Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury, Renata Cunha Matheus Rodrigues Garcia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T13:21:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Moura_JulianaSilva_D.pdf: 1782557 bytes, checksum: 062461fb23404728637a2298815f99c6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do método de polimerização e a presença da saliva humana na aderência de Candida spp. às superfícies de resinas acrílicas. Duzentas e cinqüenta e seis amostras retangulares (2,5 x 1,2 x 0,2 cm), confeccionadas com resinas polimerizadas por banho de água ou microondas foram avaliadas para rugosidade e energia livre de superfície e em seguida utilizadas para o ensaio de aderência de Candida spp. Para este propósito, as amostras foram aleatoriamente divididas em 8 grupos por resina, sendo quatro expostos durante 30 min a saliva humana. Em seguida, as amostras foram posicionadas verticalmente em tubos de plásticos estéreis contendo meio de cultura Sabouraud e uma entre quatro suspensões de Candida: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida dubliniensis e Cândida glabrata (1 a 5 x 106 células / mL). A contagem das células aderidas foi realizada em microscópio óptico com 400 x de aumento. Os dados de rugosidade superficial e energia de superfície foram submetidos a ANOVA um fator e teste t. Não houve diferença estatística significante para rugosidade (p > 0,05), enquanto maiores valores de energia livre de superfície foram encontrados para a resina polimerizada por banho de água (p < 0,05). Para aderência de Cândida spp., os testes Wilcoxon-Mann-Whitney, Kruskal Wallis e Qui-quadrado demonstraram não haver influência dos valores de rugosidade e energia livre de superfície na aderência de Candida, enquanto houve uma diminuição geral na contagem de microrganismos em grupos expostos à saliva (p < 0,05). Concluiu-se que a saliva foi capaz de reduzir a aderência total de Candida, enquanto não houve correlação destes valores com rugosidade e energia de superfície / Abstract: The aim of this work was to evaluate the influence of polymerization methods and presence of human clarified saliva on Candida spp. adherence to acrylic resins surfaces. Two hundred and fifty six rectangular acrylic resins samples (2.5 x 1.2 x 0.2 cm) polymerized by water bath or microwave were evaluated for surface roughness and surface free energy and used in an adherence assay for Candida spp. For this purpose, acrylic samples were randomly divided into 8 groups for each resin, where 4 were exposed to saliva. For the adherence assay, the samples were placed vertically on test tubes containing yeast Sabouraud broth medium and one of the four Candida suspensions: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida dubliniensis and Candida glabrata (1 to 5 x 106 cells / mL). Adhered yeasts were counted using an optic microscope at 400 x. Data from surface roughness and surface free energy were submitted to one-way ANOVA ant t test and Candida spp. adherence values were evaluated by the Wilcoxon-Mann-Whitney, Kruskal Wallis and Chi-square tests. No statistical significance was found for roughness (p > 0.05), while higher surface free energy values were found for water bath resin (p < 0.05). Roughness and surface free energy did not influence Candida adherence, while saliva generally decreased yeast counts (p < 0.05). It was concluded that polymerization methods did not interfere with adherence assay while saliva was capable of reducing Candida spp. adherence, while roughness and free energy did not influence the adherence rates / Doutorado / Protese Dental / Doutor em Clínica Odontológica

Orientador: Maria Marluce dos Santos Vilela / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T08:42:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_NadjaRodriguesde_D.pdf: 2013115 bytes, checksum: 52276d586f25b6b0ea07f41ad6a754df (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O presente estudo caracterizou a flora oral de Candida em 52 crianças infectadas pelo HIV-1 em dois períodos, definidos como período I antes da introdução de inibidores de protease no esquema de terapia antiretroviral para HIV-1 e período II após a introdução de inibidores de protease. Comparou-se as espécies de Candida identificadas nos períodos I e II. Isolados do períodos I foram identificados e as crianças em sua maioria (80%) estavam colonizadas por C. albicans. Redução no percentual de colonização por C. albicans de 80% para 52%, nos períodos I e II respectivamente, sugere mudança na colonização oral por Candida após a introdução da terapêutica com inibidores de protease HIV (IP). Destaca-se particularmente o aumento da incidência de isolados Não¿albicans (p=0.005) no período II. No período I haviam 8 crianças que estavam colonizadas