Orientador: Paulo Arruda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T00:51:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Kemper_EdsonLuis_M.pdf: 5308612 bytes, checksum: db237ee334b77fd3abfbb7a66a5f95d6 (MD5) Previous issue date: 1996 / Mestrado / Genetica de Plantas / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador : Maria Lucia Furlan Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-18T15:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Genari_SelmaCandelaria_M.pdf: 6856770 bytes, checksum: 3e91bf35ab302c4fe543a457fd235046 (MD5) Previous issue date: 1993 / Resumo: Alinhagem celular Vero estabelecida a partir de célulãs renais de macaco verde da Africa (CercoDithecus aethioDs), apresenta crescimento caracterlstico em cultura sendo considerada normal. Essas células possuem morfologia alongada crescendo em monocamadas quando em cultivo. Mantidas em cultura as células Vero passaram a apresentar alterações morfológicas, comportamenta e de crescimento em relação ao padrão normal inicial. A população Vero alterada apresentou células com morfologia mais arredondada que crescem em múltiplas camadas formando grumos celulares. Os grumos celulares apresentaram em sua superflcie células achatadas ecélulas globosas e material extracelular no seu interior. As células da população alterada aderiram mais rapidamente ao substrato em meio contendo soro fetal bovino, além disso, podiam se dividir em suspensão em meio semi-sólido de ágar com menor concentração de nutrientes. As células da população alterada apresentaram número modal de cromossomos igual a 56 enquanto a população inicial apresentou 54 cromossomos, sendo que os cromossomos extras presentes na população alterada referem-se a um homólogo do par 8 e um do par 27. O indice de células polipl6ides na população alterada foi de 19% enquanto na população inicial este indice era de 5%. Quando submetidas a reações citoqulmicas com Xilidine Ponceau - pH 2,5 e a rea_ão de P.A.S. a camada celular da população normal apresentou padrão de coloração homogêneo enquanto que a população alterada apresentou regiões mais intensamente coradas. As células alteradas apresentaram citoplasma e núcleo fracamente corados e nucléolos proeminentes pela coloração com Xilidine Ponceau e citoplasma com aspecto granular intensamente corado indicando regiões de maior concentração de glicoprotelnas pela reação de P.A.S.. Em análise eletroforética em gel de polia crilamida com SDS observou-se a presença de uma protelna de 3_kDa bastante evidenciada na popula_ão alterada e ausente na PC'_F,'lação inicial. Assim, as análises efetuadas demonstraram qu(:"", t. populaçao alterada é realmente transformada, podendo ser usada como um modelo para estudo de células tumorais / Abstract: The Vero cell linage eatabliahed from kidney cella of the Africa green monkey (Cerco_ithecua aethio_a) normally haa a characteriatic growth pathern. The cella are elonged and grow in monolayera. Maintained in culture. the Vero cella began to alter their morphology, behavior and growth in relation to their inicial characteriatica. Theae altered Vero population made up rounded. cella which grew into layered cellular aggregation. The aggregations consist of rounded cells and extracellular matrix covered by a flattened cellular layer. Theae altered cells. Grow in medium with bovine fetal serum. adhered quick and divided in soft agar medium that contained lesa concentrated nutrienta than normal cella require. A modal number of chromoaomea equal to 56 waa determined for the altered cella while the inicial population had 54 chromoaomea. The additional chromoaomea were an homologue to the 8 pair and another to the 27 pairo The polyploidy index in altered cella was 19%. while it waa only 5% in the inicial population. Xylidine Ponce_u:at pH 2,5 and the P.A.S. reaction attained uniformly the normal cella while altered onec ahowed intencely atained regiona. The nuclei and cytoplaam waa slightly attained while the nucleoli waa deeply attained with ylidine Ponceau in altered cells. They had granular cytoplasm after P.A.S. reaction, indicating glycoprotein rich region. Electrophoretic analysis in polyacrilamide gel with SDS revealed a36 kDa protein that was proeminent in the altered populationa and lacking in the inicial group. Thus, the analysis demonstrated that the altered cells constitute a tranaformed population and it can be used as a model for tumor cell atudiea / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maria Lucia Furlan Wada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T20:56:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria_SilvyaStuchi_M.pdf: 9539697 bytes, checksum: 138a555d1e996f9cc1fcc64a0b22116f (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O colágeno é amplamente utilizado como substrato para adesão e proliferação de células in vitro. Os substratos à base de colágeno podem ser preparados de formas variadas, podendo-se obter filmes secos de colágeno, gel flutuante ou estruturas tridimensionais. Diversos tipos celulares, quando cultivados