O hidróxido de cálcio (HCa), o agregado de trióxido mineral (MTA) e o óleo-resina de copaíba (COP) isoladamente apresentam características biológicas do material de capeamento pulpar direto mais apropriado. Com o pressuposto que associados poderiam originar materiais mais apropriados para serem aplicados em capeamento pulpar direto, este estudo objetivou analisar in vitro proliferação, diferenciação e migração de células-tronco de polpa de dente decíduo humano esfoliado (SHEDs) em resposta a substâncias liberadas pelo COP isolado ou associado ao HCa ou ao MTA. Proliferação, diferenciação e migração de SHEDs (Linhagem PDH3) foram analisadas através do ensaio de redução do MTT; da atividade de fosfatase alcalina (ALP), formação de nódulos mineralizados pelo ensaio de Vermelho de Alizarina e expressão dos genes (BGLAP, DSPP, DMP1 e HSP-27) pelo qRT-PCR; e, do ensaio do Scratch, respectivamente. As células foram submetidas à ação de meios condicionados pelos biomateriais, de acordo com os seguintes grupos experimentais: COP isolado (COP); HCa isolado (HCa); HCa associado ao COP (HCa+COP); MTA isolado (MTA) e MTA associado ao COP (MTA+COP). Células crescidas em meio de cultura fresco serviram de controle. Os dados foram comparados utilizando ANOVA complementado pelo teste de Tukey (p 0,05). O grupo HCa apresentou número de células viáveis significativamente menor que o dos demais grupos, inclusive o do grupo HCa+COP (p<0,01) em todos os tempos experimentais. A atividade de ALP em 14 dias foi similar em todos os grupos experimentais. Em 21 dias, o grupo COP apresentou quantidade maior de mineralização que os demais grupos (p<0,01) e o grupo HCa+COP maior que o grupo HCa (p<0,01). O gene DMP1 não foi expresso pelas células em nenhum grupo experimental. O grupo COP apresentou as menores expressões dos genes BGLAP, DSPP e HSP-27. As SHEDs do grupo MTA+COP apresentaram superexpressão dos genes BGLAP, DSPP e HSP-27, e as do grupo HCa+COP superexpressão dos genes BGLAP e HSP-27. O grupo HCa foi o único que não apresentou células em migração em todos os tempos experimentais. Os demais grupos apresentaram migração similar à do grupo Controle, exceto o grupo MTA em 12 e 24 horas. As SHEDs dos grupos HCa+COP e MTA+COP migraram significativamente mais que as dos grupos HCa e MTA, respectivamente. O COP, isolado ou em associação aos demais biomateriais, não interfere na proliferação de SHEDs e quando associado ao HCa é capaz de anular a citotoxicidade deste biomaterial isolado. O COP, isoladamente ou em associação, não interfere na atividade de fosfatase alcalina. Isoladamente, o COP induz a maior diferenciação funcional e quando associado ao HCa melhora substancialmente a diferenciação induzida por este biomaterial isolado. Os biomateriais isolados ou associados não são capazes de induzir expressão de DMP1. O COP associado aos biomateriais induz superexpressão de genes relacionados à formação de matriz extracelular e de diferenciação odontoblástica. O COP isoladamente não interfere na migração celular e, quando associado ao HCa, anula por completo a inibição de migração causada por esse biomaterial isolado. Quando associado ao MTA, o COP aumenta a velocidade de migração das células em relação ao MTA isolado. Óleo-resina de copaíba (COP) promove proliferação, diferenciação e migração de células-tronco de polpa dental sendo uma proposta de um biomaterial para capeamento pulpar. / The calcium hydroxide (CaH), the mineral trioxide aggregate (MTA) and the oil-resin copaiba (COP) by themselves have biological characteristics of the ideal direct pulp capping material. With the assumption that when associated they could originate materials more appropriated for direct pulp capping, this study aimed to analyze the in vitro proliferation, differentiation and migration of stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHEDs) in response to substances leached from COP alone or associated with CaH or MTA. Proliferation, differentiation and migration of SHEDs (PDH3 lineage) were analyzed through the MTT reduction assay; alkaline phosphatase (ALP) activity, mineralized nodules formation using the Alizarin Red assay and gene expression (BGLAP, DSPP, DMP1 e HSP-27) using qRT-PCR; and the Scratch assay, respectively. The cells were submitted to the culture medium conditioned by the biomaterials according to the following experimental groups: COP alone (COP); CaH alone (CaH); CaH associated to COP (CaH+COP); MTA alone (MTA) and MTA associated to COP (MTA+COP). Cells grown in fresh culture medium served as control. Data were compared by ANOVA complemented by the Tukey´s test (p 0.05). The CaH group presented number of viable cells significantly