Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:39Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-16Bitstream added on 2014-06-13T19:02:07Z : No. of bitstreams: 1 mangia_sh_dr_botfmvz.pdf: 2850666 bytes, checksum: 528a2aed184daa57fac613045bf43182 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O estudo objetivou identificar efeitos do tratamento com ribavirina, prednisona e DMSO na cinomose; identificar a presença viral no sangue, medula óssea e líquor antes e após o tratamento, os efeitos colaterais dos fármacos experimentais e associações. Foram utilizados 60 cães apresentando sinais neurológicos da cinomose com evolução de dez dias. Animais foram internados para tratamento de suporte; avaliados diariamente e submetidos ao hemograma e dosagens bioquímicas. Os grupos 1 e 2 foram tratados com ribavirina associada ao DMSO; os grupos 3 e 4 foram tratados com DMSO e prednisona e os grupos 5 e 6 foram tratados com ribavirina e prednisona, ribavirina, prednisona e DMSO. Os animais foram anestesiados e colhidos líquor, medula óssea e sangue, antes e após o tratamento e realizada a RTPCR das amostras; as negativas foram analisadas pela técnica de hn-PCR. O vírus foi encontrado em 95% das amostras de sangue, 90% de medula óssea e 53,3% de líquor pré-tratamento. O efeito adverso da ribavirina quando associada com a prednisona foi anemia. A prednisona na dose imunossupressora causou aumento da dosagem de proteína e diminuição da celularidade liquórica, leucocitose. Já a dose antinflamatória causou diminuição de proteína no líquor. Baseado nos índices de sobrevida e melhora clínica, o tratamento mais efetivo foi o G2 (80%); seguido do G1, G5 e G3 (70%); o G6 (60%); o G4 com o pior índice (30%). Pós-tratamento, a frequência viral foi 97,7% no sangue, 86,4% na medula óssea e 27,3% no líquor / The present study aims at the identification of ribavirin, prednisone and DMSO’s treatment effects in dogs with canine distemper, at the identification of the viral presence in the blood, bone marrow and cerebrospinal fluid (CSF) before and after the treatment and also at the identification of side effects of the experimental drugs and its combinations. Sixty dogs presenting canine distemper with neurological signs about ten days evolution were observed. The animals were hospitalized for the support treatment, assessed on daily basis and subjected to blood cells count and biochemical analysis. Groups 1 and 2 were treated with ribavirin and its combination with DMSO; Groups 3 and 4 treated with prednisone and DMSO, Group 5 treated with ribavirin and prednisone, while Group 6 with ribavirin, prednisone and DMSO. The animals were anesthetized for the cerebrospinal fluid, bone marrow and blood samples collection before and after the treatment, then the RT-PCR of the samples was proceeded. The negative were analysed according to the hn-PCR technique. The canine distemper virus were found in 95% of blood samples, 90% of bone marrow and 53,3% of CSF before the treatment. The adverse effect of ribavirin and its association with prednisone was anemia. Prednisone, at its immunosuppressive dose, led to the increase of protein and decrease of cellularity in CSF, and increase of leukocytes blood count. The antiinflammatory dose led to the CSF protein concentration’s decrease. Considering the survival and clinical improvement rates, the most successful treatment was the one applied to the G2 (80%); followed by G1 (70%); G5 (70%) and G3 (70%); G6 (60%); and the lowest rate G4 (30%). After the treatment, the virus frequency was 97,7% in the blood, 86,4% in the bone marrow and 27,3% in the CSF

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-29Bitstream added on 2015-05-14T16:58:45Z : No. of bitstreams: 1 000828932.pdf: 760604 bytes, checksum: c30674cef7dfc0506331193c0c9efe70 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Devido às diversas formas de apresentação clínica e aos sinais clínicos comuns com outras afecções, o diagnóstico laboratorial do CDV (Canine distemper virus) se torna necessário. A RT-PCR seguida da NESTED com amostras de urina é atualmente a técnica mais recomendada para o diagnóstico do CDV. No Capítulo 2, foi desenvolvida a técnica de One-Step-RT-qPCR utilizando o sistema de detecção Syber Green