Submitted by Pós Imunologia (ppgimicsufba@gmail.com) on 2017-07-31T19:06:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Approved for entry into archive by Edvaldo Souza (edvaldosouza@ufba.br) on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-01T20:27:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação Cayo Amaral Abreu (1).pdf: 920431 bytes, checksum: ab2e71045643d125d189674441bd23b6 (MD5) / PAPES/CNPq, CAPES / O melanoma é um tipo de tumor de pele com altas taxas de incidências por todo mundo. Buscando formas de terapia auxiliar, destaca-se o Imiquimode (IMIQ), um creme de uso tópico que atua no receptor tipo toll-7 (TLR-7) estimulando o sistema imune inato a promover atividades tumoricidas. No presente estudo o tumor de linhagem B16F0 foi inoculado na orelha dos camundongos, seguidos do tratamento com o creme IMIQ. A mortalidade e o desenvolvimento tumoral foram acompanhados, nos diferentes grupos experimentais. Após 12 dias de tratamento, baços e linfonodos cervicais foram removidos em grupos de animais tratados e não tratados. As células foram colocadas em cultivo, plaqueadas e marcadas para análise em citômetro de fluxo. Grupos tratados com IMIQ apresentaram considerável eficácia no aumento da sobrevida e na contenção do tumor. Além disso, foi demonstrado que a atividade antitumoral é dependente da molécula de CD1, comprovando a importância das células NKT no combate ao melanoma. Ademais, nos grupos tratados, houve maior produção de IFN-γ por linfócitos TCD8 esplênicos, e TNF-α por células TCD4 e TCD8 de linfonodos drenantes. Pôde-se ainda notar o aumento de granzima B (GZB) produzida por células dendríticas (DCs) no baço de animais com melanoma. Já na estimulação de esplenócitos com o mitógeno Concanavalina A, foi evidenciada inibição na produção de GZB por células dendríticas. Conclui-se que NKT pode ser a principal responsável pela migração dessa população celular e que a produção de GZB por DCs pode ser inibida mediante a presença de antígenos tumorais. / Melanoma is a type of skin tumor with high incidence rates worldwide. Aiming for forms of auxiliary therapy, Imiquimode (IMIQ), a topical cream that acts on the toll-7 receptor (TLR-7), stimulates the innate immune system to promote tumoricidal activities. In the present study the B16F0 lineage tumor was inoculated into the ears of the mice, followed by treatment with the IMIQ cream. Mortality and tumor development were monitored in the different experimental groups. After 12 days of treatment, spleens and cervical lymph nodes were removed in groups of treated and untreated animals. Cells were plated, plated and labeled for flow cytometer analysis. Groups treated with IMIQ showed considerable efficacy in increasing survival and tumor containment. In addition, it has been demonstrated that the antitumor activity is dependent on the CD1 molecule, proving the importance of NKT cells in the fight against melanoma. In addition, in the treated groups, there was a greater production of IFN-γ by splenic TCD8 lymphocytes, and TNF-α by TCD4 and TCD8 cells from draining lymph nodes. It was also possible to note the increase of granzyme B (GZB) produced by dendritic cells (DCs) in the spleen of animals with melanoma. Already in the stimulation of splenocytes with the mitogen Concanavalin A, inhibition was demonstrated in the production of GZB by dendritic cells. It is concluded that NKT may be the main responsible for the migration of this cell population and that the production of GZB by DCs can be inhibited by the presence of tumor antigens.

A fibrose pulmonar é uma via comum de várias doenças agudas e crônicas do interstício pulmonar que pode resultar na cicatrização anormal do pulmão. Há acúmulo excessivo das proteínas da matriz extracelular levando a desestruturação das paredes alveolares, e consequente perda das trocas gasosas pelos pulmões. As células NKT são grande fonte de citocinas e podem ser cruciais na polarização de macrófagos para o fenótipo M2. O projeto tem a hipótese de que as células NKT podem influenciar o desenvolvimento da fibrose pulmonar via modulação de macrófagos. Para isso, animais selvagens e knockout para células NKT invariante (Ja18-/-) foram submetidos ao protocolo de indução de fibrose pulmonar pela bleomicina. Os resultados indicam que o grupo Ja18-/- assim como os grupos experimentais que receberam agonistas para células NKT apresentaram uma proteção contra a fibrose pulmonar uma vez que houve menor síntese de hidroxiprolina, deposição de colágeno, citocinas pró-fibróticas e a manutenção de macrófagos M1 no tecido pulmonar. / Pulmonary fibrosis is a common pathway of various acute and chronic interstitial lung diseases that may result in abnormal healing of the lung. There is excessive accumulation of extracellular matrix proteins, leading to disruption of the alveolar walls and the consequent loss of gas exchange through the lungs. NKT cells are a big source of cytokines and may be crucial in the polarization of macrophages to the M2 phenotype. This project has hypothesized that NKT cells can influence the development of pulmonary fibrosis through modulation of macrophages. For this, wild and knockout invariant NKT cells (Ja18-/-) mice were subjected to the protocol of bleomycin induced pulmonary fibrosis. The results indicate that the group Ja18-/- as well as the experimental groups receiving agonists for NKT cells showed protection against lung fibrosis since there was less synthesis of hydroxyproline, collagen deposition, pro-fibrotic cytokines and maintenance of macrophages M1 in lung tissue.

