Thesis (Ph.D.) - James Cook University, 2006. / Typescript (photocopy) Bibliography: leaves 187-206.

BANDEIRA, Tereza de Jesus Pinheiro Gomes. Caracterização fenotípica e genotípica, sensibilidade a antimicrobianos e detecção de genes de virulência de cepas clínicas e ambientais de Burkholderia pseudomallei. 2011. 151 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2011. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-08T16:20:33Z No. of bitstreams: 1 2011_tese_tjpgbandeira.pdf: 2968543 bytes, checksum: 7ca158d99b2739cf86254cd483a4ca24 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-10T10:59:26Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_tese_tjpgbandeira.pdf: 2968543 bytes, checksum: 7ca158d99b2739cf86254cd483a4ca24 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-10T10:59:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_tese_tjpgbandeira.pdf: 2968543 bytes, checksum: 7ca158d99b2739cf86254cd483a4ca24 (MD5) Previous issue date: 2011 / Melioidose E UMA Doença infecciosa causada túmulo POR Burkholderia pseudomallei, um bacilo Gram-Negativo ENCONTRADO nenhum sozinho e na Água. A Doença endêmica e No Sudeste Asiático e hiperendêmica nenhum norte da Austrália, Onde a letalidade permanece com UMA taxa de 21%. No Brasil, è considerada UMA Doença emergente desde Marco de 2003. N.os ULTIMOS Oito Anos, 12 Casos ocorreram no Estado do Ceará e hum notificado Pelo Governo Holandês, POR SE TRATAR de hum turista Que Morreu de melioidose, APOS Visita ao Ceará. Em Razão da Ocorrência Clínica de melioidose e faça Isolamento de B. pseudomallei nenhum Ambiente do Estado do Ceará, Este Trabalho objetivou Estudar como cepas Clínicas e Ambientais de B. pseudomallei isoladas sem Estado não PERÍODO de 2003 a 2011, visando a identificar como cepas POR MÉTODOS fenotípicos e moleculares, determinar o Perfil de sensibilidade contra cinco Agentes antimicrobianos (amoxicilina / clavulanato, Ceftazidima, imipenem, doxicilina e sulfametoxazol / trimetoprim), Realizar uma genotipagem das cepas Pela amplificação aleatória de DNA polimórfico - Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), detectar o tipo de virulência Três Sistema de Secreção gene (TTSS), ALÉM de avaliar OS Aspectos clínico-epidemiológicos Que caracterizaram uma Emergência Desta Doença no Brasil. TODAS como 20 cepas (dez Clínicas e dez Ambientais) de B. pseudomallei FORAM precisamente identificadas Tanto Pela Metodologia VITEK2 ® Quanto Pelô sequenciamento da Região 16S fazer DNA, mostraram Resultado Negativo nenhum teste de assimilação de L-arabinose, e exibiram-se Positivas parágrafo fazer a detecção de genes de virulência TTSS. Como Concentrações inibitórias Mínimas (CIM), obtidas POR microdiluição los caldo Müeller-Hinton, demonstraram Opaco de Todos os Isolados (100%) sensíveis FORAM AO imipenem, à doxicilina e AO sulfametoxazol-trimetoprim, não entanto, parágrafo amoxicilina / clavulanato e Ceftazidima, um FOI sensibilidade de 80 e 90%, respectively. A Técnica de RAPD evidenciou UMA Variabilidade genética de 63% empreendedorismo como cepas de B. pseudomallei oriundas do Estado do Ceará, como cais Quais d'Orsay FORAM Agrupadas in Tres aglomerados Diferentes. Este Trabalho decerto contribuirá par o Conhecimento das Características fenotípicas e genotípicas das cepas de B. pseudomallei isoladas nenhuma Ceará e da atualização da Vigilância epidemiológica dos Casos de melioidose ocorridos no Estado, ALÉM de contribuir para à Conscientização dos Órgãos de Saúde competentes Pará a Inclusão fazer Ceará Como zona endêmica parágrafo ESTA enfermidade.