I. Foram testados e comparados três kits comerciais (Sigma®, Promega® e Qiagen®). Foi determinada a sensibilidade analítica de dois sistemas de detecção (Sistema A e Sistema B) utilizando uma curva padrão de RNA sintético. Os três kits comerciais testados detectaram o vírus em 100% das urinas provenientes de animais sintomáticos e o kit da Qiagen® mostrou melhores resultados de reação. O Sistema A detectou aproximadamente 10 cópias de RNA por microlitro e no Sistema B detectou 100 cópias de RNA por microlitro na RT-qPCR e 10 cópias por microlitro quando seguida da NESTED-qPCR. No Capítulo 3 foram desenvolvidos três imunoconjugados de microesferas de poliestireno (MP) utilizando anticorpos policlonais hiperimunes anti-CDV (IgY, IgG e Proteína A+IgG) para o preparo de RNA e aplicação na RT-qPCR. A aplicação dos conjugados foi comparada ao método convencional de extração de RNA por kit comercial. Os conjugados foram padronizados e a sensibilidade analítica foi determinada através de curva padrão de RNA sintético. A sensibilidade diagnóstica foi determinada utilizando-se conjugado com IgY, MP sem anticorpos conjugados e urina adsorvida diretamente nos tubos de qPCR / The diagnosis of canine distemper is usually based on clinical suspicion of the disease. However, due to the different clinical forms of the disease and other disorders common to clinical signs, the laboratory diagnosis is necessary. The RT-PCR followed by NESTED is currently the method used to diagnosis of CDV (Canine Distemper Virus). The Chapter 2 aimed to standardized the technique of One-Step RT-qPCR-using Syber Green I system. Three commercial kits (Sigma®, Promega® and Qiagen®) were tested and compared. Analytical sensitivity of two detection systems (System A and System B) was determined using a standard curve. The three commercial kits tested detected the virus in 100% of samples from symptomatic dogs and the kit of Qiagen® showed better results. The System A detected approximately 10 RNA copies/μL and System B detected approximately 100 RNA copies/ μL in RT-qPCR and 10 RNA copies/ μL when followed by NESTED-qPCR. In Chapter 3 three immunoconjugates were developed with polystyrene microspheres (PM) using polyclonal hyperimmune anti-CDV antibody (IgY, IgG and protein A+IgG) to prepare RNA to canine distemper molecular diagnosis and comparison with the conventional method of RNA extraction by commercial kit. Conjugates were standardized and the analytical sensitivity was determined by standard curve. The diagnostic sensitivity was determined using IgY-conjugated, PM without conjugated antibodies and urine adsorption directly qPCR in tubes / FAPESP: 2011/50889-9

A cinomose canina é uma doença viral e afeta principalmente os sistemas respiratório, gastrintestinal e nervoso. O presente trabalho analisou 54 cães com cinomose de um total de 760 cães necropsiados no período de julho de 2006 a outubro de 2007. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por secreção ocular e nasal mucopurulentas, hiperqueratose dos coxins digitais, pulmões de coloração avermelhada e não colabados, atrofia do timo, conteúdo intestinal diarréico e evidenciação das placas de Peyer. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por pneumonia intersticial, rarefação linfóide, desmielinização da substância branca, manguitos perivasculares e corpúsculos de inclusão viral na mucosa do estômago, epitélios da bexiga, brônquios e bronquíolos, pelve renal, coxins digitais, pálpebra e orelha, no sistema nervoso central (principalmente em astrócitos) e em células mononucleares dos linfonodos, baço e tonsilas. O teste de imunoistoquímica foi positivo em 94,4% dos casos analisados. Os tecidos foram marcados pela técnica imunoistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal anti-cinomose canina (VMRD) na diluição de 1:400. O coxim digital se apresentou como o órgão com o maior número de casos marcados positivamente (67,4%), seguido pelo estômago com 62,7%. A utilização da imunoistoquímica auxiliou na identificação do antígeno viral em diferentes tecidos e foi importante como diagnóstico complementar da cinomose canina. / Canine distemper is a viral disease that affects mainly, respiratory, gastrointestinal and nervous system. The present study analyzed 