Este estudo avaliou in vitro a dureza da camada de adesivo e da camada híbrida de uma interface entre resina composta e dentina humana por meio de ensaios de nanodureza (DUH). Foi avaliada a resistência de união por meio de testes de microcisalhamento (MC) com o objetivo de observar a relação desta resistência com a propriedade da dureza. Os fatores de variação compreendem quatro sistemas adesivos (Adper Scotchbond Multiuso, Adper Single Bond 2, Clearfil SE Bond e Single Bond Universal) e duas profundidades dentinárias (dentina rasa e dentina profunda). As unidades experimentais foram compostas por 144 fragmentos dentais obtidos da face vestibular de molares humanos, os quais foram distribuídos em 16 grupos, 8 grupos com n=6 para os ensaios de DUH e 8 grupos com n=12 para os ensaios de MC de forma que os quatro sistemas adesivos foram aplicados sobre fragmentos de dentina rasa e de dentina profunda. Após a confecção das restaurações em resina composta e 24h de armazenamento em estufa a 37°C, os ensaios de DUH foram realizados no ultramicrodurômetro DUH-211S (Shimadzu) com carga de 1mN/mseg. Os testes de MC foram realizados na máquina de ensaios universais Instron 5942(Instron Co) com velocidade de 1mm/min seguido da análise do padrão de fratura em microscópio digital. A análise estatística foi realizada por ANOVA (p<0,01%), Tukey e correlação de Pearson (p<0,05%). O sistema SB Universal (M=31,82±4,72) evidenciou os maiores valores de resistência de união e o Clearfil SE (M=26,75±3,73) os menores. O Single Bond 2 (M=28,83±4,07) e Scotchbond MP (M=28,53±4,61) não apresentaram diferenças entre si e obtiveram valores intermediários, não se diferenciando do maior e nem do menor valor. A resistência de união na dentina rasa (M=30,45±4,40) foi maior que em dentina profunda (M=27,52±4,01). Os sistemas SB Universal (M=22,57±2,42) e Scotchbond MP (M=22,13±2,89) não apresentaram diferença entre si e evidenciaram valores de dureza na camada de adesivo maiores que o Clearfil SE (M= 19,11±1,23). O sistema Single Bond 2 (M=20,11±1,49) apresentou valores intermediários de dureza e não foi diferente do maior e do menor valor. A camada híbrida em dentina rasa (M=38,23±3,08) apresentou maior dureza que a camada híbrida em dentina profunda (M=33,09±1,85). Pode-se concluir que tanto o sistema adesivo utilizado quanto a profundidade dentinária influenciaram nos resultados de resistência adesiva. A dureza da camada de adesivo varia conforme o sistema utilizado sendo que os adesivos SB Universal e o Scotchbond MP apresentaram os maiores valores de dureza. A dureza da camada híbrida foi influenciada pela profundidade dentinária do substrato. Foi observada uma correlação direta entre a dureza da camada de adesivo e a resistência adesiva. / This study evaluated in vitro the hardness of the adhesive layer and the hybrid layer interface between composite and human dentin using nanohardness test (DUH). Was evaluated the bond strength by microshear test (MC) in order to observe the relationship of this resistance with the hardness property. The variation factors consist of four adhesive systems (Adper Scotchbond Multi-Purpose, Adper Single Bond 2, Clearfil SE Bond and Single Bond Universal) and two dentin depths (superficial and deep dentin). The experimental units consisted of 144 dental fragments obtained from molars vestibular area, which were divided into 16 groups, 8 groups with n = 6 for DUH test and 8 groups with n = 12 for the MC test, so the four adhesive systems were applied on dentin fragments of superficial and deep dentin. After the construction of the composite resin restorations and 24h storage at 37 °C, DUH analysis were performed using a nanoindentation device DUH-211S (Shimadzu) with load of 1mN/mseg. The MC tests were performed in a universal testing machine Instron 5942 (Instron Co) with speed 1mm/min followed by analysis of the failure site in digital microscope. Statistical analysis was performed by ANOVA (p <0.01%), Tukey, and Pearson correlation (p <0.05%). The system SB Universal (M = 31.82 ± 4.72) showed higher values of bond strength and Clearfil SE (M = 26.75 ± 3.73) lower. The Single Bond 2 (M = 28.83 ± 4.07) and Scotchbond MP (M = 28.53 ± 4.61) did not differ among themselves and had intermediate values, not differentiating the largest and the smallest value. The bond strength of superficial dentin (M = 30.45 ± 4.40) was higher than in deep dentin (M = 27.52 ± 4.01.) Universal Systems SB (M = 22.57 ± 2.42) and Scotchbond MP (M = 22.13 ± 2.89) did not differ among themselves and showed hardness values in the adhesive layer higher than Clearfil SE (M = 19.11 ± 1.23.) The system Single Bond 2 (M = 20.11 ± 1.49) showed intermediate values of hardness and was not different from the largest and smallest value. The hybrid layer in superficial dentin (M = 38.23 ± 3.08) was harder than the hybrid layer in depth dentin (M = 33.09 ± 1.85.) It can be concluded that both the adhesive system used as the dentin depth influenced the bond strength. The hardness of the adhesive layer varies depending on the system used and the SB Universal adhesive and Scotchbond MP showed higher hardness values. The hardness of the hybrid layer was influenced by the depth of the dentin substrate. We observed a direct correlation between the hardness of the adhesive layer and the bond strength.

