Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / El ejercicio físico afecta tanto el metabolismo energético del músculo esquelético, como el crecimiento de este, incluyendo cambios a nivel de la síntesis de proteínas y de la expresión de genes. El calcio es una importante señal en la regulación de la transcripción. Resultados del laboratorio indican que la despolarización de células musculares esqueléticas resulta en señales de calcio rápida y lenta, muy definidas en localización subcelular y cinética, y en la activación de algunos intermediarios clásicos de la expresión génica. Entre estos intermediarios se encuentran ERK 1/2 y el factor de transcripción CREB, cuya activación depende de la señal lenta de calcio. El nivel de fosforilación de estas proteínas, que representa activación, es reflejo de la actividad de quinasas y fosfatasas. Sin embargo, en general se les ha dado mayor atención a las quinasas, conociéndose con menor profundidad las fosfatasas En músculo esquelético en particular, no se conoce cuales fosfatasas desfosforilan CREB y ERK activados por despolarización. En este trabajo se determinó que la fosfatasa calcineurina, es activada en nuestro modelo celular por la despolarización generada por dos protocolos, alta concentración de K+ extracelular y estimulación eléctrica. En ambos casos la señal lenta de calcio participa parcialmente en la activación de calcineurina. La despolarización de miotubos en presencia de un inhibidor de calcineurina genera un aumento significativo de los niveles de ERK 1 /2 y de CREB fosforilados, indicando la participación de esta fosfatasa en la desfosforilación de ambos intermediarios. Estudiamos además, el posible rol de las fosfatasas PP1 y PP2A. No hubo cambios significativos en los niveles de activación de CREB y ERK1/2 en miotubos despolarizados en presencia de un inhibidor farmacológico de ambas fosfatasas. Con esta memoria de título se han complementado estudios del laboratorio, cuyo objetivo es determinar los mecanismos de transducción de señales involucradas en la activación por calcio de CREB y ERK1/2 / PROYECTO FONDECYT N°1030988

Orientador : Prof. Dr. Ricardo Fernandez Perez / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Fisiologia. Defesa: Curitiba, 27/10/2017 / Inclui referências : f. 52-58 / Resumo: Alguns estudos já demonstraram que o estímulo do Receptor Sensível ao Cálcio Extracelular, o CaSR, é capaz de a secreção de prótons no néfron proximal e distal. Tendo em vista que a acidificação do fluido tubular no ducto coletor é fundamental para evitar a formação de cálculos, o objetivo deste trabalho foi investigar a interação do CaSR com o transporte de prótons num modelo de células intercalares do ducto coletor de mamíferos, as células MDCK C11 (Madin-Darby canine kidney cell). As células MDCK C11 foram cultivadas em meio MEM (Minimum Essential Medium) e suplementadas com 10% de SBF (Soro Bovino Fetal). A atividade bioquímica da H+-ATPasev, sensível a concanamicina 10-8 M, foi determinada por um método colorimétrico modificado do descrito por Fisk-Subarow. Alterações do cálcio intracelular foram determinadas por microscopia de fluorescência, utilizando-se o marcador FLUO-4 10 ?M. O agonista não específico de CaSR, gadolíneo 300 ?M, e o agonista específico de CaSR, R-568 0,5 e 1 ?M, incrementaram de forma significativa a atividade da H+-ATPasev em relação à atividade basal da bomba. O agonista não específico de CaSR, neomicina 200?M, incrementou a atividade da H+-ATPasev, de forma não significativa. Foi observado que o incremento do íon cálcio no meio extracelular estimulou a atividade da H+ - ATPasev de forma dose-dependente. O antagonista seletivo de CaSR, NPS 2143 150 nM, impediu o aumento da atividade da bomba promovido pelo Ca2+o 1 mM. O inibidor das fosfolipases A e C, U-73122 5x10-8 M, reverteu parcialmente o incremento na atividade da bomba observado na presença de gadolíneo 300 ?M. O ativador de proteína quinase C aumentou a atividade da H+-ATPasev em relação à basal, mas não de forma significativa. O agonista específico de CaSR, R-568 1 ?M, promoveu um aumento significativo do cálcio intracelular nas células MDCK C11, o qual persistiu mesmo com a depleção dos estoques intracelulares de Ca2+ com tapsigargina 0,1 ?M. Entretanto, na ausência de cálcio extracelular este aumento não foi observado, o que indica que o aumento do Ca2+ intracelular induzido