54 dogs with canine distemper from total of 760 necropsies done in dogs between July 2006 to October 2007. The macroscopic lesion were characterized by mucopurulent oculonasal discharge, hyperkeratosis of footpads, red and not collapsed lungs, thymic atrophy, watery intestinal, hyperemia and Peyer’s patches enlarged. The microscopic findings were characterized by interstitial pneumonia, lymphoid depletion, white matter demylization, perivascular cuffs and viral inclusion bodies located in stomach mucosa, bladder, bronchial, renal pelvis, footpads, eyelid, skin of the ear epithelium, central nervosus system (mainly in astrocytes) and mononuclear infiltrates in lymph nodes, spleen, and tonsils. The immunohistochemistry test was positive in 94,4% of analyzed cases. Tissues were strained by an immunohistochemical procedure with mouse monoclonal anti-cinomose (VMRD) diluted 1:400. The footpads was the best tissue with majority of positive marked cases (67,4%), followed by stomach with 62,7%. This observation suggests that the immunohistochemistry technique aided to identify distemper virus antigens in different tissue making it an important test for complementary diagnostic of canine distemper.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-25Bitstream added on 2014-06-13T20:35:26Z : No. of bitstreams: 1 ribeiro_mcm_me_botfmvz.pdf: 287673 bytes, checksum: dec8c154bcb68842908b9737b4e6eeb8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A cinomose e a parvovirose canina são duas enfermidades infecto-contagiosas de grande importância para a clínica de pequenos animais onde a PCR vem sendo aplicada com ótimos resultados no diagnóstico. No entanto, para o sucesso da técnica, é necessário que o ácido nucléico esteja o mais puro possível e livre de inibidores das polimerases (Transcriptase reversa e/ou Taq DNA polimerase), desejando-se um método de extração simples e rápido. O teste de coaglutinação utilizando o Staphylococcus aureus (COA) é baseado na propriedade da proteína A de se ligar especificamente à porção Fc da imunoglobulina G de alguns mamíferos e algumas subclasses de IgG de camundongos. Assim, neste trabalho utilizou-se a coglutinação para obtenção de DNA ou RNA livres de inibidores, com capacidade de concentração de partículas virais dispersas nas amostras biológicas e de forma simples, rápida e de baixo custo. Para tanto, 10 amostras de fezes positivas para o vírus da parvovirose canina e 17 amostras de urina positivas para o vírus da cinomose foram submetidas à extração de ácidos nucléicos utilizando o COA e kits comerciais para posteriormente serem analisadas pela PCR em tempo real e PCR convencional respectivamente. As amostras de fezes foram diluídas de 1: 10 a 1: 100 000 e as amostras de urina foram utilizadas puras. A metodologia desenvolvida foi eficiente na extração dos dois tipos de amostra. O método proposto demonstrou ser confiável e de baixo custo para a preparação de DNA e RNA viral para o diagnóstico molecular. / PCR presents excellent results for the diagnosis of canine distemper and canine parvoviruses, two important infectious and contagious diseases for small animal internal medicine. However, success of technique depends on nucleic acid samples free of polymerase inhibitors (Reverse Transcriptase and / or Taq DNA polymerase). The coagglutination test using Staphylococcus aureus (COA) is based on the property of specific binding of protein A to the Fc portion of immunoglobulin G of some mammals and some of IgG subclasses of mice. This work was carried out the coagglutination procedure to obtain nucleic acid inhibitors free, with capacity for viral particle concentration dispersed in biological samples, simply, quickly and low cost. For this purpose, 10 canine parvovirus positive stool samples and 17 canine distemper virus positive urine samples were submitted to the preparation of nucleic acids using the COA and commercial kits in order to be analyzed by real-time PCR or conventional PCR respectively. Fecal specimens were diluted from 1: 10 to 1: 100 000 and urine samples were used pure. The developed methodology was efficient in extracting the two types of sample. The method proposed demonstrated to be reliable and cheap to prepare viral DNA or RNA for molecular diagnosis.