smaller (p<0.01) than those of all other experimental groups, including the CaH+COP, during whole experimental time. The ALP activity in 14 days was similar in all experimental groups. In 21 days, the COP group presented the amount of mineralization higher (p<0.01) than those of all other groups. The gene DMP1 was not expressed by the cells in all experimental groups. The COP group presented the smallest expression (p<0.01) of BGLAP, DSPP and HSP-27 genes. The SHEDs of the MTA+COP group presented superexpression of the BGLAP, DSPP and HSP-27 genes, and in the CaH+COP group the cells superexpressed the BGLAP and HSP-27 genes. The CaH group was the only one where there was no cell migration during whole experiment. Migration of all other groups was similar to that of the control group, except by the MTA group in 12 and 24 hours. The CaH+COP and MTA+COP migrated significantly more than the CaH and MTA groups, respectively. COP, alone or in association to the other biomaterials, does not interfere with the proliferation of the SHEDs, and when associated to CaH is able to annul the cytotoxicity of the CaH alone. The COP, alone or in association to the other biomaterials, does not interfere with the ALP activity. The COP alone induces the highest functional differentiation of the SHEDs and when associated to the CaH substantively improves this differentiation. The biomaterials, alone or in association, are not able to induce the expression of the DMP1 gene. The COP associated to the biomaterials induces superexpression of the genes related to the extracellular matrix formation and odontoblastic differentiation. The COP alone does not interfere with the cell migration and, when associate to CaH, completely annuls the inhibition of migration caused by this material alone. When associated to MTA the COP increases the cell migration speed compared to the effect of the MTA alone. Oil-resin copaiba (COP) promotes proliferation, differentiation and migration of stem cells from dental pulp with a proposal for a biomaterial for pulp capping.

Este estudo translacional avaliou o efeito da aplicação direta de materiais capeadores à base de óleo de copaíba sobre a polpa dentária de ratos. O biomaterial foi analisado de acordo com os processos inflamatórios, reparadores e regenerativos. Cavidades classe I foram preparadas na face oclusal dos molares superiores e inferiores de ratos da linhagem Wistar (n=120). Posteriormente, uma cavidade padronizada foi realizada com broca carbide esférica ¼. Exposições pulpares foram obtidas e após a hemostasia com algodão estéril e água destilada, foi realizado o capeamento pulpar com aplicação de biomateriais diretamente no tecido pulpar. Os biomateriais utilizados foram: COP (Óleo de Copaíba); Ca(OH)2 (hidróxido de cálcio), Ca(OH)2+COP; MTA (agregado trióxido mineral); MTA+COP; BIODENTINA (Biodentine®); BIODENTINA+COP. Todas as cavidades foram restauradas com cimento provisório. Os animais foram sacrificados após o período de 7, 14, 28 dias de acordo com os princípios de ética e experimentação animal. Vinte e um grupos foram criados a partir da combinação de tempos e materiais, cada grupo foi constituído de 5 animais. As peças foram preparadas e processadas pela técnica histológica e coradas pela HE (hemotoxilina e eosina) realizando cortes aleatórios, sendo analisados ao microscópio óptico em 100X de aumento por 2 examinadores. Os critérios avaliados foram: respostas inflamatória e degenerativa, organização tecidual, dentina reacional e reparativa. No último tempo experimental (28 dias) de todos os grupos foi analisado a superfície (mm2) e o volume (mm3) da ponte de dentina formada pela técnica da micro-CT (microtomografia computadorizada) de alta resolução. Os dados foram estatisticamente analisados utilizando o teste T pareado, determinando a superfície e volume da dentina reparadora formada entre os grupos experimentais. Nas análises histológicas foi utilizado o teste não-paramétrico de Mann-Whitney realizando comparações entre os grupos (?