por espécies Não-albicans e no período II haviam 20 crianças colonizadas com isolados Não-albicans. Investigou-se a prevalência de C. dubliniensis na família de uma das crianças que estava colonizada por esta levedura. Do total de 52 crianças 38.4% mostraram manifestação oral associada a colonização por Candida. Observou-se alta sensibilidade dos isolados aos agentes antifúngicos testados, mas 4% dos isolados exibiram resistência ao fluconazol. Documentou-se resistência cruzada entre agentes antifúngicos em isolado de Candida albicans em uma criança infectada pelo HIV-1 não previamente exposta a azoles. Um isolado de C. tropicalis mostrou baixa susceptibilidade ao fluconazol (MIC = 64 µg/ml) (1). O presente estudo revelou mudança significativa na colonização oral por Candida em crianças infectadas pelo HIV-1 sob terapia HAART (Highly Active Antiretroviral Therapy). Houve alta diversidade de espécies de Candida, com emergência de espécies Não-albicans após o uso de Inibidores de protease / Abstract: This study characterized the Candida oral flora from 52 Brazilian HIV 1-infected children, comparing the Candida species identified in two periods before (PI) and under (PII) the introduction of the HIV Protease Inhibitor therapy. The majority (80%) of the children from the PI group were colonized by C. albicans. Children in the PII (52%) were colonized by C. albicans and 28% of them carried on mixed colonization (C. albicans and Non¿albicans isolates). Therefore when we compared the periods I and II, after the inhibitor protease usage there was an important decrease in the percentile of colonization for C. albicans of 80% to 52%, suggesting an important change of the Candida oral colonization after the HIV protease inhibitors introduction. Particularly with increase of the Non-albicans isolates incidence (p=0.005) in the period II. In PI there were 8 children that were colonized by Non-albicans species and in the PII there were 20 children colonized with Non¿albicans isolates. Rare Candida species were identified, particularly we investigated the C. dubliniensis prevalence in a HIV-infected child¿s family. Of 52 children in this study 20 (38.4%) of them showed oral lesions associated to the Candida colonization. In spite of the high susceptibility of the isolates to the antifungal agents tested in this study, 4.4% (n=2) exhibited resistance to the fluconazole. One of the isolates was C. albicans from a HIV-infected child not prior exposure to azoles, which showed antifungal cross-resistance. One C. tropicalis isolate has shown low susceptibility to fluconazol (MIC = 64 µg/ml). This study was succeeded in showing the inhibitory effect of ritonavir on a single hyphae tip growth of C. albicans. The present investigation revealed a significative change of the Candida oral colonization in Brazilian HIV-infected children under HAART, high diversity of Candida species and Non-albicans species emergence after IP usage / Doutorado / Pediatria / Doutor em Saude da Criança e do Adolescente

Orientador: Osley Paes de Almeida / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-07-24T19:48:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_ElizabeteBrasildos_D.pdf: 4850924 bytes, checksum: 48a213e7b4224d15baf0fd77d7f93c59 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A candidose é a micose mais comum da boca, estando associada a fatores predisponentes locais ou sistêmicos. Neste estudo verificamos o desenvolvimento de candidose em ratos portadores de carcinoma de língua. É controvertido na literatura a ocorrência e a relevância da infecção por Candida em lesões bucais como liquen plano, leucoplasias e carcinomas espinos celulares. De acordo com alguns trabalhos, a maior presença de Candida em leucoplasias está associada a maior severidade de displasias epiteliais (RENSTRUP, 1970; ]ONES & RUSSEL., 1973; ZHANG et al., 1994). Ratos normais e sialoadenectomizados foram pinceladas com 4NQO por 4 meses e posteriormente acompanhados até o desenvolvimento de carcinoma de língua. Suspensão de C albicans foi então inoculada na boca de ratos normais e portadores de carcinoma e a ocorrência de candidose verificada histologicamente após 24 e 48h. Nos mesmos períodos, leveduras foram recuperadas da boca de todos os animais e os dados foram expressos em ufc/ ml. A sialoadenectomia aumentou a quantidade de leveduras recuperadas, assim como o número de áreas de candidose. Os animais portadores de carcinoma de língua tiveram maior quantidade de leveduras na boca e de áreas de candidose, em relação aos respectivos controles. Nos animais com carcinoma, as candidoses ocorreram principalmente nas áreas de hiperqueratose, sendo pouco frequentes nas regiões de carcinoma francamente invasivos. Concluiu-se que lesões hiperqueratóticas da boca são mais