Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Bromelina é o nome genérico dado ao grupo de enzimas proteolíticas encontrada nos vegetais da família Bromeliaceae, da qual o abacaxi é o mais conhecido e rico nesta protease, que tem grande importância na área de saúde e de alimentos. O objetivo deste trabalho foi determinar as propriedades físico-químicas e purificar a bromelina presente no Ananas comosus L. Merril (abacaxi). A Diálise seguida da precipitação com 80% de (NH 4 ) 2 SO 4 realizado no extrato do abacaxi proporciou uma maior recuperação de atividade e proteína produzindo um fator de purificação cerca de 3 vezes. O CE e o CED80% apresentaram valores de pH ótimos de 8,5 e 7,2, respectivamente. Entretanto a bromelina foi estável em todos os valores de pH testados (5,0-9,0) mostrando assim ser formada por diferentes frações proteolíticas. Em relação à temperatura ótima, o CE e o CED80% apresentaram valor de 50ºC e foram foram estáveis até temperaturas de 60 ºC, sendo totalmente desnaturada a 80ºC após 30 minutos. Os valores de K M e V max aparentes, calculados segundo modelo de Lineweaver-Burk, foram: para azocaseína - K M = 2,48 mg/ml e V max = 35,29 U/mL e para azoalbumina - K M = 2,94 mg/ml e V max = 11,11 U/mL, mostrando assim praticamente a mesma afinidade por ambos os substratos. Entretanto a eficiência catalítica foi maior para azocaseína que para azoalbumina (31,62 e 8,39 min -1 , respectivamente). Através da eletroforese em gel SDS-PAGE, o extrato bruto apresentou 4 bandas de proteínas com massas moleculares de 40, 29 e 27 kDa e uma inferior a 14 kDa. Através de zimograma as bandas de 29 e a abaixo de 14kDa apresentaram atividade caseinolítica. A Cromatografia de gel-filtração apresentou 2 picos, entretanto apenas o pico 2 com atividade proteolítica especifica de 116 U/mg de proteína e purificação de 25,1 vezes, o qual apresentou 2 bandas de 29 e 26 kDa em gel SDS-PAGE. Pico 2 este quando aplicado na cromatografia de troca aniônica, rendendo um maior pico (P1) com atividade proteolítica o qual apresentou banda única em SDS- PAGE de 29 kDa com atividade caseinolítica comprovada em zimograma

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4830_1.pdf: 7927751 bytes, checksum: 9f743297b41b5a4d3aa0cefd7386f6d9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O extrato bruto de bromelina é obtido a partir de vegetais da família das bromélias, em especial do abacaxi, contém proteínas e carboidratos, entre as proteínas encontramos as endo-petidases, fosfatases, glicosidases, peroxidases, celulases, nucleases e os inibidores de proteases. Destacam-se a bromelina do talo (E.C. 3.4.22.32), ananaina (E.C. 3.4.22.31), comosaina e a bromelina do fruto (E.C. 3.4.22.33), com pesos moleculares em torno de 23 a 24 kD. Extratos obtidos do caule e fruto do abacaxizeiro têm sido utilizados como medicamento desde o período précolombiano pelos curandeiros indígenas e pela população em geral até os dias atuais. Estudos in vitro e in vivo relatam diversas aplicações clínicas para a bromelina, como agente antiinflamatório, antitrombótico, digestório e mucolítico. Publicações recentes sugerem um papel importante para a bromelina no tratamento de doenças inflamatórias e infecciosas intestinais. A bromelina, assim como outros peptídeos, foi detectada no plasma após ingestão oral em humanos. Em camundongos foi detectada a presença da bromelina no plasma e em resíduos fecais, com atividade enzimática demonstrável em níveis biologicamente significativos, após administração oral. Estes resultados apontam a bromelina como um importante agente terapêutico de administração oral aplicável em um amplo espectro de patologias. Recentemente, foi comercialmente disponibilizado o Melxi ®, medicação que combina o extrato de bromelina com o mel de abelha e que possui em sua atividade mucolítica sua principal indicação terapêutica. Com o objetivo de avaliar a toxicidade tecidual do Melxi ® e da bromelina, estas substâncias foram administradas em altas concentrações em animais. Foram utilizados ratos Wistar, com idade entre 6 e 8 semanas e peso aproximado de 200 g. Os animais foram distribuídos em 4 grupos de 10 animais e receberam administração de solução oral, através de gavagem de Melxi® 20 ml/kg (grupo A), bromelina[15mg/ml] 20 ml/Kg (grupo B), bromelina[1g/Kg] 20 ml/Kg (grupo C) e NaCl[0,9%] 20 ml/kg. Os animais foram observados por um período de 24 horas. Não foram detectadas alterações fisiológicas, lesões macroscópicas ou microscópicas em tecidos gástrico, hepático, renal, esplênico e pulmonar após a administração oral de Melxi ® e bromelina em ratos, estes resultados indicam a bromelina e o Melxi® como medicações de origem natural e baixa toxicidade, aplicável em diversas situações clínicas

