Rhynchophorus palmarum is the most harmful weevil pest of coconut palm due to its ability to find hosts from long distances and also to the direct and indirect losses it causes to the crop. Besides this, spores of the fungus that causes the stem bleeding disease have been found over R. palmarum body. Thus, the objective of this work was to evaluate the effect of the insecticide thiamethoxam and its association to the fungicide cyproconazole against R. palmarum larvae under laboratory conditions, aiming at the possible use of these products for managing R. palmarum and the fungal diseases associated to it. Newly-hatched and intermediate-instar larvae were fed with artificial diet containing insecticide or fungicide in the concentrations of 0.1%; 0.5%; 1.0% and 2.0%, and also the mixture of both. Larvae mortality on the treatments was assessed daily, during 48 hours. Means were subjected to analysis of variance and compared by Tukey’s test (P < 0.05). Regression analysis between the different product doses and larval mortality was also performed. Thiamethoxam caused mortality of 100 and 95% to newly-hatched and intermediate-instar larvae, respectively, statistically differing from cyproconazole (50 and 0%, respectively) and from the control (23.2 and 0%, respectively), but not differing from the two products mixture (100 and 92.5%, respectively). Such results point out that newly-hatched larvae are more sensitive than the intermediate-instar ones; that thiamethoxam in the doses here used is toxic to both newly-hatched and intermediate-instar larvae; that cyproconazole in the doses here used is toxic only to newly-hatched larvae; and that cyproconazole, when mixed to thiamethoxam does not improve its toxicity. Linear regression showed that thiamethoxam and its mixture with cyproconazole caused 100% mortality to newly-hatched larvae, and between 80 and 100% and between 90 and 100% to intermediate-instar larvae, respectively, in all tested concentrations. All concentrations were considered high. The thiamethoxam + cyproconazole mixture showed to be promising for the management of R. palmarum and the fungal diseases associated to it in coconut palms. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Rhynchophorus palmarum é, dentre os curculionídeos que atacam o coqueiro, o mais severo, pois além da capacidade de localizar sua planta hospedeira a longas distâncias, causa perdas diretas e indiretas à cultura. Além disso, esporos do fungo causador da doença resinose do coqueiro já foram encontrados no corpo de R. palmarum. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar em laboratório o efeito do inseticida tiametoxam, associado ao fungicida ciproconazol, sobre larvas de R. palmarum, visando a possibilidade de uso conjunto contra a praga e doenças fúngicas associadas a ela. Larvas de instares iniciais e de instares intermediários foram confinadas em dieta artificial contendo o inseticida e o fungicida isoladamente, nas concentrações de 0,1%; 0,5%; 1,0%; 2,0%, e também a mistura de ambos. A mortalidade das larvas nos tratamentos foi avaliada diariamente, durante 48 horas. As médias foram submetidas à análise de variância e comparadas entre si pelo teste de Tukey (P < 0,05). Também foi realizada a análise de regressão entre as diferentes doses dos produtos testados e a mortalidade das larvas. O tiametoxam causou mortalidade de 100 e 95% para larvas recém-eclodidas e intermediárias, respectivamente, diferindo estatisticamente do ciproconazol (50 e 0%, respectivamente) e da testemunha (23,2 e 0%, respectivamente), mas não diferindo da mistura dos dois produtos (100 e 92,5%, respectivamente). Tais resultados evidenciam que as larvas recém-eclodidas são mais sensíveis que as intermediárias; que o tiametoxam nas doses utilizadas é tóxico às larvas de ambas as idades; que o ciproconazol, nas doses utilizadas, é tóxico apenas para as larvas recém-eclodidas; e que o ciproconazol, quando adicionado ao tiametoxam, não potencializa o efeito deste. A regressão linear mostrou que tiametoxam e a mistura dos produtos causaram 100% de mortalidade às larvas recém-eclodidas, e entre 80 e 100% e entre 90 e 100% às larvas de tamanho intermediário, respectivamente, em todas as concentrações testadas, sendo estas consideradas altas para uso. A mistura de tiametoxam + ciproconazol se mostrou promissora para o manejo de R. palmarum e das doenças fúngicas associadas a ele em coqueiro.