pela ativação do CaSR é dependente da entrada de Ca2+ do meio extracelular. Destes resultados é possível concluir que o estímulo do CaSR num modelo de célula intercalar renal provoca um incremento na concentração intracelular de cálcio e na atividade bioquímica da H+-ATPasev, sugerindo uma possível interação entre o metabolismo de cálcio e os mecanismos de secreção de prótons nos túbulos renais. Palavras-chave: H+ -ATPase vacuolar; CaSR; células MDCK C11. / Abstract: Some studies have already shown that the stimulus of a Calcium-Sensing Receptor, CaSR, is able to increase protons secretions in proximal and distal nephron. Considering that fluid acidification in collecting duct is fundamental to avoid stone formation, the aim of this study was to investigate the interaction of CaSR with proton transport in a mammalian intercalated cell model, C11-MDCK (Madin-Darby canine kidney cell) cells. C11-MDCK cells were cultured in MEM (Minimum Essential Medium) and supplemented with 10% FBS (Fetal Bovine Serum).The concanamycin-sensitive activity of the H+ -ATPasev was determined by a colorimetric method modified of that described by Fisk-Subarow. Changes in intracellular calcium levels were determined by fluorescence microscopy using 10 ?M FLUO-4 dye. The non-specific CaSR agonist, gadolinium 300?M, and the specific CaSR agonist, 0,5 and 1 ?M R-568, increased significantly the activity of H+-ATPasev in relation to the basal activity of the pump. The non-specific CaSR agonist, 200 ?M neomycin, increased the activity of H+-ATPasev but not significantly. It was observed that the increase of extracellular calcium stimulated the activity of H+ -ATPasev in a dose-dependent manner. The selective CaSR antagonist, 150 nM NPS 2143, prevented the increase of pump activity promoted by 1 mM Ca2+. The phospholipase A and C inhibitor, 5x10-8 M U-73122, partially reversed the increase in pump activity observed in the presence of 300?M gadolinium. Protein kinase C activator increased the activity of H+-ATPasev relative to baseline, but not significantly. The specific CaSR agonist, R-568 1 ?M, promoted a significant increase of intracellular calcium in C11-MDCK cells, which persisted even with the depletion of intracellular Ca2+ stores with 0,1 ?M thapsigargin. However, in the absence of extracellular calcium this increase was not observed, which indicates that the increase of intracellular Ca2 + induced by CaSR activation is dependent on the input of Ca2+ from the extracellular medium Ca2+. From these results it can be concluded that the CaSR stimulus on a model of intercalated cells increase intracellular calcium concentration and biochemical activity of H+ -ATPasev, suggesting a possible interaction between calcium metabolism and the mechanisms of proton secretion in renal tubules. Keywords: vacuolar H+ -ATPase; CaSR; C11-MDCK cells.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-26T10:34:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 303233.pdf: 780315 bytes, checksum: 0735fdf4ee03c730a6af3edf0756aa87 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar, num modelo de apicificação ex vivo, se a interação do sistema MTA/dentina com PBS intracanal e se a adição de 10% de cloreto de cálcio (CaCl2) ao MTA Branco exercem influência sobre o selamento apical. Sessenta segmentos radiculares (12mm) foram divididos em 2 grupos (n=30) de acordo com o cimento empregado na confecção do tampão apical: G1, MTA Branco e G2, MTA Branco + 10% CaCl2. Em seguida foram inseridos em uma esponja floral umedecida com PBS e subdivididos (n=15): nos segmentos dos grupos G1A e G2A, uma bolinha de algodão umedecida com água destilada foi colocada na região cervical durante 24h e, depois, substituída por uma seca; nos segmentos dos grupos G1B e G2B, o espaço do canal foi preenchido com PBS. Todas as cavidades foram seladas e, decorridos 2 meses, foi realizado o teste de infiltração de glicose. Uma pressão de 103KPa (15psi) foi gerada, e a solução de glicose forçada no sentido apical durante 60min. A concentração de glicose (g/L) infiltrada foi quantificada por meio de espectrofotômetro. O conjunto de dados foi tratado estatisticamente pelo teste Kruskal-Wallis e Mann-Whitney a um nível de significância de 5%. Não foram observadas diferenças significativas entre os resultados dos grupos 1A e 1B (p=0,258), e 2A e 2B (p=0,287), no entanto os segmentos radiculares que