Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431009-Texto+Completo-0.pdf: 4261327 bytes, checksum: a42cc8ac210210fff6240ec877b3fbc4 (MD5) Previous issue date: 2011 / Spinal cord injuries (SCI) cause devastating consequences for patients, and a high cost to society. Many attempts have been made to find a cure for SCI. Stem cell research has shown encouraging results, but defining the best method and time of administration remains a challenge in the clinical setting. We compared single bone marrow mononuclear cells (BMMCs) transplant by direct injection (DI) versus lumbar puncture (LP). We aimed to determine whether multiple transplants by LP may be equally or more effective than one transplant by DI. To this end, we evaluated the presence of cells after transplantation in the injured site, motor function for 3 weeks on the Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) Scale, and the size of the lesion on histology. We found that BMMCs transplanted by LP was present in the injured site, and that two transplants by this route were more effective to promote motor improvement and significant lesion size reduction than the DI. / O Trauma-raquimedular (TRM) é uma patologia que afeta drasticamente a qualidade de vida dos pacientes acometidos, possui uma alta incidência e ocasiona um alto custo para o governo e a sociedade. Os tratamentos existentes para o TRM são apenas de cunho paliativo, não sendo capazes de reverter o dano neurológico ocasionado pelo trauma. Em função disso, é necessário investigar novas terapias que busquem soluções mais efetivas para esses casos. Os estudos com célulastronco de medula óssea (CTMO) têm demonstrado resultados animadores, mas ainda não definitivos para aplicação clínica; assim, a ampliação dos estudos préclínicos é indispensável. Para que uma pesquisa se concretize é preciso estabelecer de um modelo de lesão in vivo, desta forma nosso primeiro passo foi este, em seguida, buscamos, não somente, comparar o transplante de células mononucleadas da medula óssea (CMMO) com controle de veículo, como também, analisar o uso de duas vias de administração celular diferentes com janelas de tempo de transplante também distintas. A identificação da melhor via de administração para células-tronco e o tempo em que estas devem ser aplicadas também é fundamental para a prática clínica. Nossos grupos experimentais de estudo estão divididos entre vias de administração diferentes (intraparenquimatosa e subaracnóidea), com tempos de transplante de 48hs para via intraparenquimatosa ou direta, e 48hs e 9 dias para subaracnóidea ou punção lombar, bem como, dividem-se em tratados com CMMO, e seu controle de veículo (solução salina).Os animais foram avaliados quanto à função motora, através da escala de BBB, quanto à presença de CMMO na lesão, por meio de PCR, e quanto ao tamanho de lesão, através de técnica histológica. Nossos resultados demonstraram uma melhora da função motora no grupo tratado com 2 transplantes de CMMO pela via subaracnóidea e que estas células podem migrar para a lesão quando transplantadas por esta mesma via. A análise histológica revelou que o tamanho de lesão no grupo tratado com CMMO pela via direta era significativamente maior do que no grupo tratado com CMMO por punção lombar.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437015-Texto+Completo-0.pdf: 2405577 bytes, checksum: 64fe8d7f54de71f570c0f7a29d9c6838 (MD5) Previous issue date: 2011 / Cellular therapy represent a new frontier for the treatment of several diseases, including diseases related to central nervous system. Human umbilical cord blood is an attractive source of stem cells; however, it has a heterogeneous population with a small amount of mesenchymal stem cells. Currently, cell reprogramming induced by different methodologies can confer pluripotency to differentiated adult cells. The objective of the study was to evaluate the reprogramming potential of fibroblasts and neural differentiation after co-culture with umbilical cord blood mononuclear cells. This study was approved by the Ethics Committee of PUCRS (CEP 11/05504). Cells were obtained from four human umbilical cord blood. Cell suspensions were fractionated at gradient of density 1077. The mononuclear cells of each sample were cultured for 7 days and later, the culture was infected with 105 cells of mouse fibroblast cell line NIH 3T3 and co-cultured for 6 days. To evaluate the pluripotency it was performed RNA extraction and later, amplification using primers specific for pluripotency genes. The differentiation was also confirmed