VALENTE, Livia Gurgel do Amaral. Identificação de melanina em cepas clínicas e ambientes de Burkholderia pseudomallei e atividade in vitro do farnesol como inibidor de ß-lactamases. 2012. 81 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-12T16:03:59Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_lgavalente.pdf: 2099115 bytes, checksum: 202d0f130cefb452d49f8b0f3f7f0594 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-12T16:04:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_lgavalente.pdf: 2099115 bytes, checksum: 202d0f130cefb452d49f8b0f3f7f0594 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-12T16:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_lgavalente.pdf: 2099115 bytes, checksum: 202d0f130cefb452d49f8b0f3f7f0594 (MD5) Previous issue date: 2012 / Burkholderia pseudomallei é um bacilo Gram-negativo causador da melioidose uma doença infecciosa severa e geralmente fatal, a qual pode ser adquirida através da inoculação, inalação e ingestão do microrganismo que se encontra distribuído no ambiente. No Brasil a melioidose é considerada uma doença emergente descrita pela primeira vez em 2003 no Nordeste brasileiro O presente estudo consistiu em identificar o gene hppD que codifica a produção de um precursor importante na síntese de melanina e avaliar fenotipicamente a produção do pigmento em cepas de B pseudomallei através de meios contendo substratos fenólicos. Aliado ao estudo foi realizada a comparação do perfil de sensibilidade e curva de morte entre cepas melanizadas e não melanizada ante ao imipenem além da avaliação da possível ação do sesquiterpeno farnesol como um inibidor de β-lactamases Os isolados utilizados no estudo pertencem ao Laboratório de Patógenos Reemergentes e Emergentes-LAPERE UFC Para o cumprimento da metodologia as cepas foram recuperadas do estoque realizado a extração de DNA e a identificação do gene hppD através de reação de PCR A expressão fenotípica de melanina foi avaliada através de subcultivos em meio Brain Heart infusion (BHI) acrescido de ácido caféico. O teste de sensibilidade com cepas melanizadas e não melanizadas foi realizado utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo CLSI segundo documento M07-A8 A curva de morte foi realizada a partir da incubação do inóculo com imipenem no intervalo de 0,125 µg/ mL a 0,5 µg/ mL por 1 e 2 horas, seguida da contagem das colônias A avaliação do farnesol como um possível inibidor de β-lactamases foi realizada através da combinação in vitro do farnesol com antibióticos β-lactâmicos (amoxicilina ampicilina oxacilina imipenem amoxicilina-ácido clavulânico utilizando-se o teste de microdiluição em caldo. O gene hppD foi detectado em todas as cepas de B pseudomallei testadas além da produção de pigmento em meios contendo substratos fenólicos Em relação ao perfil de sensibilidade as cepas não melanizadas e melanizadas apresentaram o mesmo valor de CIM porém as cepas melanizadas demonstraram maior capacidade de sobrevivência quando em contato com a droga do que as cepas não melanizadas. Em relação ao farnesol todas as cepas testadas foram inibidas por este composto com CIM variando de 75 a 150µM Dentre as combinações dos β-lactâmicos testadas com farnesol, todas as drogas apresentaram redução estatisticamente significativa: amoxicilina (p=0,0001) amoxicilina-ácido clavulânico (p=0,0005), ampicilina (p=0,0026), oxacilina (p=0,0001) e imipenem (p=0,0105). Por fim as combinações com amicacina e gentamicina não apresentaram redução estatisticamente significativa pois os aminoglicosídeos praticamente repetiram seus valores quando combinados com farnesol Esse estudo abre perspectivas acerca de um novo fator de virulência melanina ainda não descrita para B pseudomallei, além do sesquiterpeno farnesol como um possível inibidor de β-latamases nessa espécie.