Este estudo avaliou in vitro a dureza da camada de adesivo e da camada híbrida de uma interface entre resina composta e dentina humana por meio de ensaios de nanodureza (DUH). Foi avaliada a resistência de união por meio de testes de microcisalhamento (MC) com o objetivo de observar a relação desta resistência com a propriedade da dureza. Os fatores de variação compreendem quatro sistemas adesivos (Adper Scotchbond Multiuso, Adper Single Bond 2, Clearfil SE Bond e Single Bond Universal) e duas profundidades dentinárias (dentina rasa e dentina profunda). As unidades experimentais foram compostas por 144 fragmentos dentais obtidos da face vestibular de molares humanos, os quais foram distribuídos em 16 grupos, 8 grupos com n=6 para os ensaios de DUH e 8 grupos com n=12 para os ensaios de MC de forma que os quatro sistemas adesivos foram aplicados sobre fragmentos de dentina rasa e de dentina profunda. Após a confecção das restaurações em resina composta e 24h de armazenamento em estufa a 37°C, os ensaios de DUH foram realizados no ultramicrodurômetro DUH-211S (Shimadzu) com carga de 1mN/mseg. Os testes de MC foram realizados na máquina de ensaios universais Instron 5942(Instron Co) com velocidade de 1mm/min seguido da análise do padrão de fratura em microscópio digital. A análise estatística foi realizada por ANOVA (p<0,01%), Tukey e correlação de Pearson (p<0,05%). O sistema SB Universal (M=31,82±4,72) evidenciou os maiores valores de resistência de união e o Clearfil SE (M=26,75±3,73) os menores. O Single Bond 2 (M=28,83±4,07) e Scotchbond MP (M=28,53±4,61) não apresentaram diferenças entre si e obtiveram valores intermediários, não se diferenciando do maior e nem do menor valor. A resistência de união na dentina rasa (M=30,45±4,40) foi maior que em dentina profunda (M=27,52±4,01). Os sistemas SB Universal (M=22,57±2,42) e Scotchbond MP (M=22,13±2,89) não apresentaram diferença entre si e evidenciaram valores de dureza na camada de adesivo maiores que o Clearfil SE (M= 19,11±1,23). O sistema Single Bond 2 (M=20,11±1,49) apresentou valores intermediários de dureza e não foi diferente do maior e do menor valor. A camada híbrida em dentina rasa (M=38,23±3,08) apresentou maior dureza que a camada híbrida em dentina profunda (M=33,09±1,85). Pode-se concluir que tanto o sistema adesivo utilizado quanto a profundidade dentinária influenciaram nos resultados de resistência adesiva. A dureza da camada de adesivo varia conforme o sistema utilizado sendo que os adesivos SB Universal e o Scotchbond MP apresentaram os maiores valores de dureza. A dureza da camada híbrida foi influenciada pela profundidade dentinária do substrato. Foi observada uma correlação direta entre a dureza da camada de adesivo e a resistência adesiva. / This study evaluated in vitro the hardness of the adhesive layer and the hybrid layer interface between composite and human dentin using nanohardness test (DUH). Was evaluated the bond strength by microshear test (MC) in order to observe the relationship of this resistance with the hardness property. The variation factors consist of four adhesive systems (Adper Scotchbond Multi-Purpose, Adper Single Bond 2, Clearfil SE Bond and Single Bond Universal) and two dentin depths (superficial and deep dentin). The experimental units consisted of 144 dental fragments obtained from molars vestibular area, which were divided into 16 groups, 8 groups with n = 6 for DUH test and 8 groups with n = 12 for the MC test, so the four adhesive systems were applied on dentin fragments of superficial and deep dentin. After the construction of the composite resin restorations and 24h storage at 37 °C, DUH analysis were performed using a nanoindentation device DUH-211S (Shimadzu) with load of 1mN/mseg. The MC tests were performed in a universal testing machine Instron 5942 (Instron Co) with speed 1mm/min followed by analysis of the failure site in digital microscope. Statistical analysis was performed by ANOVA (p <0.01%), Tukey, and Pearson correlation (p <0.05%). The system SB Universal (M = 31.82 ± 4.72) showed higher values of bond strength and Clearfil SE (M = 26.75 ± 3.73) lower. The Single Bond 2 (M = 28.83 ± 4.07) and Scotchbond MP (M = 28.53 ± 4.61) did not differ among themselves and had intermediate values, not differentiating the largest and the smallest value. The bond strength of superficial dentin (M = 30.45 ± 4.40) was higher than in deep dentin (M = 27.52 ± 4.01.) Universal Systems SB (M = 22.57 ± 2.42) and Scotchbond MP (M = 22.13 ± 2.89) did not differ among themselves and showed hardness values in the adhesive layer higher than Clearfil SE (M = 19.11 ± 1.23.) The system Single Bond 2 (M = 20.11 ± 1.49) showed intermediate values of hardness and was not different from the largest and smallest value. The hybrid layer in superficial dentin (M = 38.23 ± 3.08) was harder than the hybrid layer in depth dentin (M = 33.09 ± 1.85.) It can be concluded that both the adhesive system used as the dentin depth influenced the bond strength. The hardness of the adhesive layer varies depending on the system used and the SB Universal adhesive and Scotchbond MP showed higher hardness values. The hardness of the hybrid layer was influenced by the depth of the dentin substrate. We observed a direct correlation between the hardness of the adhesive layer and the bond strength.

