Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ação antifúngica da Terapia Fotodinâmica (TFD) em culturas planctônicas e biofilmes de Candida albicans formados in vitro e em modelo de candidose experimental em camundongos, bem como sua interferência na aderência de C. albicans às células epiteliais bucais humanas in vitro. Foi utilizada cepa padrão de C. albicans (ATCC 18804) para os ensaios. Como fonte de luz foi utilizado o Diodo Emissor de Luz (LED) com emissão de luz verde (532±10 nm) com potência de 90 mW e fotossensibilizador eritrosina nas concentrações variando de 200 a 0,39 μM para os ensaios em cultura plactônica. O biofilme foi formado em placas de 96 poços e tratado com o fotossensibilizador eritrosina na concentração de 400 μM e luz LED. 56 camundongos machos e adultos foram imunossuprimidos e inoculados com suspensões contendo 108 células/mL de C. albicans. Os animais foram submetidos a TFD mediada pelo corante eritrosina (400 μM) e irradiados por LED. Antes e após os tratamentos, foram recuperadas leveduras da cavidade bucal dos animais. As leveduras recuperadas após a TFD e grupo controle foram avaliadas quanto a interferência da TFD na aderência de C. albicans às células do epitélio bucal humano. Em seguida, os animais foram sacrificados e as línguas retiradas para análise macroscópica e histológica. Os biofilmes, línguas e lâminas de aderência foram também analisados por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). A análise dos dados foi feita por ANOVA e Teste de Tukey, teste t de Student e Kruskal-Wallis (P < 0,05). A TFD aplicada à cultura planctônica de C. albicans foi dose-dependente com redução significativa a partir da menor concentração testada (0,39 μM) e 100% de morte das células a partir de 3,12 μM. A TFD em biofilme formado in vitro reduziu 0,74 log10 de C. albicans com redução de leveduras e hifas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aims of the present study were evaluate the antifungal action of Photodynamic Therapy (PDT) on Candida albicans planktonic cultures and biofilms formed in vitro and experimental candidosis model in mice, as well as its interference on C. albicans adherence on humans buccal epithelial cells in vitro. Standard strain of C. albicans (ATCC 18804) was used for assays. Green Light Emitting Diode (LED- 532 ± 10 nm) was used as light source with an output power of 90 mW and erythrosine photosensitizer at concentrations range from 200 to 0.39 μM for the assays on plaktonic cultures. The biofilm was formed on plates of 96- wells and treated with the erythrosine photosensitizer at a concentration of 400 μM and LED light. 56 adults and males mice were immunosuppressed and inoculated with suspensions containing 108 cells/ mL of C. albicans. The animals were submitted to erythrosine dye- mediated PDT (400 μM) and irradiated by LED. Before and after the treatments, yeasts from the animals' oral cavities were recovered. The yeasts recovered after PDT and control group were evaluated for interference of PDT on C. albicans adherence to humans buccal epithelial cells. Following, the animals were sacrified and their tongues taken away for macroscopic and histological analysis. The biofilms, tongues and adherence slices were also analized by Scanning Electron Microscopy (SEM). The analysis of the dates were done by ANOVA and Tukey test, Student t test and Kruskal-Wallis (P < 0.05). PDT applied on C. albicans planktonic culture was concentrationdependent with significant reduction from minor concentration tested (0.39 μM) and 100% of cells death from 3.12 μM. C. albicans biofilm formed in vitro was reduced 0.74 log10 by PDT with reduction of yeasts and hyphaes verified by SEM. In vivo, 0.73 log10 of C. albicans and 35% adherence on buccal epithelial cells were reduced, but there was not... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Banca: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Banca: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Resumo: A proposta desta pesquisa foi avaliar se o preparo biomecânico (PBM) com extrato glicólico de gengibre 20% e hipoclorito de sódio 2,5% (NaOCl), seguido da medicação intracanal com clorexidina gel 2%, hidróxido de cálcio, hidróxido de cálcio associado à clorexidina gel 2% são efetivos sobre Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli e sua endotoxina em canais radiculares.Foram utilizados 72 dentes humanos unirradiculados, divididos em 6 grupos experimentais (n= 12) de acordo com a solução irrigadora (gengibre 20% ou NaOCl 2,5%) utilizada no preparo biomecânico e medicação intracanal (hidróxido de cálcio + soro fisiológico; hidróxido de cálcio + clorexidina gel 2%; clorexidina gel 2%).Foram realizadas coletas do conteúdo do canal radicular para confirmação de contaminação (coleta de confirmação), imediatamente após a instrumentação (1ª coleta), após 7 dias do preparo biomecânico (2ª coleta), imediatamente após 14 dias da ação da medicação intracanal (3ª coleta) e 7 dias após remoção da medicação (4ª coleta). Para todas as coletas foram realizados os seguintes testes: a) avaliação da atividade antimicrobiana pela semeadura e contagem UFC/mL de cada microrganismo; b) análise do conteúdo de endotoxina verificada pelo teste lisado de amebócitos de Limulus. Todos os resultados foram submetidos à análise de variância ANOVA, com nível de significância de 5%, e pelo teste de Dunn. Verifica-se que o NaOCl foi capaz de eliminar os microrganismos após PBM; O gengibre reduziu significantemente o número de bactérias e eliminou Candida albicans. As duas soluções irrigadoras (NaOCl e gengibre) reduziram significantemente endotoxinas mas não foram capazes de eliminá-las. As medicações intracanais foram eficazes na redução de microrganismos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpuse of this research was to evaluate the biomechanical preparation (PBM) with glycolic extract of ginger and 20% sodium hypochlorite 2.5% (NaOCl), followed by intracanal medication with 2% chlorhexidine gel, calcium hydroxide, hydroxide calcium associated with chlorhexidine gel 2% is effective on Candida albicans, Enterococcus faecalis, Escherichia coli and endotoxin in root canals. Seventy two single-rooted human teeth was used and divided into 6 experimental groups (n = 12) according to the irrigating solution (ginger 20% or NaOCl 2.5%) used in the biomechanical preparation and intracanal medication (calcium hydroxide + saline, calcium hydroxide + 2% chlorhexidine gel, chlorhexidine gel 2%). Sampling was done of the contents of the root canal to confirm contamination (collect of confirmation), immediately after the instrumentation (1st collect), after 7 days of biomechanical preparation (2nd collect) and after 14 days of the action of intracanal medication (3rd collect) and 7 days after removal of the medication (4th collect ). For all collections were performed the following tests: a) evaluation of antimicrobial activity by sowing and counting CFU / mL of each microorganism b) analyzing the content of endotoxin checked the test of amebócitos of Limulus lysate. All results were submitted to analysis of variance ANOVA, with significance level of 5%, and the test of Dunn. It appears that the NaOCl was able to eliminate the microorganisms after PBM; The ginger significantly reduced the number of bacteria and Candida albicans eliminated. Both irrigating solutions (NaOCl and ginger) significantly reduced endotoxin but were unable to eliminate them. The intracanais medications were effective in the reduction of microorganisms, eliminating... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

CAPES / O estudo de alguns dos efeitos das radiações ultravioleta C (UV-C) e terapia fotodinâmica (TFD) em células das leveduras Saccharomyces boulardii e Candida albicans foi realizado expondo-se células destes micro-organismos a diferentes intensidades destas radiações, calculadas com base no tempo de exposição e potência das fontes utilizadas. A exposição à UV-C foi realizada após inoculação dos micro-organismos em ágar YEPD que em seguida foram expostos a uma distância de 35cm da fonte em tempos que variaram entre 5s e 40s para S. boulardii e 10s e 60s para C. albicans. Os experimentos foram realizados em triplicatas, sendo uma para verificação da sensibilidade da célula à radiação e uma para verificação da fotorreativação após a irradiação com UV-C. As células consideradas mutantes, isoladas em um segundo experimento, foram submetidas a provas bioquímicas, para avaliação de alterações em seu metabolismo, e posteriormente a microscopia, para avaliação de alterações morfológicas. Os experimentos com TFD foram realizados expondo-se os microrganismos aos agentes fotossensibilizantes e posteriormente a lâmpada de LEDs em tempos entre 3 min e 12min. Os resultados mostram que a radiação UV-C é eficiente na redução populacional dos micro-organismos estudados, além de terem sido observados, nos testes bioquímicos, alterações no metabolismo da S. boulardii, como perda da capacidade de assimilar açúcares e fontes de nitrogênio. As alterações morfológicas foram o alongamento celular e diminuição no tamanho da colônia. A TFD, por sua vez, não