by the adipogenic and osteogenic differentiation. Neural differentiation of the reprogrammed cells was obtained by the method described by Song et. al (2008) and evaluated by immunofluorescence. Population growth was quantified by hemocytometer. All co-cultured cells showed adipogenic and osteogenic differentiation capacity. After co-cultivation cells began transcribing the pluripotency gene KLF4. Statistically significant differences in the parameters area, diameter, optical density and fractal dimension were observed by confocal microscopy in reprogrammed and neural differentiated cells. The population of reprogrammed cells doubled every three days until the addition of the last medium of neural differentiation, when cultures became quiescent until the end of the neural differentiation. The contact in form of co-cultivation of fibroblasts with umbilical cord blood mononuclear fraction for six days promoted the reprogramming of these cells to a indifferentiation stage, allowing the induction of neural differentiation later. / As terapias celulares representam uma nova fronteira para o tratamento de diversas doenças, inclusive patologias relacionadas ao sistema nervoso central. O sangue de cordão umbilical humano é uma atrativa fonte de células-tronco, porém, apresenta uma população heterogênea com pouca quantidade de células-tronco mesenquimais. Atualmente, a reprogramação celular induzida através de metodologias distintas, pode conferir pluripotência às células adultas diferenciadas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de reprogramação de fibroblastos e a diferenciação neural após co-cultivo com fração mononuclear de sangue de cordão umbilical. Foram obtidas células da fração mononuclear de quatro cordões umbilicais humanos de pacientes atendidas no Centro Obstétrico do Hospital São Lucas da PUCRS. As suspensões celulares foram fracionadas em gradiente de densidade 1077. A fração mononuclear de cada amostra foi cultivada por sete dias e após, contaminada com 105 células da linhagem de fibroblasto de camundongos NIH 3T3 e co-cultivadas por 6 dias. Para avaliação da pluripotência, foi realizada extração de RNA e posterior amplificação utilizando oligonulceotídeos específicos para os genes de pluripotência Oct3/4, Sox2 e KLF4. O fenótipo mesenquimal foi confirmado pela diferenciação adipogênica e osteogênica. A neurodiferenciação das células reprogramadas seguiu o método descrito por Song et. al (2008) e foi avaliada por imunofluorescência. O crescimento populacional foi quantificado em hemocitômetro. Todas as células co-cultivadas mostraram capacidade de diferenciação adipogênica e osteogênica. Após o co-cultivo, as células passaram a transcrever o gene de pluripotência KLF4. Diferenças estatisticamente significativas nos parâmetros área, diâmetro, densidade óptica e dimensão fractal foram observadas por microscopia confocal nas células reprogramadas e neurodiferenciadas. A população de células reprogramadas duplicou a cada três dias até o momento da adição do ultimo meio de neurodiferenciação, quando as culturas tornaram-se quiescentes até o final do período de neurodifereciação. O contato em forma de co-cultivo dos fibroblastos com a fração mononuclear de cordão umbilical por seis dias promoveu a reprogramação dessas células a um estágio com certa plasticidade, permitindo a indução posterior de neurodiferenciação.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000449056-Texto+Completo-0.pdf: 2018454 bytes, checksum: e1cb8245a85f0c29d0e1f07814420e60 (MD5) Previous issue date: 2013 / Chronic cartilage lesions, like septal and auricular perforations, are easily found at the otolaryngologist office. Its treatment is a challenge for physicians and patients, due to few alternatives and limit success. With the objective to decrease the surgical procedures, it’s been studying alternative methods for the total regeneration of the cartilaginous defects. The use of cellular therapy had been used in some cases, but there are no chronic cartilaginous protocols well written in the medical literature to compare the different results. This paper has the objective to describe a chronic cartilaginous lesion in an experimental model, for future studies with cellular therapy. / Lesões cartilaginosas crônicas, como as perfurações septais e auriculares, são facilmente encontradas no consultório do otorrinolaringologista. Seu tratamento é um desafio tanto para o médico quanto para o paciente, devido a poucas alternativas e sucesso limitado. Com o objetivo de diminuir a morbidade dos procedimentos cirúrgicos, cada vez mais têm sido estudados métodos alternativos para a regeneração completa dos defeitos cartilaginosos. O uso de terapia celular já está sendo utilizado em alguns casos, porém não há protocolos de lesões cartilaginosas crônicas bem descritos na literatura médica a fim de se obter comparações adequadas desses resultados. Este trabalho tem por objetivo descrever uma lesão cartilaginosa crônica em um modelo experimental, para estudos futuros com terapia celular.