Orientador: João Pessoa Araújo Júnior / Banca: Marcos Bryan Heinemann / Banca: Clarice Weis Arns / Banca: Maria Terezinha Serrão Peraçoli / Banca: José Paes de Oliveira Filho / Resumo: Devido às diversas formas de apresentação clínica e aos sinais clínicos comuns com outras afecções, o diagnóstico laboratorial do CDV (Canine distemper virus) se torna necessário. A RT-PCR seguida da NESTED com amostras de urina é atualmente a técnica mais recomendada para o diagnóstico do CDV. No Capítulo 2, foi desenvolvida a técnica de One-Step-RT-qPCR utilizando o sistema de detecção Syber Green I. Foram testados e comparados três kits comerciais (Sigma®, Promega® e Qiagen®). Foi determinada a sensibilidade analítica de dois sistemas de detecção (Sistema A e Sistema B) utilizando uma curva padrão de RNA sintético. Os três kits comerciais testados detectaram o vírus em 100% das urinas provenientes de animais sintomáticos e o kit da Qiagen® mostrou melhores resultados de reação. O Sistema A detectou aproximadamente 10 cópias de RNA por microlitro e no Sistema B detectou 100 cópias de RNA por microlitro na RT-qPCR e 10 cópias por microlitro quando seguida da NESTED-qPCR. No Capítulo 3 foram desenvolvidos três imunoconjugados de microesferas de poliestireno (MP) utilizando anticorpos policlonais hiperimunes anti-CDV (IgY, IgG e Proteína A+IgG) para o preparo de RNA e aplicação na RT-qPCR. A aplicação dos conjugados foi comparada ao método convencional de extração de RNA por kit comercial. Os conjugados foram padronizados e a sensibilidade analítica foi determinada através de curva padrão de RNA sintético. A sensibilidade diagnóstica foi determinada utilizando-se conjugado com IgY, MP sem anticorpos conjugados e urina adsorvida diretamente nos tubos de qPCR / Abstract: The diagnosis of canine distemper is usually based on clinical suspicion of the disease. However, due to the different clinical forms of the disease and other disorders common to clinical signs, the laboratory diagnosis is necessary. The RT-PCR followed by NESTED is currently the method used to diagnosis of CDV (Canine Distemper Virus). The Chapter 2 aimed to standardized the technique of One-Step RT-qPCR-using Syber Green I system. Three commercial kits (Sigma®, Promega® and Qiagen®) were tested and compared. Analytical sensitivity of two detection systems (System A and System B) was determined using a standard curve. The three commercial kits tested detected the virus in 100% of samples from symptomatic dogs and the kit of Qiagen® showed better results. The System A detected approximately 10 RNA copies/μL and System B detected approximately 100 RNA copies/ μL in RT-qPCR and 10 RNA copies/ μL when followed by NESTED-qPCR. In Chapter 3 three immunoconjugates were developed with polystyrene microspheres (PM) using polyclonal hyperimmune anti-CDV antibody (IgY, IgG and protein A+IgG) to prepare RNA to canine distemper molecular diagnosis and comparison with the conventional method of RNA extraction by commercial kit. Conjugates were standardized and the analytical sensitivity was determined by standard curve. The diagnostic sensitivity was determined using IgY-conjugated, PM without conjugated antibodies and urine adsorption directly qPCR in tubes / Doutor

O vírus da cinomose canina (CDV) é classificado no gênero Morbillivirus da família Paramyxoviridae e é o agente etiológico de uma das mais importantes doenças virais de canídeos domésticos. A cinomose ocorre em todo o mundo e produz alta mortalidade em populações imunologicamente naïve. Apesar de encontrar-se bem controlada pela vacinação, casos de cinomose ocorrem esporadicamente tanto em cães vacinados quanto em não vacinados. Uma das causas suspeitas desta falha vacinal é a grande variabilidade genética entre cepas de CDV. O objetivo deste trabalho foi detectar e analisar a variabilidade genética do CDV circulante no País. Foram coletados 386 suabes retais de cães em diversas regiões do Brasil, dos quais se