As células NKT compreendem um grupo distinto de linfócitos caracterizados pela reatividade a glicolipídios apresentados pela molécula CD1d. Em nosso trabalho, nós investigamos a participação das células NKT na homeostase intestinal utilizando animais nocautes para essas células e também caracterizamos os subtipos de NKT no intestino. Nos animais nocautes observamos que a ausência de células NKT influencia a microbiota e a homeostase intestinal. Os animais nocautes possuem diminuição no filo Firmicutes, diminuição dos níveis de IgA nas fezes e de TGF-β no intestino. Esses animais também são mais suscetíveis à colite induzida por DSS, apresentando menor sobrevida, menor tamanho do cólon e aumento no score. Nos animais selvagens, a indução do subtipo NKT10 diminuiu a inflamação intestinal, não causou intensa redução do cólon e reduziu a frequência de células NKT e do subtipo NKT17 no intestino. Nossos resultados indicam que as células NKT intestinais são peças importantes para a homeostase intestinal e para a composição da microbiota intestinal. / NKT cells comprise a distinct group of lymphocytes characterized by their reactivity to glycolipids presented by CD1d. In our work, we investigated the involvement of NKT cells in intestinal homeostasis using knockout (KO) mice and we also characterized NKT subtypes in the intestine. The absence of NKT cells in KO mice influenced the intestinal microbiota and homeostasis. KO mice had a decrease in the Firmicutes phyla, in the levels of fecal IgA and TGF-β in the intestine. These mice are also more susceptible to DSS-induced colitis, exhibiting worse survival, severe shortening of the colon and higher score. In wild type mice, the induction of the NKT10 subtype decreased intestinal inflammation, did not cause intense reduction of colon and reduced the frequency of NKT cells and the NKT17 subtype in the intestine. Our results indicate that intestinal NKT cells are important for intestinal homeostasis and microbiota composition.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:52Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10949.pdf: 1710290 bytes, checksum: 4f0e0bd77ebdd477f06366315fe3b8f9 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / As características da resposta imunológica em pacientes infectados pelo Mycobacterium leprae e pelo virus da imunodeficiência humana (HIV) não estão bem elucidadas. O objetivo geral desta tese foi avaliar diferentes parâmetros imunológicos na interação destas doenças. Inicialmente avaliamos a imunidade celular em quatro grupos de pacientes dividos em: indivíduos saudáveis, monoinfectados pelo Mycobacterium leprae, monoinfectados pelo virus da imunodeficiência humana e coinfectados pelo M. leprae e HIV. Observamos que o grupo coinfectado apresentou diminuição da razão de células CD4:CD8, aumento de níveis de ativação em células T CD8+, aumento da razão de células T V1:V2 e diminuição da porcentagem de células dendríticas plasmocitóides, comparadas com o grupo de indivíduos monoinfectados pelo HIV-1. A produção de IL-4 por linfócitos T CD4+ foi correlacionado positivamente com a porcentagem de subpopulações de memória efetora de células T CD4+, sugerindo diferenciação antigênica da população de células T em ambas as infecções de HIV-1 e M. leprae. A coinfecção por M. leprae pode exacerbar a imunopatologia da doença induzida pelo HIV-1. Houve uma tendência na expressão de citocinas Th2 na resposta de células T CD4+ em ambas infecções de M. leprae e HIV-1, mas não obtivemos efeitos aparentes nos pacientes coinfectados. No trabalho subsequente, avaliamos de forma quantitativa e qualitativa as células NKT da imunidade inata nos indivíduos saudáveis e infectados pelo HIV. A frequência de células NKT que secretam IFN- e TNF- estava significantemente diminuída em pacientes HIV-1 quando comparados com os indivíduos saudáveis. A magnitude da resposta de IFN- teve correlação inversa com o número de anos da infecção, sugerindo que a função das células NKT está diminuída progressivamente ao longo do tempo. Não houve alteração na resposta das células NKT dos indivíduos infectados pelo HIV após tratamento com Forbol12-Miristato13-Acetato (PMA) e ionomicina, sugerindo um defeito no sinal do TCR prejudicando a produção de citocina. Foi observado uma diminuição na magnitude da resposta com produção de citocinas Th1 pelas células NKT quando correlacionado com a expressão de CD161, sugerindo um mecanismo inibitório deste receptor na regulação da resposta de células NKT. Por último, nós demonstramos que pacientes coinfectados tem redução da frequência de células NKT no sangue periférico, quando comparados com indivíduos saudáveis e pacientes monoinfectados pelo M. lepare. Por outro lado, as células NKT de pacientes coinfectados secretam mais IFN- quando comparadas com pacientes monoinfectados pelo