Orientador: Sérgio Eduardo de Paiva Gonçalves / Banca: Alessandra Bühler Borges / Banca: Andrea Anido Anido / Resumo: O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência do laser Nd:YAG nas propriedades mecânicas (dureza e módulo de elasticidade) da interface adesiva, utilizando a técnica da nanoindentação, empregando-se sistema adesivo convencional Adper Single Bond 2 - 3M ESPE (SB) ou autocondicionante Clearfil SE Bond - Kuraray (CSE). Doze terceiros molares humanos tiveram suas superfícies oclusais desgastadas até a exposição da dentina superficial. Uma cavidade circular padronizada com fresa 3053 foi realizada na superfície oclusal proporcionando 2 mm de dentina remanescente. Os espécimes foram embutidos em resina acrílica, e seccionados no sentido mésio-distal, sendo as 24 hemi-coroas obtidas divididas em quatro grupos: Grupo controle (SBC) - aplicação do sistema SB de acordo com as recomendações do fabricante; Grupo laser (SBL) - aplicação do sistema adesivo SB e tratamento com laser Nd:YAG (140mJ/cm2/60s/não contato); Grupo controle (CSEC) - aplicação do sistema adesivo autocondicionante CSE de acordo com as recomendações do fabricante; Grupo laser (CSEL)- aplicação do sistema adesivo autocondicionante CSE e tratamento com laser Nd:YAG (140mJ/cm2/60s/não contato). Após a polimerização dos sistemas adesivos, foram aplicados dois incrementos da resina composta Filtek Z 350 (3M ESPE). Os corpos-de-prova foram imersos em água destilada e armazenados por 24h em estufa 37ºC e submetidos à nanoidentação em aparelho Nano Indenter® XP (MTS®, MN, EUA).. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA), Tukey e t-Student (p<0,05). Concluiu-se que a aplicação do laser Nd:YAG em ambos os sistemas adesivos não alterou o nível de dureza da interface adesiva, no entanto alterou o módulo de elasticidade / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of Nd: YAG laser on the mechanical properties (hardness and modulus of elasticity) of the adhesive interface, using the technique of nanoindentation, employing conventional adhesive system Single Bond 2 3M ESPE (SB) or selfetching adhesive system Clearfil SE Bond - Kuraray (CSE). On 12 human molars, a flat superficial dentin surface was exposed by abrasion. A standardized circular cavity with bur 3053 was performed on the occlusal surface and dentin thickness was standardized in 2 mm. The specimens were embedded in resin acrylic and sectioned mesio-distally through their long axes, and the 24 hemi-crowns obtained divided into four groups: Control Group (SBC) - the application of SB system according to the manufacturer's recommendations; Laser Group (SBL) - SB adhesive system and treatment with Nd: YAG laser (140mJ/cm2/60s/no contact) Control Group (CSEC) - application of CSE self-etching adhesive system according to the manufacturer's recommendations; Laser Group (CSEL) - application of CSE self-etching adhesive system and treatment with Nd: YAG laser (140mJ/cm2/60s/no contact). After polymerization of the adhesives, were applied two increments of composite resin Filtek Supreme and specimens were immersed in distilled water and stored for 24 hours at 37 ºC and submitted to nanoidentation in Nano Indenter ® XP (MTS ®, MN, USA. Nanoindentation were made on composite resin, adhesive system, hybrid layer and dentin. The results were analyzed by a tree-way ANOVA, Tukey and e t-Students (p<0,05). It was concluded that the application of Nd:YAG laser in both adhesive systems did not change hardness level of hybrid layer, however chanded the elastic modulus / Mestre

Adesivos de frasco único, tanto auto-condicionantes como condicione-e-lave, são misturas complexas de monômeros resinosos hidrofílicos e hidrofóbicos dissolvidos em combinações de água/solvente.Embora a inclusão de monômeros hidrofílicos tenha conseguido altas forças de adesão imediata, estudos têm mostrado que a interface resina-dentina têm se tornado muito mais fraca através do tempo. Nesse estudo através da microtração, avaliamos a resistência adesiva de 4 sistemas adesivos e através da espectroscopia micro-Raman analisamos quantitativamente a camada híbrida formada por esses adesivos. Para a microtração, os fatores de variação foram 2: o tipo de adesivo (AdperScotchbondMulti-Purpose, AdperSingle Bond 2, Adper SE Plus, AdperEasyOne), e o período de armazenamento, em 3 níveis (1 dia, 30 dias, 180 dias), totalizando 12 níveis de variação. As unidades experimentais foram confeccionadas sobre 120 superfícies de dentina de terceiros molares humanos hígidos e não irrompidos (n= 10).Para análise estatística foi utilizado o teste paramétrico de análise de variância ANOVA e o teste de múltipla comparação de Games Howell.Para a espectroscopia micro-Raman foram utilizados 3 dentes para cada sistema adesivo, totalizando 12 dentes (n=3).Os espectros Raman dos espécimes foram registrados num espectrômetro Micro-Raman RENISHAW InVia com excitação em 785 nm (laser de diodo, RENISHAW) acoplado a um microscópio LEICA DM2500M, com estágio motorizado (x;y;z)RENISHAW MS 20 EncodedStage com resoluções lateral e axial de 100 nm e 1 m. Os adesivos condicione-e-lave ScotchbondMulti-Purpose e SingleBonddesse estudo apresentaram os maiores valores de resistência adesiva, apresentando valores dentro de uma faixa de 44,36 