VIRGINIO, Camila Gomes. Aspectos fenotípicos de amostras de burkholderia pseudomallei isoladas de uma microepidemia no municípios de Tejuçuoca-CE. 2005. 136 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-01-04T13:45:00Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_cgvirgínio.pdf: 7687643 bytes, checksum: d6c0e4ff2f09282d3738c27cd4b0bc8f (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-02-02T13:40:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_cgvirgínio.pdf: 7687643 bytes, checksum: d6c0e4ff2f09282d3738c27cd4b0bc8f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-02T13:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_cgvirgínio.pdf: 7687643 bytes, checksum: d6c0e4ff2f09282d3738c27cd4b0bc8f (MD5) Previous issue date: 2005 / Burkholderia pseudomallei is a Gram-negative non-fermentative bacilli, environmental saprophyte able to cause melioidosis on men and animals. The disease is considered endemic in several countries, especially in Thailand and Australia. The bacteria was isolated and identified for the first time in Brazil, february 2003, from four children that lived in a place called Tejuçuoca, Ceará. This work consists of the phenotypic characterization of 3 strains of B. pseudomallei isolated from the patients from Tejuçuoca. The main aim of this study is to compare the data from these samples with the ones from the literature. It was assessed: the colonies morphology in different culture mediums, assimilation of L-arabinose, manual and semi-automatized biochemical tests in API 20NE, antibacterial sensitivity test and diagnosis by PCR, from bacterial cultures. In the obtained results, it was observed the morphological pattern of B. pseudomallei in blood agar, chocolate, Ashdown, Mac Conkey, CLED and trypticase soy agar. The strains 1 and 3 were classified as mucoid and the strain 2 as wrinkled. The three strains had shown the usual phenotypic patterns of B. pseudomallei as much in biochemical manual tests: motility, growth at 42°C, positive oxidase and resistance to polimixin B, as in the API 20NE Diagnosis Kit. In this last one, there was difference in the esculin test among the strains, when the reading was carried out with 48 hours, which did not change on the final identification. All of the three strains were unable to metabolize the carbohydrate L-arabinose, when tested in minimum medium salts and API 20NE, which is a characteristic of virulent strains of B. pseudomallei and is also used to differ this species from B. thailandensis, that is able to use the carbohydrate. The three isolates had shown a poor sensitivity pattern from disk diffusion on TSA, which were resistant to gentamicin, cefalotin, ciprofloxacin (one strain presented intermediate resistance) and sulfa-trimethoprim; two strains presented intermediate sensitivity to ceftriaxone. All of them were sensitive to piperacilin-tazobactam, ticarcilin-clavulanate, ceftazidime, imipenem, tetracycline and chloramphenicol. A modified extraction protocol based on phenol-chloroform was used to obtain DNA and later to test it by PCR, which had shown a 718 bp product, what also confirmed the diagnosis of the organisms by molecular method. The study confirms the presence of B. pseudomallei in Brazil with similar phenotype to that described in the international literature. / A Burkholderia pseudomallei é um bacilo Gram-negativo não-fermentador, saprófita ambiental capaz de causar melioidose em homens e animais. A doença é considerada endêmica em diversos países, entre os quais destacam-se Tailândia e Austrália. Em fevereiro de 2003, ocorreu no Brasil, o primeiro isolamento e identificação da bactéria em quatro crianças da localidade de Tejuçuoca, Ceará. Este trabalho consiste na caracterização fenotípica de 3 amostras de B. pseudomallei originárias dos pacientes do município de Tejuçuoca, com o propósito de comparar os dados obtidos de tais amostras com os dados da literatura. Foram avaliados: morfologia das colônias em diferentes meios de cultivo, assimilação de L-arabinose, testes bioquímicos manuais e em sistema semi-automatizado API 20NE, teste de sensibilidade antibacteriano e diagnóstico