Submitted by Maryse Santos (maryseeu4@gmail.com) on 2016-09-02T13:57:40Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Joyce de Figueiredo Meire.pdf: 2807877 bytes, checksum: cbe238bdb338faf2eb0cffa862aeec1e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T13:11:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Joyce de Figueiredo Meire.pdf: 2807877 bytes, checksum: cbe238bdb338faf2eb0cffa862aeec1e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-09-16T13:18:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Joyce de Figueiredo Meire.pdf: 2807877 bytes, checksum: cbe238bdb338faf2eb0cffa862aeec1e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-16T13:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação de Mestrado- Joyce de Figueiredo Meire.pdf: 2807877 bytes, checksum: cbe238bdb338faf2eb0cffa862aeec1e (MD5) Previous issue date: 2014-05-23 / Não informada / The adhesion of polymeric materials to dentin is still considered a big challenge because it is a complex histological substrate, predominantly tubular and intrinsically moist. Sclerosis and pathological processes such as caries, as well as the dentin demineralization, result in dentin properties changes. Among these transformations there is the activation of matrix metalloproteinases (MMPs) in the dentin matrix after etching. The solvents and monomers effects on the demineralized dentin have an important role in the whole concept of bonding. The use of disinfectant solutions has become an alternative to reduce these effects. Despite the great efficacy, the 2% chlorhexidine (CHX) can bring side effects. Thus, this research aims to morphometrically analyze the effect of copaiba oil emulsion 10% (COE) on the collagen of sound and carious dentin. In the analysis of the exposure of collagen fibers 80 specimens were fabricated. In the collagen fibers exposure analysis 80 specimens were fabricated from sound third molars that were immersed in test solutions for 3 months aging: G1- sound dentin (SD) + water, G2 - carious dentin (CD) + water, G3 - SD + 2% CHX, G4 - CD + CHX, G5 – SD + COE with preservative A (COE+PA), G6 - CD+COE+PA, G7 - SD + COE with preservative B (COE+PB), G8 - CD + COE+PB, G9 - SD + COE with preservative (COE+PC), G10 - CD + COE+PC. The specimens were histologically prepared, stained with Goldner's trichrome and analyzed. To analyze the examiner’s reproducibility the Pearson correlation test was used. To the data of thickness collagen layer was applied the non-parametric Kruskal-Wallis test (p <0.05). Increased frequency of exposed collagen was observed in G10 (CD+ COE+PC), followed by groups G6 (CD+COE+PA) and G5 (SD+COE+PA). The data showed no statistical difference between the groups G7 and G9, which had the thickest hybridized collagen, no difference when compared to G1 and G2, which showed less thickness. The G3, G4 and G8 groups showed no statistically significant difference between themselves and the other above. Qualitative analysis of histological samples for the study was taken by three pathologists simultaneously. Specimens treated with COE had the thickest exposed and hybridized collagen than the groups treated with CHX and water. Regarding the CD, the CHX group treated showed higher proportion of specimens with hybridized collagen. G7 showed 100% of specimens with hybridized collagen and better homogeneity of the hybrid layer. / A adesão de materiais poliméricos à dentina ainda é considerada um grande desafio por ser este um substrato histologicamente complexo, predominantemente tubular e intrinsecamente úmido. Processos patológicos como esclerose e cárie, assim como a desmineralização da dentina, resultam em alterações nas propriedades do substrato dentinário. Dentre essas transformações está a ativação de metaloproteinases (MMPs) presentes na matriz dentinária após condicionamento ácido. . O uso de agentes de limpeza cavitária tornou-se uma alternativa para reduzir esses efeitos. Apesar da grande eficácia, a clorexidina 2% (CLX) pode trazer efeitos colaterais, como o manchamento dentário. Assim, essa pesquisa se propõe a analisar morfometricamente o efeito das emulsões a base de óleo de copaíba a 10% sobre a formação da camada híbrida.Na análise da exposição de fibras colágenas foram confeccionados 80 espécimes a partir de 3o terceiros molares hígidos que foram imersos em soluções testes durante 3 meses de envelhecimento: G1 - dentina hígida (DH) + água, G2 -dentina cariada (DC) + água, G3 - DH+CLX, G4-DC+CLX, G5-DH+CM+conservante A (CM+A), G6-DC+CM+A, G7-DH+CM + conservante B (CM+B), G8-DC+CM+B, G9-DH+CM+conservante C (CM+C), G10-DC+CM+C. Os espécimes foram preparados histologicamente, corados em Tricrômico de Goldner e analisados, onde foram feitas