Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T17:11:51Z No. of bitstreams: 1 LIARA MERLUGO.pdf: 1163654 bytes, checksum: 112650b0950a34ee9e23411aa8adcab1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T17:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LIARA MERLUGO.pdf: 1163654 bytes, checksum: 112650b0950a34ee9e23411aa8adcab1 (MD5) Previous issue date: 2015-03-12 / O gênero Erythrina está presente mundialmente nas regiões tropicais e subtropicais. Estudos fitoquímicos utilizando vários órgãos dessas plantas, demostraram a presença de alcaloides, flavonoides, pterocarpanos e triterpenóides. Várias espécies são encontradas no Brasil, dentre elas Erythrina falcata e Erythrina crista-galli, conhecidas popularmente como “corticeira” e utilizadas medicinalmente devido à ação sedativa, ansiolítica, anti-inflamatória e antihipertensiva. Este trabalho objetivou estudar a composição química de extratos vegetais obtidos de folhas de E. falcata e E. crista-galli e ainda, avaliar o potencial hipotensor in vivo de extratos de E. falcata. Inicialmente, após coleta do material, as folhas foram selecionadas, submetidas à secagem e trituradas. Então, foram submetidas à extração por maceração exaustiva utilizando etanol 40% (v/v) e por infusão utilizando água a 100 °C. Para a caracterização em termos de fenólicos totais e conteúdo de flavonoides, os extratos foram quantificados por espectrofotometria. Para o ensaio cromatográfico, os extratos foram analisados por CLAE em sistema de fase reversa, com fase móvel consistindo de acetonitrila:água em eluição por gradiente e fluxo de 1,0 mL/min. Para a análise por CLUEESI- MS, a fase móvel foi composta de mistura de acetonitrila:metanol (4:1) e ácido fórmico pH 3,0, com eluição por gradiente e fluxo de 0,2 mL/min. A detecção por espectrometria de massas foi conduzida a partir das seguintes condições: N2 como nebulizante; energia de colição 4.0 eV; temperatura da fonte do eletrospray e do gás de solvatação 100°C e 120°C, respectivamente; voltagem do capilar 3000V; voltagem do cone 40V. Os espectros de massas foram obtidos na faixa de m/z 200-800. A avaliação dos efeitos hemodinâmicos foi realizadaem ratos wistar normotensos, anestesiados com uretana (1,4 mg/Kg), via canulação da artéria carótida (para a verificação da PAS, PAD e FC) e veia jugular (para administração do extratose drogas). A avaliação do potencial hipotensor da E. falcata foi investigada através da realização de uma curva crescente de administração dos extratos e os possíveis mecanismos de ação envolvidos foram analisados através da administração de diferentes drogas sendo elas: L-NAME (30 mg/kg); losartana (10 mg/Kg); hexametônio (20mg/Kg) e propranolol (5mg/kg). Os teores de fenólicos totais para E. falcata e E. crista-galli estiveram na faixa de 1,3193 – 1,4989 mgEAG/mL para os extratos obtidos por maceração e de 0,8771 – 0,9506 mgEAG/mL para as infusões. Em flavonoides totais, os conteúdos estiveram na faixa de 7,7829 – 8,1976 ER mg/g para os extratos obtidos por maceração e 9,3471 – 10,4765 ER mg/g para as infusões. Na determinação por CLUE-MS, os dados de íon molecular e fragmentos de massa indicaram a composição predominante em alcaloides, sugerindo-se os componentes erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β- hydroxyerysodine–glicose e 11-hydroxyerysotinone-ramnosídeo. O extrato aquoso da E. falcata mostrou-se um potente hipotensor dose-dependente, causando uma queda na PAS de 23 a 35% e na PAD de 32 a 49% para ambos os extratos estudados, sem influenciar a FC, podendo este efeito estar relacionado com a via dos receptores β-adrenérgicos. / The genus Erythrina is present worldwide in tropical and subtropical regions. Phytochemical studies using various organs of these plants demonstrated the presence of alkaloids, flavonoids, pterocarpans and triterpenoids. Several species are found in Brazil, among them Erythrina falcata and Erythrina crista-galli, which are popularly known as “corticeira” and. used medicinally due to it action as sedative, anxiolytic, anti-inflammatory and antihypertensive. The present study aimed to investigate the chemical composition of extracts obtained from leaves of E. falcata and E. crista-galli, and still, to evaluate the hypotensive potential in vivo of E. falcata extracts. Initially, after collection of material plant, the leaves were selected, submitted to