por PCR, a partir de cultivos bacterianos. Nos resultados obtidos, foi observado o padrão morfológico característico de B. pseudomallei em ágar sangue, chocolate, Ashdown, Mac Conkey, CLED e tripticase soja. As amostras 1 e 3 foram classificadas como mucóides e a amostra 2 como rugosa. As três amostras apresentaram os padrões fenotípicos característicos de B. pseudomallei tanto nos testes bioquímicos manuais: motilidade, crescimento à 42ºC, oxidase positiva e resistência à polimixina B, como no Kit Diagnóstico API 20NE. Neste último, houve diferença na esculina entre as amostras, o que não interferiu no resultado final de identificação, quando a leitura foi realizada com 48h. Todas as três amostras foram incapazes de assimilar o carboidrato L-arabinose, quando testadas em meio sais mínimo e API 20NE, característica de amostras virulentas de B. pseudomallei e utilizada também para diferenciar esta espécie da B. thailandensis, que é capaz de assimilar este carboidrato. O padrão de sensibilidade resultante do TSA em disco difusão apresentado pelas três amostras foi o característico da espécie B. pseudomallei. Os isolados foram resistentes à gentamicina, cefalotina, ciprofloxacina (1 amostra apresentou resistência intermediária) e sulfa-trimetoprim; 2 amostras apresentaram sensibilidade intermediária à ceftriaxona. Todas as três amostras foram sensíveis à piperacilina-tazobactam, ticarcilina-ácido clavulânico, ceftazidima, imipenem, tetraciclina e cloranfenicol. Com o protocolo fenol-clorofórmio modificado de extração de DNA, a PCR apresentou banda de 718 pb, o que confirmou o diagnóstico da bactéria também por método molecular. O estudo confirma a presença da B. pseudomallei em território brasileiro, com fenotipagem semelhante à descrita na literatura internacional.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A Burkholderia pseudomallei à um bacilo Gram-negativo nÃo-fermentador, saprÃfita ambiental capaz de causar melioidose em homens e animais. A doenÃa à considerada endÃmica em diversos paÃses, entre os quais destacam-se TailÃndia e AustrÃlia. Em fevereiro de 2003, ocorreu no Brasil, o primeiro isolamento e identificaÃÃo da bactÃria em quatro crianÃas da localidade de TejuÃuoca, CearÃ. Este trabalho consiste na caracterizaÃÃo fenotÃpica de 3 amostras de B. pseudomallei originÃrias dos pacientes do municÃpio de TejuÃuoca, com o propÃsito de comparar os dados obtidos de tais amostras com os dados da literatura. Foram avaliados: morfologia das colÃnias em diferentes meios de cultivo, assimilaÃÃo de L-arabinose, testes bioquÃmicos manuais e em sistema semi-automatizado API 20NE, teste de sensibilidade antibacteriano e diagnÃstico por PCR, a partir de cultivos bacterianos. Nos resultados obtidos, foi observado o padrÃo morfolÃgico caracterÃstico de B. pseudomallei em Ãgar sangue, chocolate, Ashdown, Mac Conkey, CLED e tripticase soja. As amostras 1 e 3 foram classificadas como mucÃides e a amostra 2 como rugosa. As trÃs amostras apresentaram os padrÃes fenotÃpicos caracterÃsticos de B. pseudomallei tanto nos testes bioquÃmicos manuais: motilidade, crescimento à 42ÂC, oxidase positiva e resistÃncia à polimixina B, como no Kit DiagnÃstico API 20NE. Neste Ãltimo, houve diferenÃa na esculina entre as amostras, o que nÃo interferiu no resultado final de identificaÃÃo, quando a leitura foi realizada com 48h. Todas as trÃs amostras foram incapazes de assimilar o carboidrato L-arabinose, quando testadas em meio sais mÃnimo e API 20NE, caracterÃstica de amostras virulentas de B. pseudomallei e utilizada tambÃm para diferenciar esta espÃcie da B. thailandensis, que à capaz de assimilar este carboidrato. O padrÃo de sensibilidade resultante do TSA em disco difusÃo apresentado pelas trÃs amostras foi o caracterÃstico da espÃcie B. pseudomallei. Os isolados foram resistentes à gentamicina, cefalotina, ciprofloxacina (1 amostra apresentou resistÃncia intermediÃria) e sulfa-trimetoprim; 2 amostras apresentaram sensibilidade intermediÃria à ceftriaxona. Todas as trÃs amostras foram sensÃveis à piperacilina-tazobactam, ticarcilina-Ãcido clavulÃnico, ceftazidima, imipenem, tetraciclina e