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443581-Texto+Parcial-0.pdf: 2098354 bytes, checksum: 0b5ec85f1b50d0c42f83f9793d9e1af5 (MD5) Previous issue date: 2012 / Lateral amyotrophic sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disease characterized by the selective loss of both lower and upper motoneurons in the spinal cord, brain stem and motor cortex. Loss of motoneurons leads to progressive paralysis, and death in 2 to 5 years. Treatment is based on symptomatic measures and pharmacological therapy available is not curative. Thus, it is of great importance to develop new therapeutic strategies to manage this disease. Alternatively, stem cells to replace could be used to replace degenerating neurons or to stop/delay neuronal death. The aim of this study was to verify if bone marrow mononuclear cells (BMMC) have therapeutic potential in transgenic mice superexpressing SOD1G93A. These animals’ phenotypic and physiopathological characteristics mimic those of ALS. Seventy-day-old or 110-day-old mice were administered with 107 BMMC in the tail vein. BMMC were obtained from C57BL/6-EGFP or SOD1G93A donors. Control animals received saline. In order to determine disease onset and progression, animals were evaluated in the Rotarod test, by electromyography and had their body weight measured. Survival was also evaluated. Tissue samples were collected for PCR analysis of cell migration. Additional groups of animals were euthanized at 120-days-old for histological analysis and the alkaline comet assay. Our results indicate that EGFPBMMC transplantation in 70-day-old mice (pre-symptomatic) mice prolong survival, preserve motor function and preserve motoneurons in the ventral horn of the spinal cord. However, for mSOD1BMMC the observed effect is intermediary. Furthermore, in 110-day-old (symptomatic) mice, only EGFPBMMC prolonged survival. This effect was more discrete than the one observed for pre-symptomatic-treated animals. Finally, systemically administered BMMC migrate into the spinal cord where fragments of their DNA were identified by PCR. There were no differences between the experimental groups in the electromyographical evaluation or DNA integrity measured by the alkaline comet assay. Our results suggest that BMMC have therapeutic potential in ALS since we observed improved motor performance and prolonged survival in animals that received the transplant. Nonetheless, outcomes were better when intervention was early and the transplanted cells did not express the mutated SOD1. Thus, our data represent a step forward in making cell-based therapy available for ALS patients. However, questions associated to the time of intervention and the source of the cells should be carefully addressed. / A esclerose lateral amiotrófica (ELA) é uma doença neurodegenerativa caracterizada por uma perda seletiva de neurônios motores na medula espinhal, tronco encefálico e córtex motor. A perda de motoneurônios dá início a uma paralisia progressiva, levando o paciente a óbito em 2 a 5 anos. O tratamento se baseia principalmente em medidas sintomáticas e a terapia farmacológica existente não é curativa. Assim, é de máxima importância o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Como alternativa, existe a perspectiva do uso de células-tronco para substituir neurônios em degeneração, ou impedir/retardar o processo de morte neuronal. O objetivo deste estudo foi verificar se as células mononucleares da medula óssea (CMMO) apresentam potencial terapêutico em camundongos transgênicos que superexpressam SOD1G93A. Estes animais apresentam características fisiopatológicas e fenotípicas que se assemelham à ELA. Aos 70 dias (pré-sintomático) ou 110 dias (sintomático) de vida os animais receberam 107 CMMO pela veia da cauda. Camundongos C57BL/6-EGFP ou SOD1G93A foram utilizados como doadores. Animais controle receberam solução salina. Para determinar a idade em que os animais passam a apresentar sintomas da doença e diferenças na progressão, foram utilizados o teste motor do Rotarod, eletroneuromiografia e o peso corporal dos animais. A