The coleoptera Rhynchophorus palmarum (L.), vulgarly known as palm weevil is considered on of mainly pest of several palm trees of economic importance. In coconut tree their larvae destroy the plant culms and their adults act like a vector of nematode Bursaphelenchus cocophilus that cause the red ring disease. With the objective of subside the practices of biological control of R. palmarum already utilized it was carried out tests aiming to determine the flight activity of the insect in coconut fields; to validate the technique of autoinoculation of adults of R. palmarum using traps like vegetal traps bait inoculated with the Beauveria bassiana enthomopatogenic fungi; and to characterize genetically isolates of the fungi by molecular makers of RAPD, microsatellites and ITS-DNAr. To determine the flight activity of the insect it was installed, around the commercial field, traps of capture/monitoring for population of R. palmarum adult’s insect, containing attractive feed (culms of sugar cane) added with pheromone of aggregation. For the autoinoculation tests it was used the randomized statistical design, in a factorial scheme 3x4 (3 spores concentration of the fungi and 4 periods of autoinoculation), using four replications constituted by 5 pairs of males and females. The insects were separated, cleaned with distilled water and transfer to buckets with sugar cane culms inoculated with B. bassiana on concentrations 107, 108 and 109 spores/mL of suspension), keeping in contact with the inoculums for 45min.; 90min.; 3h00 and 6h00. After this period of exposition the insects were individualized being the mortality/infection evaluated for 20 days. For genetic characterization it was used 11 isolates obtained from monospores cultures that posterior were inoculated in a liquid medium at 25ºC±1ºC under constant shaking in dark conditions. After seven days the mycelium were filtered, lyophilized and after DNA extracted in SDS buffer at 10%. It was tested 20 decamer primers of arbitrary sequence of IDT Company. The amplifications were carried out in termocycler (Biometra/Unisciense) programmed for initial temperature of 94°C for 5min. and 45 cycles of: 94°C for 1min., 36°C for 2min. and 72°C for 1min.. For microsatellites analyses it was used four pairs of primers. The amplification reactions were carried out using a volume of 25µL. The amplifications consisted by one initial cycle of 94ºC and 30 cycles of 94ºC for 1min.; 50ºC for 1min. and 72ºC for 2min., and a end cycle of 72ºC for 7min.. The amplified fragments were separated by electrophoresis in agarose gel using TBE buffer, and the gel stained with ethidium bromete (0.5µg/mL) after visualized under UV light. The insect initiates flight activity at 5h00 am through 6h00 pm o’clock occurring the population maximum at 9h00 am to11h00 am. It was verified the mortality increase of adults of R. palmarum in accord to fungi concentration and period of exposition of the inoculums. The higest index of mortality (53%) occurred nine days after the autoinoculation by B. bassiana. The RAPD analysis generated 138 polymorphic and 14 monomorphic bands being the patterns used to calculate the genetic similarity that varies of 2% to 77%. The 57.99 (Betume2-SE) and 53.96 (Mojú-PA) isolates presented high similarity (77%), followed by 64.99 (Egypt) and 53.96 (Mojú-PA), with similarity of 73% by RAPD test. For microssatellite the BC.05 and 32.91 isolates presented genetic similarity of 82%, followed by 64.99 and 57.99 with genetic similarity of 80%. It was not observed amplifications variations using ITS regions for B. bassiana isolates. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / O coleóptero Rhynchophorus palmarum (L.), vulgarmente conhecido como broca-doolho-do-coqueiro é considerado uma das principais pragas de palmeiras de importância econômica. Suas larvas destroem a estipe da planta e os adultos atuam como vetores do nematóide Bursaphelenchus cocophilus causador da doença “anel vermelho”. Com o objetivo de subsidiar as práticas de controle biológico do R. palmarum já empregadas, foram realizados testes visando: determinar a atividade de vôo do inseto em plantios de coco; validar a técnica de autoinoculação de adultos de R. palmarum usando armadilhas com iscas vegetais inoculadas com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana e caracterizar geneticamente isolados do fungo por meio de marcadores moleculares do tipo RAPD, microssatélite e ITS-DNA. Para determinar a atividade de vôo do inseto foram instaladas, na periferia de pomares comerciais de coco, armadilhas de captura/monitoramento da população de adultos de R. palmarum, contendo atrativo alimentar (colmos de cana-de-açúcar) mais feromônio de agregação. Nos testes de autoinoculação utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3x4 (3 concentrações do fungo e 4 tempos de autoinoculação), com 4 repetições de 5 casais. Os insetos foram separados, limpos em água destilada e transferidos para baldes contendo cana-de-açúcar inoculada com B. bassiana nas concentrações padronizadas (107, 108 e 109 esporos/mL de suspensão), permanecendo em contato com o inóculo por 45min.; 90min.; 3h00 e 6h00. Após o período de exposição ao fungo, os insetos foram individualizados, sendo a mortalidade/infecção avaliada por 20 dias. Na caracterização genética foram utilizados 11 isolados, para os quais foram obtidas culturas monospóricas que posteriormente foram repicadas, em meio líquido a 25ºC±1ºC, em agitação constante e no escuro. Após sete dias os micélios foram filtrados, liofilizados e em seguida seu DNA genômico extraído em tampão de extração SDS 10%. Foram testados 20 primers decâmeros de seqüência arbitrária da marca IDT. As amplificações foram realizadas em termociclador (Biometra/Unisciense) programado com temperatura inicial de 94°C por 5min. e 45 ciclos a 94°C por 1min., 36°C por 2min. e 72°C por 1min.. Para as análises de microssatélites foram empregados quatro pares de primers. As reações de amplificação foram feitas em um volume de 25µL. As amplificações consistiram de um ciclo inicial de 94ºC e 30 ciclos de: 94ºC por 1min.; 50ºC por 1min. e 72ºC por 2min., ao final 1 ciclo de 72ºC por 7min. Os fragmentos amplificados foram separados em gel de agarose, submetidos à eletroforese em tampão TBE, corados com brometo de etídio (0,5 µg/mL) e visualizados sob luz UV. Observou-se que o inseto inicia sua atividade de vôo as 5h00 até às 18h00, ocorrendo um pico populacional máximo das 9h00 às 11h00. Verificou-se uma mortalidade crescente de adultos de R. palmarum em função do aumento da concentração do fungo e dos tempos de exposição ao inóculo. O maior índice de mortalidade (53%) ocorreu nove dias após a autoinoculação do inseto. As análises de RAPD geraram 138 bandas polimórficas e 14 monomórficas, sendo os padrões empregados para o cálculo das similaridades genéticas que variaram de 2% a 77%. Os isolados 57.99 (Betume2-SE) e 53.96 (Moju-PA) apresentaram maior similaridade (77%), seguidos de 64.99 (Egito) e 53.96 (Moju-PA), com uma similaridade de 73% pelo teste de RAPD. Enquanto que para o microssatélite os isolados BC.05 e 32.91 apresentaram maior similaridade genética (82%), seguidos de 64.99 e 57.99 com similaridade genética de 80%. Não foram observadas variações na amplificação das regiões ITS de DNAr para os isolados de B. bassiana.