susceptíveis à infecção por C albicans em relação ao epitélio normal, mas o papel no desenvolvimento de displasias epiteliais precisa ser melhor determinado. Num estudo paralelo ao acima descrito verificou-se a aderência. de C albicans, a permanência e o desenvolvimento de candidose na boca de ratos. A aderência de microrganismos é considerada etapa fundamental para o desenvolvimento de infecções. Os estudos de aderência de Candida são feitos in vitro, não havendo na literatura relatos da aderência in vivo. Ratos normais ou sialoadenectomizados, tratados ou não com tetraciclina foram inoculados na boca com suspensão de C. albicans e a aderência das leveduras no dorso da língua e o desenvolvimento de candidose foram avaliados histologicamente após 5, 15, 30, 60 min., e 4, 12, 24 e 48h. Também foi feita a recuperação da levedura presentes na boca nos períodos de 4 a 48h. Os resultados mostraram que a aderência de C. albicans ocorre principalmente na queratina mole das papilas verdadeiras, sobre a placa bacteriana presente nesta área. A xerostomia aumentou a quantidade de placa bacteriana nas papilas linguais e facilitou a aderência da C. albicans, assim como o desenvolvimento de candidose, aumentando também o número de leveduras recuperadas. O tratamento com tetraciclina diminuiu a aderência de Candida, mas aumentou a recuperação de C. albicans e o desenvolvimento de candidose. Concluiu-se que a aderência de C albicans ocorre principalmente através de bactérias e que o desenvolvimento de candidose está associado a maior quantidade de leveduras presentes na boca, que no caso deste trabalho ocorreu pela xerostomia e/ou antibioticoterapia. Outros estudos são necessários para se determinar quais são os mecanismos envolvidos numa aderência transitória ou que caminhe para a formação de candidose / Abstract: Candidosis is the most common fungal infection in the oral cavity, usually associated with local and systemic predisposing factors. ln this study we verified the development of candidiasis in the tongue of rats with carcinomas provoked by 4NQO. The occurrence and relevance of candidal infection in orallesions such as lichen planus, leukoplakias and carcinomas are still to be understood. lt is interesting that according to some works, the prevalence of Candida in leukoplakia is associated with more severe epithelial displasia (RENSTRUP, .1970; JONES & RUSSEL, 1973; ZHANG et al., 1994). Normal and sialoadenectomizad mice were painted with 4NQO during 4 months and thereafter they were observed until the development of carcinomas in the tongue, when they were innoculated in the mouth with a suspension of C albicans. The development of candidosis was verified histologically after 24 and 48h. Yeasts were recovered from the oral cavity of all rats and the results were expressed in ufc/ ml. Sialoadenectomy alone increased the number of yeasts recovered from the mouth and of areas with candidosis. Rats, normal and sialoadenectomizad, bearing carcinoma of the tongue had a higher number of yeasts in the mouth and of candidosis than the respective controls. Candidosis was observed mainly in areas with hiperqueratosis and was less frequente in regions of carcinoma. We concluded that hyperqueratotic lesions of the mouth are more susceptible to candidal infection than normal epithelium, but the role of C albicans in the development of epithelial displasia must be better understood. In a parallel study we verified the adherence of C albicans, its recovery from saliva and the development of candidosis in the rat tongue. The adherence of microorganisms is considered a fundamental step in infection. Most of the studies about candidal adherence to epithelial cells are in vitro and there are no records about the mechanisms in vivo. In this study, normal and sialoadenectomized rats, treated or not with tetracycline received one oral innoculation of a suspension of C albicans and the adherence of the yeasts and the development of candidosis were vetified histologically after 5,15,30 and 60 min., and 4, 12, 24 and 48h. The results showed that the adherence of C albicans occurred in the "soft" keratin of the true papillae of the tongue, and mainly on the bacterial plaque present on this area. Xerostomia caused na increase in bacterial plaque of the papillae and facilitated the adherence of C albicans and the development of candidosis. The treatment with tetracycline decreased bacterial plaque and the adherence of Candida to epithelial cells, but increased the number of yeasts recovered from the mouth of rats and the number of areas of candidosis. We concluded that the adherence of C albicans occurs mainly on the bacterial plaque of the papillae and that the development of candidosis is related to na increased number of yeasts present in the mouths of rats, caused in this study by xerostomia and/or antibiotictherapy / Doutorado / Biologia e Patologia Buco-Dental / Doutor em Odontologia