demonstrou ação antimicrobiana com a metodologia utilizada, apenas observou-se uma aparente recuperação das células que foram expostas às substâncias tóxicas utilizadas para sua fotossensibilização. Conclui-se que a levedura patogênica C. albicans é mais resistente à radiação UV-C comparando-se com a S. boulardii, pois necessita 60s de exposição à UV-C contra 40s para redução decimal de S. boulardii. A metodologia para TFD utilizada neste trabalho não provocou redução populacional as células estudas / The study of some effecs of ultraviolet C (UVC) and photodynamic therapy (PDT) in S. boulardii and C. albicans cells was performed by exposing the cells to different radiation intensities, and was computed based on the exposure time and power sources used. The exposure to UV-C was performed after the inoculation of microorganisms in YEPD agar and immediately exposed to UV-C rays at distance of 35 cm from the source for lengths of time ranging from 40s to 5s for S. boulardii and from 10s to 60s for C. albicans. The experiments were performed in triplicate, once for checking the cell’s sensitivity by radiation and once to test the occurrence of photoreactivation after irradiation with UV-C. The cells considered mutants, isolated in another experiment, were submitted to biochemical tests to assess changes in their metabolism, and, later, microscopy to assess morphological changes. The experiments with PDT were done by exposing the microorganisms to the photosensitizing agents and later to the LED bulb for lengths of time ranging from 3 min to 12 min. The results show that UV-C is effective in reducing the population of microorganisms. The biochemical tests also showed changes in the metabolism of the S. boulardii such as a loss in the ability to assimilate sugars and nitrogen sources. The morphological changes were cell elongation and reduction of the colony size. PDT, in turn, showed no antimicrobial action with this methodology. There was only an apparent recuperation of cells that were exposed to toxic substances used in its photosensitization. Our conclusion is that the pathogenic yeast C. albicans is more resistant to UV-C rays compared with the S. boulardii because it needs 60 seconds of exposure to UV-C against 40 seconds for a decimal reduction of S. boulardii. The methodology used for PDT in this study did not cause population reduction in the studied cells.

Evalúa la composición química del aceite esencial de las hojas de Clinopodium pulchellum (Kunth) Govaerts “panizara”, actividad antioxidante in vitro y la actividad antifúngica in vitro, frente a Candida albicans. El aceite esencial se obtuvo tratando 5 Kg de hojas en un sistema de hidrodestilación con arrastre de vapor de agua a temperatura y presión controlada, reportándose un rendimiento de 0,58 %v/p; se realizó el análisis preliminar y las propiedades fisicoquímicas del aceite esencial encontrándose los siguientes resultados: líquido oleoso y aromático, ligeramente amarillo, insoluble en agua, ligeramente soluble en metanol, soluble en etanol, nhexano y éter etílico, densidad (0,978 g/mL), pH (5,60) e índice de refracción (1,475). En el análisis cualitativo-cuantitativo de la composición química del aceite esencial realizado por Cromatografía de Gases y Espectrofotometría de Masas (CG/EM), se identificaron 44 compuestos químicos, conformados por 15 hidrocarburos monoterpénicos, 15 monoterpenos oxigenados, 2 hidrocarburos sesquiterpénicos, 6 ésteres, 2 alcoholes cíclicos, 2 hidrocarburos cíclicos, 1 alcano y 1 compuesto heterocíclico aromático. La evaluación de la actividad antioxidante in vitro del aceite esencial se determinó utilizando los siguientes métodos: método de captación del radical DPPH y el método de captación del radical ABTS•+, los resultados indican que el aceite esencial presenta actividad antioxidante variable; por el método del DPPH resultó tener una actividad antioxidante no significativa frente al patrón estándar Trolox. Asimismo, por el método del radical ABTS•+, se obtuvo una actividad antioxidante significativa frente al estándar. La determinación de la actividad antifúngica in vitro del aceite esencial, se realizó empleando el método de difusión en agar mostrando actividad significante frente a Candida albicans en concentraciones de 100, 75 y 50 por ciento, utilizando la nistatina como control positivo. / Tesis