Orientador: Elias Basile Tambougi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T07:55:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cesar_AnaClaudiaWabiszczewicz_M.pdf: 2166735 bytes, checksum: f9685c712b03e9d7db1030c7281f5818 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: O desenvolvimento de novos processos de extração e purificação de proteínas é muito importante, uma vez que esta é uma etapa limitativa na produção de bioprodutos A extração líquido- líquido vem sendo aplicada há muitos anos como uma valiosa técnica laboratorial de separação. A sua aplicação em larga escala começou a ocorrer no início do século, desde então ela teve um grande desenvolvimento na indústria nos mais diversos setores, desde a extração de metais nobres até a purificação de antibióticos. A extração líquido - líquido pode ser usada como um passo da pré purificação usando um sistema de duas fases aquosas. Esses sistemas vem sendo testados com sucesso, são sistemas formados por duas fases aquosas imiscíveis ou parcialmente miscíveis entre si , obtidas pela adição de polímeros hidrofílicos ou um desses polímeros e um sal, como o sistema PEG ( polietileno glicol ) e o fosfato de potássio. O presente trabalho estuda a recuperação da bromelina do caldo prensado do abacaxi, por extração líquido-líquido em duas fases aquosas, utilizando técnicas de planejamento fatorial para a otimização dos ensaios experimentais, reduzindo assim o número de experimentos a serem realizados, reduzindo o custo e o tempo de desenvolvimento do trabalho. Foram calculados os efeitos das variáveis em estudo, e as interações) entre elas. Realizando ensaios em batelada, procurou-se delinear as melhores condições para a extração e recuperação da enzima, utilizando como indicador o coeficiente de partição / Abstract: The development of new process in protein's extraction and purification is very important, since this is a limiting step in bio-products production. Liquid-liquid extraction has been applied for a long time as a valuable laboratory separation technique. It's application on a large scale started at the beginning of the century and since then it had a great industrial development in many fields, from noble metal's extraction to antibiotic's purification. Liquid-liquid extraction can be used as a pre-step in purification utilizing a twophase aqueous system. These systems have been successfully tested; they are formed by two aqueous non miscible or partially miscible systems, resulting ITom the addition of hydrophilic polymers or one of these polymers and a salt, like the system PEG (polyethylene glycol) and potassium phosphate. The present work studies bromeline's recovery from pineapple's syrup, through liquid-liquid extraction in two-phase aqueous systems, employing factorial planning to optimize experiments, hence reducing their number and, consequently, reducing time and costs in the development of the work. The effects of the studied variables and their interaction were calculated. Through batch tests the best conditions for enzyme extraction and recovery were sought, using as indicator the partition coefficient / Mestrado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:02:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campese_GilsineiMarques_D.pdf: 3429433 bytes, checksum: 99937444b046618fe48859f8f5bf4cc9 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: o sistema de duas fases aquosas explora a capacidade de dois polímeros, ou de um polímero e um sal, se separarem em duas fases aquosas sempre que certas concentrações mínimas sejam excedidas. Neste trabalho, o objetivo é a determinação do índice de recuperação da bromelina do caldo do abacaxi, utilizando, para isso, uma microcoluna agitada por campânulas pulsantes, para três tamanhos de linhas de amarração, três pH' s diferentes e três vazões de alimentação. A caracterização desse sistema bifásico aquoso é formada por um polímero regional, o polissacarídeo do cajueiro (Policaju). Sendo o elevado custo dos polímeros envolvidos o principal entrave à aplicação em grande escala da partição bifásica aquosa, este sistema apresentou a possibilidade em reduzir esse custo, aumentando a competitividade da partição bifásica aquosa como processo alternativo frente aos