imagens, utilizando um aumento de 400x, com a câmera Dino-Eye. A espessura de colágeno exposto e hibridizado foi medida através do programa UTHSCSA Image Tool.. A reprodutibilidade do examinador foi pelo teste de correlação de Pearson. Aos dados de espessura da camada de colágeno foi aplicado o teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis (p<0,05). Maior frequência de colágeno exposto foi observada em G10 (DC + CM+C), seguidos dos grupos G6 (DC + CM+A) e G5 (DH + CM+A). Os dados demonstraram que não houve diferença estatística entre os grupos G7 e G9, que apresentaram maior espessura de colágeno hibridizado, havendo diferença quando comparados aos grupos G1 e G2, que apresentaram menor espessura. Os grupos G3, G4 e G8 não apresentaram diferença estatística significante entre si e entre os demais supracitados. A análise histológica foi feita de maneira qualitativa por três patologistas, simultaneamente. Os espécimes tratados com as emulsões à base de copaíba apresentaram maior espessura de colágeno exposto e hibridizado que os grupos tratados com clorexidina e água. Quanto o à dentina cariada o grupo tratado com clorexidina apresentou maior proporção de corpos de prova com colágeno hibridizado. G7 apresentou 100% de espécimes com colágeno hibridizado e melhor homogeneidade de camada híbrida.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-07-13T13:13:18Z No. of bitstreams: 1 vitoriacelestefernandesteixeira.pdf: 5962558 bytes, checksum: 288c2013154e288680445ffcde39df0c (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-07-13T16:54:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vitoriacelestefernandesteixeira.pdf: 5962558 bytes, checksum: 288c2013154e288680445ffcde39df0c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-13T16:54:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vitoriacelestefernandesteixeira.pdf: 5962558 bytes, checksum: 288c2013154e288680445ffcde39df0c (MD5) Previous issue date: 2011-07-08 / O objetivo do presente estudo foi avaliar a resistência da união à microtração dos sistemas adesivos convencional (Single Bond II, SB) e autocondicionante (Clearfil SE Bond, SE) em dentina humana condicionada após a aplicação de agentes dessensibilizantes. Foram utilizados discos obtidos de terceiros molares humanos hígidos, os quais tiveram o esmalte oclusal removido para exposição de superfícies planas de dentina média. Seis grupos foram formados, de acordo com os materiais utilizados: G1 (controle) – hibridização com SB; G2 - dessensibilizante à base de oxalato (BisBlock, BB) e SB; G3 - dessensibilizante à base de fluoreto (Aqua Prep F, AF) e SB; G4 (controle) – hibridização com SE; G5 – BB e SE; G6 – AF e SE. Sobre estas superfícies foram confeccionados blocos de resina composta Filtek Z350 de 5 mm de altura para obtenção de palitos de 1Ox1x1mm. Os corpos de prova foram armazenados em água deionizada a 37° por 24h e submetidos ao ensaio mecânico de microtração com velocidade de 1mm/min até a fratura. Os resultados foram analisados através de ANOVA two-way e Teste Tukey (p<0,05). Os valores médios dos grupos em MPa foram: G2 46,48 (8,04), G3 44,87 (11,26), G5 39,02 (13,45), G4 36,95 (7,14), G1 36,66 (10,84) e G6 32,71 (13,83) os quais não exibiram diferença estatisticamente significativa entre si (p=0,012). Conclui-se que o uso combinado de dessensibilizantes aos sistemas adesivos convencional e autocondicionante sobre a dentina humana condicionada não alterou a resistência da união. / The aim of study was evaluate the microtensile bond strength of the total etch (Single Bond II, SB) and self-etch adhesive systems (Clearfil SE Bond, SE) in human dentin after desensitizer agents. Disks were obtained from human third molars, which had their oclusal enamel removed to expose flat dentin surface. Six groups were formed according to the materials used: G1 (control)- hybridization with SB, G2- oxalate desensitizer (BisBlock, BB) and SB, G3- fluoride desensitizer (Aqua Prep F, AF) and SB, G4 (control)- hybridization with SE, G5- BB and SE, G6- AF and SE. On these surfaces were made blocks of composite Filtek Z350 of 5 mm to obtain “sticks” 10x1x1 mm. The specimens were stored in deionized water at 37°/ 24 h and subjected to microtensile testing 1 mm/min until fracture. The images were observed in MEV. The results were analyzed ANOVA two-way and Tukey test (p<0,05). The mean values of the groups in MPa were: G2- 46.48(8.04), G3- 44.87(11.26), G5- 39.02 (13.45), G4-36.95(7.14), G1- 36.66(10.84) and G6- 32.71(13.83) which showed no statistically significant difference between groups (p =0.012). It can be concluded that the combined use the desensitizers and adhesive systems in human dentin etched there is no influence on bond strength.