Candida albicans est une levure saprophyte présente dans la flore digestive humaine. Elle peut néanmoins devenir pathogène chez des individus immunodéficients et causer des infections sévères associées à de forts taux de mortalité. La paroi de C. albicans, en contact avec l’hôte, contient des β-1,2 oligomannosides (β-Man) liés à de multiples molécules pariétales telles que le phospholipomannane (PLM) ou le phosphopeptidomannane (PPM). Ces β-Man sont présents dans les espèces les plus pathogènes de Candida (principalement C. albicans, mais également C. glabrata et C. tropicalis) et sont considérés comme des facteurs de virulence. L’identification d’une famille de 9 gènes codant pour des β-mannosyltransférases (CaBmt) a permis une meilleure compréhension du rôle de 6 de ces enzymes. Des études de génétique inverse ont montré que la β-1,2-mannosylation du PPM était assurée par les enzymes CaBmt1 à 4, tandis que CaBmt5 et 6 étaient impliquées dans celle du PLM. Une première enzyme responsable de l’initiation de la β-mannosylation du PPM, CaBmt1, a donc été caractérisée dans l’équipe grâce à l’étude de l’activité d’une forme recombinante soluble.L’objectif de cette thèse est de caractériser l’activité et la structure de CaBmt3, l’enzyme qui initie la polymérisation des β-Man suite à l’action de CaBmt1, pour mieux comprendre le mécanisme catalytique des β-1,2-mannosyltransférases. Ainsi, nous avons précisément identifié le substrat accepteur de CaBmt3 et défini ses paramètres enzymatiques. Par une approche combinant la diffusion des rayons X aux petits angles (SAXS), la modélisation moléculaire in silico et la mutagenèse dirigée de protéines recombinantes, nous proposons un modèle structural et catalytique de CaBmt3 qui pourrait être étendu à l’ensemble de la famille. En parallèle, nous avons montré que des iminosucres mono- et multivalents étaient capables de moduler l’activité des β-mannosyltransférases. Enfin, nous avons amorcé le travail sur une dernière enzyme, CaBmt4, qui est susceptible de polymériser le β-Man initié par CaBmt1 et CaBmt3. Pour conclure, ces travaux offrent une meilleure compréhension de la β-mannosylation du PPM de C. albicans. Ces études fonctionnelles, couplées aux avancées structurales, pourraient conduire à l’élaboration d’inhibiteurs de CaBmt et développer ainsi de nouvelles approches thérapeutiques contre les candidoses invasives. / Candida albicans is a saprophytic yeast of human gastro-intestinal tract. It can however become pathogenic in immunocompromised individuals and cause severe infections associated with high mortality rates. The cell wall of C. albicans, in contact with the host, contains β-1,2 oligomannosides (β-Man) linked to several parietal molecules such as phospholipomannan (PLM) and phosphopeptidomannan (PPM). These β-Man are found in the most pathogenic Candida species (primarily C. albicans, but also in non-albicans species such as C. glabrata and C. tropicalis) and are considered as virulence factors. The identification of a family of 9 genes coding for β-mannosyltransferases (CaBmt) led to a better understanding of the role of 6 of these enzymes. Reverse genetics studies showed that CaBmt1-4 were responsible for the β-1,2-mannosylation of PPM, whereas CaBmt5-6 were involved in the β-1,2-mannosylation of PLM. A first enzyme responsible for the initiation of the PPM’s β-mannosylation, CaBmt1, was characterized in the lab by studying the activity of its recombinant soluble form.The goal of this thesis is to characterize both activity and structure of CaBmt3, the enzyme initiating β-Man polymerization following CaBmt1’s activity, in order to further the understanding of β-1,2-mannosyltransferases catalytic mechanism. Thus, we precisely identified CaBmt3 acceptor substrate and characterized its enzymatic parameters. Combining small angle X-ray diffraction (SAXS), in silico molecular modelization and site-directed mutagenesis of recombinant proteins, we propose a structural and catalytic model of CaBmt3 which could be extended to the whole family. In parallel, we showed that mono- and multivalent iminosugars were able to modulate β-mannosyltransferases activity. Finally, we started to work on one last enzyme, CaBmt4, which could potentially polymerize the β-Man initiated by CaBmt1 and CaBmt3.In conclusion, the synthesis of these investigations offers a better understanding of the β-mannosylation processes occurring on the PPM of C. albicans. Functional studies, in conjunction with structural advances could ultimately lead to the development of CaBmt inhibitors in order to design new therapeutic approaches for the management of invasive candidiasis.