dryness and powdered. Then, submitted to extration by exhaustive maceration using ethanol 40% (v/v) and by infusion using water at 100 °C. For characterization in terms of phenolics and flavonoid content, the extracts were quantified by spectrophotometry. For chromatographic assay, the extracts were analysed by HPLC in reversed phase system, with a mobile phase consisting of acetonitrile:water in gradient elution and flow rate of 1.0 mL/min. For analysis by UPLC-ESI-MS, the mobile phase consisted in a mixture of acetonitrile:methanol (4:1) and 0.1% formic acid pH 3.0, with a elution by gradient and flow rate of 0.2 mL/min. The MS detection was performed following the conditions: N2 as nebulizing; collision energy 4.0 eV; temperature of electrospray source and desolvation gas 100°C and 120°C, respectively; capillary voltage 3000V; sample cone 40V. Mass spectra were recorded in the range of m/z 200-800. The evaluation of the hemodynamic effects was performed in normotensive Wistar rats, anesthetized with urethane (1.4 mg/kg) by cannulation of the carotid artery (for verification of SBP, DBP and HR) and jugular vein (for administration of the extracts and drugs). The hypotensive potential of E. falcata was investigated by conducting a growing curve administration of the extracts and the possible mechanisms involved were analyzed by administering different drugs such as: L-NAME (30 mg/kg); losartan (10 mg/kg); hexamethonium (20 mg/kg) and propranolol (5 mg/kg). The total phenolics content for E. falcata and E. crista-galli was from 1.3193 to 1.4989 mgGAE/mL for maceration and 0.8771 to 0.9506 mgGAE/mL for infusions. In total flavonoid, the content was from 7.7829 to 8.1976 mg RE/g for maceration and 9.3471 to 10.4765 RE mg/g for infusions. The molecular ions and mass fragments obtained by UPLCMS indicated the predominant composition in alkaloids, suggesting the components erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β-hydroxyerysodine-glucose and 11-hydroxyerysotinone-rhamnoside. The aqueous extract of E. falcata showed to be a potent dose-dependent hypotensive, decreasing the SBP in 23 to 35% and DBP in 32 to 49% for both extracts, without influence in HR, and this effect may be due to the route of β- adrenergic receptors.

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-05-08T02:43:19Z No. of bitstreams: 1 127110045.pdf: 1527824 bytes, checksum: 960729a0a23069d5d40ec997cc3034b8 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-08T02:43:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 127110045.pdf: 1527824 bytes, checksum: 960729a0a23069d5d40ec997cc3034b8 (MD5) Previous issue date: 2014-07-17 / O gênero Cuphea, popularmente conhecido no Brasil por “sete-sangrias”, tem seu uso medicinal reconhecido devido aos efeitos diurético, hipotensor e cardioprotetor. No sul do Brasil, em região característica do bioma Pampa, foi encontrada a espécie Cuphea glutinosa Cham. & Schltdl. Embora o uso popular, esta espécie é pouco descrita na literatura. O presente trabalho tem como objetivos o estudo da composição química dos extratos de C. glutinosa e a avaliação das atividades antifúngica e anti-hipertensiva. O material vegetal foi coletado na cidade de Uruguaiana (RS, Brasil), identificado e depositado em herbário. Após secagem e trituração do material vegetal, foram obtidos os extratos hidroetanólicos através de maceração exaustiva com etanol 40% (v/v) para folhas e etanol 70% (v/v) para raízes. Para a infusão, utilizou-se água a 80oC. As análises cromatográficas foram realizadas em equipamento cromatógrafo a líquido Prominence Shimadzu, em técnica por CLAE e CLUE. Utilizou-se sistema de fase reversa, eluição por gradiente com fase móvel composta por acetonitrila:metanol (4:1) e ácido fórmico 0,1% pH 3,0, coluna C18 analítica e fast, e detecção por UV-DAD e ESI-MS. Os teores de polifenóis totais e de flavonóides foram determinados por método colorimétrico, seguindo metodologia padronizada. A atividade antifúngica in vitro foi realizada utilizando o método de microdiluição em caldo, determinando-se a CIM, in-vitro, contra diferentes isolados clínicos. Para avaliação do potencial anti-hipertensivo in vivo, foram realizadas medições da pressão sanguínea pelo método de monitoramento hemodinâmico invasivo, através da inserção de cateter na artéria carótida. Os resultados de teor de fenólicos totais indicaram