sobrevida dos animais também foi analisada. Após a eutanásia foram coletadas amostras para avaliação da migração celular por PCR. Grupos adicionais de animais foram tratados conforme previamente descrito e eutanasiados aos 120 dias de vida para avaliação histológica e ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados indicam que o transplante intravenoso de EGFPCMMO aumenta a sobrevida de animais tratados aos 70 ou aos 110 dias de vida. Quando a intervenção é feita no período pré-sintomático, o aumento da sobrevida é acompanhado de preservação da função motora e de motoneurônios do corno ventral da medula espinhal. Entretanto, quando as células transplantadas são mSOD1CMMO, o efeito observado nos mesmos parâmetros é apenas intermediário. Além disso, quando o transplante ocorre no período sintomático, somente as EGFPCMMO promovem aumento na sobrevida, embora discreto. A perda de função motora e a progressão não se modificam. Finalmente, embora as células tenham sido administradas sistemicamente, migram para a medula espinhal, onde foram identificados fragmentos de seu DNA.Não foram identificadas diferenças entre os grupos na avaliação por eletroneuromiografia, nem da integridade de do DNA avaliada pelo ensaio do cometa alcalino. Nossos resultados até o momento sugerem que a fração mononuclear da medula óssea tem potencial terapêutico no tratamento da ELA, uma vez que verificamos melhora de desempenho motor e aumento de sobrevida em animais submetidos ao transplante. Apesar disso, os desfechos são mais favoráveis quando o tratamento é precoce e as células não expressam a mutação da SOD1 desencadeadora da ELA. Assim, nossos dados representam avanço na disponibilização do tratamento com células-tronco para pacientes com ELA, mas questões relacionadas ao período de intervenção e fonte das células devem ser cuidadosamente avaliadas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000404135-Texto+Completo-0.pdf: 1490615 bytes, checksum: b5509cc2d05c00816334141421e9d2b2 (MD5) Previous issue date: 2008 / Introduction: Recently, adipose tissue harvested by liposuction has been identified as a source of adult stem cells. This material is abundant and easy to obtain, which facilitates the isolation of adult stem cells for not only research purposes but moreover clinical use. Knowing the concentration of these cells in different parts of the body is essential for the use of this material, but this information is not yet available. Objective: The aim of this study was to determine the effect of liposuction donor site on the concentration of stem cells obtained from adipose tissue. Method: A prospective cross-sectional study was conducted in 25 women with indication for liposuction in 4 or more different areas in the same procedure. After selective liposuction, the material was sent to the laboratory where it was processed for extraction of adult stem cells which were separated from the adipose tissue and quantified. The following harvest regions were evaluated: upper abdomen, lower abdomen, trochanteric region, crural region, knee and flank region. The cell concentration obtained from each site was compared by analysis of variance for mixed models. Results: A significant difference in cell concentration was found for the different harvest sites. The cell concentration in the lower abdomen was greater than in other areas, but no significant difference was found in relation to the crural region. Conclusion: The lower abdomen and the inner thigh appear to have higher concentrations of adipose-derived stem cells. / Introdução: Recentemente, o tecido adiposo obtido através da lipoaspiração foi identificado como uma fonte alternativa de células-tronco adultas. A facilidade de obtenção e a abundância de material facilitam não só a pesquisa, mas principalmente a aplicação clínica destas células. Os estudos que tratam deste assunto não avaliam de forma precisa a existência ou não de diferença na concentração destas células nas diferentes possíveis zonas de coleta do corpo. Objetivo: Avaliar a influência da zona doadora na concentração de células-tronco derivadas do tecido adiposo em mulheres. Método: Estudo transversal prospectivo. Foram incluídos no estudo 25 pacientes com indicação de lipoaspiração em 4 ou mais zonas diferentes em um mesmo procedimento cirúrgico. Após a lipoaspiração seletiva, o material foi processado para a dissociação do tecido e extração das células-tronco adultas para posterior quantificação. Foram avaliadas as seguintes zonas de coleta: abdome superior, abdome inferior, zona trocantérica, zona crural, joelho e flanco. A concentração celular obtida em cada zona foi comparada através de análise de variância para modelos mistos. Resultados: Verificou-se diferença significativa na concentração celular obtida nas diferentes zonas doadoras. A concentração celular no abdome inferior foi superior às demais; porém, não apresentou diferença significativa em relação à zona crural. Conclusão: O abdome inferior e a zona crural parecem ter maiores concentrações de células-tronco derivadas do tecido adiposo.