A degradação da interface adesiva em dentina pode acometer tanto a porção resinosa como a porção orgânica da camada híbrida. Evidências indicam que a degradação da porção orgânica pode ocorrer em parte devido a atividade enzimática de proteases da própria dentina. As metaloproteinases da matriz (MMPs) constituem a primeira classe de enzimas relacionada com a degradação da matriz orgânica. É possível que as MMPs, possam ser reativadas durante o procedimento adesivo em conseqüência da queda do pH do meio. Objetivo: Esta investigação teve como objetivos avaliar a influência de soluções desmineralizadoras com diferentes concentrações de ácido fosfórico (AF1%, AF10% e AF37%) na atividade proteolítica da dentina humana sadia, na degradação do colágeno exposto pela desmineralização, além de identificar imunologicamente as metaloproteinases. Material e Métodos: Vinte dentes molares permanentes foram triturados para obtenção de um pó de dentina. Alíquotas de 1g do pó foram acondicionadas em tubos plásticos para que a desmineralização do substrato pudesse ser realizada de acordo com as três diferentes concentrações de ácido fosfórico testadas. Após a neutralização do ácido com NaOH, as amostras foram centrifugadas. O sobrenadante foi utilizado para mensuração espectrofotométrica do conteúdo de Cálcio (Ca) liberado pela desmineralização. O precipitado obtido foi incubado com tampão de extração de proteínas por 24h a 4°C sob agitação. Nova centrifugação foi realizada e o sobrenadante utilizado para avaliação da atividade da MMP-2 e MMP-9 por zimografia e para a identificação imunológica das metaloproteinases por western blot. O precipitado obtido pela centrifugação foi liofilizado e separado em alíquotas de 40mg (n=10) de pó de dentina para cada condição experimental. As alíquotas foram incubadas em saliva artificial por 24h a 37°C sob agitação e hidrolisadas em autoclave. Após incubação a 65°C por 40 min, as amostras foram avaliadas por espectrofotometria para que a mensuração da concentração do aminoácido hidroxiprolina (HYP) liberado pela degradação do colágeno exposto pudesse ser obtida. Fatias de 0.3 mm da dentina coronária de outro dente foram obtidas e desmineralizadas, de acordo com as diferentes concentrações de ácido fosfórico para avaliação da atividade enzimática através do método da zimografia in situ. Os resultados foram submetidos à análise de variância de um fator sem vinculação ou teste de Kruskal-Wallis para identificação das diferenças existentes entre os grupos experimentais. Para contraste das médias foi realizado o teste de Student-Newman-Keuls com nível de significância de 5% (=0,05). Resultados: A atividade enzimática de MMP-2 foi estatisticamente maior quando a dentina foi desmineralizada com AF 1% ou 10%. O uso do ácido fosfórico 37% diminuiu consideravelmente a atividade desta enzima, em relação ao AF10% (<0,05). Em nenhuma das amostras desmineralizadas com AF foi detectada a atividade enzimática da MMP-9. A identidade da MMP-2 foi confirmada pelo immunoblotting da enzima com anticorpo específico. A MMP-9 não foi expressa nos extratos analisados. A expressão de MMP-2 foi maior quando utilizado AF 1% ou 10% e menor quando foi utilizado o AF 37%. A utilização do AF 37% liberou valores de Ca, em g/mL, estatisticamente superiores aos valores determinados para os demais grupos (<0,05). A maior concentração de HYP, em g/mL, foi encontrada nos extratos desmineralizados com AF 10%. Em seguida, aparecem os valores encontrados com o uso do AF1%. Os menores valores da concentração de HYP aparecem no grupo em que foi utilizado o AF 37% (<0,05). A concentração de HYP em função do peso de dentina utilizado (40mg) também foi calculada. A maior concentração de HYP por mg de dentina foi obtida com AF 10%, seguida pelos extratos desmineralizados com AF1%. Os menores valores foram detectados com AF 37% (<0,05). O uso do AF10% demonstrou ser responsável pela maior taxa de degradação de colágeno exposto (20,13%). Em seguida, aparecem valores intermediários (11,34%) obtidos com AF1%. Por último, surgem os menores valores (0,68%) com AF37%. A análise das imagens obtidas após a realização da zimografia in situ demonstrou maior atividade enzimática quando a dentina foi desmineralizada com AF10%. Conclusão: O uso do AF37% para o condicionamento da dentina durante a realização do procedimento adesivo pode minimizar os efeitos degradantes das proteases endógenas sobre o colágeno. Em contrapartida, estudos realizados com pó de dentina desmineralizado com AF1% ou 10% podem estar sobreestimando a atividade das MMPs, em relação à prática clínica. / The dentin adhesive interface degradation can occur in resin and in organic portion of the hybrid layer. Evidence indicates that the degradation of organic matrix may partially occur due to the enzymatic activity of proteases own dentin. The matrix metalloproteinases (MMPs) have been described as the first class of enzymes associated with degradation of the organic matrix. It is possible that MMPs may be reactivated during the adhesive procedure as a result of the fall of pH. Purpose: The objectives of the present investigation are to evaluate the influence of different demineralizing phosphoric acid solutions (PA1%, PA10% and PA37%) on the proteolytic activity of human sound dentin, on the collagen degradation that was exposed after demineralization, as well as to identify the metaloproteases immunologically. Material and Methods: Dentin powder was obtained from twenty human molars. One gram aliquots were placed in polyestyrene tubes and the dentin demineralization was performed using the three different phosphoric acid concentrations tested in this study. After neutralization with NaOH, the samples were centrifuged. The supernatant was used for the spectrophotometrically quantification of calcium (Ca) released by the demineralization while the precipitate was re-suspended and incubated with a protein extraction buffer for 24h at 4ºC