=5%). A BIODENTINA demonstrou uma tendência de acelerar o processo de regeneração pulpar, iniciando a deposição de dentina reparativa ao sétimo dia do capeamento. Este material apresentou uma dentina mais espessa em comparação com os outros biomateriais. O MTA também demonstrou uma eficiência na formação da ponte dentinária, entretanto em 20% das amostras não foi observada a presença de dentina reparadora. Ao acrescentar o COP nestes materiais, a formação da ponte dentinária apresentava heterogênea e incompleta, além disso esses grupos continham um processo inflamatório aumentado. A dentina reparadora do grupo de Ca(OH)2 demonstrou presença de túnel, com característica heterogênea. A adição do COP ao Ca(OH)2 aumentou a formação de dentina nas paredes ao redor da câmara pulpar em 80% das amostras, porém esta dentina não apresentava melhora na qualidade. Desta forma, o capeamento pulpar com COP isolado ou associado a Ca(OH)2, MTA e BIODENTINA não formou uma ponte de dentina completa e homogênea no local da exposição pulpar. / This translational study evaluated the effect of the direct application of copaiba oil based capping materials on the rat pulp. The biomaterial was analyzed according to inflammatory, repairing and regenerative processes. Class I cavities were prepared on the occlusal surface of the upper and lower molars of Wistar rats (n = 120). Subsequently, standardized cavities was performed with ¼ spherical carbide drill. Pulp exposures were obtained and after their hemostasis with sterile cotton and distilled water, pulp capping was done with application of biomaterials directly on the pulp tissue. The biomaterials used were: COP (Copaíba oil); Ca(OH)2 (calcium hydroxide), Ca(OH)2+COP; MTA (aggregate mineral trioxide); MTA+COP; BIODENTINE (Biodentine®); BIODENTINA+COP. All cavities were restored with temporary cement. The animals were sacrificed after the period of 7, 14, 28 days according to the principles of ethics and animal experimentation. Twenty-one groups were created from the combination of times and materials, each group consisted of 5 animals. The specimens were prepared and processed by histological technique and stained by HE (haemotoxin and eosin); randomized cuts were examined under optical microscope with 100X enlargement by two different examiners. The evaluated criteria were inflammatory and degenerative response, tissue organization, reactive and reparative dentin. In the last experimental period (28 days) of all groups, the surface (mm2) and the volume (mm3) of the reactive and reparative dentin formed were analyzed by the high-resolution micro-CT (computerized microtomography) technique. The data were statistically analyzed using the paired T-test, determining the surface and volume of the reparative dentin formed between the experimental groups. In the histological analyzes, the non-parametric Mann-Whitney test was used, comparing groups (? = 5%). BIODENTINE demonstrated a tendency to accelerate the process of pulpal regeneration, initiating the deposition of reparative dentin on the seventh day of the capping. This material had a thicker dentin compared to the other biomaterials. The MTA also demonstrated an efficiency in the formation of the dentin bridge; however, 20% of the samples did not observe the presence of reparative dentin. When adding the COP in these materials, the formation of the dentin bridge was heterogeneous and incomplete, in addition these groups contained an increased inflammatory process. The repair dentin of the Ca(OH)2 group showed a tunnel with a heterogeneous characteristic. The addition of COP to Ca(OH)2 increased dentin formation in the walls around the pulp chamber in 80% of the samples, but this dentin did not show improvement in quality. Thus, pulp cap with COP isolated or associated with Ca(OH)2, MTA and BIODENTINE did not form a complete and homogeneous dentin bridge at the site of pulp exposure.

Este estudo translacional avaliou o efeito da aplicação direta de materiais capeadores à base de óleo de copaíba sobre a polpa dentária de ratos. O biomaterial foi analisado de acordo com os processos inflamatórios, reparadores e regenerativos. Cavidades classe I foram preparadas na face oclusal dos molares superiores e inferiores de ratos da linhagem Wistar (n=120). Posteriormente, uma cavidade padronizada foi realizada com broca carbide esférica ¼. Exposições pulpares foram obtidas e após a hemostasia com algodão estéril e água destilada, foi realizado o capeamento pulpar com aplicação de biomateriais diretamente no tecido pulpar. Os biomateriais utilizados foram: COP (Óleo de Copaíba); Ca(OH)2 (hidróxido de cálcio), Ca(OH)2+COP; MTA (agregado trióxido mineral); MTA+COP; BIODENTINA (Biodentine®); BIODENTINA+COP. Todas as cavidades foram restauradas com cimento provisório. Os animais foram sacrificados após o período de 7, 14, 28 dias de acordo com os princípios de ética e experimentação animal. Vinte e um grupos foram criados a partir da combinação de tempos e materiais, cada grupo foi constituído de 5 animais. As peças foram preparadas e processadas pela técnica histológica e coradas pela HE (hemotoxilina e eosina) realizando cortes aleatórios, sendo analisados ao microscópio óptico em 100X de aumento por 2 examinadores. Os critérios avaliados foram: respostas inflamatória e degenerativa, organização tecidual, dentina reacional e reparativa. No último tempo experimental (28 dias) de todos os grupos foi analisado a superfície (mm2) e o volume (mm3) da ponte de dentina formada pela técnica da micro-CT (microtomografia computadorizada) de alta resolução. Os dados foram estatisticamente analisados utilizando o teste T pareado, determinando a superfície e volume da dentina reparadora formada entre os grupos experimentais. Nas análises histológicas foi utilizado o teste não-paramétrico de Mann-Whitney realizando comparações entre os grupos (?