cloranfenicol. Com o protocolo fenol-clorofÃrmio modificado de extraÃÃo de DNA, a PCR apresentou banda de 718 pb, o que confirmou o diagnÃstico da bactÃria tambÃm por mÃtodo molecular. O estudo confirma a presenÃa da B. pseudomallei em territÃrio brasileiro, com fenotipagem semelhante à descrita na literatura internacional. / Burkholderia pseudomallei is a Gram-negative non-fermentative bacilli, environmental saprophyte able to cause melioidosis on men and animals. The disease is considered endemic in several countries, especially in Thailand and Australia. The bacteria was isolated and identified for the first time in Brazil, february 2003, from four children that lived in a place called TejuÃuoca, CearÃ. This work consists of the phenotypic characterization of 3 strains of B. pseudomallei isolated from the patients from TejuÃuoca. The main aim of this study is to compare the data from these samples with the ones from the literature. It was assessed: the colonies morphology in different culture mediums, assimilation of L-arabinose, manual and semi-automatized biochemical tests in API 20NE, antibacterial sensitivity test and diagnosis by PCR, from bacterial cultures. In the obtained results, it was observed the morphological pattern of B. pseudomallei in blood agar, chocolate, Ashdown, Mac Conkey, CLED and trypticase soy agar. The strains 1 and 3 were classified as mucoid and the strain 2 as wrinkled. The three strains had shown the usual phenotypic patterns of B. pseudomallei as much in biochemical manual tests: motility, growth at 42ÂC, positive oxidase and resistance to polimixin B, as in the API 20NE Diagnosis Kit. In this last one, there was difference in the esculin test among the strains, when the reading was carried out with 48 hours, which did not change on the final identification. All of the three strains were unable to metabolize the carbohydrate L-arabinose, when tested in minimum medium salts and API 20NE, which is a characteristic of virulent strains of B. pseudomallei and is also used to differ this species from B. thailandensis, that is able to use the carbohydrate. The three isolates had shown a poor sensitivity pattern from disk diffusion on TSA, which were resistant to gentamicin, cefalotin, ciprofloxacin (one strain presented intermediate resistance) and sulfa-trimethoprim; two strains presented intermediate sensitivity to ceftriaxone. All of them were sensitive to piperacilin-tazobactam, ticarcilin-clavulanate, ceftazidime, imipenem, tetracycline and chloramphenicol. A modified extraction protocol based on phenol-chloroform was used to obtain DNA and later to test it by PCR, which had shown a 718 bp product, what also confirmed the diagnosis of the organisms by molecular method. The study confirms the presence of B. pseudomallei in Brazil with similar phenotype to that described in the international literature.

Thesis (Ph.D.) - James Cook University, 2004. / Typescript (photocopy) Bibliography: leaves 189-223.

VASCONCELOS, D. C. Efeito da prometazina combinada aos antibióticos clássicos frente à forma planctônica e ao biofilme de Burkholderia pseudomallei. 2015. 84 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T14:13:27Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_dcvasconcelos.pdf: 2600778 bytes, checksum: 517035433406fc9bf380fa7e591e303e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-20T14:13:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_dcvasconcelos.pdf: 2600778 bytes, checksum: 517035433406fc9bf380fa7e591e303e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-20T14:13:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_dcvasconcelos.pdf: 2600778 bytes, checksum: 517035433406fc9bf380fa7e591e303e (MD5) Previous issue date: 2015-11-13 / Among the defense mechanisms employed by Burkholderia pseudomallei are the expression of efflux pumps such as BpeAB-OprB, AmrAB-OprA and BpeEF-OprC, which are responsible for resistance to aminoglycosides, macrolides, fluoroquinolones and sulfonamides. It is therefore necessary to find adjuvants able to minimize this resistance. In this context, the phenothiazines stand out for inhibiting those