M. lepare. Estes resultados sugerem que as células NKT têm atividade aumentada em pacientes coinfectados, contudo em frequência diminuída no sangue periférico. / The immune response characteristics in patients infected with Mycobacterium leprae and human immunodeficiency virus (HIV) is not elucidated. The aim of this study was to evaluate different immune parameters in the overlapping of both diseases. In the first paper we observaded The co-infected group exhibited lower CD4:CD8 ratio, higher levels of CD8 T-cell activation, increased V1: V2 T cell ratio and lower percentage of plasmacytoid dendritic cells, compared to HIV-1 infected subjects. Across infected groups, IL-4 production by CD4 T lymphocytes was positively correlated with the percentage of effector memory CD4 T cells, suggesting antigenically-driven differentiation of such T cell population in both HIV-1 and M. leprae infections. Co-infection with M. leprae may exacerbate the immunopathology of HIV-1 induced disease. A T helper 2 (Th2) bias in the CD4 T-cell response was evident in both HIV-1-infection and leprosy, but no additive effect was apparent in co-infected patients. Subsequently, we evaluated quantitatively and qualitatively the NKT cells from innate immune response in HIV-infected subjects and healthy controls. The frequencies of NKT cells secreting IFN- and TNF- were significantly lower in HIV-1-infected subjects and the magnitude of the IFN- production was negatively correlated with the number of years of infection, suggesting that NKT cell function is progressively lost over time. NKT cell responses in HIV-1 infected subjects were essentially normal after treatment with Phorbol12-Myristate13- Acetato (PMA) and ionomycin, suggesting that defective TCR-signaling was the underlying defect in the cytokine production. The lower levels of the NKT Th1 response correlated with higher CD161 expression, suggesting a role for this inhibitory receptor in regulating NKT cell responsiveness. Finally, we have investigated the NKT cells in the context of HIV and M. leprae coinfection. The volunteers were enrolled into four groups: twenty-seven healthy controls, seventeen HIV seropositive patients, seventeen patients with leprosy, and twenty-three co-infected patients with leprosy and HIV-1 infection. Flow cytometric and ELISPOT assays were performed in stored PBMC. We demonstrated that coinfected patients have reduced NKT cells in the peripheral blood when compared to healthy subjects and leprosy monoinfected patients. On the other hand, NKT cells from coinfected patients secrete more IFN- when compared to leprosy monoinfected patients. These results suggest that NKT cells are highly active in coinfected patients, although occurring in lower frequency in the peripheral blood. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

A fibrose pulmonar é uma via comum de várias doenças agudas e crônicas do interstício pulmonar que pode resultar na cicatrização anormal do pulmão. Há acúmulo excessivo das proteínas da matriz extracelular levando a desestruturação das paredes alveolares, e consequente perda das trocas gasosas pelos pulmões. As células NKT são grande fonte de citocinas e podem ser cruciais na polarização de macrófagos para o fenótipo M2. O projeto tem a hipótese de que as células NKT podem influenciar o desenvolvimento da fibrose pulmonar via modulação de macrófagos. Para isso, animais selvagens e knockout para células NKT invariante (Ja18-/-) foram submetidos ao protocolo de indução de fibrose pulmonar pela bleomicina. Os resultados indicam que o grupo Ja18-/- assim como os grupos experimentais que receberam agonistas para células NKT apresentaram uma proteção contra a fibrose pulmonar uma vez que houve menor síntese de hidroxiprolina, deposição de colágeno, citocinas pró-fibróticas e a manutenção de macrófagos M1 no tecido pulmonar. / Pulmonary fibrosis is a common pathway of various acute and chronic interstitial lung diseases that may result in abnormal healing of the lung. There is excessive accumulation of extracellular matrix proteins, leading to disruption of the alveolar walls and the consequent loss of gas exchange through the lungs. NKT cells are a big source of cytokines and may be crucial in the polarization of macrophages to the M2 phenotype. This project has hypothesized that NKT cells can influence the development of pulmonary fibrosis through modulation of macrophages. For this, wild and knockout invariant NKT cells (Ja18-/-) mice were subjected to the protocol of bleomycin induced pulmonary fibrosis. The results indicate that the group Ja18-/- as well as the experimental groups receiving agonists for NKT cells showed protection against lung fibrosis since there was less synthesis of hydroxyproline, collagen deposition, pro-fibrotic cytokines and maintenance of macrophages M1 in lung tissue.