Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-08T13:34:35Z No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 1211419 bytes, checksum: 3bc943600caeb78440095073154d36ca (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-08T13:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 1211419 bytes, checksum: 3bc943600caeb78440095073154d36ca (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The objective of this work is to develop serological tests (AGID and ELISA -ELISAi) using antigens of the virus Arthritis Encephalitis Goat (CAEV) obtained from a goat corneal cell line (CorFC cells) grown with 0.1% FBS. For AGID antigens were obtained from cells cultured in MEM, DMEM / F12 and RPMI 1640. Of the 163 tested sera samples (28 positive and 135 negative), 28 (17.17%) were positive for MEM and Ag Ag DMEM / 12 and 29 (17.79%) to Ag is RPMI 1640. Comparing the results obtained with three Ag was observed almost perfect agreement kappa adjusted (0.98 to 1.00). The Ag RPMI 1640 antigen, which showed better quality of precipitation lines in AGID and best performance was evaluated in comparison to a commercial Ag (Kit for the diagnosis of CAE - AGID; Unika biotech, Recife). The test of 797 sera with commercial Ag showed 216 positive and 581 negative; RPMI 1640 with Ag were observed 225 positive and 572 negative, corresponding to sensitivity (Se) and specificity (Es) for 100% and 98.45%, respectively. Globally, there has been adjusted (kappa = 0.97) between the almost perfect results with both Ag. For ELISAi empregandos native viral antigens were obtained by a simple process (clarification, dialysis and the treatment with triton X-100) to from cells cultured in RPMI 1640. After standardization were made the ELISAi performance evaluations. To assess the repeatability of the observed ELISAi RPMI CV entreplacas 4.4 and 17.3 and between 18.4 and 5.1 days for negative and positive sera. The results of 722 sera tested with the kits to diagnose LVPR AGID / commercial ELISAi (Unika biotech, Recife) showed 166 positive and 556 negative; with RPMI were observed ELISAi 171 positive and 551 negative, and if Sp corresponding to about 97.59% and 98.38%, respectively, with agreement adjusted kappa 0.95, considered almost perfect. These results demonstrate that one can establish an AGID an ELISA for highly sensitive and specific diagnosis of LVPR using a simplified model for obtaining of antigens, employing CorFC cells with low levels of FBS. Depending on the cell type and medium used can be produced LVPR antigens with low FCS content, which agrees with the animal welfare, represents a reduction of input costs and protein purification processes. / Objetivou-se com este trabalho desenvolver testes sorológicos (IDGA e ELISA indireto -ELISAi) utilizando antígenos do vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) obtidos a partir de uma linhagem de células de córnea caprina (células CorFC) cultivada com 0,1% de SFB. Para a IDGA foram obtidos antígenos a partir de células cultivadas em MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640. Das 163 amostras de soros testados (28 positivas e 135 negativas), 28 (17,17%) apresentaram resultados positivos para o Ag MEM e Ag DMEM/12 e 29 (17,79%) para o Ag RPMI 1640. Comparando-se os resultados obtidos com os três Ag foi observada concordância ajustada de kappa quase perfeita (0,98 a 1,00). O antígeno Ag RPMI 1640, que apresentou melhor qualidade das linhas de precipitação na IDGA e melhor rendimento foi avaliado comparativamente com um Ag comercial (Kit para diagnóstico de CAE – IDGA; Unika biotech, Recife). O teste dos 797 soros com o Ag comercial apresentou 216 positivos e 581 negativos; com o Ag RPMI 1640 foram observados 225 resultados positivos e 572 negativos, correspondendo a sensibilidade (Se) e especificidade (Es) relativas de 100% e 98,45%, respectivamente. De forma global, houve uma concordância ajustada (kappa = 0,97) quase perfeita entre os resultados com ambos Ag. Para o ELISAi foram empregandos antígenos virais nativos obtidos por um processo simples (clarificação, diálise e tratamento com triton X-100) a partir de células cultivadas em meio RPMI 1640. Após a padronização foram feitas as avaliações de desempenho do ELISAi. Ao avaliar a repetibilidade do ELISAi RPMI observou-se o CV entreplacas de 4,4 e 17,3 e entre dias de 5,1 e 18,4, para soros negativo e positivo, respectivamente. Os resultados dos 722 soros testados com os Kits para diagnóstico de LVPR IDGA/ELISAi comerciais (Unika biotech, Recife) apresentou 166 positivos e 556 negativos; com o ELISAi RPMI foram observados 171 resultados positivos e 551 negativos, correspondendo a Se e Sp relativas de 97,59% e 98,38%, respectivamente, com concordância ajustada kappa de 0,95, considerada quase perfeita. Esses resultados