pumps. This study evaluated the in vitro inhibitory activity of promethazine alone or in combination with amoxicillin, amoxicillin/clavulanate, erythromycin, sulfamethoxazole/trimethoprim, ciprofloxacin or gentamicin against B. pseudomallei in planktonic and biofilm form. The structure of B. pseudomallei biofilm, with and without addition of promethazine, was also investigated. The sensitivity was evaluated by the broth microdilution test. The minimum inhibitory concentration (MIC) was 0.78 mg / mL and the minimum biofilm elimination concentration (MBEC) was 0.78 to 3.12 mg / mL for promethazine. Moreover, the association with promethazine significantly reduced the MIC values for erythromycin, trimethoprim / sulfamethoxazole, gentamicin and ciprofloxacin, whereas the MBEC values of all antibiotics tested significantly declined in combination with promethazine (p <0.05). Through electron and confocal microscopy, we found that promethazine was able to disrupt the biofilm matrix, possibly facilitating penetration of antibiotics. Therefore, this study demonstrates the inhibitory activity of promethazine against B. pseudomallei and its synergistic effect with traditional antibiotics against biofilms. / Dentre os mecanismos de resistência demonstrados por Burkholderia pseudomallei, há o destaque para expressão de bombas de efluxo do tipo BpeAB-OprB, AmrAB-OprA e BpeEFOprC, que são responsáveis pela resistência a aminoglicosídeos, macrolídeos, fluoroquinolonas e sulfonamidas. Torna-se assim necessária a busca por adjuvantes capazes de minimizar essa resistência. Neste contexto, destacam-se as fenotiazinas, que inibem tais bombas. O presente estudo visou avaliar a atividade inibitória in vitro da prometazina isolada e em combinação com amoxicilina, amoxicilina/clavulanato, eritromicina, sulfametoxazol/trimetoprim, ciprofloxacina e gentamicina frente à forma planctônica e ao biofilme de B. pseudomallei. Foi investigada ainda a estrutura do biofilme de B. pseudomallei, com e sem adição de prometazina. A concentração inibitória mínima (CIM) foi de 0,78 mg / mL e a concentração eliminatória mínima em biofilme (CEMB) foi de 0,78 a 3,12 mg/mL para prometazina. Ademais, a associação com prometazina reduziu significativamente os valores de CIM para eritromicina, sulfametoxazol/trimetoprim, gentamicina e ciprofloxacina, enquanto que os valores de CEMB para todos os antibióticos testados apresentaram diminuição significativa em combinação com prometazina (p<0.05). Por meio de técnicas de microscopia confocal e eletrônica, observou-se que a prometazina foi capaz de desestruturar a matriz do biofilme, possivelmente auxiliando a penetração dos antibióticos. Deste modo, o presente estudo mostrou a atividade inibitória da prometazina ante a B. pseudomallei e seu efeito sinérgico com antibióicos clássicos frente aos biofilmes.

ROLIM, Dionne Bezerra. Burkholderia pseudomallei no estado do Ceará : caracterização de reservárias. 2009. 156 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T13:23:34Z No. of bitstreams: 1 2009_ tese_dbrolim.pdf: 3141910 bytes, checksum: 3afbdab5e7f63e729d72f0de548bd1f4 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-05-18T13:27:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_ tese_dbrolim.pdf: 3141910 bytes, checksum: 3afbdab5e7f63e729d72f0de548bd1f4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-18T13:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_ tese_dbrolim.pdf: 3141910 bytes, checksum: 3afbdab5e7f63e729d72f0de548bd1f4 (MD5) Previous issue date: 2009 / Melioidosis, a disease caused by the Gram-negative bacteria Burkholderia pseudomallei, is endemic in southeast Asia and in Australia and shows a sporadic distribution in other parts of the world. The disease has been described in the Americas, it is an emergent illness in Brazil, as human cases are well documented in Ceará state. This research aims to better understand the ecology of the bacteria. The study was carried out by means of an environmental search for B. Pseudomallei in the ground of the cities Tejuçuoca and Banabuiú and by a epidemiological surveillance on the local rural population. For