=5%). A BIODENTINA demonstrou uma tendência de acelerar o processo de regeneração pulpar, iniciando a deposição de dentina reparativa ao sétimo dia do capeamento. Este material apresentou uma dentina mais espessa em comparação com os outros biomateriais. O MTA também demonstrou uma eficiência na formação da ponte dentinária, entretanto em 20% das amostras não foi observada a presença de dentina reparadora. Ao acrescentar o COP nestes materiais, a formação da ponte dentinária apresentava heterogênea e incompleta, além disso esses grupos continham um processo inflamatório aumentado. A dentina reparadora do grupo de Ca(OH)2 demonstrou presença de túnel, com característica heterogênea. A adição do COP ao Ca(OH)2 aumentou a formação de dentina nas paredes ao redor da câmara pulpar em 80% das amostras, porém esta dentina não apresentava melhora na qualidade. Desta forma, o capeamento pulpar com COP isolado ou associado a Ca(OH)2, MTA e BIODENTINA não formou uma ponte de dentina completa e homogênea no local da exposição pulpar. / This translational study evaluated the effect of the direct application of copaiba oil based capping materials on the rat pulp. The biomaterial was analyzed according to inflammatory, repairing and regenerative processes. Class I cavities were prepared on the occlusal surface of the upper and lower molars of Wistar rats (n = 120). Subsequently, standardized cavities was performed with ¼ spherical carbide drill. Pulp exposures were obtained and after their hemostasis with sterile cotton and distilled water, pulp capping was done with application of biomaterials directly on the pulp tissue. The biomaterials used were: COP (Copaíba oil); Ca(OH)2 (calcium hydroxide), Ca(OH)2+COP; MTA (aggregate mineral trioxide); MTA+COP; BIODENTINE (Biodentine®); BIODENTINA+COP. All cavities were restored with temporary cement. The animals were sacrificed after the period of 7, 14, 28 days according to the principles of ethics and animal experimentation. Twenty-one groups were created from the combination of times and materials, each group consisted of 5 animals. The specimens were prepared and processed by histological technique and stained by HE (haemotoxin and eosin); randomized cuts were examined under optical microscope with 100X enlargement by two different examiners. The evaluated criteria were inflammatory and degenerative response, tissue organization, reactive and reparative dentin. In the last experimental period (28 days) of all groups, the surface (mm2) and the volume (mm3) of the reactive and reparative dentin formed were analyzed by the high-resolution micro-CT (computerized microtomography) technique. The data were statistically analyzed using the paired T-test, determining the surface and volume of the reparative dentin formed between the experimental groups. In the histological analyzes, the non-parametric Mann-Whitney test was used, comparing groups (? = 5%). BIODENTINE demonstrated a tendency to accelerate the process of pulpal regeneration, initiating the deposition of reparative dentin on the seventh day of the capping. This material had a thicker dentin compared to the other biomaterials. The MTA also demonstrated an efficiency in the formation of the dentin bridge; however, 20% of the samples did not observe the presence of reparative dentin. When adding the COP in these materials, the formation of the dentin bridge was heterogeneous and incomplete, in addition these groups contained an increased inflammatory process. The repair dentin of the Ca(OH)2 group showed a tunnel with a heterogeneous characteristic. The addition of COP to Ca(OH)2 increased dentin formation in the walls around the pulp chamber in 80% of the samples, but this dentin did not show improvement in quality. Thus, pulp cap with COP isolated or associated with Ca(OH)2, MTA and BIODENTINE did not form a complete and homogeneous dentin bridge at the site of pulp exposure.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese _ Elenara_Ferreira_ Oliveira.pdf: 694369 bytes, checksum: 410d5111d12d3fad68258a97ba292b1b (MD5) Previous issue date: 2006-10-16 / This paper assesses clinical/radiographic changes after incomplete carious dentine removal and tooth sealing. 