a 50,66 MPa, enquanto que os adesivos AdperSE e Easy One apresentaram valores de 17,97 a 24,60 MPa. O adesivo que apresentou os maiores valores de resistência adesiva foi o ScotchbondMulti-Purpose e o que teve o pior desempenho foi o adesivo Easy One. Todos os adesivos apresentaram queda significativa de resistência de união após 30 e 180 dias. Na análise micro- Raman, o adesivo ScotchbondMulti-Purpose mostrou-se mais homogêneo e com valores de penetração do adesivo semelhantes aos do Single Bond e do Easy One. O adesivo SE Plus apresentou a menor penetração do adesivo e a camada híbrida mais fina. Concluímos neste trabalho que avaliando 4 diferentes tipos de adesivos de uma mesma marca, existe uma relação negativa entre as estratégias de adesão (diminuição do número de passos e frascos) e a resistência de união e a qualidade da camada híbrida. / One-bottle adhesives, both self-etching as etch-and-rinse, are complex mixtures of hydrophilic and hydrophobic monomers resin combinations dissolved in water / solvent. Although the inclusion of hydrophilic monomers has achieved high immediate adhesion forces, studies have shown that dentin-resin interface have become much weaker over time. In this study, bond strength of four adhesive systems was evaluated bymicrotensile test and quantitative analyze ofthe hybrid layer was obtained by micro-Raman spectroscopy. For microtensile test, the factors of variation were 2: the type of adhesive (AdperScotchbondMulti-Purpose, AdperSingle Bond 2, Adper SE Plus, AdperEasy One), and the period of storage at 3 levels (1 day, 30 days, 180 days), totaling 12 levels of variation. The experimental units were made on 120 dentin surfaces of intact humanunerupted third molars (n = 10). The parametric analysis of variance ANOVA and multiple comparison Games Howell was used for statistical analysis. For micro-Raman spectroscopy were used three teeth for each adhesive system, with a total of 12 teeth (n = 3). Raman spectra of the samples were recorded on a Micro-Raman spectrometer RENISHAW invia with 785 nm excitation (laser diode, RENISHAW) coupled to a microscope LEICA DM2500M with motorized stage (x, y, z) RENISHAW MS 20 EncodedStage with lateral and axial resolutionof 100 nm and 1 microns. Etch-and-rinse adhesives ScotchbondMulti-Purposeand SingleBond of this study showed the highest bond strength values, with values within a range from 44.36 to 50.66 MPa, whereas the self-etch adhesives SE Plusand Easy One had values of 17.97 to 24.60 MPa. The adhesive that showed the highest bond strength was ScotchbondMulti-Purpose and the worst performance was fromEasy One.All adhesives showed a significant decrease in bond strength after 30 and 180 days. In micro-Raman analysis, the ScotchbondMulti-Purpose was more homogeneous and had penetration values similar to those of the adhesive Single Bond and Easy One. The SE Plus had the lowest penetration of the adhesive and the thinner hybrid layer. We conclude that evaluating 4 different types of adhesives of the same brand, there is a negative relationship between the strategies of adhesion (decreasing the number of steps and bottles) and bond strength and quality of the hybrid layer.

Adesivos de frasco único, tanto auto-condicionantes como condicione-e-lave, são misturas complexas de monômeros resinosos hidrofílicos e hidrofóbicos dissolvidos em combinações de água/solvente.Embora a inclusão de monômeros hidrofílicos tenha conseguido altas forças de adesão imediata, estudos têm mostrado que a interface resina-dentina têm se tornado muito mais fraca através do tempo. Nesse estudo através da microtração, avaliamos a resistência adesiva de 4 sistemas adesivos e através da espectroscopia micro-Raman analisamos quantitativamente a camada híbrida formada por esses adesivos. Para a microtração, os fatores de variação foram 2: o tipo de adesivo (AdperScotchbondMulti-Purpose, AdperSingle Bond 2, Adper SE Plus, AdperEasyOne), e o período de armazenamento, em 3 níveis (1 dia, 30 dias, 180 dias), totalizando 12 níveis de variação. As unidades experimentais foram confeccionadas sobre 120 superfícies de dentina de terceiros molares humanos hígidos e não irrompidos (n= 10).Para análise estatística foi utilizado o teste paramétrico de análise de variância ANOVA e o teste de múltipla comparação de Games Howell.Para a espectroscopia micro-Raman foram utilizados 3 dentes para cada sistema adesivo, totalizando 12 dentes (n=3).Os espectros Raman dos espécimes foram registrados num espectrômetro Micro-Raman RENISHAW InVia com excitação em 785 nm (laser de diodo, RENISHAW) acoplado a um microscópio LEICA DM2500M, com estágio motorizado (x;y;z)RENISHAW MS 20 EncodedStage com resoluções lateral e axial de 100 nm e 1 m. Os adesivos condicione-e-lave ScotchbondMulti-Purpose e SingleBonddesse estudo apresentaram os maiores valores de resistência adesiva, apresentando valores dentro de uma faixa de 44,36 a 50,66 MPa, enquanto que os adesivos AdperSE e Easy One apresentaram valores de 17,97 a 24,60 MPa. O adesivo que apresentou os maiores valores de resistência adesiva foi o ScotchbondMulti-Purpose e o que teve o pior desempenho foi o adesivo Easy One. Todos os adesivos apresentaram queda significativa de resistência de união após 30 e 180 dias. Na análise micro- Raman, o adesivo ScotchbondMulti-Purpose mostrou-se mais homogêneo e com valores de penetração do adesivo semelhantes aos do Single Bond e do Easy One. O adesivo SE Plus apresentou a menor penetração do adesivo e a camada híbrida mais fina. Concluímos neste trabalho que avaliando 4 diferentes tipos de adesivos de uma mesma marca, existe uma relação negativa entre as estratégias de adesão (diminuição do número de passos e frascos) e a resistência de união e a qualidade da camada híbrida. / One-bottle adhesives, both self-etching as etch-and-rinse, are complex mixtures of hydrophilic and hydrophobic monomers resin combinations dissolved in water / solvent. Although the inclusion of hydrophilic monomers has achieved high immediate adhesion forces, studies have shown that dentin-resin interface have become much weaker over time. In this study, bond strength of four adhesive systems was evaluated bymicrotensile test and quantitative analyze ofthe hybrid layer was obtained by micro-Raman spectroscopy. For microtensile test, the factors of variation were 2: the type of adhesive (AdperScotchbondMulti-Purpose, AdperSingle Bond 2, Adper SE Plus, AdperEasy One), and the period of storage at 3 levels (1 day, 30 days, 180 days), totaling 12 levels of variation. The experimental units were made on 120 dentin surfaces of intact humanunerupted third molars (n = 10). The parametric analysis of variance ANOVA and multiple comparison Games Howell was used for statistical analysis. For micro-Raman spectroscopy were used three teeth for each adhesive system, with a total of 12 teeth (n = 3). Raman spectra of the samples were recorded on a Micro-Raman spectrometer RENISHAW invia with 785 nm excitation (laser diode, RENISHAW) coupled to a microscope LEICA DM2500M with motorized stage (x, y, z) RENISHAW MS 20 EncodedStage with lateral and axial resolutionof 100 nm and 1 microns. Etch-and-rinse adhesives ScotchbondMulti-Purposeand SingleBond of this study showed the highest bond strength values, with values within a range from 44.36 to 50.66 MPa, whereas the self-etch adhesives SE Plusand Easy One had values of 17.97 to 24.60 MPa. The adhesive that showed the highest bond strength was ScotchbondMulti-Purpose and the worst performance was fromEasy One.All adhesives showed a significant decrease in bond strength after 30 and 180 days. In micro-Raman analysis, the ScotchbondMulti-Purpose was more homogeneous and had penetration values similar to those of the adhesive Single Bond and Easy One. The SE Plus had the lowest penetration of the adhesive and the thinner hybrid layer. We conclude that evaluating 4 different types of adhesives of the same brand, there is a negative relationship between the strategies of adhesion (decreasing the number of steps and bottles) and bond strength and quality of the hybrid layer.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:51:19Z : No. of bitstreams: 1 silva_prp_me_sjc.pdf: 750069 bytes, checksum: 94263aef7c378118e8087ea9d933ad86 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência do laser Nd:YAG nas propriedades mecânicas (dureza e módulo de elasticidade) da interface adesiva, utilizando a técnica da nanoindentação, empregando-se sistema adesivo convencional Adper Single Bond 2 – 3M ESPE (SB) ou autocondicionante Clearfil SE Bond – Kuraray (CSE). Doze terceiros molares humanos tiveram suas superfícies oclusais desgastadas até a exposição da dentina superficial. Uma cavidade circular padronizada com fresa 3053 foi realizada na superfície oclusal proporcionando 2 mm de dentina remanescente. Os espécimes foram embutidos em resina acrílica, e seccionados no sentido mésio-distal, sendo as 24 hemi-coroas obtidas divididas em quatro grupos: Grupo controle (SBC) - aplicação do sistema SB de acordo com as recomendações do fabricante; Grupo laser (SBL) - aplicação do sistema adesivo SB e tratamento com laser Nd:YAG (140mJ/cm2/60s/não contato); Grupo controle (CSEC) - aplicação do sistema adesivo autocondicionante CSE de acordo com as recomendações do fabricante; Grupo laser (CSEL)- aplicação do sistema adesivo autocondicionante CSE e tratamento com laser Nd:YAG (140mJ/cm2/60s/não contato). Após a polimerização dos sistemas adesivos, foram aplicados dois incrementos da resina composta Filtek Z 350 (3M ESPE). Os corpos-de-prova foram imersos em água destilada e armazenados por 24h em estufa 37ºC e submetidos à nanoidentação em aparelho Nano Indenter® XP (MTS®, MN, EUA).. Os resultados foram submetidos aos testes estatísticos de Análise de Variância (ANOVA), Tukey e t-Student (p<0,05). Concluiu-se que a aplicação do laser Nd:YAG em ambos os sistemas adesivos não alterou o nível de dureza da interface adesiva, no entanto alterou o módulo de elasticidade / The aim of this study was to evaluate the influence of Nd: YAG laser on the mechanical properties (hardness and modulus of elasticity) of the adhesive interface, using the technique of nanoindentation, employing conventional adhesive system Single Bond 2 3M ESPE (SB) or selfetching adhesive system Clearfil SE Bond - Kuraray (CSE). On 12 human molars, a flat superficial dentin surface was exposed by abrasion. A standardized circular cavity with bur 3053 was performed on the occlusal surface and dentin thickness was standardized in 2 mm. The specimens were embedded in resin acrylic and sectioned mesio-distally through their long axes, and the 24 hemi-crowns obtained divided into four groups: Control Group (SBC) – the application of SB system according to the manufacturer's recommendations; Laser Group (SBL) – SB adhesive system and treatment with Nd: YAG laser (140mJ/cm2/60s/no contact) Control Group (CSEC) – application of CSE self-etching adhesive system according to the manufacturer's recommendations; Laser Group (CSEL) – application of CSE self-etching adhesive system and treatment with Nd: YAG laser (140mJ/cm2/60s/no contact). After polymerization of the adhesives, were applied two increments of composite resin Filtek Supreme and specimens were immersed in distilled water and stored for 24 hours at 37 ºC and submitted to nanoidentation in Nano Indenter ® XP (MTS ®, MN, USA. Nanoindentation were made on composite resin, adhesive system, hybrid layer and dentin. The results were analyzed by a tree-way ANOVA, Tukey and e t-Students (p<0,05). It was concluded that the application of Nd:YAG laser in both adhesive systems did not change hardness level of hybrid layer, however chanded the elastic modulus

A aplicação de soluções de digluconato de clorexidina (CHX), em diferentes concentrações, tem demonstrado potencial em prevenir a progressão da erosão dentinária in situ e a diminuição, com o passar do tempo, dos valores de resistência de união (RU) de resinas compostas (RC) à dentina normal ou afetada por cárie. Entretanto, seu papel na adesão à dentina já erodida é desconhecido. Este estudo se propôs, portanto, a avaliar o efeito da aplicação de soluções de CHX em diferentes concentrações na RU de uma RC à dentina normal (parâmetro para comparações) e à dentina erodida, ao longo do tempo. Terceiros molares humanos hígidos extraídos (n=48) tiveram seu terço oclusal seccionado e as superfícies dentinárias expostas foram somente submetidas à ação de uma lixa de carbeto de silício de granulação 600/1 min (dentina normal-N, n=24), ou subsequentemente erodidas por um refrigerante a base de cola (imersões de 5 min, 3x/dia, 5 dias; dentina erodida-E, n=24). Foram, então, condicionadas (H3PO4 a 37%; 15 s), lavadas, secas e reidratadas com 1,5 L, respectivamente, de água deionizada (controle-NC, n=8 / EC, n=8), de CHX a 0,004% (N0,004%, n=8 / E0,004%, n=8) ou de CHX a 2% (N2%, n=8 / E2%, n=8). O sistema adesivo AdperTMSingle Bond 2® foi aplicado em todos os espécimes e a porção coronária foi incrementalmente reconstruída com a RC FiltekTMZ350®. Depois de armazenados em água deionizada (24 h, 37oC), os espécimes foram seccionados em palitos (secção transversal 0,81 mm2), que foram testados, sob força de tração (EMIC; célula de carga de 50 kgf; 0,5 mm/minuto), imediatamente ou depois de 6 meses ou 1 ano de envelhecimento. As falhas foram analisadas e classificadas em adesivas, mistas, coesivas em dentina ou em resina. Paralelamente, avaliou-se a qualidade da hibridização para cada grupo experimental, por meio da obtenção de imagens em microscopia confocal de varredura a laser de um espécime por grupo, hibridizado pelo mesmo adesivo, mas marcado pela adição de rodamina B, e seccionado apenas no sentido mésio-distal. Os dados obtidos da microtração foram analisados por meio dos testes de ANOVA a três critérios e de Tukey (p<0,05). Os valores médios de RU (MPa±dp; imediatamente / 6 meses / 1 ano) foram: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Falhas adesivas e/ou mistas consistiram-se nas preponderantemente observadas. Os valores de RU da RC à dentina erodida foram sempre inferiores àqueles da RC à dentina normal. Tais valores, para ambas as condições de dentina, experimentaram redução significante com o passar do tempo, mas a aplicação da solução de CHX a 2% foi capaz de mantê-los estáveis até os 6 meses de envelhecimento dos espécimes. Portanto, a aplicação de soluções de CHX, a 2%, apresenta-se como uma estratégia promissora para conservar a RU de resinas compostas tanto à dentina normal quanto à dentina erodida. Com o tempo, no entanto, seu efeito pode tornar-se reduzido ou irrelevante. / The application of chlorhexidine digluconate (CHX) solutions, in different concentrations, has shown potential in preventing the progression of dentin erosion in situ and the decline, in the course of time, of the bond strength (BS) values of composite resins (CR) to normal or caries-affected dentin. However, its role on adhesion to already eroded dentin is unknown. This study aimed, therefore, to evaluate the effect of the application of CHX solutions in different concentrations on BS of a CR to normal (parameter for comparisons) and to eroded dentin over time. Extracted sound human third molars (n=48) had their occlusal thirds sectioned and exposed flat dentin was only submitted to a 600-grit SiC paper/1min (normal dentin- N, n=24), or subsequently eroded by a regular-cola soft-drink (5-min immersions, 3x/day, 5 days; eroded dentin-E, n=24). They were, then, acid-etched (37% H3PO4; 15 s), washed, vigorously dried, and rehydrated with 1.5 L, respectively, of deionized water (control-NC, n=8 / EC, n=8); of 0.004% CHX (N0.004%, n=8 / E0.004%, n=8); or of 2% CHX (N2%, n=8 / E2%, n=8). AdperTMSingle Bond 2® was applied in all specimens and composite core buildups were incrementally constructed with FiltekTMZ350®. After storage in deionized water (24 h, 37°C), specimens were sectioned in beams (cross-section 0.81 mm2), which were tested, under tensile (EMIC; 50 kgf load cell; 0.5 mm/minute), immediately or after 6 months or 1 year of aging. Failures were analyzed and classified in adhesive, mixed, cohesive in dentin or in resin. In parallel, the quality of the hybridization for each experimental group was evaluated, by means of the obtainment of laser scanning confocal microscopy images from one specimen per group, hybridized with the same adhesive, but marked by the addition of rhodamine B and sectioned only mesiodistally. Microtensile data were analyzed by three-way ANOVA and Tukey tests (<0.05). Mean TBS values (MPa±sd; immediately / 6 months / 1 year) were: NC (34,74±9,79 / 20,77±14,35 / 7,58±4,94); N0,004% (35,69±9,85 / 23,10±8,13 / 13,82±10,12); N2% (41,22±5,38 / 34,64±6,62 / 13,25±4,83); EC (20,94±5,37 / 7,87±8,81 / 5,43±4,99); E0,004% (22,12±7,44 / 3,47±6,25 / 4,97±3,11); E2% (15,97±5,17 / 22,23±9,12 / 5,41±5,47). Adhesive and/or mixed failures consisted in the mainly observed ones. BS values of the CR to the eroded dentin were always lower than that of the CR to the normal dentin. These values, to both dentin conditions, experienced a significant reduction in the course of time, but application of the 2% CHX solution was able to keep them stable until 6-months aging of the specimens. Therefore, the application of CHX solutions, at 2%, is presented as a promising strategy to conserve BS both to normal and to eroded dentin. Over time, however, its effect may become reduced or irrelevant.

Adesivos dentinários aplicados diretamente sobre dentina aumentam a atividade de enzimas endógenas deste tecido que degradam colágeno, colocando em risco a integridade da camada híbrida de restaurações estéticas. Estes adesivos podem também alcançar a polpa dentária indiretamente através do fluído dos túbulos dentinários por substâncias liberadas pelos mesmos. Desta forma, a polpa dentária poderia responder a estas substâncias por meio de síntese e/ou aumento da atividade de colagenases, o que poderia colaborar na degradação da camada híbrida. Sendo assim, o objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito das substâncias liberadas por sistemas adesivos dos tipos autocondicionante e condicione e lave sobre a atividade e a expressão gênica de metaloproteinases (MMPs) e cisteíno-catepsinas (CTs) em células-tronco da polpa dentária humana. Foram aplicados meios de cultura condicionados por adesivos do tipo autocondicionante e condicione e lave polimerizados e não polimerizados sobre culturas celulares por 24 horas. O meio de cultivo fresco foi usado como controle. Depois de 24, 48, 72 e 96 horas, as atividades gelatinolíticas de MMP-2 e de MMP-9 foram avaliadas por meio da técnica de zimografia em gel de gelatina. Nos mesmos tempos experimentais, a modulação da expressão gênica das MMPs (1, 2, 3, 7, 9, 13 e 14) e das CTs (B e K) foi analisada por meio de reação de transcriptase reversa quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Os resultados obtidos dos dois experimentos foram avaliados por meio do teste estatístico ANOVA, complementado pelo teste de Tukey (p<0.05). Todos os grupos mostraram atividade gelatinolítica aumentada de MMP-2 e MMP-9. Até 72 horas, as atividades foram similares em todos os grupos experimentais. Diferenças significativas apareceram somente em 96 horas. De forma geral, as maiores atividades de MMPs foram observadas nas culturas celulares tratadas com o adesivo autocondicionante. Para a MMP-2, o grupo do adesivo autocondicionante polimerizado mostrou atividade intermediária, enquanto o grupo não polimerizado mostrou a maior atividade. Os dois grupos do adesivo condicione e lave polimerizado e não polimerizado mostraram atividade de MMP-9 intermediária, enquanto o grupo autocondicionante polimerizado mostrou maior atividade que o grupo controle. O qRT-PCR revelou que a maioria das MMPs e CTs analisadas tiveram a expressão gênica positivamente modulada em 24 e 48 horas. MMP-7 e MMP-9 não foram expressos em nenhum grupo experimental. Baseados nas limitações deste estudo in vitro, concluímos que substâncias liberadas por sistemas adesivos são capazes de influenciar células-tronco de polpa dentária humana levando ao aumento da atividade de MMP-2 e MMP-9 e também à modulação positiva de genes das MMPs e CTS estudadas. / Adhesive systems directly applied to dentin increase the activity of endogenous collagen degrading proteinases of the dentin, which jeopardizes the integrity of the hybrid layer of aesthetic restorations. These adhesives can also reach the dental pulp through the dentinal fluid indirectly by substances leached from them. Then, the dental pulp tissue could respond by synthetizing and/or increasing the activity of collagen proteases, which in turn could collaborate to the hybrid layer degradation. Then, the aim of this study was to evaluate the effect of substances leached from self-etch and etch-and-rinse adhesive systems on the expression and activities of matrix metalloproteinases (MMPs) and cysteine cathepsins (CT-B and CT-K) in human dental pulp stem cells. Culture media conditioned by polymerized or non-polymerized self-etch and etch-and-rinse adhesive systems were applied to the cultures for 24 hours. Fresh medium was used as control. After 24, 48, 72 and 96 hours, the gelatinolytic activities of MMP-2 and MMP-9 were assessed by zymography technique. At the same experimental time gene expression of MMPs (1, 2, 3, 7, 9, 13 e 14) and CTs (B e K) were analyzed with quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR). Data was compared by ANOVA complemented by the Tukey´s test (p<0.05). All experimental groups showed increased gelatinolytic activity for MMP-2 and MMP-9. Until 72 hours, the activities were similar regardless the group. Significant differences appeared only after 96 hours. Overall, the highest activities of MMPs were observed in the cultures treated with the self-etch adhesive. For MMP-2, the group of polymerized self-etch adhesive showed intermediary activity, while the group of non-polymerized adhesive showed the highest activity. Both polymerized and non-polymerized etch-and-rinse adhesive groups showed intermediary MMP-9 activity, while the group of polymerized self-etch adhesive showed higher activity than control. The qRT-PCR revealed that most of MMPs and CTs analyzed presented the gene expression positively modulated at 24 and 48 hours. MMP-7 and MMP-9 were not expressed in any experimental group.Based on the limitations of this in vitro study, it was concluded that substances leached from adhesive systems are able to influence human dental pulp stem cells leading to the increase of the activity of MMP-2 and MMP-9 along with positive modulation of MMPs and CTS studied genes.

The use of the versatile universal adhesive systems aims to improve adhesion to dentin and simplify the bonding procedure. The association between functional monomer as 10-methacryloyloxydecyl-dihydrogen phosphate (10-MDP) and proteolytic inhibitors seems to be a promising strategy to improve the longevity of hybrid layer. Therefore, this study aimed to evaluate the performance of Adper Single Bond Universal (SU) combined with proteolytic inhibitors, especially chlorhexidine (CHX), in different dentin substrates overtime. In article 1, the interaction between CHX and E-64 with SU (in etch-and-rinse mode) was investigated in sound, artificial carious and eroded dentin over 18 months aging. It was found that carious substrate was the most affected and none of the inhibitors tested were able to maintain stability over 18 months. Furthermore, it was observed that CHX negatively impacted regardless of the substrate, leading to the hypothesis of possible competition between CHX and 10-MDP, since both involve calcium ions in their mechanism of action. For a better comprehension, article 2 purposed the evaluation of proteolytic activity and bonding to dentin tests, focusing on the performance of SU in both modes (etch-and-rinse and self-etching) compared to a conventional MDP-free 2- step adhesive system (Adper Single Bond 2), associated with CHX over 6 months aging. It was observed that proteolytic activity was evidenced when all dentin bonding systems (DBS) was used. SU in self-etching mode showed the highest values of microtensile bond strength. CHX was able to reduce proteolytic activity, regardless of DBS even in 6 months aging. Moreover, CHX did not affect negatively mechanical properties. In conclusion, CHX is capable of reduce proteolytic activity, however it did not provide long lasting up to 18 months. / A utilização dos versáteis sistemas adesivos universais tem por objetivo melhorar à adesão à dentina e simplificar o procedimento adesivo. A associação entre monômeros funcionais como o 10-Metacriloiloxidecil dihidrogênio fosfato (10-MDP) e inibidores proteolíticos tende a ser uma estratégia promissora para melhorar a longevidade da camada hibrida. Desta forma, este trabalho tem por objetivo avaliar o desempenho do Adper Single Bond Universal (SU) combinado com inibidores proteolíticos, especialmente a clorexidina (CHX), em diferentes substratos dentinários ao longo do tempo. No artigo 1, a interação entre CHX e E-64 com SU (modo convencional) foi investigada em dentina sadia, artificialmente cariada e erodida em 18 meses de envelhecimento. Foi encontrado que o substrato cariado foi o mais afetado e nenhum dos inibidores testados foram capazes de manter a estabilidade ao longo de 18 meses. Além do mais, observou-se que a CHX impactou de forma negativa independente do substrato avaliado, levando a hipótese de uma possível competição entre ela e o 10-MDP, visto que ambos envolvem íons Ca em seus mecanismos de ação. Para uma melhor compreensão, no artigo 2 foi proposto testes para avaliação de atividade proteolítica e resistência de união à dentina, com foco no desempenho do SU nos dois modos (convencional e autocondicionantes) comparado a um convencional de 2 passos livre de MDP (Adper Single Bond 2), associados com CHX em 6 meses de envelhecimento. Foi observado que a atividade proteolítica foi evidente em todos os sistemas adesivos (SA). O SU no modo autocondicionantes apresentou os maiores valores de resistência de união. A CHX foi capaz de reduzir a atividade proteolítica, independente dos SA mesmo em 6 meses de envelhecimento. Além disso, a CHX não afetou negativamente as propriedades mecânicas. A CHX é capaz de reduzir a atividade proteolítica, no entanto não perdura até 18 meses.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da aplicação de clorexidina após o condicionamento ácido na preservação da camada híbrida, avaliando a resistência de união imediata e a longo prazo de pinos de fibra de vidro cimentados à dentina radicular. Setenta e dois dentes unirradiculares superiores humanos foram selecionados. Os canais radiculares foram alargados para receberem os pinos de fibra de vidro e aleatoriamente divididos em três grupos (n=24). No Grupo Controle (Gcontrol), o pino de fibra de vidro foi cimentado de acordo com as instruções do fabricante, utilizando um sistema adesivo convencional de três passos e um cimento resinoso dual. Os grupos tratados com digluconato clorexidina GCHX0.2 e GCHX2 receberam a aplicação de solução de clorexidina 0,2% e 2%, respectivamente, após o condicionamento com ácido fosfórico e os pinos foram cimentados utilizando o mesmo sistema adesivo e cimento utilizados no Gcontrol. As raízes foram seccionadas transversalmente ao longo eixo do dente, em fatias de 0,68 (± 0,09) mm. Metade dos dentes foi submetida ao ensaio de push-out após 24 horas e a outra metade, após seis meses de armazenamento em água destilada, a 37°C. Os valores foram analisados com ANOVA de duas vias e teste de comparações múltiplas de Tukey, com nível de significância de 5%. A aplicação de clorexidina não influenciou a resistência de união quando os dentes foram avaliados no mesmo período de armazenagem (p>0,05). O tempo de armazenamento diminuiu significativamente a resistência de união de 24 horas para 6 meses, em todos os grupos (p<0,05). A aplicação de clorexidina não preveniu significativamente a degradação da resistência de união de pinos de fibra cimentados em raízes de dentes humanos, após seis meses de armazenamento. / Introduction: This study evaluated the effect of chlorhexidine applied after dentin phosphoric acid etching on hybrid layer preservation, analyzing the immediate and long-term bond strength of a fiber post cemented to root dentin. Methods: Seventy-two single-rooted, human upper teeth were selected for analysis. Root canals were enlarged for fiber post cementation and were randomly divided into three groups (n= 24). After phosphoric acid etching, each group received a different dentin treatment. In the Control Group (Gcontrol), the fiber post was cemented according to the manufacture’s instruction, using a three-step etch-and-rinse adhesive and a dual-cured resin cement. The Chlorhexidine 0.2% Group (GCHX 0.2) and the Chlorhexidine 2% Group (GCHX 2) received an application of a chlorexidine digluconate solution of 0.2% and 2%, respectively, after phosphoric acid etching, and the post was cemented using the same adhesive and cement that was used in the Gcontrol. Teeth were sectioned transversally in slices of 0.68 (± 0.09) mm. Half of the teeth were submitted to push-out bond strength after 24 hours and the other half were submitted after six months of distilled water storage at 37°C. Data were analyzed by using the two-way analysis of variance (ANOVA) and a post hoc tests using the Tukey multiple comparison test at α = 0.05. Results: Chlorhexidine application had no influence on bond strength when teeth were stored for the same period of time (p>0.05). The storage time significantly decreased the bond strength values of 24 hours to six months, in all groups (p<0.05). Conclusion: After six months, chlorhexidine application did not effectively arrest bond strength degradation of fiber post cemented in human roots.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da aplicação de clorexidina após o condicionamento ácido na preservação da camada híbrida, avaliando a resistência de união imediata e a longo prazo de pinos de fibra de vidro cimentados à dentina radicular. Setenta e dois dentes unirradiculares superiores humanos foram selecionados. Os canais radiculares foram alargados para receberem os pinos de fibra de vidro e aleatoriamente divididos em três grupos (n=24). No Grupo Controle (Gcontrol), o pino de fibra de vidro foi cimentado de acordo com as instruções do fabricante, utilizando um sistema adesivo convencional de três passos e um cimento resinoso dual. Os grupos tratados com digluconato clorexidina GCHX0.2 e GCHX2 receberam a aplicação de solução de clorexidina 0,2% e 2%, respectivamente, após o condicionamento com ácido fosfórico e os pinos foram cimentados utilizando o mesmo sistema adesivo e cimento utilizados no Gcontrol. As raízes foram seccionadas transversalmente ao longo eixo do dente, em fatias de 0,68 (± 0,09) mm. Metade dos dentes foi submetida ao ensaio de push-out após 24 horas e a outra metade, após seis meses de armazenamento em água destilada, a 37°C. Os valores foram analisados com ANOVA de duas vias e teste de comparações múltiplas de Tukey, com nível de significância de 5%. A aplicação de clorexidina não influenciou a resistência de união quando os dentes foram avaliados no mesmo período de armazenagem (p>0,05). O tempo de armazenamento diminuiu significativamente a resistência de união de 24 horas para 6 meses, em todos os grupos (p<0,05). A aplicação de clorexidina não preveniu significativamente a degradação da resistência de união de pinos de fibra cimentados em raízes de dentes