the environmental study, soil samples were collected monthly from the surface down to 40 cm depth from January to December 2007. Five sampling sites in each municipality were chosen near to the homes of people who had melioidosis. For the serological study, serum samples of 321 inhabitants of those areas were collected, and an inquiry was taken that included data about demography, previous illnesses and activities related to exposition to water and soil. Serological titers were determined by means of an immunoenzymatic test, using microplates adsorbed with filtered antigen of B. Pseudomallei. The bacteria was found in the soil of Tejuçuoca and Banabuiú municipalities in 4.3% (26/600) of the samples. Both regions show similar geoclimatic and environmental aspects, such as soil and vegetation, rainfall index, and temperatures. Detection of B. Pseudomallei occurred in tropical semi-arid climate, with low annual pluviometric index and a shrubby “caatinga” vegetation, showing an influence of local factors enabling the survival and multiplication of the microorganism. Epidemiological surveillance showed 51.27% (161/327) for the IgM isotype and 58.49% (186/317) for IgG isotype. Frequency of IgM titers was higher among children than adults, while IgG frequency raised with age. There was a significant association between agricultural occupations and IgM (44.15%, p<0.005) and IgG titers (44.15%, p<0.005) and between construction workers and IgG titers (84.6%, p=0.005). Most samples with high titers showed reactivity to the 33 and 45 kD bands, which correspond to the polysaccharide O of the liposaccharide chain of the bacteria. / A melioidose, uma enfermidade causada pelo bacilo Gram-negativo, Burkholderia pseudomallei, é endêmica no sudeste da Ásia e na Austrália e tem distribuição esporádica em outras partes do mundo. A doença é descrita nas Américas, sendo emergente no Brasil desde que casos em humanos são bem documentados no Estado do Ceará. Esta pesquisa pretendeu compreender melhor a ecologia da bactéria por meios da caracterização de suas reservárias. O estudo foi realizado em uma pesquisa ambiental de B. pseudomallei no solo dos Municípios de Tejuçuoca e Banabuiú e na realização de inquérito soro-epidemiológico para a população rural residente nesses locais. Para o estudo ambiental, foram coletadas amostras mensais de solo da superfície até 40 cm de profundidade durante o período de janeiro a dezembro do ano de 2007. Cinco sítios de coleta em cada município, delimitados na residência de pessoas que tiveram melioidose. Para a realização do estudo sorológico, foram coletadas amostras de soro de 321 residentes nessas áreas e efetivado inquérito, que incluiu informações sobre dados demográficos, história de doenças prévias e atividades com exposição relativas a solo e água. A determinação dos títulos sorológicos de anticorpos foi realizada mediante teste imunoenzimático, utilizando microplacas adsorvidas com antígeno filtrado de B. pseudomallei. A bactéria foi encontrada no solo dos Municípios de Tejuçuoca e Banabuiú em 4,3 % (26/600) das amostras investigadas. As duas regiões apresentaram aspectos geoclimáticos e componentes ambientais, como tipo de solo e vegetação, índice pluviométrico, temperatura similares entre si. A detecção de B. pseudomallei ocorreu em clima tropical semi-árido, com índice pluviométrico anual baixo e vegetação de caatinga arbustiva, demonstrando influência de fatores locais que facilitam a sobrevivência e multiplicação do microorganismo. O inquérito sorológico evidenciou 51, 27% (161/327) para oisotipo IgM e 58,49 % (186/317) para o isotipo IgG. A freqüência dos títulos de IgM foi maior em crianças do que em adultos, enquanto a freqüência de IgG aumentou com a idade. Houve associação significativa entre a ocupação em atividades de agricultura e os títulos de IgM (44.15%, p<0.005) e de IgG (44.15%, p<0.005) e entre trabalhadores de construção civil e os títulos de IgG (84.6%, , p=0.005). A maioria das amostras com títulos elevados mostrou reatividade com as banda na posição 33 a 45 kD que correspondem ao polissacarídeo O da cadeia do lipossacarídeo da bactéria.