Orientador: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Iguatemy Lourenço Brunetti / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Marcelo Fabiano Gomes Boriollo / Resumo: A irradiação com microondas tem sido recomendada para a desinfecção de próteses odontológicas de resinas acrílicas devido ao seu poder inibitório sobre os microrganismos. Entretanto, as alterações celulares provocadas pela irradiação e que levam à inativação dos microrganismos presentes nas próteses não estão esclarecidas. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos das microondas sobre células de Candida albicans, por meio de parâmetros de contagem celular e de liberação de substâncias intracelulares. Foram obtidas culturas de C. albicans de 24 horas em Tryptic Soy Broth (TSB) a partir de cepas padrão (ATCC 10231). As células foram centrifugadas, lavadas e ressuspensas em 400 mL de água destilada gelada na concentração de 108 cél/mL. Essa suspensão foi dividida em experimental e controle. A suspensão experimental (200 mL) foi colocada em um béquer de 500 mL contendo uma prótese total acrílica estéril e irradiada por microondas durante 6 min a 650 W. A suspensão controle não foi submetida à irradiação. Para ambas as suspensões, foram realizadas diluições seriadas para contagem celular em câmara de Neubauer, utilizando a entrada do corante azul de Metileno, como indicativo de alteração de permeabilidade de membrana. Alíquotas diluídas também foram semeadas em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Alíquotas não diluídas foram analisadas quanto à densidade óptica (DO) a 550 nm. Para a quantificação de substâncias liberadas, as células foram eliminadas das suspensões por centrifugação e filtragem e a solução resultante foi liofilizada. O conteúdo liofilizado foi ressuspenso em 5 mL de água destilada e analisado pelos seguintes métodos: Microprote e Sensiprote, para quantificação de proteínas; potenciometria, para quantificação de Na+ e K+; Liquiform, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microwaves have been used in the disinfection of acrylic resin dentures as a result of its inhibitory effect on microorganisms. However, much controversy exists concerning the lethal effects of microwave radiation on microorganisms. Evaluating the presence of significant differences on cell counts and substances released between irradiated and non-irradiated Candida albicans cell suspensions was the aim of this study. A stock C. albicans strain (ATCC 10231) was cultured in 600 mL of Tryptic Soy Broth (TSB) at 37ºC on a rotating shaker. The cells were centrifuged, water-washed and resuspended in distilled cold water to a final concentration of 108 cell/mL. The cell suspensions were equally divided in a 200 mL experimental suspension, which was placed in a 500 mL beaker with an acrylic resin denture inside and irradiated for 6 min at 650 W. The control suspension (200 mL) was not submitted to irradiation. Aliquots of both suspensions were serially diluted and counting in a Neubauer chamber using the uptake of Methylene blue dye as indicative of alterations in membrane cell permeability. Serially diluted aliquots were spread on Agar Sabouraud dextrose (ASD) plates for viability assay. Non-diluted aliquots were spectrophotometrically measured at 550 nm. To quantify the intracellular released substances, the cells were separated from the suspensions by centrifugation followed by filtering, and the resulting solution was freeze-dried. This liophylized was resuspended in 5 mL of cold water and submitted to optical density (OD) analyses of protein contents by the Microprote and Sensiprote systems; potenciometry analysis of Na+ and K+ contents; Ca++ contents analysis by Liquiform; and nucleic acids contents analysis by OD measurements at 260 nm...(Complete abstract, click electronic access below) / Doutor

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with "good" intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Sandra Marcia Habitante / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Claudio Antonio Talge Carvalho / Resumo: Primeiramente foi avaliada no estudo a ação antimicrobiana da água ozonizada frente suspensão composta por Candida albicans e Enterococcus faecalis, verificando o tempo necessário de ozonização da água para eliminação destes microrganismos. Nas próximas etapas, foi avaliada a eficiência da água ozonizada como agente irrigante, durante o preparo biomecânico, tanto na eliminação de Candida albicans e Enterococcus faecalis, assim como na neutralização de LPS de Escherichia coli inoculados no interior de canais radiculares. Foram utilizados 48 dentes humanos unirradiculados, sendo que nos canais radiculares de 24 espécimes, foram inoculados 20 mL de uma suspensão contendo C. albicans e E. faecalis, e nos outros 24 