under agitation. The sample was centrifuged and the supernatant was used for the identification of MMP-2 and MMP-9 by western blot and for the evaluation of gelatinolytic activity by zymography. The pellet was lyophilized and 40 mg aliquots of the dentin powder (n=10) were incubated in artificial saliva for 24h at 37°C under agitation and hydrolysed in autoclave after incubation at 65°C for 40 min. The samples were analyzed spectrophotometrically to measure the hydroxyproline (HYP) released after collagen degradation. Slices of 0.3 mm of the dentine crown of the another tooth were obtained and demineralized in accordance with the concentrations of phosphoric acid used in this study for evaluating the enzymatic activity by the method of in situ zymography.The data were analyzed by ANOVA one-way or Kruskal-Wallis test for the identification of differences between the experimental groups. The means were analyzed by Student-Newmans-Keulss test (=0,05). Results: The MMP-2 enzymatic activity was statistically higher when the dentin was demineralized with 1% or 10% PA. The 37% phosphoric acid decreased the activity of such enzyme relative to PA 10% (<0,05). MMP-9 activity was not detected in any demineralization condition (1%, 10% or 37% PA). MMP-2 identification was confirmed by immunoblotting while MMP-9 was not observed in any condition. MMP-2 identification was higher when 1% or 10% PA were used while 37% PA showed lower MMP-2 identification. The use of 37% PA resulted in higher release of Ca, which was significantly higher when compared to other PA concentrations (<0,05). The highest HYP concentration was observed when 10% PA was used, followed by 1% PA. The lowest values were observed for 37% PA (<0,05). The HYP concentration according to the dentin weight used (40 mg) was also calculated. Highest concentrations of HYP per mg of dentin were observed for 10% and 1% PA, while 37% PA resulted in the lowest HYP concentration (<0,05). The use of 10% PA showed to be responsible for the highest exposed collagen degradation after demineralization (20,13%) when compared to 1% PA (11,34%) and 37% PA (0,68%). The analysis of images obtained after the realization of in situ zymography showed greater enzyme activity when the dentin was demineralized in PA10%. Conclusion: The use of 37% PA for dentin etching during the restorative procedure might minimize collagen degradation by host-derived proteases. On the other hand, studies that have been using 1% or 10% PA might have overestimated MMPs activity when compared to the clinical situation.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the thickness of hybrid layer and the depth of demineralization produced by adhesive systems applied in dentinal surfaces submitted to different treatments. Dentin slices extracted from 20 caries free human third molars were divided in two groups. One was polished with 60-grit SiC paper while the other was polished with 600-grit SiC. The samples were prepared to receive the treatment with self-etching adhesive systems: Adhe SE (AD), Clearfil SE Bond (CL), G Bond (GB) and total-etching adhesive system Adper Single Bond (SB). After treatment, the samples were fractured and prepared for SEM, to analyze the smear layer produced with each paper, the effect of conditioners and the thickness of hybrid layer produced by adhesives used. The data were analyzed through ANOVA, with multiple comparisons post hoc using Tukey´s test. Correlation between depth of demineralization and thickness of hybrid layer was tested through Spearman s correlation coefficient. Adhesive system and smear layer influenced the thickness of hybrid layer, where, the highest values were obtained for SB while the lowest, for GB. The phosphoric acid was able to demineralize dentin deeper, whereas GB did not promote any demineralization. The conditioners were more efficient on thin smear layer. It was demonstrated a direct correlation between depth of demineralization and thickness of hybrid layer. The smear layer was able to influence the depth of demineralization and thickness of hybrid layer, however, for the total-etching adhesive system, the thickness of hybrid layer was independent of that. / O objetivo do estudo foi avaliar a espessura de camada híbrida e a profundidade de desmineralização produzida por sistemas adesivos aplicados sobre superfícies dentinárias submetidas a diferentes tratamentos. Discos de dentina retirados de 20 dentes terceiros molares humanos livres de cárie foram seccionados, onde a metade foi submetida ao tratamento com lixa 60# e a outra metade com lixa 600#. As amostras foram preparadas para receberem tratamento com os sistemas self-etching Adhe SE (AD), Clearfil SE Bond (CL), G Bond (GB) e o sistema total-etching Adper Single Bond (SB). Após aplicação, as amostras foram fraturadas e preparadas para a visualização em MEV, onde foi possível analisar a smear layer formada por cada lixa, a ação do condicionador e a espessura de camada híbrida formada pelos sistemas adesivos utilizados. Os dados foram analisados através do teste ANOVA, com comparações múltiplas post hoc realizadas utilizando teste de Tukey. Correlação entre profundidade de desmineralização e espessura de camada híbrida foi testada através do coeficiente de relação de Pearson. Sistema adesivo e smear layer influenciaram na espessura de camada híbrida, onde, os maiores valores encontradas foram para SB e os menores para GB. O ácido fosfórico foi capaz de desmineralizar a dentina mais profundamente, enquanto que GB não promoveu nenhuma desmineralização. Os condicionadores foram mais eficazes sobre smear layer delgada. Ficou demonstrada uma correlação direta entre profundidade de desmineralização e espessura de camada híbrida. A smear layer é capaz de influenciar a profundidade de desmineralização e espessura de camada híbrida para os sistemas adesivos testados, porém, para o sistema adesivo total-etching a camada híbrida independe desta.

A degradação da interface adesiva em dentina pode acometer tanto a porção resinosa como a porção orgânica da camada híbrida. Evidências indicam que a degradação da porção orgânica pode ocorrer em parte devido a atividade enzimática de proteases da própria dentina. As metaloproteinases da matriz (MMPs) constituem a primeira classe de enzimas relacionada com a degradação da matriz orgânica. É possível que as MMPs, possam ser reativadas durante o procedimento adesivo em conseqüência da queda do pH do meio. Objetivo: Esta investigação teve como objetivos avaliar a influência de soluções desmineralizadoras com diferentes concentrações de ácido fosfórico (AF1%, AF10% e AF37%) na atividade proteolítica da dentina humana sadia, na degradação do colágeno exposto pela desmineralização, além de identificar imunologicamente as metaloproteinases. Material e Métodos: Vinte dentes molares permanentes foram triturados para obtenção de um pó de dentina. Alíquotas de 1g do pó foram acondicionadas em tubos plásticos para que a desmineralização do substrato pudesse ser realizada de acordo com as três diferentes concentrações de ácido fosfórico testadas. Após a neutralização do ácido com NaOH, as amostras foram centrifugadas. O sobrenadante foi utilizado para mensuração espectrofotométrica do conteúdo de Cálcio (Ca) liberado pela desmineralização. O precipitado obtido foi incubado com tampão de extração de proteínas por 24h a 4°C sob agitação. Nova centrifugação foi realizada e o sobrenadante utilizado para avaliação da atividade da MMP-2 e MMP-9 por zimografia e para a identificação imunológica das metaloproteinases por western blot. O precipitado obtido pela centrifugação foi liofilizado e separado em alíquotas de 40mg (n=10) de pó de dentina para cada condição experimental. As alíquotas foram incubadas em saliva artificial por 24h a 37°C sob agitação e hidrolisadas em autoclave. Após incubação a 65°C por 40 min, as amostras foram avaliadas por espectrofotometria para que a mensuração da concentração do aminoácido hidroxiprolina (HYP) liberado pela degradação do colágeno exposto pudesse ser obtida. Fatias de 0.3 mm da dentina coronária de outro dente foram obtidas e desmineralizadas, de acordo com as diferentes concentrações de ácido fosfórico para avaliação da atividade enzimática através do método da zimografia in situ. Os resultados foram submetidos à análise de variância de um fator sem vinculação ou teste de Kruskal-Wallis para identificação das diferenças existentes entre os grupos experimentais. Para contraste das médias foi realizado o teste de Student-Newman-Keuls com nível de significância de 5% (=0,05). Resultados: A atividade enzimática de MMP-2 foi estatisticamente maior quando a dentina foi desmineralizada com AF 1% ou 10%. O uso do ácido fosfórico 37% diminuiu consideravelmente a atividade desta enzima, em relação ao AF10% (<0,05). Em nenhuma das amostras desmineralizadas com AF foi detectada a atividade enzimática da MMP-9. A identidade da MMP-2 foi confirmada pelo immunoblotting da enzima com anticorpo específico. A MMP-9 não foi expressa nos extratos analisados. A expressão de MMP-2 foi maior quando utilizado AF 1% ou 10% e menor quando foi utilizado o AF 37%. A utilização do AF 37% liberou valores de Ca, em g/mL, estatisticamente superiores aos valores determinados para os demais grupos (<0,05). A maior concentração de HYP, em g/mL, foi encontrada nos extratos desmineralizados com AF 10%. Em seguida, aparecem os valores encontrados com o uso do AF1%. Os menores valores da concentração de HYP aparecem no grupo em que foi utilizado o AF 37% (<0,05). A concentração de HYP em função do peso de dentina utilizado (40mg) também foi calculada. A maior concentração de HYP por mg de dentina foi obtida com AF 10%, seguida pelos extratos desmineralizados com AF1%. Os menores valores foram detectados com AF 37% (<0,05). O uso do AF10% demonstrou ser responsável pela maior taxa de degradação de colágeno exposto (20,13%). Em seguida, aparecem valores intermediários (11,34%) obtidos com AF1%. Por último, surgem os menores valores (0,68%) com AF37%. A análise das imagens obtidas após a realização da zimografia in situ demonstrou maior atividade enzimática quando a dentina foi desmineralizada com AF10%. Conclusão: O uso do AF37% para o condicionamento da dentina durante a realização do procedimento adesivo pode minimizar os efeitos degradantes das proteases endógenas sobre o colágeno. Em contrapartida, estudos realizados com pó de dentina desmineralizado com AF1% ou 10% podem estar sobreestimando a atividade das MMPs, em relação à prática clínica. / The dentin adhesive interface degradation can occur in resin and in organic portion of the hybrid layer. Evidence indicates that the degradation of organic matrix may partially occur due to the enzymatic activity of proteases own dentin. The matrix metalloproteinases (MMPs) have been described as the first class of enzymes associated with degradation of the organic matrix. It is possible that MMPs may be reactivated during the adhesive procedure as a result of the fall of pH. Purpose: The objectives of the present investigation are to evaluate the influence of different demineralizing phosphoric acid solutions (PA1%, PA10% and PA37%) on the proteolytic activity of human sound dentin, on the collagen degradation that was exposed after demineralization, as well as to identify the metaloproteases immunologically. Material and Methods: Dentin powder was obtained from twenty human molars. One gram aliquots were placed in polyestyrene tubes and the dentin demineralization was performed using the three different phosphoric acid concentrations tested in this