Philosophiae Doctor - PhD / One of the most common HIV-associated opportunistic infections is candidiasis, caused by Candida albicans or other Candida species. In immune suppressed subjects, this commensal organism can cause an increase in patient morbidity and mortality due to oropharyngeal or systemic dissemination. Limited information exists on the prevalence and antifungal susceptibility of Candida species in the African continent, the most HIV-affected region globally and home to new and emerging drug resistant Candida species. The mechanisms of Candida drug resistance in the African continent have also not been described. In this study, 255 Candida species isolated from the oral mucosa of HIV-positive South African and Cameroonian patients were identified using differential and chromogenic media and their drug susceptibility profiles tested using the disk diffusion method and the TREK Sensititre system, an automated broth microdilution method. Candida cell wall fractions were run on SDSPAGE and HPLC-MS with the aim of identifying peptides specifically expressed by antifungal drug resistant isolates. Comparisons between the two groups of isolates revealed differences in Candida species prevalence and drug susceptibility with interesting associations observed between specific drug resistance and duration of ARV therapy. This study showed that fluconazole, the drug of choice for the treatment of candidiasis in the African continent, is not an effective therapy for most cases of Candida infection, and suggests that regional surveillance be implemented in the continent. A multiple-drug resistant Candida strain was identified in this study, a finding that has not previously been documented. The use of proteomics tools allowed for the identification of peptides involved in drug resistance and the elucidation of Candida colonization mechanisms in HIV-infected African patients.

Evalúa el efecto antifúngico de gel formulado con aceite esencial de Satureja brevicalyx Epling “Inca Muña” frente a Candida spp. de pacientes portadores de prótesis. Los pacientes fueron divididos en tres grupos: pacientes no portadores de prótesis, pacientes portadores de prótesis parcial removible metálica, pacientes portadores de prótesis total. A los pacientes no portadores se les recolectó muestras de saliva en frascos estériles y aquellos que portaban prótesis removible, se les solicitó colocarlas dentro de una bolsa hermética que contenía solución salina; se realizó un lavado de la prótesis friccionando sobre las superficies para el desprendimiento de placa. Todas las muestras fueron sembradas en placas petri que contenían agar Sabouraud con cloranfenicol, e incubadas a 37º C por 48 horas; se seleccionaron las colonias según características morfológicas y se resembró en agar Saboroud para realizar así la coloración Gram, prueba de tubo germinativo, producción de clamidospora y auxonograma de carbohidratos, todas esas pruebas para realizar la identificación del tipo de levadura; luego de ello se procedió a la prueba de difusión en pocillos para la determinación de la actividad antifúngica del gel de Satureja brevicalyx Epling “Inca Muña”. Los resultados que se obtuvieron fueron alto porcentaje de levaduras en pacientes portadores de prótesis total y parcial 78.02 %, en pacientes con prótesis total se observó Candida albicans en un 56.34 % y Candida glabrata 45.63 % y en pacientes portadores de prótesis parcial removible metálica fue Candida albicans en un 25.35 % y Candida glabrata 5.63 %. Al evaluar los halos de inhibición de aquellas cepas expuestas al gel de Satureja brevicalyx Epling “Inca muña” se encontró diversos valores; Candida glabrata , 25.50 mm en prótesis total y 30.14 mm en prótesis parcial removible metálica, seguido Candida guillermondi con 20.50 mm en prótesis total y Candida no albicans con 27 mm en "prótesis parcial removible metálica. Concluye que la especie Satureja brevicalyx Epling “Inca muña” tiene efecto antifúngico frente a cepas de Candida albicans, Candida glabrata, Candida guillermondi y Candida no albicans. / Tesis