detectaram 155 positivos através de uma RT-nested-PCR de um fragmento do gene do nucleocapsídeo. Destes, 23 foram selecionados para amplificação parcial do gene da hemaglutinina, sequenciamento e análise filogenética. A grande maioria das sequências obtidas agrupou no genótipo América do Sul-I, que inclui isolados da Argentina e do Uruguai, com exceção de uma amostra similar à cepa vacinal Rockborn. A análise filogenética sugere a presença de pelo menos sete subgenótipos do genótipo América do Sul-I circulando neste continente. O grupo América do Sul-II é formado somente por isolados da Argentina. Além disso, propõe-se que este grupo e os clados Rockborn-like e Europa Selvagem sejam denominados subgenótipos dentro de um genótipo único. / Canine distemper virus (CDV) is classified in the genus Morbillivirus within the family Paramyxoviridae and is the etiologic agent of one of the most important viral diseases of domestic Canidea. It occurs worldwide and produces high mortality in immunologically naïve populations. Despite being well controlled by vaccination, cases of canine distemper occur sporadically in vaccinated and unvaccinated dogs. One of the suspected causes of this vaccine failure is the great genetic variability between strains of CDV. The objective of this study was to detect and analyze the genetic variability of CDV circulating in our country. Rectal swabs were collected from 386 dogs in various regions of Brazil, of which 155 were found positive by a nested RT-PCR of a fragment of the nucleocapsid gene. Of these, 23 were selected for partial amplification of the hemagglutinin gene, sequencing and phylogenetic analysis. The vast majority of sequences obtained grouped in genotype South America-I, which includes isolates from Argentina and Uruguay, with the exception of a sample similar to the vaccine strain Rockborn. Phylogenetic analysis suggests the presence of at least seven subgenotypes belonging to South America-I genotype, circulating in this continent. The group South America-II consists only of isolates from Argentina. Furthermore, it is proposed that this group and clades Rockborn-like and Europe Wildlife are denominated subgenotypes within a single genotype.

O vírus da cinomose canina (CDV) é classificado no gênero Morbillivirus da família Paramyxoviridae e é o agente etiológico de uma das mais importantes doenças virais de canídeos domésticos. A cinomose ocorre em todo o mundo e produz alta mortalidade em populações imunologicamente naïve. Apesar de encontrar-se bem controlada pela vacinação, casos de cinomose ocorrem esporadicamente tanto em cães vacinados quanto em não vacinados. Uma das causas suspeitas desta falha vacinal é a grande variabilidade genética entre cepas de CDV. O objetivo deste trabalho foi detectar e analisar a variabilidade genética do CDV circulante no País. Foram coletados 386 suabes retais de cães em diversas regiões do Brasil, dos quais se detectaram 155 positivos através de uma RT-nested-PCR de um fragmento do gene do nucleocapsídeo. Destes, 23 foram selecionados para amplificação parcial do gene da hemaglutinina, sequenciamento e análise filogenética. A grande maioria das sequências obtidas agrupou no genótipo América do Sul-I, que inclui isolados da Argentina e do Uruguai, com exceção de uma amostra similar à cepa vacinal Rockborn. A análise filogenética sugere a presença de pelo menos sete subgenótipos do genótipo América do Sul-I circulando neste continente. O grupo América do Sul-II é formado somente por isolados da Argentina. Além disso, propõe-se que este grupo e os clados Rockborn-like e Europa Selvagem sejam denominados subgenótipos dentro de um genótipo único. / Canine distemper virus (CDV) is classified in the genus Morbillivirus within the family Paramyxoviridae and is the etiologic agent of one of the most important viral diseases of domestic Canidea. It occurs worldwide and produces high mortality in immunologically naïve populations. Despite being well