processos tradicionais de recuperação de bioprodutos. Os resultados demonstraram um aumento do índice de recuperação com o aumento da velocidade de rotação e com o aumento da composição do sistema. A análise do perfil de extração contínua da bromelina do caldo do abacaxi demonstrou que o maior índice recuperação da proteína foi obtido para as seguintes condições: sistema 13%PEG4000-22%Policaju em uma microcoluna pulsada com 3 campânulas à velocidade de 60 rpm com velocidade total de alimentação 11,12mL/min e pH 8,0 que foi de 68,82% / Abstract: Aqueous two-phase system explores the possibility of solutions of two polymers or one polymer and one salt separating into two immiscible aqueous phases, when certain critical concentrations are exceeded. This work was characterised by the KA W ASE recovery index analysis of the bromelain of pineapple juice, using a pulsed column for three sizes of tie lines, three different pH's and three feeding flows. The characterisation of a new aqueous two-phase system is based on a regional polymer, the polysaccharide of cashew nut tree (Policaju). Since the cost of the phase forming polymers is the main drawback on the large scale application of aqueous two-phase partition, this system showed the possibility of decreasing this cost by increasing the applicability of biphasic partition as an alternative technique to the traditional recovery processes of bio products. The results showed an increase of the recovery index with an increase of the rotation speed and with an increase of the system composition. The profile analysis of continuous extraction of the bromelain of pineapple juice demonstrated that the largest protein recovery was obtained for the following conditions: 13%PEG4000-22% Cashew nut tree system in pulsed column with 3 rotative disks at the speed of 60 rpm with total of feeding speed of 11,12 mL/min, and pH 8,0 which was 68,82% / Doutorado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Banca: Luiz Juliano / Banca: Vitor Marcelo Silveira Bueno Brandão de Oliveira / Banca: Marcos Roberto de Mattos Fontes / Banca: Paula Rahal Liberatore / Resumo: As peptidases ou proteases hidrolisam ligações peptídicas. Apesar de todas terem essa característica funcional comum, elas diferem acentuadamente no seu grau de especificidade. O conhecimento da especificidade das cisteíno-peptidase, nos fornece valiosas informações que podem levar a uma melhor compreensão da relação estrutura-função, do papel fisiológico destas enzimas, ou para o desenho de inibidores seletivos. Pela caracterização realizada, a Fastuosaina, uma cisteíno peptidase extraída de frutos verdes de gravatá (Bromelia fastuosa) possui um pH ótimo próximo do neutro, semelhante à Bromelina do talo e do fruto, por enquanto para a Papaína, que possui um pH ótimo de 6,3. Em relação à estabilidade térmica, a Fastuosaina mostrou ser mais resistente à desnaturação, seguida pela Papaína, a Bromelina do fruto e por último a Bromelina do talo. / Abstract: Peptidases, also known as proteases, hydrolyse peptide bonds with different specificities. Knowing their preferences for cleavage sites, gives valuable informations that can lead to a better understanding of the structure-function relationships, their physiological role, or for design of selective inhibitors. We performed a characterization of Fastuosain, a cystein-peptidase isolated from unripe fruits of "gravatá" (Bromelia fastuosa), which showed an optimum pH near 7.0, as found also for stem and fruit bromelains. Papain showed a lower value, at pH 6.3. Concerning its thermal stability, Fastuosain showed higher resistance to denaturation, followed by Papain, Fruit and Stem Bromelain. / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:52:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4547_1.pdf: 1702711 bytes, checksum: 8957e7b4102418b67fc1815c352e9631 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2007 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Melxi® é um fitoterápico confeccionado com o mel de abelha e o extrato de abacaxi (Ananas comosus L.). O mel apresenta ações anti-sépticas e bactericidas, sendo constituído de 78% de carboidratos, 1,5% de proteínas e 0,18% de sais minerais, além de 5,72% de vitaminas e outros elementos. O extrato bruto do abacaxi contém uma mistura complexa de proteinases, denominada de bromelina, além de outras enzimas e inibidores de proteases como também sacarose, frutose e glicose. A eficácia terapêutica da bromelina tem sido relatada em diversas publicações, sendo