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-29Bitstream added on 2015-03-03T12:06:09Z : No. of bitstreams: 1 000810960.pdf: 543169 bytes, checksum: 86b76dd316103fade6c41bb9db902c95 (MD5) / As pesquisas com células-tronco têm avançado expressivamente e ocupam um papel de destaque no contexto do novo ramo terapêutico que se convencionou denominar de medicina regenerativa. A abundância e facilidade de obtenção do tecido muscular têm permitido a ampliação dos estudos acerca de seu potencial como fonte de células-tronco mesenquimais. Neste sentido, diferentes metodologias têm sido propostas para a obtenção de células-tronco mesenquimais oriundas do tecido muscular (CTDM), objetivando cultivo e aplicação clínica em medicina humana e veterinária. Um aspecto importante a ser considerado nos diversos protocolos de isolamento de células-tronco mesenquimais refere-se ao emprego rotineiro da colagenase de origem bacteriana (Clostridium histolyticum). O emprego de reagentes xenobióticos, como a colagenase, rotineiramente empregados, obedecem às recomendações da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA - Brasil), que preconiza a não utilização desses produtos no cultivo de células destinadas à terapia celular em pacientes humanos, uma vez que podem conter agentes infecciosos e contaminantes capazes de desencadear severas reações imunológicas. Neste contexto, objetivou-se, neste estudo, a proposição de novas metodologias a fim de substituir o emprego de xenobióticos no processo de obtenção CTDM. Para tanto, foram comparados os métodos de digestão enzimática (colagenase), dissociação mecânica e explante, em diferentes meios de cultura. O conjunto de resultados mostra que as técnicas de dissociação mecânica e explante são metodologias... / The researches with stem cells have advanced significantly and take a prominent role in the context of the new treatment branch that has been conventionally called of regenerative medicine. The abundance and ease of obtaining muscle tissue have allowed the expansion of studies on its potential as a source of mesenchymal stem cells. In this sense, different methodologies have been proposed for obtaining mesenchymal stem cells derived of muscle tissue (SCDM), aiming cultivation and clinical application in human and veterinary medicine. An important aspect to be considered in the various protocols of isolation of mesenchymal stem cells refers to the routine use of bacterial collagenase (Clostridium histolyticum). The use of xenobiotic reagents, such as collagenase, contrasts with the recommendations of the National Health Surveillance Agency (ANVISA - Brazil), which recommends the avoidance of the use of these products in the cultivation of cells destined for cell therapy in human patients, since which may contain infectious agents and contaminants that are capable of triggering severe immunological reactions. In this context, we aimed in this study to propose new methods to replace the use of xenobiotics in the process of obtaining SCDM. For this end, the methods of enzymatic digestion (collagenase), mechanical dissociation and explant were compared in different culture media. The set of results shows that the techniques of mechanical dissociation and explant are viable methodologies for replacement of collagenase procedures for obtaining SCDM. These new methodological...

Resumo: A pesquisa em Biologia Celular, depende de técnicas laboratoriais que possam ser usadas para estudar a estrutura e função celular. Importantes avanços na compreensão das células têm sucedido diretamente o desenvolvimento de novas técnicas, que permitiram novos meios de investigação. Uma grande inovação da indústria biotecnológica é a produção de anticorpos monoclonais que são de extrema importância na área médica . Todas as células do organismo apresentam um conjunto de marcadores de superfície que caracterizam a singularidade biológica e a marca das células que os contêm. Contudo, as células-tronco mesenquimais (CTMs) apresentam poucos marcadores imunofenotípicos específicos, sendo