controlled by vaccination, cases of canine distemper occur sporadically in vaccinated and unvaccinated dogs. One of the suspected causes of this vaccine failure is the great genetic variability between strains of CDV. The objective of this study was to detect and analyze the genetic variability of CDV circulating in our country. Rectal swabs were collected from 386 dogs in various regions of Brazil, of which 155 were found positive by a nested RT-PCR of a fragment of the nucleocapsid gene. Of these, 23 were selected for partial amplification of the hemagglutinin gene, sequencing and phylogenetic analysis. The vast majority of sequences obtained grouped in genotype South America-I, which includes isolates from Argentina and Uruguay, with the exception of a sample similar to the vaccine strain Rockborn. Phylogenetic analysis suggests the presence of at least seven subgenotypes belonging to South America-I genotype, circulating in this continent. The group South America-II consists only of isolates from Argentina. Furthermore, it is proposed that this group and clades Rockborn-like and Europe Wildlife are denominated subgenotypes within a single genotype.

A cinomose canina é uma doença viral e afeta principalmente os sistemas respiratório, gastrintestinal e nervoso. O presente trabalho analisou 54 cães com cinomose de um total de 760 cães necropsiados no período de julho de 2006 a outubro de 2007. As lesões macroscópicas observadas eram caracterizadas por secreção ocular e nasal mucopurulentas, hiperqueratose dos coxins digitais, pulmões de coloração avermelhada e não colabados, atrofia do timo, conteúdo intestinal diarréico e evidenciação das placas de Peyer. Os achados microscópicos caracterizavam-se principalmente por pneumonia intersticial, rarefação linfóide, desmielinização da substância branca, manguitos perivasculares e corpúsculos de inclusão viral na mucosa do estômago, epitélios da bexiga, brônquios e bronquíolos, pelve renal, coxins digitais, pálpebra e orelha, no sistema nervoso central (principalmente em astrócitos) e em células mononucleares dos linfonodos, baço e tonsilas. O teste de imunoistoquímica foi positivo em 94,4% dos casos analisados. Os tecidos foram marcados pela técnica imunoistoquímica utilizando o anticorpo monoclonal anti-cinomose canina (VMRD) na diluição de 1:400. O coxim digital se apresentou como o órgão com o maior número de casos marcados positivamente (67,4%), seguido pelo estômago com 62,7%. A utilização da imunoistoquímica auxiliou na identificação do antígeno viral em diferentes tecidos e foi importante como diagnóstico complementar da cinomose canina. / Canine distemper is a viral disease that affects mainly, respiratory, gastrointestinal and nervous system. The present study analyzed 54 dogs with canine distemper from total of 760 necropsies done in dogs between July 2006 to October 2007. The macroscopic lesion were characterized by mucopurulent oculonasal discharge, hyperkeratosis of footpads, red and not collapsed lungs, thymic atrophy, watery intestinal, hyperemia and Peyer’s patches enlarged. The microscopic findings were characterized by interstitial pneumonia, lymphoid depletion, white matter demylization, perivascular cuffs and viral inclusion bodies located in stomach mucosa, bladder, bronchial, renal pelvis, footpads, eyelid, skin of the ear epithelium, central nervosus system (mainly in astrocytes) and mononuclear infiltrates in lymph nodes, spleen, and tonsils. The immunohistochemistry test was positive in 94,4% of analyzed cases. Tissues were strained by an immunohistochemical procedure with mouse monoclonal anti-cinomose (VMRD) diluted 1:400. The footpads was the best tissue with majority of positive marked cases (67,4%), followed by stomach with 62,7%. This observation suggests that the immunohistochemistry technique aided to identify distemper virus antigens in different tissue making it an important test for complementary diagnostic of canine distemper.