uma das mais importantes à ação mucolítica e fluidificante sobre secreções de vias aéreas. Este trabalho teve como objetivo estudar o efeito do xarope Melxi® sobre o tecido pulmonar e do lavado broncoalveolar em modelo animal de doença inflamatória do trato respiratório. Ratos machos Wistar foram divididos em quatro grupos, sendo: Grupo I = Controle não sensibilizado; Grupo II = Controle sensibilizado; Grupo III = sensibilizado tratado com salina e Grupo IV = sensibilizado tratado com Melxi®. Os animais dos Grupos II, III e IV foram pré-sensibilizados com 2 injeções intraperitoneais (IP) de 200 μl de solução de ovoalbumina (OVA) a 1% (p/v) em intervalos de 10 dias, seguido de sensibilização com 4 aplicações intranasais de 50 μl da (OVA) obedecendo ao mesmo intervalo de tempo. Após a sensibilização o Grupo IV recebeu 2 ml do xarope Melxi®, por gavagem orogástrica, 3 vezes ao dia, enquanto o Grupo III recebeu 2 ml de NaCl a 0,9% (p/v) nas mesmas condições, durante 7 dias. Todos os animais foram anestesiados com solução de pentobarbital. O pulmão e o lavado bronco-alveolar foram coletados e processados para eletroforese bidimensional (2D). Parte do pulmão foi removido e fixado em formalina a 10%, corados pela hematoxilina/eosina(HE), pelo alcian blue(AB) e pelo ácido periódico de Schiff(PAS), para análise histopatológica. Os tecidos pulmonares do Grupo IV corados pelo PAS apresentaram uma redução nos depósitos intracelulares de glicosaminoglicanos quando comparados com animais do Grupo II. As imagens obtidas dos géis de eletroforese 2-D foram analisadas pelo software 2D Plantinum da Amersham Biociences. Os perfis eletroforéticos das proteínas nos lavados bronco-alveolares dos diferentes grupos estudados demonstraram pequenas alterações, apenas a nível das proteínas de baixo peso molecular na região de pH alcalino da focalização isoelétrica (IEF). Enquanto nos tecidos pulmonares, os quatro grupos apresentaram-se bastante semelhantes. Os resultados obtidos sugerem que tenha havido uma diminuição na produção de muco pelas células do epitélio brônquico nos animais tratados pelo Melxi®, entretanto, estas alterações não parecem ter influenciado o perfil protéico pulmonar dos animais tratados quando comparados com os controles

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Tese (doutorado) - Universidade Estaudal de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-27T16:32:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bertevello_LuizCarlos_D.pdf: 2846370 bytes, checksum: 49ea69ccec6843f885623a5acc9cfdee (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A partição em sistemas de duas fases aquosas é uma alternativa aos processos de separação existentes, que sendo muito estudada nos últimos anos. Em sistemas aquosos bifásicos, ambas as fases são compatíveis com quase todas as proteínas conhecidas. Outro importante fator favorável é a possibilidade de usar-se equipamentos de extração líquido-líquido que operam em contínuo. Neste trabalho é proposto um processo de recuperação de bromelina do abacaxi utilizando sistema bifásico aquoso como etapa principal. Para tanto, é utilizada uma micro-coluna agitada por campânulas pulsantes, visando promover um eficiente contato entre as fases. Foram realizadas análises da influencia de parâmetros operacionais na eficiência do processo de separação. Os parâmetros estudados no equipamento são a freqüência de pulsação e a razão entre as fases que entram na coluna. Além do estudo da extração líquido-líquido em contínuo, foi realizado o estudo da extração em descontínuo, a fim de encontrar-se as melhores condições de extração, em relação em relação ao sistema de duas fases aquosas. Neste estudo, verificou-se que o processo proposto apresenta uma excelente eficiência em relação a recuperação da proteína, com média de 60% de proteína total e principalmente uma boa eficiência em relação a atividade enzimática da bromelina, 58% de recuperação em média. É apresentado também um estudo de transferência de massa na coluna, envolvendo o coeficiente de transferência, e número de unidades de transferência, além do estudo de fração de retenção de fase dispersa / Abstract: Partition in aqueous two-phase systems is an alternative for the separation processes, that has been study extensively late years. In aqueous two-phase systems, both phases are compatible with almost ali known proteins. Other favorable factor is the possibility of using liquid-liquid extraction equipment's that operate continuously. In this