sua caracterização estabelecida pela identificação de um perfil de marcadores específicos e não específicos. Essa imunofenotipagem é realizada com a utilização de anticorpos monoclonais que reconhecem esses antígenos de superfície da membrana celular, conforme demonstrado em estudos contemporâneos. O importante avanço da Terapia Celular em diferentes espécies animais tem alavancado à produção de anticorpos monoclonais para a caracterização fenotípica das célulastronco, sejam de origem hematopoiéticas ou de outros tecidos, por exigentes critérios de qualidade. Para o sucesso terapêutico há que se definir o perfil fenotípico das células a serem utilizadas na Terapia Celular, bem como proceder à quantificação das mesmas. Tendo em vista a inexistência no mercado de reagentes para coelhos e o elevado custo de aquisição para a espécie humana, o objetivo desta pesquisa foi desenvolver uma ferramenta diagnóstica explorando seu potencial de uso.Foi realizada a caracterização de dois clones de anticorpos monoclonais dirigidos contra antígenos expressos em células-tronco mesenquimais de coelhos, produzidos previamente no protocolo MSC, através de estudo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Research in Cell Biology, depends on laboratory techniques that can be used to study the structure and cellular function. Important advances in understanding the cells have happened directly the development of new techniques, which enabled new ways of investigation. Breakthrough biotechnology industry is the production of monoclonal antibodies that are of extreme importance in the medical field. All body cells have a set of surface markers that characterize the biological uniqueness and mark cells that contain them. However, the mesenchymal stem cells (MSCs) have few specific immunophenotypic markers, and their characterization established by identifying a profile of specific markers and nonspecific. This immunophenotype is performed with the use of monoclonal antibodies that recognize these surface antigens of the cell membrane, as demonstrated in contemporary studies. The important advance in cell therapy in different species has underpinned the production of monoclonal antibodies for the phenotypic characterization of stem cells, they originate in hematopoietic or other tissues, exacting standards of quality. Therapeutic success is defined as the phenotypic profile of cells to be used in cell therapy, as well as the quantification of them. Given the lack of reagents on the market for rabbits and the high cost to human beings, the goal of this research was to develop a diagnostic tool for exploring its potential use. The characterization of two clones of monoclonal antibodies directed against antigens expressed in mesenchymal stem cells from rabbits, previously produced in the MSC protocol, through study with five samples of bone marrow and fat of animals expanded in culture so watching the speech recognition phenotype of the cells and the level of recognition of clones against 5 different passages of cell culture.The production of monoclonal antibody directed against antigens... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Flávia Cilene Maciel da Cruz Alves / Banca: Luciano Lobo Gatti / Banca: João Tadeu Ribeiro Paes / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Marcos Andrey Cipriani Frade / Banca: Luciana Patrícia Abbade / Resumo: O hemocomponente gerador da cola de fibrina home made é a fração do plasma fresco congelado. Neste os fatores I (fibrinogênio), VIII, XIII, von Wilebrand e fibronectina estão presentes em elevada concentração. O fibrinogênio, fator I da coagulação sangüínea, sofre ativação nos processos de injúria tecidual onde são desencadeados os fenômenos hemostáticos que culminam com a formação de uma rede resistente de fibrina na qual existem leucócitos, hemácias e plaquetas. O gel de plaquetas é um hemocomponente obtido a partir de concentrado de plaquetas ou de plaquetaféres com adição de gluconato de cálcio e trombina e tem sido alvo de muitos estudos na última década sua participação no processo de cicatrização, especialmente porque libera fatores de crescimento no leito de feridas promovendo a reparação fisiológica tecidual. Neste estudo avaliou a ação de curativos bioativos home made: células tronco mesenquimais incorporadas ao gel de plaquetas laminares com laserterapia, no processo de cicatrização de feridas crônicas. Foram avaliados feridas crônicas em membros inferiores, de 5 pacientes, sendo predominantemente feridas decorrentes de seqüelas de hanseníase. O gel