Diferentes amostras biológicas foram avaliadas (zaragatoa ocular, genital, urina e células mononucleares do sangue periférico) pela RT-PCR em 50 cães com sintomas neurológicos compatíveis como cinomose, na presença ou não de outros sintomas sistêmicos. O gene da nucleoproteína do vírus da cinomose foi detectado em 43 das 50 amostras avaliadas. Considerando apenas os animais com resultado positivos pela hemi-nested - PCR, os sintomas neurológicos observados com freqüência maior que 50%, foram mioclonia e alteração locomotora (maioria dos cães evoluiu a tetraparesia); convulsão e vocalização foram observados em 32% dos casos Outros sintomas sistêmicos, sintomas oculares, respiratórios ou digestivos, prévios ou associados aos sintomas neurológicos, foram observados em 82% dos cães. Também observou-se hiperqueratose nasal ou de coxins em 44% dos casos. Somente 20% dos animais positivos haviam sido vacinados contra o vírus da cinomose. Zaragatoas genitais forneceram maior número de resultados positivos (40), seguidos por zaragatoas oculares e urina (37) e células mononucleares do sangue periférico (34). A coleta associada de duas amostras biológicas (zaragatoa genital e urina) por animal aumentou a possibilidade de detecção de animais positivos, principalmente nos casos de cães suspeitos que não apresentaram sintomas respiratórios, gastrintestinais e oculares, assim como nos animais vacinados e cronicamente infectados ou convalescentes. / Using Reverse transcription-PCR assay, different biological samples were avaliabled (conjunctival and genital swabs, urine and peripheral blood mononuclear cells) from dogs with or with no extraneural signs prior to or accompanying the neurologic signs. Canine distemper nucleoprotein were detected in 43 from 50 dogs availabled by hemi-nested-PCR. Considering just dogs with distemper confirmed by hemi-nested PCR, gait abnormalities (most commonly tetraparesis) and myoclonus were the neurological signs observed in over 50%; vocalizing and seizures occurred in 32%. Other systemic signs (respiratory, gastroenteric or ocular signs). preceding or associated to neurological signs, occurred in 82% of dogs Hyperkeratosis of the footpads or nose were observed in 44 % of the cases. Only (20%) were vaccinated against canine distemper. A greater number of positive results were obtained from genital swabs (40), followed by conjuctival swabs and urine (37) and PBMCs (33). Sensitivity of detection positive results were increased by using two clinical samples association (genital swab and urine), specially in dogs that had not shown extra neural signs, vaccinate dogs or during the convalescent and late stage of canine distemper.

O vírus da cinomose canina (CDV) e o vírus parainfluenza canino (CPIV) afetam uma ampla variedade de hospedeiros e encontram-se distribuídos mundialmente. O CDV é considerado um dos mais importantes agentes infecciosos dentro das populações caninas. Este vírus é o agente causal da cinomose, uma doença potencialmente letal em membros das famílias Canidae, Mustelidae e Procionidae, sendo recentemente detectado como causa de morbidade e mortalidade em carnívoros aquáticos e grandes felinos. O CPIV, por sua vez, é altamente contagioso entre cães, podendo infectar roedores e gatos em infecções experimentais. Geralmente, o CPIV produz uma traqueobronquite aguda auto-limitante, porém pode atuar sinergicamente com outros agentes infecciosos, como o CDV, causando sinais clínicos mais graves. Como em nosso meio são escassas as informações sobre estes vírus, o presente estudo visou aprofundar os conhecimentos sobre a prevalência de CDV e CPIV em cães e felinos silvestres mantidos em cativeiro. Para tanto, soros destes animais foram testados em busca de anticorpos neutralizantes contra amostras padrão do CDV (Rockborn e Snyder Hill) e do CPIV (V660). Inicialmente, foram testados soros de 173 cães de rua mantidos em canis municipais em Novo Hamburgo e Porto Alegre, RS. A prevalência de anticorpos neutralizantes anti-CDV frente às amostras de vírus da