Les collagènes de défense (C1q, MBL, ficolines) sont capables de reconnaître de nombreux motifs à la surface des éléments du non soi ou du soi altéré, via leurs domaines globulaires C-terminaux. Ils peuvent également interagir avec certains récepteurs présents à la surface des cellules humaines ou de pathogènes. Nous nous sommes intéressés dans un premier temps à la calréticuline de Trypanosoma Cruzi (TcCRT), une protéine qui interviendrait dans les mécanismes d'évasion de ce parasite. Dans le but de réaliser des études fonctionnelles et structurales de la TcCRT, nous avons produit différents fragments recombinants. Nous ne sommes cependant pas parvenus à obtenir un échantillon nous permettant d'accomplir nos objectifs, nous conduisant à reporter nos efforts sur l'étude d'un autre récepteur, CR1/CD35. Il a été montré précédemment que CR1/CD35 pouvait interagir avec C1q et la MBL, probablement par ses modules CCP 22-30. Cette interaction pourrait être impliquée dans l'élimination des complexes immuns, la phagocytose ou encore des mécanismes de signalisation cellulaire. A l'aide d'un fragment recombinant comprenant les modules CCP 22-30 de CR1, nous avons confirmé par SPR l'interaction avec C1q et la MBL. Nous avons également montré pour la première fois que CR1 pouvait interagir avec les ficolines L, H et M par ce même domaine. Nos résultats indiquent que cette interaction prendrait majoritairement place dans la région collagène de C1q, de la MBL et de la ficoline L, probablement à proximité du site de fixation des protéases. L'utilisation de fragments tronqués de CR1 CCP 22-30, nous permet de proposer l'hypothèse que les modules CCP 24 et 25 de CR1 seraient le site majoritaire de fixation des collagènes de défense. Ces données ouvrent la voie à des études structurales et fonctionnelles visant à approfondir notre connaissance des interactions CR1 – collagène de défense et de leur rôle physiologique. / The defence collagens (C1q, MBL, ficolins) are able to recognize various patterns on non-self or altered-self surfaces through their globular domains. They can also interact with receptors at the surface of human cells or pathogens. First, we were interested in the calreticulin from Trypanosoma cruzi, a protein which may be involved in the evasion mechanisms of that parasite. To achieve structural and functional studies, we produced recombinant fragments from TcCRT. Unfortunately, we couldn't obtain any sample suitable for our studies, so we decided to focus on another receptor, CR1/CD35. It has been shown previously by other teams that C1q and MBL bind to CR1/CD35, probably through CCP modules 22 to 30, close to the cell membrane. This interaction could be involved in several biologic mechanisms: elimination of immune complexes, phagocytosis, cell signaling. We produced a recombinant fragment including the CCP modules 22 to 30 of CR1 and confirmed its interaction with C1q and MBL using SPR. We also showed for the first time that L-, H- and M-ficolins bind to CR1 through CCP modules 22 to 30. Our results point out that the CR1 binding site of C1q, MBL and L-ficolin is located in the collagen stalks, most probably at or in close proximity to the serine protease interaction site. By using CR1 CCP 22-30 truncated fragments, we suggest that CCP modules 24 to 25 could be the main binding site for the defence collagens. These data open the way for structural and functional studies aiming at improving our knowledge of the CR1 – defense collagen interactions and of their physiological role.