espécimes, foram inoculados 10 mL LPS de E. coli, verificando-se a ação da água ozonizada como agente irrigante durante o preparo biomecânico. Foram realizadas coletas das amostras (imediata e após sete dias da instrumentação), e os dados foram submetidos à análise estatística. Como resultados, pode-se observar que a ação antimicrobiana da água ozonizada por dez minutos foi efetiva frente à suspensão microbiana. Como agente irrigante durante o preparo biomecânico, a água ozonizada apresentou efetividade frente à suspensão de C. albicans e E. faecalis inoculada no interior dos canais radiculares na coleta imediata, porém, na segunda coleta apresentou pouco efeito residual. Na verificação da neutralização de endotoxina, a ação da água ozonizada como agente irrigante não apresentou efetividade na neutralização de LPS de E. coli inoculada nos canais radiculares, sendo que quantidades restantes de LPS apresentaram efeitos biológicos. Como conclusão, a água ozonizada foi eficiente na redução de C. albicans e E. faecalis inoculada no interior dos canais radiculares, mas não apresentou efeito sobre LPS de E. coli. / Abstract: At first, the study was to evaluated the antimicrobial action of the ozonized water before the suspension composed of Candida albicans and Enterococcus faecalis, checking the necessary time of ozonization of the water in order to eliminate these microorganisms. In the next stages, the efficiency of ozonized water as an irrigant agent was evaluated, during the biomechanical preparation, as in the elimination of C. albicans and E. faecalis, as well as in the neutralization of Escherichia coli LPS inoculated into the root canals. Were used 48 single-rooted human teeth, seeing that in the root canals of 24 specimens, it were inoculated 20 mL of a suspension containing C. albicans and E. faecalis, and on the other 24 specimens, it were inoculated 10 mL of Escherichia coli LPS, having been checked the action of the ozonized water as an irrigant agent during the biomechanical preparation. Collections of samples (immediately and after seven days of the instrumentation) were carried out, and the data was submitted to statistical analysis. As a result, one could observe that the antimicrobial action of the ozonized water for ten minutes was effective before the microbial solution. As an irrigant agent during the biomechanical preparation, the ozonized water presented effectiveness before the suspension of C. albicans and E. faecalis inoculated into the root canals in the immediate collection, however, in the second collection it presented little residual effect. When verifying the endotoxin neutralization, the action of the ozonized water as an irrigant agent did not present effectiveness in the neutralization of E. coli LPS inoculated in the root canals, seeing that the remaining quantities of LPS presented biological effects. It was concluded that, the ozonized water was efficient in the reduction of C. albicans and E. faecalis inoculated inside the root canals, but it did not present any effect over E. coli LPS. / Doutor

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-08-10T11:14:59Z No. of bitstreams: 1 WalicyranisonPlinioDaSilva_TESE.pdf: 1746736 bytes, checksum: 438a1971df141eaacfe425498424e81e (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-08-10T13:58:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 WalicyranisonPlinioDaSilva_TESE.pdf: 1746736 bytes, checksum: 438a1971df141eaacfe425498424e81e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-10T13:58:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 WalicyranisonPlinioDaSilva_TESE.pdf: 1746736 bytes, checksum: 438a1971df141eaacfe425498424e81e (MD5) Previous issue date: 2017-03-30 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / Em certas circunst?ncias, Candida albicans pode passar de colonizante para infectante e, como na candid?ase oral. A morfog?nese de C. albicans, bem como sua capacidade de combater o estresse oxidativo no interor de c?lulas fagoc?ticas, ? um fator essencial para a invas?o tecidual e estabelecimento da infec??o. Devido ao baixo arsenal antif?ngico dispon?vel no mercado e o constante surgimento de cepas resistentes, faz-se necess?ria a pesquisa de novas fontes terap?uticas, principalmente oriundas de produtos naturais. No presente estudo foram selecionados 48 isolados cl?nicos de C. albicans oriundos da cavidade bucal de pacientes transplantados renais. A fra??o acetato de etila de Eugenia uniflora foi utilizada na concentra??o de 1000 ?g/mL para avaliar a a??o comparativa (tratada e n?o tratada com extrato) sobre a fagocitose e morfog?nese de C. albicans. Foi realizado o ensaio de resist?ncia ao ataque de neutr?filos polimorfonucleares. O isolado 111R, de alta capacidade filamenta??o foi utilizado para avalia??o do perfil prot?ico por meio de an?lise prote?mica, bem como da intera??o com prote?nas diretamente associadas ? morfog?nese. A resposta ? infec??o foi observada em modelo murino de candid?ase oral e a a??o t?xica do extrato de E. uniflora foi observada em ensaio de MTT. O extrato de E. uniflora reduziu significativamente a capacidade de fagocitose de C. albicans (m?dia total de 120.36 ? 