receberam PBS intracanal apresentaram menor número de amostras com traços da solução e menor valor médio de concentração de glicose. Foram observadas diferenças significativas entre os resultados dos grupos 1A e 2A (p=0,0037) e 1B e 2B (p=0,019). Os segmentos radiculares que receberam o tampão com MTA Branco + 10% CaCl2 apresentaram maior número de amostras com traços da solução e maior valor médio de concentração de glicose. Foi possível concluir que, embora sem diferença significativa, a interação do sistema MTA/dentina com PBS intracanal influenciou positivamente o selamento apical. A adição de CaCl2 ao MTA influenciou negativamente o selamento apical. / The aim of this study was to investigate, in an ex vivo apexification model, if the interaction of the MTA-dentin system with phosphate-buffered saline (PBS) and if the addition of calcium chloride (CaCl2) 10% to MTA influence the apical seal. Sixty root segments (12mm) were divided into two groups (n=30) according to the cement used to form the apical plug: G1, MTA and G2, MTA + 10% CaCl2. After that, the root segments were introduced in floral foams moistened with PBS and subdivided (n=15): in the segments of the groups G1A and G2A, a cotton pellet moistened with distilled water was placed in the cervical region for 24h and, after, replaced by a dry one; in the segments of the groups G1B and G2B, the remaining canal space was filling with PBS as an intracanal dressing. All access openings were filled and, after 2 months, prepared in a double chamber apparatus to evaluate the glucose leakage, along the apical plugs. A pressure of 103KPa (15psi) was created, and the glucose solution was forced apically for 60min. The amount of glucose leakage was quantified by a spectrophotometer. Data were analyzed by using Kruskal-Wallis and Mann-Whitney test. Significance was set at á=5%. There were no significant differences between the results of the groups 1A and 1B (p=0,258), and 2A and 2B (p=0,287). However, the root segments that were filling with PBS as an intracanal dressing had the smaller number of samples with traces of the solution and the lower mean of glucose concentration. Significant differences were observed between the results of the groups 1A and 2A (p=0,0037) and 1B and 2B (p=0,019). The root segments that received MTA + 10% CaCl2 had a higher number of samples with traces of the solution and the higher mean of glucose concentration. Although no significant difference, the interaction of the MTA-dentin system with PBS positively influenced the apical seal. The addition of CaCl2 to the MTA negatively influenced the apical seal.

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Orientador: Ines Joekes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-25T03:48:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sueoka_Wilson_M.pdf: 3285511 bytes, checksum: b7c7caac0b3e2826ccb26356d9c225af (MD5) Previous issue date: 1999 / Mestrado

Orientador : Anibal Eugenio Vercesi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T01:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Parentoni_LuciaSimas_M.pdf: 3253683 bytes, checksum: e4c19ae29c90e01d8c222332a71eb074 (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: O Ca++ possui um efeito altamente deletério sobre mitocôndrias em diversas situações patológicas, envolvendo um processo de alteração de permeabilidade da membrana interna desta organela. Resultados prévios de nosso laboratório indicaram que esta permeabilização causada por Ca++ e oxidantes é devida à formação de ligações cruzadas entre grupamentos tiol de proteínas da membrana, com o aparecimento de agregados protéicos de alto peso molecular (FAGIAN, M;M.; PEREIRA DA SILVA, L.; MARTINS, I.S. & VERCESI, A. E. Membranas Protein Thiol Cross Linking Association with Permeabilization of the Inner Mitochondrial Membrane by Ca++ plus Prooxidants. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Cartas al editor