CORREIA, G. R. B. Efeito inibitório in vitro do composto farnesol frente ao biofilme de Burkholderia pseudomallei. 2015. 88 f. Dissertação (Mestrado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-02T15:58:57Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_grbcorreia.pdf: 1260823 bytes, checksum: 8ebde2fdd525176303b72981cc66cfa0 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-05-02T15:59:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_grbcorreia.pdf: 1260823 bytes, checksum: 8ebde2fdd525176303b72981cc66cfa0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-02T15:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_grbcorreia.pdf: 1260823 bytes, checksum: 8ebde2fdd525176303b72981cc66cfa0 (MD5) Previous issue date: 2015-07-14 / The intrinsic antimicrobial resistance of Burkholderia pseudomallei is a serious challenge to the treatment of melioidosis. Many studies have searched for adjuvants that increase susceptibility bacteria to antimicrobials. In this context, the antimicrobial activity of farnesol against B. pseudomallei in planktonic growth has been reported. Thus, the aim of this study was to analyze the in vitro activity of farnesol alone against Burkholderia pseudomallei biofilms, as well as its combination with the antibacterials amoxicillin, doxycycline, ceftazidime and sulfamethoxazole-trimethoprim. Susceptibility was assessed by the broth microdilution test and cell viability was read with the oxidation-reduction indicator dye resazurin. The interaction between farnesol and antibacterial drugs against B. pseudomallei biofilms was evaluated through the calculation of the fractional inhibitory concentration index. The minimum biofilm erradication concentration (MBEC) for farnesol was 75 to 2400 mM. In addition, farnesol significantly reduced the MBEC values for ceftazidime,amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim by 256, 16, 4 and 4 times respectively (P<0.05). Optical, confocal and electronic microscopic analyses of farnesol treated B. pseudomallei biofilms demonstrated that this compound damages biofilm matrix,facilitating antimicrobial penetration in the biofilm structure. This study demonstrated the effectiveness of farnesol against B. pseudomallei biofilms and its potentiating effect on the activity of antibacterial drugs, in particular ceftazidime, amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim. / A intrínseca resistência apresentada pela bactéria Burkholderia pseudomallei é um grave empecilho para o tratamento da melioidose. Muitas pesquisas focam na busca de adjuvantes que aumentem a sensibilidade desta bactéria aos antimicrobianos. Nesse contexto, a ação inibitória do farnesol frente às cepas de B. pseudomallei, na forma planctônica, já foi relatada em estudo prévio. Diante disso, esse estudo objetivou analisar a atividade in vitro do farnesol contra cepas de B. pseudomallei na forma de biofilme. Aliado à análise da ação do farnesol isoladamente, foi investigada a combinação desse composto com os antimicrobianos amoxicilina, ceftazidima, doxiciclina, imipenem e sulfametoxazol/trimetoprim frente ao biofilme. A sensibilidade foi avaliada por meio do teste de microdiluição em caldo e a leitura da viabilidade celular feita com a resazurina. A concentração inibitória mínima em biofilme (CEMB) para o farnesol foi de 75 a 2400 mM. Ademais, o farnesol reduziu em até 256, 16, 4 e 4 vezes os valores de CEMB para ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim, respectivamente (P<0.05). Por meio de técnicas de microscopia, tais como óptica, confocal e eletrônica, observou-se que o farnesol foi capaz de causar danos na matriz do biofilme, facilitando assim, a penetração dos antibióticos. Deste modo, o presente estudo mostrou a eficácia do farnesol contra biofilmes de B. pseudomallei e seu efeito potenciador, em especial com ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim.

The aim of this study was to identify and characterise peptidyl-prolyl cis-trans isomerases (PPIases) from the bacterium Burkholderia pseudomallei, the causative agent of the disease melioidosis. The longer term goal was to assess their potential as vaccine candidates or antimicrobial targets. Using bioinformatic approaches, six putative FK506-binding proteins (FKBPs) proteins and three putative parvulin proteins were identified in B. pseudomallei. Of these, six were expressed and purified as recombinant proteins. The purified proteins were used to immunise BALB/c mice, with some providing protection against a subsequent B. pseudomallei infection. These proteins could therefore be proposed as potential vaccine candidates. Homologues of Mip or SurA, which are associated with virulence in other bacterial species, were identified in B. pseudomallei and closely related B. thailandensis. Recombinant Mip or SurA homologues from B. pseudomallei were shown to have characteristic PPIase enzyme activity. To evaluate the role of the Mip homologue from B. pseudomallei in virulence, an unmarked deletion mutant was constructed. The mutant had reduced intracellular survival; defects in putative virulence mechanisms and attenuated virulence in mice. To assess the role of a SurA homologue, closely related B. thailandensis was used as a model organism, with deletion of the gene resulting in defects in intracellular infection, outer membrane integrity and virulence. This indicates that PPIases from B. pseudomallei and B. thailandensis represent novel virulence determinants and potential antimicrobial targets for therapeutics against melioidosis.