36.71 vs. 44.68 ? 19.84). Trinta e nove prote?nas foram identificadas na an?lise prote?mica, relacionadas ? gera??o de energia, metabolismo de prote?nas e glicose, divis?o celular, transporte citoplasm?tico, metabolismo de ?cidos nucl?icos, estrutura celular e resposta ao estresse. Importantes prote?nas relacionadas com a forma??o do citoesqueleto foram reguladas negativamente nas c?lulas tratadas. Houve instala??o de infec??o na cavidade oral dos camundongos e a infec??o foi atenuada quando C. albicans foi pr?-incubada na presen?a do extrato de E. uniflora e quando o extrato foi aplicado na cavidade oral ap?s a instala??o da infec??o. Este resultado foi condizente com a redu??o na contagem de UFC (2.36 vs. 1.85 Log10 CFU/ml) e a atenua??o dos danos teciduais observados na an?lise histopatol?gica. O extrato de E. uniflora n?o foi t?xico para c?lulas humanas mesmo em concentra??es 8x acima da utilizada nos experimentos. A fra??o acetato de etila de E. uniflora poder? causar danos ? parede celular e prote?nas essenciais ao metabolismo de C. albicans, afetando prote?nas relacionadas ? estrutura celular, reduzindo a capacidade pl?stica de filamenta??o, atenuando a a??o invasiva em modelo animal, sem causar efeito t?xico em c?lulas humanas, podendo ser uma futura alternativa terap?utica para o tratamento de infec??es por Candida. / Under certain circumstances, Candida albicans may switch a colonizing to a infecting yeast, such as in oral candidiasis. Morphogenesis in C. albicans, besides its ability to combat the oxidative stress inside phagocytic cells is an essential step for tissue invasion and establishment of infection. Due to the reduced drug arsenal used for treatment of fungal infections and the constant emergence of resistant strains, it is mandatory to search for new therapeutic sources, mainly from natural products. In the present study, 48 clinical isolates of C. albicans from the oral cavity of renal transplant recipients were selected. In order to evaluate the comparative action (treated and untreated cellst) on phagocytosis and morphogenesis of C. albicans, the ethyl acetate fraction of Eugenia uniflora extract was used at a concentration of 1000 ?g/mL. Resistance of C. albicans to polymorphonuclear neutrophils was carried out. The isolate 111R, a highly filamentous strain was used to evaluate protein profiling through proteomic analysis, as well as the interaction with proteins directly associated with morphogenesis. The in vivo response to infection was observed in murine model of oral candidiasis and the toxic action of E. uniflora extract was observed in the MTT assay. E. uniflora extract significantly reduced the phagocytosis of C. albicans (Mean 120.36 ? 36.71 vs. 44.68 ? 19.84). Thirty-nine proteins, related to energy generation, protein and glucose metabolism, cell division, cytoplasmic transport, nucleic acid metabolism, cell structure and stress response were identified with proteomics analysis. Important proteins directly related with cytoesqueleton formation were down regulated on treated cells. The infection in the oral cavity of the mice was established and it was attenuated when both C. albicans cells were either preincubated in the presence of E. uniflora extract or when the extract was applied to the surface of the oral cavity after infection. These results were consistent with the reduction in CFU countings (2.36 vs. 1.85 Log10 CFU/ml) and attenuation of tissue damages observed in the histopathologycal analysis. E. uniflora extract was non-toxic to human cells even at concentrations 8 fold hugher than the one used in the experiments. The ethyl acetate fraction of E. uniflora may act act damaging and metabolism essential proteinsmainly related to cellular structure, reducing the plastic capacity of filamentation and attenuating infection in a murine modell model, without causing any toxic effect on human cells, suggesting that it may be a future therapeutic alternative for the treatment of Candida infections.