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se estudió la influencia que ejerce un soporte polimérico en base a quitosano (Qo) sulfonado en ensayos de cristalización heterogénea in vitro de carbonato de calcio (CaCO3) usando la técnica de difusión de gases. Para ello primeramente se elaboró un soporte de Qo sulfonado y se realizaron cuatro tratamientos de cristalización. Dos de ellos fueron ensayos control (1 y 2) y dos fueron ensayos que utilizaron soportes poliméricos, film de Qo puro (3) y un soporte de Qo sulfonado (4). El ensayo 4 fue el único que utilizo una superficie funcionalizada y sobre la cual se formaron cristales de CaCO3. Los cristales de CaCO3 obtenidos fueron caracterizados mediante las técnicas de Microscopía Electrónica de Barrido (SEM), espectroscopía Raman e Infrarroja con transformada de Fourier (FTIR) y con difracción de rayos x (XRD). Los resultados morfológicos mediante SEM de los cristales depositados sobre el soporte de Qo sulfonado mostraron una morfología romboédrica concordante con calcita. Los resultados obtenidos mediante Raman y FTIR comprobaron la naturaleza físico química tanto de soporte utilizado como del material cristalino obtenido. Así, Raman mostró la presencia de Qo sulfonado y cristales con ciertos patrones del polimorfo de calcita. FTIR por su parte permitió caracterizar el soporte y reafirmar el polimorfismo de estos cristales. La técnica XRD corroboró la naturaleza del polimorfo de calcita. En resumen, de acuerdo a los resultados obtenidos en esta Memoria de Título se concluye que Qo sulfonado como soporte en un ensayo de cristalización heterogénea de CaCO3 actúa como una superficie efectiva para el control de la nucleación y crecimiento de cristales, haciendo de este modelo de cristalización un modelo muy simplificado y una aproximación más plausible a las condiciones biomiméticas en que ocurre el fenómeno de mineralización biológica. / Proyecto Fondecyt No. 1110194

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La formación de minerales inorgánicos es controlada biológicamente en los organismos vivos (biomineralización) formando materiales compósitos híbridos orgánico-inorgánicos. Estos materiales híbridos poseen propiedades superiores, las cuales han sido ampliamente estudiadas. A nivel de laboratorio, el carbonato de calcio (CaCO3) ha sido investigado siendo útil para el estudio de la biomineralización y la formación de nuevos biomateriales. Para controlar las características de los cristales de CaCO3 es necesario comprender los mecanismos por los cuales los cristales se forman y las interacciones entre sus componentes orgánico e inorgánico. En este contexto, polímeros naturales y sintéticos han sido utilizados como aditivos y/o sustratos en ensayos de cristalización in vitro, modificando la morfología de cristales CaCO3. Así, el quitosano (Qo) y el ácido poliacrílico (APA) han mostrado ser activos en el control de la nucleación, crecimiento y orientación cristalográfica del CaCO3. En este trabajo se evaluó Qo y APA sobre la cristalización de CaCO3 in vitro usando una técnica electroquímica. Se estudiaron las reacciones químicas involucradas en la formación electroquímica del CaCO3 mediante cronoamperometría en electrodos ITO como electrodo de trabajo. Se evaluaron las variables de tiempo, voltaje y concentración de APA. El Qo fue utilizado como sustrato biopolimérico en la electrocristalización de CaCO3. Los resultados de los ensayos se evaluaron mediante SEM y XRD. Las curvas amperométricas demuestran que en los primeros 3 minutos ocurre una disminución importante en los valores de corriente en todos los ensayos, lo que demuestra la formación de cristales o depósito de CaCO3. Al realizar ensayos de CaCO3 sin aditivo, se obtienen cristales con tamaño de 10 µm, de morfología tetraédrica y romboédrica con fases alargadas y bordes bien definidos. Al usar APA se observaron aglomerados de partículas de forma irregular distribuidos ampliamente en la superficie del ITO. Mientras que, en presencia de un film de Qo, se observan cristales superpuestos y con formas tetraédricas. Finalmente, al combinar ambos polímeros en un mismo ensayo, se observan cristales con formas esféricas bien definidas. Mediciones de XRD de ángulo rasante, confirman la formación de CaCO3 amorfo (ACC) en los ensayos donde se encuentra presente APA. Por otro lado, al usar Qo se demuestra que es un modulador de la morfología y disposición de los cristales sin alterar su fase cristalina romboédrica / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1140660

Orientadores : yuji Takahat, Andrejus Korolkovas / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-15T19:48:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gaudio_AndersonCoser_M.pdf: 6494565 bytes, checksum: dd11a444edeff78fa7d65ce6c53d66ee (MD5) Previous issue date: 1992 / Mestrado