study. After neutralization with NaOH, the samples were centrifuged. The supernatant was used for the spectrophotometrically quantification of calcium (Ca) released by the demineralization while the precipitate was re-suspended and incubated with a protein extraction buffer for 24h at 4ºC under agitation. The sample was centrifuged and the supernatant was used for the identification of MMP-2 and MMP-9 by western blot and for the evaluation of gelatinolytic activity by zymography. The pellet was lyophilized and 40 mg aliquots of the dentin powder (n=10) were incubated in artificial saliva for 24h at 37°C under agitation and hydrolysed in autoclave after incubation at 65°C for 40 min. The samples were analyzed spectrophotometrically to measure the hydroxyproline (HYP) released after collagen degradation. Slices of 0.3 mm of the dentine crown of the another tooth were obtained and demineralized in accordance with the concentrations of phosphoric acid used in this study for evaluating the enzymatic activity by the method of in situ zymography.The data were analyzed by ANOVA one-way or Kruskal-Wallis test for the identification of differences between the experimental groups. The means were analyzed by Student-Newmans-Keulss test (=0,05). Results: The MMP-2 enzymatic activity was statistically higher when the dentin was demineralized with 1% or 10% PA. The 37% phosphoric acid decreased the activity of such enzyme relative to PA 10% (<0,05). MMP-9 activity was not detected in any demineralization condition (1%, 10% or 37% PA). MMP-2 identification was confirmed by immunoblotting while MMP-9 was not observed in any condition. MMP-2 identification was higher when 1% or 10% PA were used while 37% PA showed lower MMP-2 identification. The use of 37% PA resulted in higher release of Ca, which was significantly higher when compared to other PA concentrations (<0,05). The highest HYP concentration was observed when 10% PA was used, followed by 1% PA. The lowest values were observed for 37% PA (<0,05). The HYP concentration according to the dentin weight used (40 mg) was also calculated. Highest concentrations of HYP per mg of dentin were observed for 10% and 1% PA, while 37% PA resulted in the lowest HYP concentration (<0,05). The use of 10% PA showed to be responsible for the highest exposed collagen degradation after demineralization (20,13%) when compared to 1% PA (11,34%) and 37% PA (0,68%). The analysis of images obtained after the realization of in situ zymography showed greater enzyme activity when the dentin was demineralized in PA10%. Conclusion: The use of 37% PA for dentin etching during the restorative procedure might minimize collagen degradation by host-derived proteases. On the other hand, studies that have been using 1% or 10% PA might have overestimated MMPs activity when compared to the clinical situation.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-30 / The aim of this study was to evaluate the effect of different concentrations of 2-hydroxyethyl methacrylate (HEMA) triethyleneglycol dimethacrylate (TEGDMA) on the inhibition of matrix metalloproteinase 2 (MMP-2). Mouse gingival explants were cultured overnight in DMEM and the expression of secreted enzymes was analyzed by gelatin zymography in buffers containing 5 mM CaCl2 (Tris-CaCl2) in 50 mM Tris-HCl buffer with the addition of HEMA and TEGDMA at different concentrations (0.62, 1.25, 2.5 or 5.0% (v/v)). The gelatinolytic proteinase present in the conditioned media was characterized as matrix metalloproteinase by means of specific chemical inhibition with 0.5 mM of EDTA and 0.5 mM of NEM. The matrix metalloproteinases present in the conditioned media were characterized as MMP-2 by immunoprecipitation.The eletrophoretic bands were scanned and the transmittance values were analyzed with ImageJ software. Data was plotted and submitted to linear regression to investigate MMP-2 inhibition as a function of HEMA and TEGDMA concentration. Three major bands were detected in the zymographic assays. Those bands were characterized as MMP-2. Zymogene (72 kDa), intermediate (66 kDa) and active forms of MMP-2 (62 kDa) were inhibited by HEMA and TEGDMA in a dose-dependent way. These findings suggest that HEMA and TEGDMA could inhibit MMP-2 expression even at small concentrations. / O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito de diferentes concentrações de 2-hidroxietil metacrilato (HEMA) e trietilenoglicol dimetacrilato (TEGDMA) na inibição da metaloproteinase da matriz 2 (MMP-2). Tecidos gengivais de ratos foram incubados em DMEM e a expressão das enzimas secretadas foi analisada por zimografia em tampões de incubação contendo 5 mM de CaCl2 (Tris-CaCl2) em 50 mM de Tris-HCl com a adição de diferentes concentrações de HEMA e TEGDMA (0,62; 1,25; 2,5 e 5%) em volume. Para caracterizar as enzimas como MMPs foi realizado ensaio de inibição química específica com 0,5 mM de EDTA (um conhecido inibidor de MMPs) e 0,5 de NEM (um conhecido inibidor de proteinases serinas).Para caracterizar as enzimas como MMP-2 foi realizado o ensaio de imunoprecipitação. As bandas produzidas no gel foram escaneadas e os valores de transmitância foram analizados com o auxílio do programa ImageJ. Os resultados foram submetidos a regressão linear em função da concentração de HEMA e TEGDMA. Três bandas foram identificadas após a zimografia. Essas bandas foram caracterizadas como MMP-2. O zimogênio (72 kDa), a forma intermediária (66 kDa) e a forma ativa da MMP-2 (62 kDa) foram inibidas pelo HEMA e pelo TEGDMA de forma dose-dependente. Nossos resultados sugerem que o HEMA e o TEGDMA podem inibir a expressão da MMP-2 mesmo em pequenas concentrações.