predominância destes componentes em extratos obtidos de folhas e por maceração, conforme os valores obtidos: 1,8501 mg EAG/mL (folhas) e 0,8467 mg EAG/mL (raízes) para infusão, e 3,7284 mgEAG/mL (folhas) e 2,6266 mg EAG/mL (raízes) para maceração. Quanto ao teor de flavonóides, os resultados quantitativos foram: 7,0959 mg/g (folhas) e 0,5664 mg/g (raízes) para a infusão, e 7,9511 mg/g (folhas) e 0,5994 mg/g (raízes) para maceração. Na análise cromatográfica, os extratos obtidos das folhas de C. glutinosa apresentaram picos cromatográficos bem separados, em perfil reprodutível. Na determinação por CLUE-MS, os dados de íon molecular e fragmentos de massa indicaram a composição predominante em flavonóides, sugerindo-se os componentes quercetina-3-O-glicosídeo, quercetina-3- arabinosídeo, quercetina-3-glicuronídeo, isoramnetina e quercetina-5-O-β-glicopiranosídeo. Para o potencial antifúngico, os extratos das folhas e raízes apresentaram atividade in vitro contra Candida parapsilosis, Candida tropicalis e Trichosporon asahii, com CIM variando na faixa de 1,9-62,5 μg/mL. Nos testes hemodinâmicos realizados, os extratos das folhas não apresentaram efeito significativo sobre a pressão arterial. A identificação dos componentes em C. glutinosa, derivados de quercetina, torna promissora novas investigações a fim de aprofundar o conhecimento a respeito desta espécie, em especial na busca de respostas para a relatada ação anti-hipertensiva. / The Cuphea genus, popularly known in Brazil as "sete-sangrias", is used traditionally due the diuretic, hypotensive and cardioprotective effects. In southern Brazil, in characteristic region of Pampa biome, it was found the species Cuphea glutinosa Cham. & Schltdl. Although used popularly, this species is few reported in the literature. The present work aimed to study the chemical composition of extracts from C. glutinosa and to evaluate the antifungal and anti -hypertensive activities. The plant material was collected in the city of Uruguaiana (RS, Brazil), identified and deposited in a herbarium. After dryness and milling, the hydroethanolic extracts were obtained through exhaustive maceration using ethanol 40% (v/v) for leaves and ethanol 70% (v/v) for roots. The infusions were prepared using water at 80 °C. The chromatographic analyses were performed in liquid chromatography Prominence Shimadzu, for HPLC and UPLC assays. The method was conducted using reverse phase system, gradient elution with mobile phase composed by acetonitrile:methanol (4:1) and formic acid 0.1% pH 3.0, C18 analytical and fast column, and detection by UV-DAD and MS. The polyphenols and flavonoids contents were determined by colorimetric method. The in vitro antifungal activity was conducted by using the broth microdilution method, determining the MIC against different clinical isolates. For evaluation of in vivo anti-hypertensive potential, the blood pressure was measured by the method of invasive hemodynamic monitoring, through of insertion the catheter into the carotid artery. The results of phenolic content indicated the high concentration of these compounds in leaves extracts obtained by maceration: 1.8501 mgEAG/mL (leaves) and 0.8467 mgEAG/mL (roots) for infusion, and 3.7284 mgEAG/mL (leaves) and 2.6266 mgEAG/mL (roots) for maceration. For flavonoids, the contents were: 7.0959 mg/g (leaves) and 0.5664 mg/g (roots) for infusion, and 7.9511 mg/g (leaves) and 0.5994mg/g (roots) for maceration. In the chromatographic analyses, the leaf extracts from C. glutinosa presented chromatographic peaks well separated and reproducible. In the determination by UPLC-MS, the molecular ion and mass fragments indicated the predominant composition in flavonoids, suggesting the compounds quercetin-3- O-glucoside, quercetin-3-arabinoside, quercetin-3-glucuronide, isorhamnetin and quercetin-5- O-β-glucopiranoside. For the antifungal potential, the leaf and roots extracts presented activity against Candida parapsilosis, Candida tropicalis e Trichosporon asahii, with MIC values ranging 1,9-62,5 μg/mL. In the hemodynamic tests performed, the leaves extracts did not present significant effect in the arterial pressure, although a tendency in pressure reduction could be observed. The identification of quercetin derivatives in C. glutinosa becomes promisor further investigations about this species, mainly in respect to the anti-hypertensive action.