Les collagènes de défense (C1q, MBL, ficolines) sont capables de reconnaître de nombreux motifs à la surface des éléments du non soi ou du soi altéré, via leurs domaines globulaires C-terminaux. Ils peuvent également interagir avec certains récepteurs présents à la surface des cellules humaines ou de pathogènes. Nous nous sommes intéressés dans un premier temps à la calréticuline de Trypanosoma Cruzi (TcCRT), une protéine qui interviendrait dans les mécanismes d'évasion de ce parasite. Dans le but de réaliser des études fonctionnelles et structurales de la TcCRT, nous avons produit différents fragments recombinants. Nous ne sommes cependant pas parvenus à obtenir un échantillon nous permettant d'accomplir nos objectifs, nous conduisant à reporter nos efforts sur l'étude d'un autre récepteur, CR1/CD35. Il a été montré précédemment que CR1/CD35 pouvait interagir avec C1q et la MBL, probablement par ses modules CCP 22-30. Cette interaction pourrait être impliquée dans l'élimination des complexes immuns, la phagocytose ou encore des mécanismes de signalisation cellulaire. A l'aide d'un fragment recombinant comprenant les modules CCP 22-30 de CR1, nous avons confirmé par SPR l'interaction avec C1q et la MBL. Nous avons également montré pour la première fois que CR1 pouvait interagir avec les ficolines L, H et M par ce même domaine. Nos résultats indiquent que cette interaction prendrait majoritairement place dans la région collagène de C1q, de la MBL et de la ficoline L, probablement à proximité du site de fixation des protéases. L'utilisation de fragments tronqués de CR1 CCP 22-30, nous permet de proposer l'hypothèse que les modules CCP 24 et 25 de CR1 seraient le site majoritaire de fixation des collagènes de défense. Ces données ouvrent la voie à des études structurales et fonctionnelles visant à approfondir notre connaissance des interactions CR1 - collagène de défense et de leur rôle physiologique.

<p>IgG, IgM and IgE in complex with antigen have the capacity to regulate specific immune responses. In this investigation, the role of Fc receptors for IgG (FcγRI, FcγRII and FcγRIII) and complement receptors 1 and 2 (CR1/2) for antibody-mediated enhancement of antibody responses are investigated.</p><p>IgM is known to efficiently activate complement and thereby enhance specific antibody responses but it is not known if this involves binding to CR1/2. Using CR1/2 deficient mice, immunized with sheep erythrocytes alone or together with specific IgM, we present evidence that IgM-mediated enhancement is completely dependent on CR1/2 expression, whereas IgG or IgE in complex with bovine serum albumin (BSA) induce strong antibody responses in CR1/2-deficient mice. Enhancement by IgE is mediated via the low affinity receptor for IgE (FcεRII, CD23). However, the receptors which are involved in IgG-mediated enhancement are not known. We find that γ-chain-deficient mice (lacking FcγRI and FcγRIII) have impaired antibody responses to IgG/BSA complexes. In contrast, FcγRIII deficient mice have normal responses, suggesting that FcγRI mediates the effect. Furthermore, IgG/BSA complexes induce up to 189-fold stronger antibody responses in FcγRIIB-deficient mice than in wild-type mice. The threshold dose of IgG/BSA required was lower, the response was sustained for longer and initiated earlier in FcγRIIB-deficient than in wild-type animals. The findings suggest that FcγRIIB acts as a "safety-valve" preventing excessive antibody production during an immune response. We show for the first time that IgG3/BSA complexes can mediate enhancement of specific antibody responses. Their effect does not involve known Fcγ receptors.</p>

IgG, IgM and IgE in complex with antigen have the capacity to regulate specific immune responses. In this investigation, the role of Fc receptors for IgG (FcγRI, FcγRII and FcγRIII) and complement receptors 1 and 2 (CR1/2) for antibody-mediated enhancement of antibody responses are investigated. IgM is known to efficiently activate complement and thereby enhance specific antibody responses but it is not known if this involves binding to CR1/2. Using CR1/2 deficient mice, immunized with sheep erythrocytes alone or together with specific IgM, we present evidence that IgM-mediated enhancement is completely dependent on CR1/2 expression, whereas IgG or IgE in complex with bovine serum albumin (BSA) induce strong antibody responses in CR1/2-deficient mice. Enhancement by IgE is mediated via the low affinity receptor for IgE (FcεRII, CD23). However, the receptors which are involved in IgG-mediated enhancement are not known. We find that γ-chain-deficient mice (lacking FcγRI and FcγRIII) have impaired antibody responses to IgG/BSA complexes. In contrast, FcγRIII deficient mice have normal responses, suggesting that FcγRI mediates the effect. Furthermore, IgG/BSA complexes induce up to 189-fold stronger antibody responses in FcγRIIB-deficient mice than in wild-type mice. The threshold dose of IgG/BSA required was lower, the response was sustained for longer and initiated earlier in FcγRIIB-deficient than in wild-type animals. The findings suggest that FcγRIIB acts as a "safety-valve" preventing excessive antibody production during an immune response. We show for the first time that IgG3/BSA complexes can mediate enhancement of specific antibody responses. Their effect does not involve known Fcγ receptors.