Após a exposição da raiz do dente na cavidade bucal, causada por recessão gengival, há uma mudança na microflora existente na região. Micro-organismos se depositam nessa região e formam um biofilme, que se exposto a carboidratos fermentáveis pode levar a uma queda de pH do meio, selecionando micro-organismos ácido-tolerantes e causando uma dissolução dos tecidos minerais e ativação de mecanismos de degradação da matriz orgânica da dentina. A presença de Candida albicans em lesões radiculares vem sendo relatada na literatura de forma controversa, alguns estudos sugerem que a cariogenicidade do biofilme aumenta na presença desse fungo, embora outros sugerem que o fungo levaria a uma neutralização do pH do biofilme por meio de secreção de metabólitos e consumo de ácido lático liberado na matriz do biofilme como resultado da metabolização de carboidratos. Frente ao exposto, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial cariogênico de biofilmes contendo Candida albicans em relação à dentina radicular. Discos de dentina radicular foram obtidos de raízes de dentes bovinos e tiveram sua microdureza de superfície inicial determinada. Foi realizado então um experimento in vitro nos quais os blocos de dentina foram aleatorizados em 3 grupos para cultivo de biofilme como se segue: Grupo 1 – biofilme monoespécie de S. mutans (SM); Grupo 2 – biofilme monoespécie de C. albicans (CA); e Grupo 3 – biofilme dualespécies de S. mutans + C. albicans (MIX). Os biofilmes foram cultivados na superfície dos blocos de dentina durante 24, 48 e 72 horas. pH do meio de cultura dos biofilmes foi aferido a cada 24 horas. Biofilmes foram coletados da superfície de seis blocos de dentina após cada um dos tempos acima descritos e a contagem de células viáveis foi determinada. Além disso, após cada período de formação de biofilme, os mesmos blocos de dentina tiveram sua microdureza de superfície medida novamente para determinação da porcentagem de perda de dureza de superfície (%PDS) e duas amostras de cada grupo/tempo foram submetidas a coloração histológica PicroSirius Red para determinação da porcentagem de colágeno estruturado na matriz orgânica da dentina desmineralizada. Os experimentos foram realizados em triplicata e os dados foram analisados por ANOVA de duas vias seguido de teste de Bonferroni ao nível de significância de 5%. Em relação aos resultados, independentemente da composição microbiana do biofilme, houve maior %PDS em biofilmes formados durante 48 e 72h em comparação aos biofilmes formados por 24 horas. Em relação à composição microbiana do biofilme, observou-se que a %PDS no biofilme de SM foi estatisticamente maior que na presença do biofilme MIX, que por sua vez foi maior que aquela encontrada na presença de biofilme CA. Os resultados mostraram ainda que os valores de pH do meio de cultivo dos biofilmes MIX foram estatisticamente maiores do que os valores encontrados na presença de biofilme SM nos tempos de 48 e 72 horas (p<0,05). Em relação à análise orgânica da dentina, os resultados sugerem que há uma maior tendência para manutenção de colágeno estruturado em biofilmes contendo CA do que em relação aos biofilmes de SM e de MIX. Nossos resultados sugerem que embora a C. albicans apresente potencial cariogênico para dentina radicular, o biofilme contendo C. albicans associada ao S. mutans parece apresentar um menor potencial cariogênico quando comparado aos biofilmes cultivados na ausência deste fungo. / After root exposure on the oral cavity, caused by gingival recession, a shift in the site microflora occurs. Deposits of microorganisms turn in to a biofilm in the root surface, which if exposed frequently to fermentable carbohydrates may lead to a pH drop on the biofilm matrix, selecting acid tolerant microorganisms causing solubilization of the mineralized tissues and the activation of dentin organic matrix degrading system. Candida albicans presence in root caries has been debated on the literature, some studies suggest that the cariogenicity of the biofilm increases on the fungus presence, although some others have said that the fungus would lead to a biofilm pH neutralization by releasing some metabolites and lactic acid consumption, the acid released on the biofilm matrix as a product of the carbohydrates metabolization. Therefore, the aim of this present study was to evaluate the cariogenic potential of biofilms containing C. albicans in relation to root dentin. Dentin root slabs were obtained from root of bovine teeth and its surface microhardness was accessed. An in vitro trial was performed, by randomizing the slabs in 3 groups: Group 1 – mono-species