em diferentes substratos de colágeno apresentam variações em suas características morfofisiológicas. Assim, não somente a presença de elementos da matriz extracelular mas também sua organização molecular são importantes para que as células expressem seu genótipo.Outro aspecto relevante sobre o comportamento das células durante a cultura é o fato de contraírem o gel de colágeno, tal como ocorre na derme em processos de cicatrização, fibroses e desenvolvimento do tecido conjuntivo. Em nosso trabalho, tivemos por objetivo estudar o padrão de crescimento e alterações morfofisiológicas de células VelO cultivadas sobre gel de colágeno tipo I. Amostras com 1, 5, 10, 15, 20, 25 e 30 dias de cultivo foram fixadas em Kamovsky e incluídas em Paraplast. Cortes de 5f.U1l foram submetidos às colorações de Hematoxilina­eosina (HE), Azul de toluidina pH 4,0 (AT), Xilidine Ponceau (XP) e PAS. Num outro experimento, foram colhidas amostras com 1, 2, 3, 4 e 5 dias de cultura na ausência e presença de soro fetal bovino, tendo-se medido o diâmetro da face superior do gel, para quantificação da contração. Com 1 dia de cultivo, as células aderiram a superfície do gel e formaram uma monocamada, com morfologia inicialmente arredondada e posteriormente fibroblastóide, apresentando coloração nuclear intensa ecitoplasma meta cromático com AT, núcleo e citoplasma corados com XP e citoplasma corado com P AS. Após 5 dias de cultivo várias camadas de células fibroblastóides são observadas na superfície do gel. Alguns focos de infiltração são observados assim como numerosos grânulos meta cromáticos que são depositados no interior do gel. Estes grânulos também se coravam pelo XP e P AS. Nos tempos posteriores de incubação, a proliferação e infiltração para o interior do gel são mais proeminentes e o padrão de coloração pelos AT, XP e P AS foram mantidos. Aos 20 dias de cultivo o gel assemelha-se a um tecido conjuntivo frouxo, representado por uma grande população de células dispersas numa matriz tridimensioanal finamente fibrilar. Aos 25 dias de cultivo observou-se um aumento do pregueamento da superfície do gel e uma reorganização das fibras do gel de colágeno evidenciadas por XP, caracterizando o processo de contração causado pelas células Vero neste substrato. Neste tempo de cultivo, as células da superfície se apresentam com o mesmo padrão de coloração, porém as células que se infiltram no gel apresentam morfologia senescente caracterizada por fragmentação citoplasmática e picnose nuclear que podem ser observadas até 30 dias de cultivo. No experimento de contração, na presença de soro, as células Vero contraíram o gel cerca de 10% após 1 dia de cultivo. Após 5 dias foi observada uma contração de cerca de 50% , sempre em relação ao diâmetro do gel sem células.Na ausência de soro, com 1 dia de cultivo, as células contraíram o gel em cerca de 7% e aos 5 dias, apenas 15% do diâmetro superior do gel foi contraído. Nossos resultados demonstram que as células Vero aderem, proliferam e infiltram-se no substrato de colágeno, apresentando ao longo do cultivo, alterações na forma celular, caracterizando um processo de diferenciação induzido pelo substrato. As propriedades citoquímicas dos grânulos depositados entre as fibras de colágeno permitem sugerir que sejam compostos por glicoproteínas sulfatadas e/ou carboxiladas. os resultados sugerem ainda que estes grânulos constituam-se de elementos da MEC produzidos e secretados pelas células. As células Vero são também capazes de contrair o gel de colágeno num mecanismo dependente da presença de soro fetal bovino / Abstract: Collagen is widely employed as substratum for cell adhesion and proliferation. Collagen-based substrata may be prepared in different ways, as dry films, floating gel or three dimensional structures. Many cell types undergo morphophysiological alterations when placed on different collagen substrata. Not only the presence but also the organization of individual components of the extracellular matrix are important for cells to assume a given phenotype. Another aspect about the behavior of cultured cells is their ability to contract collagen gels, similarly to process occurrings in the dermis during wound healing, in fibrosis, and in connective tissue development .We have here studied the behavior of Vero cells grown on type I collagen gels. Samples were harvested afier 1, 5, 10, 15, 20, 25 e 30 days of incubation, fixed in Kamovsky's fixative and embedded in Paraplast Plus. Sections 5 f-tm thick were obtained, dewaxed and stained with either hematoxilin-eosin (HE), toluidine blue at pH 4,0 (AT), xylidine ponceau (XP) or PAS. Parallel experiments were conducted to evaluate the effect of foetal bovine se rum on the cell's ability to contract collagen gels. The cells first adhered to the gel surface and constitute a monolayer afier 24 hours of culturing. The cells were initially rounded but became fibroblast-like and showed intense nuclear and cytoplasmatic metachromasy. Reactivity with XP was observed in the nuclei and cytoplasm and P AS-positive material