demonstram que pode-se estabelecer uma IDGA e um ELISA para diagnostico de LVPR altamente sensíveis e específicos utilizando-se um modelo simplificado para obtenção de antígenos, empregando células CorFC cultivadas com baixo teor de SFB. Dependendo do tipo de célula e meio utilizado pode-se produzir antígenos de LVPR com baixo teor de SFB, que corrobora com o bem estar animal, representa redução de custos com insumos e nos processos de purificação de proteínas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-04T16:22:18Z No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 768542 bytes, checksum: b909fa47d18e5a1f4cc1dfdb90c42f7d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-04T16:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 768542 bytes, checksum: b909fa47d18e5a1f4cc1dfdb90c42f7d (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / Cells which grow in vitro culture is divided into three categories: primary, secondary or crop finite line and continuous line, that can be grown indefinitely. These tumors derived from transformed cells or artificially or naturally. This work describes a cell line of fetal goat cornea (CorFC) and its growth in media supplemented with low FBS aimed at producing virus antigens caprine arthritis-encephalitis for antibodies by agar gel immunodiffusion. The cell line has CorFC fibroblastic appearance and has been cultivated for more than two years, more than 40 passages without noticeable change in the morphology or the rate of cell multiplication. Of the 163 serum samples tested by micro-AGID with antigen (Ag) commercial (Biovetech, Brazil), 29 (17.79%) were positive, of these, 28 were also positive for micro-AGID-MEM with Ag and Ag -DMEM/12 Ag and 29 with RPMI-1640. We observed excellent agreement adjusted kappa (k) between the micro-AGID tests employing the commercial Ag, Ag-MEM and Ag-DMEM/F12 (k = 0.98) between the antigen and perfect commercial and Ag-RPMI 1640 (k = 1,00). Due to their growth characteristics of cells CorFC have behaved as a continuous lineage, which can only be definitively confirmed with continued passages. The studied cell culture media (MEM, DMEM/F12 and RPMI 1640) showed to be adequate to nourish the cell lineage CorFC. However, considering jointly the medium RPMI 1640 was the most recommended for cultivation, in supplementation of 2% FBS for scheduling and 0.1% to manutenção.As CorFC cell line grown in MEM, and DMEM/F12 RPMI 1640 proved to be highly permissive to CAEV replication of the virus in medium with low FBS, with production of higher quality antigens, reducing input costs and simplify the processes of purification of proteins, especially when the RPMI 1640 is used. / As células que crescem em cultivo in vitro estão divididas em três classes: primárias, de linhagem finita ou cultivos secundários e de linhagem contínua, que podem ser multiplicadas indefinidamente. Estas derivam de tumores ou células transformadas artificial ou naturalmente. Neste trabalho é descrita uma linhagem de células de córnea de feto caprino (CorFC) e seu cultivo em meios suplementados com baixo teor de SFB visando à produção de antígenos do vírus da artrite-encefalite caprina para pesquisa de anticorpos pela imunodifusão em gel de Agar. A linhagem celular CorFC apresenta aparência fibroblástica e vem sendo cultivada há mais de 2 anos, por mais de 40 passagens, sem alteração perceptível na morfologia ou na taxa de multiplicação celular. Das 163 amostras de soros testados pela micro-IDGA, com antígeno (Ag) comercial (Biovetech, Brasil), 29 (17,79%) apresentaram resultado positivo; dessas, 28 também foram positivas à micro-IDGA com Ag-MEM e Ag-DMEM/12 e 29 com o Ag-RPMI 1640. Foi observada ótima concordância ajustada de kappa (k) entre os testes de micro-IDGA empregando-se o Ag comercial, Ag-MEM e Ag-DMEM/F12 (k = 0,98) e perfeita entre o antígeno comercial e Ag-RPMI 1640 (k = 1,00). Devido às suas características de crescimento as células CorFC têm se comportado como de linhagem contínua, o que só poderá ser definitivamente comprovado com a continuação das passagens. Os meios de cultivo celular estudados (MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640) demonstraram-se adequados para nutrir as células de linhagem CorFC. Entretanto, considerando em conjunto, o meio RPMI 1640 seria o mais recomendado para seu cultivo, nas suplementações de 2% de SFB para escalonamento e de 0,1% para manutenção.As células da linhagem CorFC cultivadas em MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640 mostraram-se altamente permissíveis à replicação do vírus CAEV em meio com baixo teor de SFB, com produção de antígenos de melhor qualidade, redução de custos com insumos e simplificação no processos de purificação de proteínas, sobretudo quando o meio RPMI 1640 é usado.