S. mutans biofilm (SM), Group 2 – monospecies C. albicans biofilm (CA) and Group 3 - dual-species S. mutans and C. albicans biofilm (MIX). The biofilms were grown at the dentin slab surface in 24, 48 and 72. The pH of the culture medium was checked every 24 hours. Biofilms were collected from the surface of six dentin slabs after each time as described above and the CFU/mL counts were determined. Additionally, after each time of biofilm growth, the surface microhardness of the samples was measured again to calculate the surface hardness loss percentage (%SHL) and, also, two samples of each group/time were sent to histological stain by PicroSirius Red to determine the percentage of structured collagen on the organic demineralized dentin. Each trial was performed three times and the data was analysed by Two-Way ANOVA, followed by Bonferroni test, with a significance level of 5%. As related to the results, irrespective from the microbial composition of the biofilm, a higher %SHL was observed in biofilms growth in 48 and 72 hours when compared to the biofilms growth in 24 hours. Regarding the microbial composition of the biofilm, it was observed that the %SHL at the SM biofilm was statistically higher than in the presence of the MIX biofilm, which was also higher than the one found at the CA biofilm. The results also show that the pH values of the culture medium in MIX biofilms were statistically higher than those found in the presence of SM biofilms at 48 and 72 hours (p<0,05). Related to the organic analysis of the dentin, the results suggest that there is a higher tendency to structured collagen maintenance in CA biofilms when compared to the SM and MIX biofilms. Our results suggest that, although C. albicans has a cariogenic potential related to root dentin, the biofilm containing C.albicans associated to S. mutans seems to present a lower cariogenic potential when compared to biofilms growth without this fungus.

Orientador: Taís Maria Bauab / Resumo: A candidíase vulvovaginal (CVV) é uma infecção fúngica oportunista que ocasiona relevante problema à saúde da mulher, visto os desagradáveis sintomas desta afecção, somada às dificuldades terapêuticas dos fármacos da prática clínica e ao surgimento de cepas resistentes. Neste sentido, as plantas medicinais associadas a alternativas que melhorem o potencial antifúngico, como o emprego da nanotecnologia, despontam como uma importante fonte no controle e erradicação de infecções fúngicas. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do óleo essencial (OE) de Cymbopogon nardus (L.) Rendle, em forma livre e incorporado em microemulsão lipídica (ME+OE) frente cepas ATCC e clínicas de C. albicans, C. glabrata e C. krusei. O OE foi obtido por hidrodestilação. A análise química do OE foi realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrofotômetro de massas (CG-EM). As microemulsões lípidicas (ME) foram desenvolvidas e um diagrama de fases foi construído. A ME e ME+OE foram caracterizados por dispersão de luz dinâmica, análise do potencial zeta, microscopia de luz polarizada, ensaios reológicos, força mucoadesiva e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A potencialidade antifúngica do OE e ME+OE foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM), concentração fungicida mínima (CFM) por microdiluição, ensaio de interação sorbitol e ergosterol. O ensaio de inibição da formação de hifas de C. albicans em presença de probiótico e p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Vulvovaginal candidiasis (VVC) is an opportunistic fungal infection that causes relevant problem to woman’s health, due to unpleasant symptoms, difficulties of the therapy and the emergence of resistant strains. In this context, the medicinal plants associated to alternatives that improve the antifungal potential, such as the nanotechnology, is an important source in the eradication and control of fungal infections. Thus, the objective of this study was to evaluate the antifungal activity of the essential oil (EO) of Cymbopogon nardus (L.) Rendle, free form and loaded into a lipid microemulsion (ME+EO) against ATCC and clinical strains of C. albicans, C. glabrata and C. krusei. The EO was obtained by hydrodistillation. The chemical analysis of the EO was performed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The lipid microemulsions (ME) were developed and a phase diagram was constructed. The ME and ME+EO were characterized by scattering, zeta potential, polarized light microscopy, rheological assays, bioadhesiveness and transmission electronic microscopy (TEM). The antifungal activity of the EO and ME+EO were evaluated by determination of minimal inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) by microdilution, sorbitol and ergosterol assay. The inhibition of C. albicans hyphae formation in presence of probiotic and vaginal pathogen was carried out by transwells® system. Moreover, the coated and clean surfaces were characterized by contact angle... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Las micosis ocasionadas por levaduras del género Candida generan afecciones de variable grado de severidad, desde infecciones cutáneas leves hasta candidiasis severas en pacientes inmunocomprometidos. El tratamiento más frecuente son los medicamentos de derivados imidazólicos; sin embargo, se ha visto un incremento de resistencia contra estos antifúngicos. El uso de plantas medicinales representa una alternativa al tratamiento. Por ello se determina el efecto antifúngico - in vitro- del aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) en Candida albicans ATCC 90028 mediante un estudio experimental. Se realizaron pruebas de susceptibilidad antimicótica en Candida albicans ATCC 90028 empleando aceite esencial de Origanum vulgare (orégano) a las concentraciones de 100%, 75%, 50% y 25 %. Se evaluó el efecto antifúngico mediante la técnica de disco difusión. Además, se trabajó con Fluconazol 25 ug y DMSO (Dimetilsulfoxido) como controles. Población y muestra: Estuvo conformada por 180 repeticiones de los grupos experimentales, conformada por 30 repeticiones de cada concentración del Aceite esencial de Origanum vulgare al 100%, 75%, 50% y 25%, además de los controles (Fluconazol 25 ug y DMSO) en cepa estándar de Candida albicans Resultados: Se halló un promedio de halo inhibitorio del aceite esencial de Origanum vulgare al 100% ( =27,97 mm), aceite esencial de Origanum vulgare al 75%( =21, 48 mm), aceite esencial de Origanum vulgare al 50% ( =8,83 mm), aceite esencial de Origanum vulgare al 25%( =7,93 mm), el Fluconazol 25 ug ( =28.57 mm) y DMSO ( =6 mm) presentando las variables diferencia estadísticamente significativa mediante el test de ANOVA p=0.00. Llega a la conclusión de que al 95% de confianza estadística se comprobó mediante la prueba de ANOVA y prueba post hoc de comparaciones múltiples de HSD Tukey, que las medias de ambos grupos: el Fluconazol 25 ug y la concentración del aceite esencial de Origanum vulgare al 100% fueron similares; sin embargo, el Fluconazol 25 ug presenta una diferencia de media superior con respecto al aceite esencial de Origanum vulgare. / Tesis

Menciona que el eugenol es un fenilpropanoide derivado de plantas medicinales y con actividad antifúngica. El estrés oxidativo es uno de los mecanismos que explican su actividad anti-Candida. Este estudio determinó las propiedades fisicoquímicas y la reactividad in silico del eugenol, epóxido de eugenol y quinona metilada; se encontró que el eugenol y derivados poseen la capacidad para atravesar membranas biológicas y que el eugenol puede ser metabolizado hasta epóxido de eugenol. Además, se determinaron las propiedades fisicoquímicas y reactividad, in silico, de aductos de epóxido de eugenol y quinona metilada con glutatión, aminoácidos, espermidina y espermina. Se encontró que la formación de aductos de epóxido de eugenol-glutatión y quinona metilada-glutatión es termodinámicamente favorable, por lo que, podría ser un mecanismo que explique la disminución de la concentración de glutatión reducido en Candida albicans tratada con eugenol. Además, se halló que los aductos de epóxido de eugenol con cisteína, lisina y arginina, son termodinámicamente favorables, igualmente, los aductos de quinona metilada con cisteína y lisina. Asimismo, la formación de los aductos de epóxido de eugenol y quinona metilada con espermina y espermidina, es un proceso termodinámicamente no favorable. Por último, se determinó in silico las reacciones metabólicas de cada aducto en microorganismos aeróbicos, siendo los aductos de epóxido de eugenol-glutatión y quinona metilada-glutatión susceptibles a la desaminación oxidativa y desalquilación oxidativa. / Tesis