accumulated in the cytoplasm. Mer 5 days, the cells were fibroblast-like and grew in multiple layers. Foci of cells invading the gel were observed at this time and numerous metachromatic granules were deposited in the gel. These granules were also XP and P AS positive. Longer periods of cell growth resulted in enhanced proliferation and invasion of the gel, but the staining characteristics were preserved. At 20 days, the cells occupied a large extension of the gel, which showed aspects of loose connective tissue. On the 25th. day, the gel surface is highly folded and XP­ stained collagen fibers were mostly aligned featuring the contraction of the gel by Vero cells.showing contraction of the gel by Vero cells. The cells inside the gel presented aspects of senescense, with cytoplasm fragmentation and nuclear picnosis. These aspects were aIs o observed on the 30th.day. In the presence of serum, the cells contracted the gel in 10% and 50% of its previous length after 1 and 5 days, respectively. Without serum the values were 7% and 15% shorter, after 1 and 5 days, respectively.The results demonstrated that Vero cells adhere to, proliferate and invade collagen gels in vitro characterizes a substratum-induced differentiation processo The cytochemical characteristics of the granules entrapped in the gel indicate that they are constituted by sulphated and/or carboxylated extracellular glycoproteins produced and secreted by the cells. It was also shown that the contraction of the gel is a serum-dependent activity of Vero cells / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Laercio Luis Vendite / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matematica, Estatistica e Computação Científica / Made available in DSpace on 2018-07-21T03:25:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leckar_HamiltonFaria_D.pdf: 3108709 bytes, checksum: a7f01446388f08097019085aa9a1c63f (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Não informado / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Matemática Aplicada

Orientador: Selma Candelaria Genari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:42:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Petinari_Leandro_M.pdf: 1891620 bytes, checksum: 00620df0a905704b914a9cf8decf8855 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador: Selma Candelaria Genari / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T19:22:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_EstelaMaria_D.pdf: 4512893 bytes, checksum: 36b5b4604b23f405a7254a71f5971cd4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: A cisplatina é um agente antineoplásico utilizado no tratamento quimioterápico de tumores como os de testículo, de ovário e de bexiga urinária. Contudo, estudos indicam que a cisplatina apresenta potencial mutagênico, genotóxico e tumorigênico tanto in vitro como in vivo. Após tratamento com 50 µg/ml de cisplatina durante 24 h, células Vero apresentaram alterações comportamentais e morfológicas associadas à transformação celular in vitro. Modificações morfológicas foram investigadas com utilização de imunocitoquímica (fibronectina), microscopia eletrônica de varredura e coloração faloidina-fluoresceína (actina). O estudo proliferativo foi realizado a partir de curvas de crescimento e o padrão de adesão celular foi obtido através de testes de adesão. Características citogenéticas foram avaliadas em células Vero e V79 tratadas com cisplatina, através da determinação dos números modais de cromossomos, das freqüências de poliploidia e dos índices mitóticos. Células Vero controles apresentaram crescimento em monocamadas, enquanto que células Vero transformadas cresceram em múltiplas camadas, formando grumos ou agregados celulares. A proliferação celular e as características morfológicas e de adesão das células Vero transformadas foram acentuadamente diferentes das células controles. Células Vero transformadas e células V79 tratadas com cisplatina apresentaram alterações nos números de cromossomos além de aumento nos índices mitóticos e nas freqüências de poliploidia. Os resultados obtidos indicam que as alterações morfológicas, de crescimento e de adesão observadas em células Vero e as alterações citogenéticas, observadas em células Vero e em células V79, provavelmente relacionam-se com a transformação celular in vitro induzida pelo tratamento com cisplatina. Estas células Vero transformadas apresentam características associadas ao crescimento neoplásico, podendo ser utilizadas como modelo de estudo de células tumorais in vitro / Abstract: Cisplatin is an antineoplastic agent used to treat solid malignancies, such as testicular, ovarian and bladder tumors. However, both in vitro and in vivo, cisplatin has been shown to be mutagenic, genotoxic and tumorigenic. Maintained in culture, Vero cells presented behavioral and morphological alterations associated with cellular transformation in vitro, after treatment with 50 µg/ml of cisplatin during 24 h. The morphological alterations were investigated using immunocytochemistry (fibronectin), scanning electron microscopy and the actin cytoskeleton was labeling with fluorescein isothiocyanate-phalloidin. The study of proliferation was obtained from the growth curve and the adhesion pattern was obtained from the adhesion assay. In Vero and V79 cells treated with cisplatin, cytogenetical characteristics were obtained by modal chromosome numbers, polyploidy frequencies and mitotic index determinations. Control Vero cells presented growth in a monolayer, while the transformed cells grew in multilayers forming cellular aggregates. The cellular proliferation, adhesion pattern and morphological characteristics of the transformed Vero cells were very different from the control ones. Transformed Vero cells and cisplatin-treated V79 cells presented altered chromosome numbers. Polyploidy frequencies and mitotic indexes were also enhanced in these cells. The results indicate that morphological, growth and adhesion changes observed in Vero cells and cytogenetical alterations, observed in Vero and V79 cells, probably resulted from cellular transformation in vitro induced by cisplatin treatment. These transformed Vero cells presented characteristics associated with neoplastic growth, and can be used as a model for tumor cells studies in vitro / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Hormônios glicocorticóides (GCs), através do receptor de glicocorticóide (GR), bloqueiam o processo de inflamação, suprimem a ativação do sistema imune e atuam como agentes inibidores do crescimento, in vitro e in vivo. GR interage com outros fatores de transcrição, como AP-1 e NF-κB. Para estudar o mecanismo de ação de GCs, utilizamos o modelo celular ST1, variante da linhagem C6 de glioma de rato, que é hiper-sensível a GCs. O tratamento hormonal induz completa reversão fenotípica tumoral-normal, bem como inibição dos níveis basal e induzido por TNF-α da atividade de ligação a DNA do fator de transcrição NF-κB. O papel de NF-κB na reversão fenotípica de células ST1, induzida por GCs, foi analisado por: (1) bloqueio da expressão da subunidade RelA de NF-κB através de construções \"antisense\"; (2) inibição da atividade NF-κB com o anti-oxidante curcumina. Após transfecção estável, foram isolados 12 clones transfectados com o vetor pOPI3-RelA(as), expressando o mRNA de RelA na orientação reversa, e 9 clones transfectados com o vetor parental pOPI3CAT. A proliferação destes clones foi analisada através de curvas de crescimento e eficiência de plaqueamento em suspensão de agarose. Não foi possível correlacionar a expressão de RelA com a proliferação celular, pois tanto os clones ST1-RelA(as) como alguns clones ST1-pOPI3CAT apresentaram menor taxa de crescimento e eficiência de plaqueamento em agarose, quando comparados com a célula parental ST1. Curcumina foi capaz de inibir a proliferação e a atividade de ligação a DNA do fator de transcrição NF-κB, indicando que este fator é importante no controle da proliferação das células ST1. A atividade de AP-1 também é modulada negativamente por GC, sugerindo que a inibição da proliferação mediada por GC em células ST1 se dá através da inibição conjunta de NF-κB e AP-1. / Glucocorticoid hormones (GC) bind to their receptor (GR), which acts as a transcription factor in the nucleus, blocking the inflammation process, suppressing activation of the immune system and acting as a growth-repressor and as anti-tumor agent both in vivo and in vitro. GR interacts with other transcription factors, such as AP-1 and NF-κB. To study the mecanism of action of GC, we have been using the ST1 cell model, a variant of the C6 glioma cell line, which is hyper-responsive to GC. Hormonal treatment leads ST1 cells to a dramatic tumoral-normal phenotypic reversion. We previously showed that GCs are able to repress both the basal and the TNF-α-induced levels of NF-κB DNA binding activity in ST1 cells. The role of NF-κB in the tumoral-normal phenotypic reversion induced by GC in ST1 cells was analysed by: (1) blocking the RelA subunit of NF-κB by expression of an antisense construct; (2) inhibition of NF-κB activity by treatment with curcumin (antioxidant). Upon stable transfection, we isolated 12 clones transfected with pOPI3-RelA(as) vector, which express reverse RelA mRNA, and 9 clones transfected with the empty pOPI3CAT vector. Cell proliferation of isolated clones was evaluated by growth curves and soft-agar assays. It was not possible to correlate RelA expression with cell proliferation since both types of clones (transfected with the pOPI3-RelA vector or with the empty vector) displayed a lower growth rate in monolayer culture, and decreased capacity to form colonies in semi-solid substrate, when compared to the non-transfected parental ST1 cell line. Curcumin was able to inhibit ST1 cell proliferation, as well NF-κB DNA-binding, indicating the importance of NF-κB in ST1 cells\' growth control. AP-1 activity is also downregulated by GC, suggesting that GC-mediated inhibition of cell proliferation in ST1 cells is results from concomitant inhibition of NF-κB and AP-1.