laminar de plaquetas mostrou-se ser um promissor meio de microencapsulação de células tronco mesenquimais, fibroblastos e queratinócitos. Nas feridas tratadas com células tronco mesenquimais, incorporadas ao gel laminar de plaquetas, foi observada melhora clínica considerável, tanto na cicatrização, quanto na redução das manifestações inflamatórias e dolorosas, nos 5 pacientes / Abstract: The blood components of fibrin glue generator home made is the fraction of fresh frozen plasma. In the factors I (fibrinogen), VIII, XIII, von Wilebrand and fibronectin are present in high concentration. Fibrinogen, blood coagulation factor I, undergoes activation in the processes of tissue injury where the phenomena are triggered hemostatic culminating in the formation of a strong fibrin network in which there are leukocytes, red blood cells and platelets. The platelet gel is a blood components obtained from platelet concentrate with the addition of calcium gluconate and thrombin and has been the subject of many studies over the last decade due to their involvement in the healing process, especially because it releases factors growth in the wound bed to promote the physiological tissue repair. This study evaluated the action of bioactive dressings home made: mesenchymal stem cells embedded in the laminar platelet gel with laser therapy in the healing of chronic woundsChronic wounds were evaluated in the lower limbs of five patients, predominantly due to wounds sequelae of leprosy. The laminar platelet gel showed to be a promising be means of microencapsulation of mesenchymal stem cells, fibroblasts and keratinocytes. In wounds treated with mesenchymal stem cells embedded in the laminar platelet gel, significant clinical improvement was observed both in healing and in reducing inflammatory and painful manifestations in 5 patients / Mestre

Resumo: Injúrias traqueais são problemas na prática cirúrgica, pois apresentam dificuldades no tratamento. Atualmente, a engenharia tecidual (ET) é a única técnica para substituição traqueal que fornece promessa real. O uso de suportes naturais apresenta vantagens biológicas, mas faz-se necessário a descelularização desses materiais.Assim, o objetivo do presente trabalho é a descelularização de traquéias, com posterior aplicação das células epiteliais respiratórias (CERs) na face interna das traquéias descelularizadas; bem como, a diferenciação das células-tronco mesenquimais (CTMs) em condrócitos. O presente estudo foi efetuado com modelo em coelhos da raça Botucatu, pesando entre 3,0 e 4,0kg, provenientes do Biotério Central da Unesp. A utilização desses animais foi aprovada pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal. Foram realizados 54 diferentes protocolos de descelularização, que envolvem métodos físicos (congelamento, agitação, pressão mecânica-PM, irradiação eletromagnética não ionizante-LED 475nm e LED 630nm), associados com métodos químicos (Triton X-100, SDS e DS) e enzimáticos (DNase e RNase). Paralelamente, também foi realizado cultura celular das CTMs, com posterior diferenciação em condrócitos. A expansão ex vivo das CERs foi realizada por diferentes protocolos: fragmentos traqueais, lavado traqueal, raspado traqueal, punch dermatológico de 2mm e digestão por tripsina. As células obtidas foram aplicadas na face interna das traquéias descelularizadas. Com relação a PM, não se observa contribuição nos protocolos de descelularização. A irradiação com LED 475nm provoca remoção das células condrogênicas; já a irradiação com LED 630nm provoca aumento da proliferação celular. Sob o critério custo-benefício, a utilização dos processos enzimáticos não foi validada. Em relação aos detergentes, ocorre... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tracheal injuries are a problem in surgical practice once they present difficulties in their treatment. Nowadays, tissue engineering (TE) is the only technique for tracheal replacement that provides real promise. There are biological benefits in using natural scaffolds, but the decellularization of such materials is necessary. Thus, the objective of this study is tracheal decellularization with subsequent application of respiratory epithelial cells (RECs) on the inner side of the decellularized cells, as well as the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) into chondrocytes. This study was carried out with model in Botucatu rabbits weighing between 3.0 to 4.0kg from the Animal Colony at Unesp. The use of such animals was approved by the Ethics Committee of Animal Experiments. Fifty-four different