work, a new process in bromelina recovery developed in bromelina recovery from pineapple's syrup was developed, through liquid-liquid extraction in two-phase systems. Whit this aim, it was used a micro-column agitated by pulsed caps, for promoting an efficient contact between phases end column and also to avoid enzyme desnaturation and the of main proteins properties. The parameters studied in the equipment were pulse frequency and ratio between phases which enter the columns. In addition to the continuous liquid-liquid extraction study a batch extraction was carried out in order to find best extraction conditions regarding. In this study it was observed that the suggested process has an excellent efficiency in protein recovery, whit an average of 60% of total protein and principally, good efficiency in bromeline' s enzymatic activity, 58% of recovery in average. It was also, shows a mass transfer study in the column, regarding transfer coefficient and number of transfer units, in addition to the hold-up determination / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

Orientador: Elias Basile Tambourgi. / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-25T15:10:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_AndreRodriguesGurgelda_M.pdf: 1839329 bytes, checksum: 62d25f563cc23cf1138031c7be606be8 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O abacaxi, considerado a terceira fruta mais importante do mundo, é utilizado como principal fonte de bromelina, uma enzima com atividade anti-inflamatória e que auxilia no tratamento de queimaduras. Pesquisas recentes indicam possíveis aplicações dessa enzima em terapias oncológicas. Atualmente a purificação de compostos biológicos é um grande desafio para a indústria. A extração em sistemas de duas fases aquosas (SDFA) proporciona um elevado rendimento e fácil ampliação de escala nesse tipo de processo. Dessa forma, esse trabalho visa a caracterização de um SDFA formado por polietilenoglicol (PEG) e sulfato de amônio, utilizando os modelos termodinâmicos NRTL, UNIQUAC, UNIFAC E ASOG. Os dados experimentais foram obtidos a 5°C e 25°C com PEG de peso molecular 2000, 4000 e 6000 e, posteriormente, comparados com os resultados dos modelos indicando uma predominância dos modelos que utilizam o conceito de contribuição de grupos, e dentre estes, se destacou o método UNIFAC obtendo valores com erros próximos a 2% / Abstract: The pineapple, considered the third most important fruit in the world, is used as the main source of bromelain, an enzyme with anti-inflammatory activity and used for burns treatment. Nowadays, several researches show a possible application of this protein for cancer's treatment. In this context, the purification of biological components is an important challenge to industries. The extraction in aqueous two-phase system (ATPS) presents an elevated potential and easy application for this process. Thus, this study aims the characterization of an ATPS composed by Polyethylene Glycol (PEG) and ammonium sulfate, using NRTL, UNIQUAC, UNIFAC and ASOG as thermodynamic models. Experimental data were obtained for temperatures of 5 °C and 25 °C with PEG of different molecular weight (2000, 4000 and 6000) and posteriorly compared to the model's results, which indicated a predominance of those whom employ the group concept for calculating the activity coefficient, emphazing the UNIFAC method which obtained an average error of 2% / Mestrado / Engenharia Química / Mestre em Engenharia Química

Orientador: Priscila Gava Mazzola / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T00:24:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lourenco_CarolinaBotelho_M.pdf: 4920837 bytes, checksum: 7aef8f035b2bceba5c8c4fc37a04cd45 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Bromelina é o nome dado a um conjunto de enzimas proteolíticas encontradas em vários tecidos, como talo, fruto e folhas do abacaxi (Ananas comosus), e de demais espécies da família Bromeliaceae. O uso da bromelina nas indústrias alimentícias, farmacêuticas e cosméticas está baseado em sua atividade proteolítica. Na indústria cosmética, tem sido muito utilizada, principalmente nos tratamentos de pele, com os apelos de agente de limpeza, renovação celular, anti-aging, peeling biológico, clareamento e anticelulite. O presente trabalho estudou a estabilidade da bromelina comercial em formulações cosméticas, por meio da avaliação do conteúdo protéico, medida da atividade enzimática, das alterações de viscosidade e