cinomose Rockborn e Snyder Hill, foi de 9,3 % e 4,1 %, respectivamente. Somente dois cães apresentaram títulos de anticorpos considerados protetores contra CDV Rockborn (igual ou maior que 100) e nenhum soro apresentou título de anticorpos neutralizantes considerado protetor para a amostra Snyder Hill (igual ou maior que 100). Contra a amostra de parainfluenza canino V660, a prevalência de anticorpos neutralizantes encontrada foi de 51,4 %. Conclui-se, portanto, que a população de cães de rua amostrada apresenta poucos indícios de contato prévio com CDV, sugerindo grande susceptibilidade à cinomose. Por outro lado, o CPIV parece circular amplamente nesta população. Na segunda parte do presente estudo, como no Brasil não existem relatos sobre CDV e CPIV em felinos silvestres, buscou-se verificar a possibilidade da ocorrência dessas infecções em felinos silvestres brasileiros. Para tanto, foram testados soros de 84 felinos silvestres de seis diferentes espécies nativas do Brasil (Leopardus tigrinus, Puma concolor, Leopardus wiedii, Herpailurus yaguarondi, Panthera onca), todos mantidos em cativeiro em criatórios de distintas regiões do País. Todos os felinos amostrados apresentaram-se soronegativos frente às amostras de CDV e CPIV utilizadas. Estes resultados indicam que CDV e CPIV parecem não circular nas populações de felinos silvestres amostradas. / Canine distemper virus (CDV) and canine parainfluenza virus (CPIV) infect a great variety of hosts ranges and are distributed worldwide. CDV is one of the most important infectious agents in dogs. This virus may cause potentially lethal disease among members of the Canidae, Mustelidae and Procionidae families. It has also caused diseases of significant morbidity and mortality in aquatic carnivores and large felids. CPIV, on its turn, is highly contagious among dogs, whilst rodents and cats are susceptible to experimental infections. CPIV is usually associated with an acute selflimiting tracheobronchitis. However, it can act sinergistically with other infectious agents, such as CDV, and cause clinical signs of variable severity. As information on CDV and CPIV infections in our millieu are scarce, this study was carried out aiming to increase knowledge on the prevalence of CDV and CPIV in stray dogs as well as in captive Brazilian wild felids. In order to have an estimate on such prevalences, sera from these animals were tested for neutralizing antibodies to CDV strains Rockborn and Snyder Hill, and to CPIV strain V660. Initially, 173 sera from stray dogs kept in kennels from the municipalities of Novo Hamburgo and Porto Alegre, RS, were examined. The prevalences of neutralizing antibodies to CDV strains Rockborn and Snyder Hill were 9.3 % and 4.1 %, respectively. Only two dogs had antibody levels which could be correlated to protection (that is, titre ≥ 100) to CDV Rockborn whereas no sera presented antibody titres high enough to be considered protective to CDV strain Snyder Hill (that is, titre ≥ 100). Regarding CPIV, the prevalence of anti-V660 neutralizing antibodies was 51.4 %. It can be concluded that the stray dog populations under study shows few serological evidence of previous contact with CDV and seem largely susceptible to CDV infections. On the other hand, CPIV seems to circulate widely in the examined population. In the second part of this study, as there are no reports on CDV and CPIV infections in wild felids in Brazil, it was aimed to determine whether there would be any evidence of such infections among some of such species. For that, 84 sera from wild felids of six different Brazilian native species (Leopardus tigrinus, Puma concolor, Leopardus wiedii, Herpailurus yaguarondi, Panthera onca), all kept in captivity in different regions of the country, were tested for neutralizing antibodies to both CDV and CPIV. All wild felid sera tested were negative for antibodies to the two strains of CDV as well as to CPIV. These results indicate that CDV and CPIV do not seem to circulate among the wild felid populations examined.