Após a exposição da raiz do dente na cavidade bucal, causada por recessão gengival, há uma mudança na microflora existente na região. Micro-organismos se depositam nessa região e formam um biofilme, que se exposto a carboidratos fermentáveis pode levar a uma queda de pH do meio, selecionando micro-organismos ácido-tolerantes e causando uma dissolução dos tecidos minerais e ativação de mecanismos de degradação da matriz orgânica da dentina. A presença de Candida albicans em lesões radiculares vem sendo relatada na literatura de forma controversa, alguns estudos sugerem que a cariogenicidade do biofilme aumenta na presença desse fungo, embora outros sugerem que o fungo levaria a uma neutralização do pH do biofilme por meio de secreção de metabólitos e consumo de ácido lático liberado na matriz do biofilme como resultado da metabolização de carboidratos. Frente ao exposto, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial cariogênico de biofilmes contendo Candida albicans em relação à dentina radicular. Discos de dentina radicular foram obtidos de raízes de dentes bovinos e tiveram sua microdureza de superfície inicial determinada. Foi realizado então um experimento in vitro nos quais os blocos de dentina foram aleatorizados em 3 grupos para cultivo de biofilme como se segue: Grupo 1 – biofilme monoespécie de S. mutans (SM); Grupo 2 – biofilme monoespécie de C. albicans (CA); e Grupo 3 – biofilme dualespécies de S. mutans + C. albicans (MIX). Os biofilmes foram cultivados na superfície dos blocos de dentina durante 24, 48 e 72 horas. pH do meio de cultura dos biofilmes foi aferido a cada 24 horas. Biofilmes foram coletados da superfície de seis blocos de dentina após cada um dos tempos acima descritos e a contagem de células viáveis foi determinada. Além disso, após cada período de formação de biofilme, os mesmos blocos de dentina tiveram sua microdureza de superfície medida novamente para determinação da porcentagem de perda de dureza de superfície (%PDS) e duas amostras de cada grupo/tempo foram submetidas a coloração histológica PicroSirius Red para determinação da porcentagem de colágeno estruturado na matriz orgânica da dentina desmineralizada. Os experimentos foram realizados em triplicata e os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido de teste de Bonferroni ao nível de significância de 5%. Em relação aos resultados, independentemente da composição microbiana do biofilme, houve maior %PDS em biofilmes formados durante 48 e 72h em comparação aos biofilmes formados por 24 horas. Em relação à composição microbiana do biofilme, observou-se que a %PDS no biofilme de SM foi estatisticamente maior que na presença do biofilme MIX, que por sua vez foi maior que aquela encontrada na presença de biofilme CA. Os resultados mostraram ainda que os valores de pH do meio de cultivo dos biofilmes MIX foram estatisticamente maiores do que os valores encontrados na presença de biofilme SM nos tempos de 48 e 72 horas (p<0,05). Em relação à análise orgânica da dentina, os resultados sugerem que há uma maior tendência para manutenção de colágeno estruturado em biofilmes contendo CA do que em relação aos biofilmes de SM e de MIX. Nossos resultados sugerem que embora a C. albicans apresente potencial cariogênico para dentina radicular, o biofilme contendo C. albicans associada ao S. mutans parece apresentar um menor potencial cariogênico quando comparado aos biofilmes cultivados na ausência deste fungo. / After root exposure on the oral cavity, caused by gingival recession, a shift in the site microflora occurs. Deposits of microorganisms turn in to a biofilm in the root surface, which if exposed frequently to fermentable carbohydrates may lead to a pH drop on the biofilm matrix, selecting acid tolerant microorganisms causing solubilization of the mineralized tissues and the activation of dentin organic matrix degrading system. Candida albicans presence in root caries has been debated on the literature, some studies suggest that the cariogenicity of the biofilm increases on the fungus presence, although some others have said that the fungus would lead to a biofilm pH neutralization by releasing some metabolites and lactic acid consumption, the acid released on the biofilm matrix as a product of the carbohydrates metabolization. Therefore, the aim of this present study was to evaluate the cariogenic potential of biofilms containing C. albicans in relation to root dentin. Dentin root slabs were obtained from root of bovine teeth and its surface microhardness was accessed. An in vitro trial was performed, by randomizing the slabs in 3 groups: Group 1 – mono-species S. mutans biofilm (SM), Group 2 – monospecies C. albicans biofilm (CA) and Group 3 - dual-species S. mutans and C. albicans biofilm (MIX). The biofilms were grown at the dentin slab surface in 24, 48 and 72. The pH of the culture medium was checked every 24 hours. Biofilms were collected from the surface of six dentin slabs after each time as described above and the CFU/mL counts were determined. Additionally, after each time of biofilm growth, the surface microhardness of the samples was measured again to calculate the surface hardness loss percentage (%SHL) and, also, two samples of each group/time were sent to histological stain by PicroSirius Red to determine the percentage of structured collagen on the organic demineralized dentin. Each trial was performed three times and the data was analysed by Two-Way ANOVA, followed by Bonferroni test, with a significance level of 5%. As related to the results, irrespective from the microbial composition of the biofilm, a higher %SHL was observed in biofilms growth in 48 and 72 hours when compared to the biofilms growth in 24 hours. Regarding the microbial composition of the biofilm, it was observed that the %SHL at the SM biofilm was statistically higher than in the presence of the MIX biofilm, which was also higher than the one found at the CA biofilm. The results also show that the pH values of the culture medium in MIX biofilms were statistically higher than those found in the presence of SM biofilms at 48 and 72 hours (p<0,05). Related to the organic analysis of the dentin, the results suggest that there is a higher tendency to structured collagen maintenance in CA biofilms when compared to the SM and MIX biofilms. Our results suggest that, although C. albicans has a cariogenic potential related to root dentin, the biofilm containing C.albicans associated to S. mutans seems to present a lower cariogenic potential when compared to biofilms growth without this fungus.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:28:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2091_1.pdf: 953836 bytes, checksum: 5ccbdf9a806b13d638aeaed035817e77 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / As ações terapêuticas de alguns fármacos podem ser melhoradas através da modificação molecular. São conhecidas as propriedades biológicas de numerosos compostos heterocíclicos, entre os quais aqueles contendo enxofre e nitrogênio no seu anel. Entre estes compostos os derivados, das 4-tiazolidinonas merecem destaque especial por suas atividades antimicrobiana, antifúngica, antiprotozoária, antiinflamatória, entre outras. A partir dessas informações, sintetizamos uma série de derivados das 4- tiazolidinonas (4 a-m) para avaliar as atividades biológicas contra algumas bactérias e fungos. Inicialmente, foram obtidas tiossemicarbazonas (3a-m) preparadas a partir de formil-piridinas (1 a-c) e tiossemicarbazidas não-substituídas e substituídas (2), em etanol sob refluxo, sendo posteriormente tratadas e purificadas por recristalização em solvente apropriado. Na segunda etapa, as tiossemicarbazonas foram ciclizadas utilizando o anidrido maléico (aceptor de Michael) para formar as 4-tiazolidinonas. Após purificação, as substâncias finais apresentaram rendimentos entre 14-50%. Para a caracterização estrutural dos compostos sintetizados foram empregadas as espectroscopias de infravermelho e ressonância magnética nuclear (RMN 1H e RMN 13C). Quanto à atividade biológica, as novas moléculas foram submetidas a testes de atividade antimicrobiana, sendo avaliadas contra bactérias Gram-positivas, Gram-negativas e fungos. Dos doze derivados tiazolidinônicos sintetizados, apenas cinco (4a, 4g, 4h, 4j e 4m) foram selecionados para a realização da CMI e CMB em meio líquido. Todos os compostos analisados demonstraram atividade biológica contra bactérias Gram-positivas e contra fungos dos gêneros Candida albicans e Malassezia furfura. Entretanto, apenas o composto 4j apresentou atividade bacteriostática para Klebsiella pneumoniae, que é uma bactéria Gram-negativa, e boa atividade bactericida contra Mycobacterium smegmatis e Mycobaterium tuberculosis. De acordo com os resultados, o composto 4g apresentou atividade bactericida considerável frente ao M. luteus, tendo melhor resultado do que cloranfenicol. Em relação aos compostos 4h e 4m verificou-se similaridade em relação à CMI, contra Candida albicans, quando comparados com a nistatina. Em geral, os derivados 4-tiazolidinonas da série 4a-m apresentaram consideráveis atividades antimicrobianas frente aos microrganismos testados, principalmente aqueles com o nitrogênio do anel piridínico na posição 2. Além disso, alguns destes derivados demonstraram melhores valores de CMI, CMB e CMF quando comparados aos fármacos de referência