reologia, valor de pH e cor das formulações selecionadas. A bromelina comercial foi incorporada em três concentrações, 0,5%, 1,0% e 2,0%, em fórmulas base de emulsão óleo em água, gel de Carbopol® 980 e dispersão aquosa e mantidas armazenadas por seis meses. Amostras de cada formulação foram submetidas a diferentes temperaturas e intensidades de iluminação. Avaliações do conteúdo protéico foram realizadas através do método de Bradford e a atividade enzimática foi verificada utilizando azocaseína como substrato. Após 180 dias de incubação, os resultados mostraram que a cor de todas as amostras sofreu alteração, que foi dependente da temperatura e da concentração de bromelina presente. As emulsões e as dispersões sofreram menor alteração de cor do que os géis. Não foram observadas relações entre as variações de pH e a temperatura e luminosidade para todas as amostras. Para as emulsões com teor de bromelina de 2,0%, maiores alterações na viscosidade foram verificadas ao término dos seis meses de estudo. Para os géis, a viscosidade apresentou comportamento mais constante, não sendo fortemente influenciada pelas condições de temperaturas e luminosidade. A presença da bromelina nas emulsões contribuiu para o aumento da recuperação da viscosidade após submissão a forças de cisalhamento. A atividade específica das amostras foi reduzida ao longo dos seis meses para todas as amostras em estudo. As emulsões e as dispersões apresentaram atividade específica superior ao término de seis meses em relação aos géis, para os quais a atividade final a 45oC chegou quase à zero. O gel demonstrou ser a pior base para veiculação da bromelina com finalidade cosmética, pois apresentou a menor manutenção das características iniciais tanto relacionadas à formulação quanto em relação à integridade da bromelina. As dispersões aquosas e as emulsões apresentaram-se mais estáveis ao longo de 180 dias de avaliações, nas condições de 5oC, ao abrigo da luz / Abstract: Bromelain is the name given to a set of proteolytic enzymes found in various tissues, such as stems, leaves and fruit of the pineapple (Ananas comosus), and other species of Bromeliaceae. The use of bromelain in food, pharmaceutical and cosmetic industries is based on its proteolytic activity. In the cosmetic industry, it has been widely used, especially in skin treatments, with calls for cleaner, cell renewal, anti?aging, biological peeling, whitening and anti?cellulite. This work studied the stability of comercial bromelain in cosmetic formulations through the evaluation of protein content, measure of the enzyme activity, changes in viscosity and rheology, pH and color of the selected formulations. The commercial bromelain was incorporated at three concentrations, 0,5%, 1,0% and 2,0% in oil in water emulsion, Carbopol ® 980 gel and aqueous dispersion and kept stored for six months to different temperatures and light intensities. Evaluations of protein content were performed by the method of Bradford and enzymatic activity was verified using azocasein as substrate. After 180 days of incubation, the results showed that the color of all samples was altered, which was temperature and concentration of bromelain dependent. Emulsions and dispersions underwent less change in color than the gels. No relationships were observed between the changes in pH and temperature and luminosity exposure for all samples. The biggest changes in viscosity were observed for emulsions with 2,0% of bromelain at the end of six months. For gels, the viscosity showed a more constant behavior and was not strongly influenced by light and temperature conditions. The presence of bromelain in the emulsions contributed to increase recovery of viscosity after subjection to shear forces. The specific activity of the samples was reduced over the six months for all samples analyzed. The emulsions and dispersions showed higher specific activity at the end of six months than the gels, for which the final activity in 45oC reached almost zero. The gel proved to be the worst basis for placement of bromelain with cosmetic purpose, as it presented the lowest maintenance of both baseline characteristics related to the formulation and to the integrity of bromelain. Aqueous dispersions and emulsions were more stable over 180 days of evaluations, under 5oC temperature, protected from light / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T16:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_ThayseAlvesdeLimae_D.pdf: 1455657 bytes, checksum: daf56c809e4fdd0f27b5b6dd5705a606 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: O curauá (Ananas erectifolius L.B. Smith) é uma espécie vegetal de porte herbáceo, uma monocotiledônea pertencente à família Bromeliaceae, nativa da região norte do Brasil, especialmente da Amazônia, de onde pode ser extraída a bromelina. Esta enzima faz parte de um grupo de enzimas proteolíticas, usadas na indústria alimentícia e como medicamento, pois oferece amplo espectro de eficácias terapêuticas: antiedemas, anti-inflamatórias, antitrombóticas e atividades fibrinolíticas. O desenvolvimento de novos processos de extração e purificação de proteínas é muito importante, uma vez que essa é uma etapa limitante na produção de bioprodutos. Um dos grandes desafios na obtenção da bromelina é manter a sua estabilidade enzimática durante o processo de extração, purificação, secagem e estocagem. Por isso, estudos vêm sendo conduzidos para identificar os mecanismos que levam à desnaturação da proteína, e com isso, apontar formas de minimizar esta inativação. Desta forma, a determinação da atividade da enzima em plantas de curauá poderá proporcionar indicativos para posterior purificação e, assim, contribuir para a viabilização do uso desta espécie, uma vez que o principal produto de extração é a fibra, sendo que os demais componentes são, atualmente, descartados. Os resultados da caracterização mostraram que as condições ideais de trabalho são pH 6 e temperatura de 40 e 60º C para a variedade branca, e pH 6 e 7 e 40º C de temperatura para a variedade roxa. A massa molar é de 24 kDa, e melhor condição de estabilidade com maior atividade em pH 6 e temperatura entre 20 e 40ºC, tanto para o curaua roxo, quanto para o branco, sendo este último, mais estável. Os parâmetros cinéticos demonstraram que o curaua roxo possui menor valor de Km, com 158,73 ?mol.L-1min e o branco, 185,18 ?mol.L-1min, apresentando ambas variedades, afinidade pelo substrato utilizado nos experimentos, azocaseína. O curauá branco demonstrou menor energia de ativação, demonstrando com isso, melhor atividade enzimática em comparação ao curauá roxo e a outras proteases.Esses resultados demonstraram valores significativos de atividade, energia de ativação e estabilidade,quando comparados com outras proteases, confirmando ser este um complexo enzimático com atividade hidrolítica / Abstract: The curaua (Ananas erectifolius LB Smith) is a herbaceous plant species, belonging to the family Bromeliaceae, native to northern Brazil, especially the Amazon, where it can be extracted bromelain. This enzyme is part of a group of proteolytic enzymes, used in the food industry and as a medicine, it offers wide range of therapeutic efficacies: antiedemas, anti-inflammatory, antithrombotic and fibrinolytic activities. The development of new extraction and purification of proteins is very important, since this is a limiting step in the production of bioproducts. A major challenge is in getting the bromelain enzyme maintain its stability during the extraction, purification, drying and storage. Therefore, studies are being conducted to identify mechanisms that lead to protein denaturation, and thus pointing ways to minimize this inactivation. Thus, the determination of enzyme activity in plants may provide indicative curaua for further purification and thus contribute to the optimization of this specie, since the main product of the fiber is extracted, and the other components are currently discarded. The characterization results showed that the ideal working conditions are pH 6 and temperature at 40°C and 60°C for the white variety, and pH 6 and 7 and 40°C temperature for the purple variety. The molar mass is 24 kDa, and better stability condition with the highest activity at pH 6 and temperature between 20 and 40°C for both curauá purple, and for the white, the latter being more stable. The kinetic parameters showed that curauá purple has a lower Km value with 158.73 ?mol.L -1min and white 185.18 ?mol.L-1 min. With both varieties, affinity for the substrate used in the experiments, azocasein was demonstrated. The white curaua showed lower activation energy, demonstrating that the better enzyme activity compared to purple curaua and other proteases. These results showed significant amounts of activity, activation energy and stability when compared with other proteolytic enzymes, confirming that this is a complex enzymatic with hydrolytic activity / Doutorado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Doutor em Engenharia Química