Hormônios glicocorticóides (GCs), através do receptor de glicocorticóide (GR), bloqueiam o processo de inflamação, suprimem a ativação do sistema imune e atuam como agentes inibidores do crescimento, in vitro e in vivo. GR interage com outros fatores de transcrição, como AP-1 e NF-κB. Para estudar o mecanismo de ação de GCs, utilizamos o modelo celular ST1, variante da linhagem C6 de glioma de rato, que é hiper-sensível a GCs. O tratamento hormonal induz completa reversão fenotípica tumoral-normal, bem como inibição dos níveis basal e induzido por TNF-α da atividade de ligação a DNA do fator de transcrição NF-κB. O papel de NF-κB na reversão fenotípica de células ST1, induzida por GCs, foi analisado por: (1) bloqueio da expressão da subunidade RelA de NF-κB através de construções \"antisense\"; (2) inibição da atividade NF-κB com o anti-oxidante curcumina. Após transfecção estável, foram isolados 12 clones transfectados com o vetor pOPI3-RelA(as), expressando o mRNA de RelA na orientação reversa, e 9 clones transfectados com o vetor parental pOPI3CAT. A proliferação destes clones foi analisada através de curvas de crescimento e eficiência de plaqueamento em suspensão de agarose. Não foi possível correlacionar a expressão de RelA com a proliferação celular, pois tanto os clones ST1-RelA(as) como alguns clones ST1-pOPI3CAT apresentaram menor taxa de crescimento e eficiência de plaqueamento em agarose, quando comparados com a célula parental ST1. Curcumina foi capaz de inibir a proliferação e a atividade de ligação a DNA do fator de transcrição NF-κB, indicando que este fator é importante no controle da proliferação das células ST1. A atividade de AP-1 também é modulada negativamente por GC, sugerindo que a inibição da proliferação mediada por GC em células ST1 se dá através da inibição conjunta de NF-κB e AP-1. / Glucocorticoid hormones (GC) bind to their receptor (GR), which acts as a transcription factor in the nucleus, blocking the inflammation process, suppressing activation of the immune system and acting as a growth-repressor and as anti-tumor agent both in vivo and in vitro. GR interacts with other transcription factors, such as AP-1 and NF-κB. To study the mecanism of action of GC, we have been using the ST1 cell model, a variant of the C6 glioma cell line, which is hyper-responsive to GC. Hormonal treatment leads ST1 cells to a dramatic tumoral-normal phenotypic reversion. We previously showed that GCs are able to repress both the basal and the TNF-α-induced levels of NF-κB DNA binding activity in ST1 cells. The role of NF-κB in the tumoral-normal phenotypic reversion induced by GC in ST1 cells was analysed by: (1) blocking the RelA subunit of NF-κB by expression of an antisense construct; (2) inhibition of NF-κB activity by treatment with curcumin (antioxidant). Upon stable transfection, we isolated 12 clones transfected with pOPI3-RelA(as) vector, which express reverse RelA mRNA, and 9 clones transfected with the empty pOPI3CAT vector. Cell proliferation of isolated clones was evaluated by growth curves and soft-agar assays. It was not possible to correlate RelA expression with cell proliferation since both types of clones (transfected with the pOPI3-RelA vector or with the empty vector) displayed a lower growth rate in monolayer culture, and decreased capacity to form colonies in semi-solid substrate, when compared to the non-transfected parental ST1 cell line. Curcumin was able to inhibit ST1 cell proliferation, as well NF-κB DNA-binding, indicating the importance of NF-κB in ST1 cells\' growth control. AP-1 activity is also downregulated by GC, suggesting that GC-mediated inhibition of cell proliferation in ST1 cells is results from concomitant inhibition of NF-κB and AP-1.