+F). Para o experimento 2 os embriões foram expostos a solução de vitrificação 1 (SV1 = 5M de Etileno Glicol) durante 3 minutos e transferidos para uma gota com 15μL da solução de vitrificação 2 (SV2 = composta por 7M de Etileno Glicol, 0.5M de Galactose e 18% (w/v) de Ficoll 70) sendo, em seguida envasados em palhetas francesas estéreis de 0,25 mL. Para o aquecimento, as palhetas foram mantidas em ar por 8 segundos e depois em água a 37°C por 15 segundos. Como controle dos experimentos, embriões bovinos produzidos in vivo coletados de vacas Nelores foram utilizados. A taxa de clivagem e de produção de blastocisto no experimento 1, não diferiu entre os tratamentos dentro dos grupo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The main objective of this dissertation was to evaluate the viability and cryotolerance of bovine embryos treated with forskolin to induce chemical lipolysis. In vitro produced Bos taurus indicos (OZ) and Bos taurus indicus X Bos taurus taurus (OMZT) embryos were compared in culture conditions containing or not fetal calf serum (FCS). For Experiment 1, 1.052 grade I and II Bos taurus indicos oocytes were obtained from slaughterhouse ovaries and divided in 7 replicates. The oocytes were matured in TCM 199 supplemented with FCS, Sodium Piruvate, FSH, LH and Penicillin/Streptomycin. Fertilization was performed using semen from one Nelore bull (Bos taurus indicos) and one Simental bull (Bos taurus taurus) in HTF medium supplemented with BSA, Sodium Pyruvate, Caffeine, Heparine, Penicilamine, Hipotaurine, Epinephrine and Penicillin/Streptomycin. The presumptive zygotes were cultured in SOFaa with BSA, Sodium Pyruvate and Penicillin/Streptomycin supplemented or not with FCS (Group 2.5%FCS and Group 0%FCS). On day 6 embryos from both groups were divided in two sub-groups containing or not 10μM of forskolin (total of 4 groups - 2.5%FCS, 0%FCS, 2.5%+F and 0%+F). For Experiment 2 the embryos were exposed to a vitrification solution 1 (SV1 = 5M of Ethylene Glycol) during 3 minutes and transferred to a vitrification solution 2 (SV2 = 7M Ethylene Glycol + 0.5M Glucose + 18% Ficoll). While in the SV2 embryos were packaged in 0.25 mL straws, incubated for 1 minute in Liquid N2 vapor and plunged into Liquid N2. For warming the straws were held in air for 8 seconds and plunged in 37oC water bath for 15 seconds. As a control, in vivo produced embryos collected from Nelore cows were used. The cleavage and blastocyst production rates, in Experiment 1, was not different among groups of OZ or OMZT embryos (P>0.05). However, a significant difference was observed in blastocyst production rates when... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre