O gênero Candida acomete cerca de 80% das infecções fúngicas no ambiente hospitalar e constitui causa relevante de infecções na corrente sangüínea. Espécies de Candida não-albicans respondem atualmente por pelo menos 50% das infecções invasivas por Candida spp, apresentando peculiaridades em termos clínicos e suscetibilidade a drogas antifúngicas. A mortalidade geral de fugemias por Candida spp é da ordem de 40-60%, tornando esta complicação infecciosa um grande desafio aos clínicos. O objetivo deste estudo foi a padronização de um ensaio imuno-enzimático (ELISA) para o diagnóstico de infecções hematogênicas devido a Candida spp. Vinte e cinco soros de pacientes com candidemia obtidos do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e trinta e dois soros de indivíduos hígidos obtidos do Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisados. Foram utilizados os extratos protéicos totais de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis e Candida krusei como antígenos. Nossos resultados demonstraram reatividade cruzada entre as espécies bem como alguns resultados falsonegativos. Estes resultados falso-negativos podem ser devido a resposta imune do paciente estar atrasada, diminuída ou ausente. Isto pode ser melhorado com amostras seriadas do mesmo paciente. Os resultados falso-positivos podem ser minimizados selecionando-se antígenos específicos apropriados, moléculas purificadas ou antígenos recombinantes. / Candida spp is associated to almost 80% of all nosocomial fungal infections and is considered a major cause of blood stream infections. This yeast is the fourth most common cause of blood stream infections in the United States, where this agent is responsible for 8% of all invasive infections documented in this site and the crude mortality rate is between 40 and 60%. At the present, non-albicans species are related to at least 50% of all invasive infections due to Candida spp and they present differences in terms of clinical outcome as well as susceptibility to antifungal drugs. Nevertheless, the hematogenous infections due to Candida spp diagnosis remain an important challenge for all clinicians. The objective of this study was the standardization of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) to diagnose hematogenous infections due to Candida spp. Twenty five sera of patients with candidaemia from Hospital de Clínicas de Porto Alegre, a general tertiary care hospital in Southern Brazil and thirty two sera from healthy people from Centro de Biotecnologia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul were analyzed. As antigens for ELISA, protein extracts from Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida guilliermondii, Candida glabrata, Candida dubliniensis and Candida krusei were used. Our results had demonstrated cross-reactivity between species as well as some false-negatives. These false-negatives may be due to a delayed, reduced or absent antibody response, which might be improved increasing the number of samples tested. The false-positives can be improved by selecting more appropriate specific antigens, as purified molecules or recombinant antigens.

Objetivos: definir os dados demográficos, as doenças de base e os fatores de risco associados aos episódios de candidemia ocorridos na Santa Casa Complexo Hospitalar entre 17/02/1995 e 31/12/2003; identificar as espécies envolvidas nestes episódios de candidemia e determinar a mortalidade global entre estes pacientes. Métodos: estudo de coorte retrospectivo não-controlado com inclusão de todos os casos consecutivos de candidemia diagnosticados na instituição entre 17/02/1995 e 31/12/2003. Como critério de inclusão no estudo, foi exigida a presença de sinais ou sintomas temporalmente relacionados ao isolamento de Candida em hemocultivo coletado de veia periférica. Resultados: 210 pacientes com candidemia foram incluídos (infecção nosocomial em 91,0%). O sexo feminino foi mais prevalente (51,4%) e a idade mediana foi de 41,0 anos. A doença de base mais prevalente foi câncer (neoplasias sólidas 30,5% e hematológicas 9,0%). Candida albicans foi a espécie mais freqüente (38,1%), seguida de Candida parapsilosis (27,6%) e Candida tropicalis (15,7%); candidemia por Candida glabrata ocorreu em 3,8%, e por Candida krusei, em 2,4%. Procedimentos cirúrgicos foram realizados em 43,8%, cateter venoso central estava presente em 74,8%, cateter urinário em 57,1%, ventilação mecânica em 48,6% e nutrição parenteral em 33,8%; o número mediano de antimicrobianos foi 4,0 por paciente (glicopeptídeos 54,3%, carbapenêmicos 25,7%). A maioria dos pacientes com candidemia comunitária (52,6%) havia sido hospitalizada nos 60 dias anteriores à candidemia; em 21,1%, Candida foi isolada de cateter; insuficiência renal crônica (p<0,001) e hemodiálise (p=0,027) foram mais freqüentes no grupo de candidemia comunitária do que no nosocomial; a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Comparadas aos adultos, as crianças com candidemia nosocomial foram mais expostas a antimicrobianos de amplo espectro (p<0,001), ventilação mecânica invasiva (p=0,002) e nutrição parenteral (p<0,001). Candidemia nosocomial por Candida parapsilosis foi mais freqüente em crianças (p=0,002), bem como o isolamento de Candida de cateteres (p=0,019); crianças foram mais freqüentemente tratadas com anfotericina B do que adultos (p<0,001), os quais receberam mais fluconazol (p=0,013). Entre os pacientes com câncer e candidemia nosocomial, tratamento prévio com corticosteróides (p=0,004), quimioterapia (p<0,001) e cefepima (p=0,004) foram mais comuns naqueles com malignidades hematológicas; cirurgias foram mais comuns em pacientes com tumores sólidos (p<0,001), principalmente do trato gastrointestinal (p=0,016); a distribuição das espécies de Candida foi semelhante entre os grupos. Candidemia breakthrough (“de escape”) ocorreu em 10,5% dos pacientes com candidemia nosocomial; a maioria destes vinha em uso de anfotericina B em doses terapêuticas, por período mediano de 6,5 dias; o isolamento de Candida de sítios outros que o sangue foi mais freqüente nestes pacientes (p=0,028). A mortalidade dos pacientes com candidemia foi 50,5%, sem diferenças estatisticamente significativas entre pacientes com candidemia comunitária ou nosocomial, com câncer ou outros diagnósticos e com infecção breakthrough ou não-breakthrough; a mortalidade foi maior em adultos do que em crianças (p=0,005). Conclusões: espécies não-Candida albicans foram os principais agentes de candidemia; assim como em outros estudos brasileiros, a prevalência de espécies como Candida glabrata e Candida krusei foi baixa. Fatores de risco já descritos na literatura foram freqüentemente encontrados, e a distribuição dos mesmos variou de acordo com as diferentes características dos pacientes estudados. A mortalidade em pacientes com candidemia foi semelhante \à descrita na literatura.

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:25:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002-06-21. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:29:56Z : No. of bitstreams: 1 000173857.pdf: 1867638 bytes, checksum: a211eb025ce7f15bfc62bf54b3bdfed5 (MD5) / A Candidose bucal e um dos processos infecciosos micóticos mais comuns da cavidade oral e existe suscetibilidade aumentada para o mesmo durante o período neonatal principalmente devido à imaturidade dos mecanismos de defesa e a falta de uma microbiota bucal balanceada. Para verificar a presença de Candida spp. na cavidade bucal de lactentes foram examinados inicialmente cem bebês, nos quais foi feita coleta de material do dorso da língua com swab nas primeiras 24 horas de vida. Trinta e três recém-nascidos deste grupo foram acompanhados durante os primeiros quatro meses de vida sendo realizada mensalmente coleta de material da cavidade oral e avaliação das condições gerais de saúde, nutrição e higiene. A análise do material obtido nesse período mostrou positividade para Candida spp. em 64 (48,5%) das 132 amostras. A doença foi observada em 27,3% dos recém nascidos acompanhados. Candida albicans foi a espécie encontrada mais frequentemente (44,6%), e esteve presente em nove dos 11 casos de candidose bucal. Verificou-se com a ananmese que os possíveis fatores de risco para o grupo estudado foram o uso de chupeta e mamadeira, e, a introdução de outros tipos de alimento. Conclui-se que Candida albicans e a espécie prevalente nesta faixa etária / Oral candidosis is one of the most frequent mycotic infectious diseases of the oral cavity and there is increased susceptibility to this infection during the neonatal period due to immaturity of the defense mechanisms and the lack of a balanced buccal microbiota. To verify the presence of Candida spp. in the oral cavity of infants were examined initially a hundred babies from which were collected material of the lingual dorsum with swabs in the first 24 hours of life. Thirty-three newborn of this group were accompanied during the first 120 days of life and were submitted monthly to a material collection of the oral cavity and an evaluation of general conditions of health, nutrition and hygiene. The analysis of the material collected during this period showed positivity to Candida ssp. in 64 (48,5%) of the 132 samples. Disease was observed in 27,3% of those 33 newborns. Candida albicans was the most frequent species (44,6%) and it was present in nine of the 11 cases of oral candidosis. The anamnesis showed that the possible risk factors were pacifier use, bottle feeding and introduction of different food types. It was concluded that Candida albicans is the prevalent species in this age band

Orientador: Alexandre Luiz Souto Borges / Coorientadora: Cristiane Campos Costa Quishida / Banca: Cesar Rogério Pucci / Banca: Bruno Vinícius Manzolli Rodrigues / Resumo: O objetivo desse estudo foi sintetizar mantas não tecidas de nanofibras (NFs) de Polietilmetacrilato (PEMA) com adição de nistatina (NYS) e avaliar a atividade antimicrobiana nas resinas reembasadoras rígidas e macias. Realizou- se o teste microbiológico da CIM de NYS para a inativação da C. albicans. NFs foram sintetizadas pela técnica da eletrofiação, utilizando-se solução de PEMA puro e NYS e PEMA. Para a síntese das NFs de PEMA, foi produzida uma solução de PEMA dissolvido em Dimetilformamida (DMF) e 1,1,2,2 Tetracloroetano (TCE), logo após foram adicionadas duas concentrações de NYS (10 e 20 mg/ml) obtidas do teste CIM. As amostras foram analisadas em Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), Análise de molhabilidade, Análise de Difratometria de Raios-X (DRX) e Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR). Após a análise em MEV foi realizada a média dos diâmetros das fibras com Software ImageJ. As atividades antimicrobianas foram avaliadas por meio do teste de difusão em ágar. As NFs de PEMA apresentaram diâmetro menor, o padrão NF/PEMA apresentou 0,42µm enquanto que a NF/20 1,14 µm e a NF/10 foi de 0,87 µm. As fibras foram consideradas hidrofóbicas por meio da análise de molhabilidade. O DRX e o FTIR comprovaram a presença de PEMA e sugeriram a presença de NYS. O teste de difusão em ágar demonstrou que as fibras não conseguiram inibir a proliferação de C. albicans / Abstract: The objective of the study was to synthesize nanofibers (NFs) of Polyethylmethacrylate (PEMA) with addition of Nystatin (NYS) and to evaluate an antimicrobial activity in rigid and soft resins. Microbiological testing of NYS MIC for inactivation of C. albicans was performed. NFs were synthesized using the electrochemical technique using pure PEMA and NYS and PEMA solutions. For a synthesis of PEMA NFs, a solution of PEMA dissolved in Dimethylformamide (DMF) and 1,1,2,2 Tetrachloroethane (TCE) was produced, following doses of NYS concentrations (10 and 20 mg / ml) obtained from the CIM. As samples were analyzed in Scanning Electron Microscopy (SEM), Goniometer, X-ray Diffraction Analysis (XRD) and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR). After an SEM analysis, a mean of the fiber diameters was performed with ImageJ Software. The antimicrobial activities were evaluated by means of the agar diffusion test. As the PEMA NFs presented smaller diameter, the NF / PEMA standard showed 0.42 μm whereas NF / 20 1.14 μm and the NF / 10 was 0.87μm. The fibers were considered hydrophobic by means of the wettability analysis. The DRX and the FTIR proved a presence of PEMA and suggested a presence of NYS. The diffusion test on agar demonstrated that as fibers failed to inhibit a proliferation of C. albicans / Mestre

Orientador: Cristiane Yumi Koga Ito / Coorientador: Prof. Konstatin Georgiev Kostov / Banca: Ivanildes Vasconcelos Rodrigues / Banca: Fernanda Lourenção Brighenti / Banca: Janete Dias Almeida / Banca: Mônica Fernandes Gomes / Resumo: As doenças fúngicas representam grande desafio para a área médica e odontológica devido à crescente prevalência e aumento da resistência aos antifúngicos. O plasma frio sob pressão atmosférica (PFPA) é uma mistura gasosa contendo partículas carregadas, radicais livres e radiação. Sua potencial aplicação em doenças infecciosas foi relatada, contudo a literatura carece de estudo sistemático sobre o efeito antifúngico, mecanismos de ação e potencial citotóxico. Neste trabalho foi avaliado o efeito antifúngico do PFPA sobre Candida albicans através de ensaios em células planctônicas e biofilmes, efeitos sobre a integridade de parede celular e membrana plasmática, morfogênese, produção de exoenzimas, aderência às células epiteliais e efeito no tratamento in vivo de lesões de candidose oral induzida em modelo murino. Ainda, avaliou-se o efeito do PFPA sobre culturas de Trichophyton rubrum, além de efeitos sobre capacidade de adesão de conídios. Ainda, o potencial citotóxico foi investigado usando células epiteliais. PFPA em modo de tensão contínuo (MC) foi capaz de reduzir a aderência de C. albicans às células epiteliais, modular a transição levedura-hifa na cepa SC 5314 e comprometer a viabilidade de biofilmes. PFPA-MC se mostrou citotóxico em parâmetros efetivos frente a biofilmes de C. albicans. Porém, não foi observado efeito citotóxico quando o PFPA foi utilizado em modo de tensão pulsada (MP). A exposição ao PFPA-MP reduziu a invasão de C. albicans no epitélio in vivo. O PFPA... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / ABSTRACT Fungal diseases represent a great challenge to the medical and dental areas, due to the increasing prevalence and antifungal resistance. Atmospheric pressure plasma jet (APPJ) is a gaseous mixture containing charged particles, free radicals and radiation. Its potential application in infectious disease has been reported, however there is still a lack of a systematic study on the antifungal effect, mechanism of action and citotoxicc potential. The general aim of this project was to evaluate the antifungal effect of APPJ on Candida albicans in planktonic and biofilm cultures, effects on cell wall and cell membrane integrity, morphogenesis, exoenzymes production, adherence to epithelial cells and in vivo effect in the treatment of oral candidosis in murine model will be performed. The effect of APPJ on Trichophyton rubrum cultures and on adherence capability were also evaluated. The cytotoxic potential was evaluated in vitro. APPJ in continuous tension mode (CM) was able to reduce the adherence and yeast-hyphae transition in C. albicans SC 5314 and to decrease biofilm viability. APPJ-CM showed cytotoxic effect in the parameters effective to C. albicans biofilm. Conversely, no cytotoxic effect on epithelial cells were observed when pulsed (PM) plasma jet was used. In vivo tests showed that APPJ-PM was able to prevent C. albicans invasion to the epithelium. T. rubrum cultures were affectd by APPJ-PM after 15 minutes of exposure and conidia adherence was impaired by 10 minutes exposure. In conclusion, APPJ showed antifungal effect against C. albicans and T. rubrum and can also impair virulence factors in both microorganisms / Doutor

Orientador: Carmelinda Schmidt Unterkircher / Banca: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Keila Maria Roncato Duarte / Banca: Luiz Antonio Guimaraes Cabral / Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Resumo: O presente estudo teve como objetivo a produção de um anticorpo monoclonalreativo com leveduras do gênero Candida. Esplenócitos de camundongosBALB/c previamente imunizados com Candidaforam fusionados in vitro comcélulas de mieloma Sp2-0Ag14 e os híbridos resultantes mantidos em cultura a37°C com 5% de C02. Os sobrenadantes das células em crescimento foram testados por ELISA para a produção de anticorpos. Os pontos positivos {0,29%)foram clonados para obter-se o anticorpo monoclonal e posteriormenteexpandidos in vivo emperitônio de camundongo. O anticorpo produzido peloclone foi purificado e isotipado. O anticorpo monoclonal foi denominado 76C e éuma lgMK. O 76C é dirigido para um epítopo de mananoproteína da paredecelular de Candida, cuja natureza ainda não foi completamente elucidada. Oanticorpo 76C foi analisado por DOT SLOT contra diferentes cepas de Candidareagindo positivamente com 87,5% das amostras testadas. O anticorpomonoclonal (76C) será uma ferramenta útil no estudo sorológico de pacientescom candidose invasiva. / Abstract: The aim of this study was to obtain a reactive monoclonal antibody against Candida albicans. Spleen celIs of BALB/c mice previously immunized withCandida were fused in vitro with mielorna cells Sp2-0Ag14. The resultant hybridcells were kept in culture medium at 5% C02.The suspension growing cells were tested by ELISA to check the antibodies titer. The positive colonies were cloned to achieve the monoclonal antibody and further expanded in mice peritoneum. The antibody produced was purified and isotope. The monoclonal antibody was denominated 76C. The 76C was directed against mannoprotein molecules from Candida cell surface, which has not yet been completely investigated to find outlhe specific nature of epitope. The antibody 76C was analyzed by DOT BLOTagainst different Candida species and there were positives results in 87,5% of the tested samples_ The monoclonal antibody 76C will be a useful tool to investigate oligomannoside epitope from mannan and could be applied in sera diagnosis in invasive candidiasis and in studies of glicidic epitope / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-06-09Bitstream added on 2014-06-13T18:31:37Z : No. of bitstreams: 1 martins_js_me_sjc.pdf: 608313 bytes, checksum: e32f819f13bdf398082ecb9e208a1b5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre a patogenicidade de C. albicans e C. dubliniensis na candidose bucal em ratos. Foram utilizados 96 ratos (Rattus norvegicus, Albinus, Wistar), sendo que 80 animais foram submetidos à indução de candidose experimental no dorso da língua por C. albicans ou C. dubliniensis e 16 ratos não foram infectados por Candida. Após 5 dias da indução da candidose, foram realizados diferentes tratamentos: laser e azul de metileno como fotossensibilizador (Grupo L+F+), apenas laser (Grupo L+F-), apenas fotossensibilizador (Grupo L-F+) e grupo sem laser e fotossensibilizador (Grupo L-F-). Após 1 dia, amostras do dorso da língua foram coletadas e semeadas em ágar Sabouraud para contagem de UFC/mL recuperadas da cavidade bucal. Os animais foram submetidos à eutanásia para análise microscópica do dorso da língua. Foi avaliada também a capacidade de produção de fosfolipase e proteinase por C. albicans e C. dubliniensis. Os resultados demonstraram que a quantidade de C. albicans recuperadas da cavidade bucal dos ratos foram semelhantes entre os quatro grupos estudados. C. dubliniensis não foi recuperarada da cavidade bucal dos ratos estudados. Na análise microscópica do dorso da língua, observou-se a presença de várias lesões teciduais induzidas por C. albicans, sendo que no grupo L+F+ essas lesões foram menores em relação aos demais grupos estudados. C. dubliniensis exibiu lesões teciduais discretas sem diferença estatística entre os grupos. Em relação aos fatores de patogenicidade de C. albicans, o grupo L+F+ produziu menor quantidade de fosfolipase e proteinase em relação aos demais grupos. C. dubliniensis produziu menor quantidade de fosfolipase em relação à C. albicans, sem diferença entre os 4 grupos estudados. Entretanto, C. dubliniensis não foi capaz de produzir proteinase... / The objective was to evaluate the effects of photodynamic therapy on the pathogenicity of C. albicans and C. dubliniensis in oral rats candidosis. Were evaluated 96 rats, while 80 were subjected to candidosis experimental induction on the tongue dorsum by C. albicans or C. dubliniensis and 16 rats were not infected. After 5 days of induction candidosis, different treatments were performed: laser and methylene blue as photosensitizers (Group L+F+), laser only (Group L+F-), only photosensitizers (Group L-F+) and without laser neither photosensitizers group (Group L-F). After 1 day, samples of the tongue dorsum were collected and sown on Sabouraud agar for counts of UFC/mL recovered from the oral cavity. The animals were submitted to euthanasia for microscopic analysis. It also evaluated the production capacity of a proteinase and phospholipase C. albicans and C. dubliniensis. The results showed that the amount of C. albicans recovered from rats oral cavity were similar among the four groups. To recover C. dubliniensis of the oral cavity from studied rats was not possible. In microscopic examination of tongue dorsum, was seen the presence of multiple tissue lesions induced by C. albicans, whereas in group L+ F+ these lesions were smaller than in other groups. C. dubliniensis showed slight tissue lesions with no statistic difference between groups. Regarding the factors of pathogenicity of C. albicans, the group L+F+ produced smaller amounts of phospholipase and proteinase compared to other groups. C. dubliniensis produced fewer quantitiy of phospholipase related to C. albicans, without difference between the 4 (four) groups studied. However, C. dubliniensis was not able to produce proteinase. It was concluded that the development of experimental candidosis by C. dubliniensis was less than that induced by C. albicans. Photodynamic therapy was effective on treatment... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Luana Sauvesuk null (luana_sauvesuk@hotmail.com) on 2017-10-26T17:07:51Z No. of bitstreams: 1 Dissertação de mestrado- Luana Sauvesuk - UNESP-FOA 26.10 pós defesa.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) / Approved for entry into archive by Monique Sasaki (sayumi_sasaki@hotmail.com) on 2017-10-31T18:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sauvesuk_l_me_araca.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-31T18:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sauvesuk_l_me_araca.pdf: 4367747 bytes, checksum: 5e1aa26820a5d96f8ddb932295fee7aa (MD5) Previous issue date: 2017-10-16 / O presente estudo revisou na literatura trabalhos entre 2006 e 2017 relacionados à fitossíntese de nanopartículas de prata (AgNP) e destacar a variedade de plantas passíveis de serem utilizadas e o quanto estas influenciam as características e propriedades dessas nanopartículas. Avaliou-se também como a temperatura (25, 50, 70 e 95°C) e a concentração de extrato da casca de romã (Punica granatum) (7, 14 e 28 mg mL-1) interferem na efetividade da reação fitoquímica por meio da quantificação dos íons Ag+ livres na solução de AgNP. A atividade antifúngica das AgNP produzidas foi avaliada por meio do método da microdiluição (CLSI M27-A2) contra cepas padrão (ATCC) de Candida albicans e Candida glabrata. As AgNP foram caracterizadas por microscopia eletrônica de varredura (MEV), difração de raios-X e espectroscopia UV/visível. O extrato da casca desidratada da romã foi obtido por maceração seguido de percolação em etanol (70%) e desidratado em rota-evaporador. Quantificou-se os fenóis totais expressos em ácido gálico por método colorimétrico e o ácido elágico por HPLC, sendo respectivamente 158,61 e 4,21 mg mL-1. Foram revisados mais de duzentos artigos relacionados à fitossintese de AgNP, onde cerca de cento e setenta plantas foram utilizadas para esta síntese e sendo a maioria delas geograficamente concentradas nos continentes asiático e europeu. As AgNP fitossintezadas no presente estudo apresentaram concentração de íons livres de Ag+ proporcional à quantidade de extrato utilizada na reação e maior nas temperaturas mais elevadas, e foram efetivas contra ambas cepas padrão de Candida avaliadas. / The present work reviewed in the literature studies of phythosynthesis of silver nanoparticles (AgNP) between 2006 and 2017, highlighting the variety of plants used to and how they can influence the characacteristics and properties of AgNP. This work also evaluated the influence of temperature (25, 50, 70 and 95°C) and concentration of peel extract of pomegranate (Punica granatum) (7, 14 and 28 mg mL-1) on the effectiveness of phytosynthesis reaction by quantifying the free Ag+ ions in the AgNP soluction. The antifungal activity of AgNP against reference strains (ATCC) of Candida albicans and Candida glabrata were evaluated by the microdilution method (CLSI M27-A2). AgNP were characterized through scanning electron microscopy (SEM), X-Ray diffraction and UV-Vis spectroscopy. The pomegranate peel was dehydrated and the hydroalcoholic extract was obtained by maceration followed by percolation, and then obtained the crude extract using a rotary evaporator. Total phenols expressed in galic acid and elagic acid were quantified in the extract using a colorimetric method and by HPLC, and the values found were 158.61 and 4.21 mg mL-1, respectively. It was found more than two hundred studies using about an hundred seventy plants to synthesize AgNP, being the majority of those plants from the Asiatic and European Continents. The AgNp phytosynthesized in the present study presented the concentration of free Ag+ ions proportional with the quantity of pomegranate peel extract and it was high when the temepratures used in the reaction were above 50ºC. Also, AgNP were effective against both Candida reference strains evaluated.

Orientador: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Adolfo José da Mota / Banca: Ricardo Sérgio Couto de Almeida / Banca: Renata Falchete do Prado / Banca: Samira Esteves Afonso Camargo / Resumo: Candida albicans é um fungo oportunista capaz de causar infecções superficiais e até sistêmicas. A maioria das infecções é mediada pela formação de biofilme que confere resistência aos agentes antifúngicos e ao sistema imune, porém os mecanismos de desenvolvimento do biofilme e patogenicidade ainda não foram completamente elucidados. No presente estudo foram selecionados 9 genes de C. albicans com função desconhecida, dentre 34 cepas mutantes que apresentaram fenótipo alterado para formação de biofilme. Os biofilmes foram formados em placas de 96 poços ou discos de poliestireno e avaliados em diferentes tempos de desenvolvimento. A seguir foram construídas 4 cepas complementadas que foram avaliadas quanto à susceptibilidade a agentes estressantes, crescimento sob limitação de nutrientes e testes de filamentação. A arquitetura dos biofilmes foi analisada por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os biofilmes também foram avaliados quanto à quantidade de β-1,3-glucana e quitina. Para os modelos de infecção, células epiteliais bucais (TR-146) foram utilizadas para análise de aderência, invasão e dano. A patogenicidade das cepas foi avaliada em ovos embrionados de galinha durante 7 dias, após a inoculação das cepas. Células planctônicas e biofilmes foram submetidos a testes antifúngicos com os agentes fluconazol, anfotericina B e caspofungina. A reação em cadeia da polimerase quantitativa foi realizada para verificar a expressão dos genes MRV8 e NDT80 em células fúngicas em interação com células epiteliais e MRV8, MRV1 e MRV6 em células crescidas em biofilme. Os resultados foram analisados por teste t de Student, ANOVA, Tukey e testes de Log-rank (Mantel-Cox) (p < 0,05). Foram construídas 4 cepas complementadas para os genes selecionados ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847 e MRV8. A função de ORF19.823 ainda permanece desconhecida, pois nãofoi observado fenótipo msignificativo para a cepa.... / Abstract: Candida albicans is an opportunistic fungi capable of causing superficial and systemic infections. Most of infections are mediated by biofilm formation which confers resistance to antifungal agents and immune system, but the mechanisms of biofilm development and pathogenicity were not thoroughly elucidated yet. In the presente study, 9 unknown function genes of C. albicans were selected among 34 mutant strains that presented altered phenotype for biofilm formation. The biofilms were formed on 96-well microtitle plates or on polystyrene disks and evaluated in different time intervals. Next, 4 complemented strains were constructed and evaluated for susceptibility to stressor agents, growth under nutrient limitation and filamentation tests. The biofilm architecture was analyzed by scanning electron microscopy (SEM). The biofilms were also assessed as the quantity of β-1,3-glucan and chitin. For the infection models, buccal epithelial cells (TR-146) were used for adherence, invasion and damage assays. The pathogenicity of the strains was evaluated in embrionated chicken eggs for 7 days, after inoculation of the strains. Planktonic cells and biofilms were submitted to antifungal tests with fluconazole, amphotericin B, and caspofungin. Quantitative polymerase chain reaction was performed to verify the expression of MRV8 and NDT80 genes in fungal cells in interaction with epithelial cells and MRV8, MRV1, and MRV6 genes in cells grown in biofilm. The results were submitted to the Student t test, ANOVA, Tukey's test, and Log-rank test (Mantel-Cox) (p < 0.05). Four complemented strains were constructed for the selected genes ORF19.823, ORF19.7170, ORF19.6847, and MRV8. The function of the ORF19.823 is still unknown, because the mutant strain did not show any significative phenotype for the tests performed. The mutant strain for the ORF19.7170 caused less damage on epithelial cells, but the result was not significant and the gene was dispensable... / Doutor

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Luciane Dias de Oliveira / Resumo: Interações entre micro-organismos ocorrem na natureza. O conhecimento das modificações estruturais, metabólicas e comportamentais de Candida albicans em interações com outros micro-organismos nos biofilmes, podem esclarecer os eventos que ocorrem quando estes micro-organismos interagem na natureza ou nos tecidos do hospedeiro e podem beneficiar as estratégias de controle da candidose. O objetivo do presente trabalho foi avaliar interações microbianas de C. albicans em biofilmes multiespécies e avaliar a patogenicidade dessas interações. Foram realizadas interações entre cepas padrão de C. albicans, com Acinetobacter baumanni e Klebsiella pneumoniae em biofilmes, avaliando-se a contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL). Foram também avaliadas interações com cepas padrão de Candida albicans com dois isolados clínicos de cada um dos micro-organismos (A. baumannii e K. pneumoniae). A patogenicidade dos micro-organismos isolados e em interações com C. albicans foram avaliadas no modelo experimental Galleria mellonella. Houve aumento no crescimento de C. albicans em biofilme in vitro quando em interação com as cepas clínicas testadas. A interação in vitro de C. albicans com A. baumannii favoreceu o crescimento de C. albicans de forma significativa e não afetou A. baumannii, com maior aumento na interação com as cepas clínicas. Exceto para a cepa clínica 1, a interação com K. pneumoniae também estimulou o crescimento de C. albicans, mas em menor intensidade quando comparado à interação entre C. albicans e A. baumannii. Conclusão: a interação de C. albicans in vitro com A. baumannii ou K. pneumoniae foi favorável para C. albicans exceto em interação com cepa clínica 1 de K. pneumoniae, onde houve redução no crescimento de C. albicans. Houve redução na porcentagem de morte de G. mellonella quando inoculada com C. albicans e cepa clínica 2 de K. pneumoniae ou quando G. mellonella... / Abstract: nteractions among microorganisms occur in nature. The knowledge of structural, metabolic and behavioral modifications of Candida albicans in interactions with other microorganisms in biofilms can clarify the events that occur when those microorganisms interact in nature or in host tissue and can benefit in strategies to control candidiasis. The aim of this study was to evaluate the microbial interactions of C. albicans in multispecies biofilms and evaluate the pathogenicity of these interactions. Were performed interactions between standards strains of C. albicans with standards strains of Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae in biofilms, evaluating the counts of colony forming units per milliliter (CFU / mL). Were also performed interactions between standard strain of C. albicans with two clinical isolates of each one of the microorganisms (A. baumannii and K. pneumoniae). The pathogenicity of the isolated micro-organisms and in interaction with C. albicans was evaluated in Galleria mellonella experimental model. There was an increase in the growth of C. albicans in in vitro biofilm when interacting with the clinical strains tested. The interaction in vitro between C. albicans and A. baumannii favored the growth of C. albicans significantly and did not affect A. baumannii, with the biggest increase in interaction with the clinical strains. Except for clinical strain 1, the interaction with K. pneumoniae also promoted the growth of C. albicans, but at a lower intensity compared to the interaction between C. albicans and A. baumannii. Conclusion: The interaction in vitro between C. albicans with Acinetobacter baumannii or K. pneumoniae was favorable for C. albicans except in the interaction K. pneumonia clinical strain 1, in which there was a reduction in the growth of C. albicans. There was a reduction in the percentage of G. mellonella death when inoculated with C. albicans... / Mestre