humanos, após seis meses de armazenamento. / Introduction: This study evaluated the effect of chlorhexidine applied after dentin phosphoric acid etching on hybrid layer preservation, analyzing the immediate and long-term bond strength of a fiber post cemented to root dentin. Methods: Seventy-two single-rooted, human upper teeth were selected for analysis. Root canals were enlarged for fiber post cementation and were randomly divided into three groups (n= 24). After phosphoric acid etching, each group received a different dentin treatment. In the Control Group (Gcontrol), the fiber post was cemented according to the manufacture’s instruction, using a three-step etch-and-rinse adhesive and a dual-cured resin cement. The Chlorhexidine 0.2% Group (GCHX 0.2) and the Chlorhexidine 2% Group (GCHX 2) received an application of a chlorexidine digluconate solution of 0.2% and 2%, respectively, after phosphoric acid etching, and the post was cemented using the same adhesive and cement that was used in the Gcontrol. Teeth were sectioned transversally in slices of 0.68 (± 0.09) mm. Half of the teeth were submitted to push-out bond strength after 24 hours and the other half were submitted after six months of distilled water storage at 37°C. Data were analyzed by using the two-way analysis of variance (ANOVA) and a post hoc tests using the Tukey multiple comparison test at α = 0.05. Results: Chlorhexidine application had no influence on bond strength when teeth were stored for the same period of time (p>0.05). The storage time significantly decreased the bond strength values of 24 hours to six months, in all groups (p<0.05). Conclusion: After six months, chlorhexidine application did not effectively arrest bond strength degradation of fiber post cemented in human roots.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da aplicação de clorexidina após o condicionamento ácido na preservação da camada híbrida, avaliando a resistência de união imediata e a longo prazo de pinos de fibra de vidro cimentados à dentina radicular. Setenta e dois dentes unirradiculares superiores humanos foram selecionados. Os canais radiculares foram alargados para receberem os pinos de fibra de vidro e aleatoriamente divididos em três grupos (n=24). No Grupo Controle (Gcontrol), o pino de fibra de vidro foi cimentado de acordo com as instruções do fabricante, utilizando um sistema adesivo convencional de três passos e um cimento resinoso dual. Os grupos tratados com digluconato clorexidina GCHX0.2 e GCHX2 receberam a aplicação de solução de clorexidina 0,2% e 2%, respectivamente, após o condicionamento com ácido fosfórico e os pinos foram cimentados utilizando o mesmo sistema adesivo e cimento utilizados no Gcontrol. As raízes foram seccionadas transversalmente ao longo eixo do dente, em fatias de 0,68 (± 0,09) mm. Metade dos dentes foi submetida ao ensaio de push-out após 24 horas e a outra metade, após seis meses de armazenamento em água destilada, a 37°C. Os valores foram analisados com ANOVA de duas vias e teste de comparações múltiplas de Tukey, com nível de significância de 5%. A aplicação de clorexidina não influenciou a resistência de união quando os dentes foram avaliados no mesmo período de armazenagem (p>0,05). O tempo de armazenamento diminuiu significativamente a resistência de união de 24 horas para 6 meses, em todos os grupos (p<0,05). A aplicação de clorexidina não preveniu significativamente a degradação da resistência de união de pinos de fibra cimentados em raízes de dentes humanos, após seis meses de armazenamento. / Introduction: This study evaluated the effect of chlorhexidine applied after dentin phosphoric acid etching on hybrid layer preservation, analyzing the immediate and long-term bond strength of a fiber post cemented to root dentin. Methods: Seventy-two single-rooted, human upper teeth were selected for analysis. Root canals were enlarged for fiber post cementation and were randomly divided into three groups (n= 24). After phosphoric acid etching, each group received a different dentin treatment. In the Control Group (Gcontrol), the fiber post was cemented according to the manufacture’s instruction, using a three-step etch-and-rinse adhesive and a dual-cured resin cement. The Chlorhexidine 0.2% Group (GCHX 0.2) and the Chlorhexidine 2% Group (GCHX 2) received an application of a chlorexidine digluconate solution of 0.2% and 2%, respectively, after phosphoric acid etching, and the post was cemented using the same adhesive and cement that was used in the Gcontrol. Teeth were sectioned transversally in slices of 0.68 (± 0.09) mm. Half of the teeth were submitted to push-out bond strength after 24 hours and the other half were submitted after six months of distilled water storage at 37°C. Data were analyzed by using the two-way analysis of variance (ANOVA) and a post hoc tests using the Tukey multiple comparison test at α = 0.05. Results: Chlorhexidine application had no influence on bond strength when teeth were stored for the same period of time (p>0.05). The storage time significantly decreased the bond strength values of 24 hours to six months, in all groups (p<0.05). Conclusion: After six months, chlorhexidine application did not effectively arrest bond strength degradation of fiber post cemented in human roots.