decellularization protocols were used; they involved physical methods (freezing, agitation, mechanical pressure - MP, non-ionizing electromagnetic irradiation - LED 475nm and LED 630nm), associated with chemical methods (Triton X-100, SDS and DS) and enzymatic ones (DNase and RNase). At the same time, a cell culture of the MSCs was done as well, with subsequent differentiation into chondrocytes. The ex vivo expansion of RECs was performed with different protocols: tracheal fragments, tracheal wash, scraped trachea, 2mm dermatological punch, and trypsin digestion. The cells obtained were applied to the inner side of the decellularized tracheae. Regarding MP, no contribution to the decellularization protocols is observed. Irradiation with LED 475nm causes the removal of chondrogenic cells whereas the irradiation with LED 630nm increases cell proliferation. Under the cost-benefit criterion, the use of enzymatic processes was not validated. As for the detergents, there is more destruction of the extracellular matrix of the tracheae treated with SDS when compared to those treated with... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Elenice Deffune / Coorientador: Raul Lopes Ruiz Júnior / Banca: João Tadeu Ribeiro Paes / Banca: Paulo Francisco Guerreiro Cardoso / Mestre

Resumo: Lesões na cartilagem articular representam um desafio para a Medicina Veterinária devido ao limitado potencial intrínseco de reparação. As células tronco mesenquimais (CTM) e o plasma rico em plaquetas (PRP) vêm sendo utilizados na reparação condral pela capacidade de imunomodulação, quimiotaxia, por diminuir a degradação da cartilagem articular e exercer efeito anti-inflamatório. Esse trabalho estudou a eficácia das CTM e do PRP no tratamento de lesões condrais articulares, experimentalmente induzidas em equinos, apresentando os benefícios e os principais obstáculos encontrados na aplicação clínica e cirúrgica de equinos. Para isso, foi induzida uma lesão condral, na tróclea medial femoral dos dois membros pélvicos de oito animais. Após 30 dias da indução dessa lesão os animais, divididos em quatro grupos, receberam os tratamentos propostos: com CTM (Grupo 1); PRP (Grupo 2); CTM e PRP (Grupo 3) e um controle sem tratamento (Grupo 4). As avaliações dos parâmetros clínico-laboratoriais foram realizadas antes da indução da lesão (T-0), quinzenalmente até 120 dias e aos 150 dias (T-150). Avaliações macroscópicas, histopatológicas e histoquímicas foram realizadas em T-0 e T- 150. Pôde-se observar discreta melhora clínico-laboratorial dos grupos tratados quando comparados ao grupo controle. Os exames macroscópicos, histopatológicos e histoquímicos revelaram um melhor tecido de reparação nos grupos tratados, principalmente nos grupos 2 e 3. Sendo assim, o implante autólogo de CTM e do PRP apresentou efeitos benéficos no tratamento de lesões condrais, experimentalmente induzidas em equinos / Abstract: Articular cartilage defects represent a challenge for Veterinary Medicine due to the limited intrinsic potential of repair. Mesenchymal Stem Cells (MSC) and Platelet-Rich Plasma (PRP) have been used in cartilage repair to promote immunomodulation, chemotaxis, to decrease the degradation of articular cartilage and to take antiinflammatory effect. This work aims to study the use of intralesional MSC and the PRP in the treatment of articular cartilage defects induced experimentally in horses, noting the benefits and challenges encountered in implementing clinical-surgical in horses. For this purpose, both patellofemoral joints of eight animals were approached by arthroscopic surgery to perform a cartilage defect, on the medial femoral trochlea. After 30 days of induction the animals, who were divided into four groups, received treatment with: MSC (Group 1), PRP (Group 2), MSC and PRP (Group 3) and a control without treatment (Group 4). The clinical and laboratory assessments were performed every 15 days in 120 days, with last analysis in day 150. The macroscopic and morphologic analyses were performed at 0 and 150 day. There were clinical and laboratory improvement in the treated groups compared with control group. The macroscopic and morphological analysis showed a better tissue repair in the treated groups, mainly in groups 2 and 3. Thus, the implantation of autologous MSC and PRP showed beneficial effects in the treatment of chondral lesions, experimentally induced in horses / Orientador: Ana Liz Garcia Alves / Coorientador: Marcos Jun Watanabe / Banca: Ligia Souza Lima Silveira da Mota / Banca: Raquel Yvone Arantes Baccarin / Mestre