32 teeth with deep caries lesions were studied. The treatment consisted of incomplete excavation, application of Ca (OH)2 layer, sealing for a 6-7 month period, and then restored. Standardized bitewing radiographs were taken after the temporary sealing, and at 6-7, 14-18, and 36-45 month intervals. The digitized images were analyzed: qualitatively in regard to the radiolucent zone (RZ) depth and tertiary dentine (6-7 and 36-45 months) and quantitatively in regard toradiographic density by image subtraction (6-7, 14-18, and 36-45 months). The subtractions were performed in the RZ beneath the restoration and in two control areas (CA). During the 6-7 month period, there was 1 pulp necroses and 1 pulpexposure, and at the 36-45 month interval, 3 fractures and 3 withdrawals. Nine cases showed a decrease in RZ depth in the 6-7 month period and 3 more cases, at the 36- 45 month period. Four cases displayed tertiary dentine. The radiographic density means and standard deviations were: 129.42±5.83, 127.65±4.67, and 126.86±7.03 (CA, P>0.05) and 132.96 ±7.41, 132.90±5.99, and 132.62±8.68 (RZ, P>0.05) for the 1st, 2nd, and 3rd periods. The radiographic density of the CA differed from the RZ (Tukey test, p<0.05). Interference in microbiological metabolism by partial dentine removal and by tooth sealing arrest lesion progression, suggesting that complete dentine caries removal is not essential to controlling caries progression. / Este trabalho avaliou alterações clínicas/radiográficas após a remoção incompleta da dentina cariada e selamento do dente. Trinta e dois dentes com lesões profundas de cárie foram estudados. O tratamento consistiu da escavação incompleta da dentina cariada, aplicação de uma camada de cimento de Ca(OH)2, selamento provisório por um período de 6-7 meses, e restauração. Radiografias interproximais foram feitas logo após o selamento temporário e em intervalos de 6-7, 14-18, e 36-45 meses. As imagens digitalizadas foram analisadas: qualitativamente em relação à profundidade da zona radiolúcida (ZR) e deposição de dentina terciária (6-7 e 36-45 meses) e quantitativamente, em relação à densidade radiográfica, através da subtração de imagem (6-7, 14-18, e 36-45 meses). As subtrações foram realizadas na ZR, abaixo da restauração, e em duas áreas controles (AC). Durante período de 6-7 meses houve uma necrose e uma exposição pulpar, e no intervalo de 36-45 meses, três fraturas e três perdas de pacientes. Nove casos mostraram uma diminuição da profundidade da ZR no período de 6-7 meses e mais três casos no intervalo de 36-45 meses. Em quatro casos foi observada a deposição de dentina terciária. As médias de densidade radiográfica e desvio-padrão foram: 129.42±5.83, 127.65±4.67, e 126.86±7.03 (AC, p>0.05) e 132.96±7.41, 132.90±5.99, e 132.62±8.68 (ZR, p>0.05) para o 1º, 2º e 3º períodos, respectivamente. A densidade radiográfica das AC foi diferente da ZR (teste de Tukey, p<0.05). A interferência no metabolismo microbiano promovida pela remoção parcial da dentina cariada e selamento do dente provocou a paralisação da lesão, sugerindo que a remoção completa da dentina cariada não é essencial para o controle da progressão da cárie.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Elaine Baldissera_TESE.pdf: 2456356 bytes, checksum: eaccf33a07294f70b9babaa3140cc017 (MD5) Previous issue date: 2006-07-06 / Aim Based on the great importance of the extracellular matrix (EM) in tissue development and repair, the aim of this study was to investigate the expression of their major glycoproteins, tenascin (TN) and fibronectin(FN) in the human pulp repair. Methodology Using immunohistochemistry, the expression of TN and FN was analyzed in forty-two human teeth, which were taken from a previous study. TN and FN profiles were evaluated after 7, 30, and 90 days after pulp capping with calcium hydroxide, being used three different haemostatic agents (0.9% salin solution, 5.25% sodium hypoclorite and 2% chlorhexidine digluconate) before pulp capping. Results There was no difference in the expression of TN and FN among the distinct haemostatic agents being all the time intervals taken into consideration. Both glycoproteins were found in all the pulp tissue, accomplishing the collagen fiber, and they were absent in all the mineralized tissues. Within 7 days post-treatment, it was observed a slightly more pronounced immunostaining on the exposure pulp site. Within 30 days, TN and FN demonstrated a stronger expression around the dentin barrier. TN also showed focal staining inside the reparative dentin, which was in mineralization. Within 90 days, it was observed a thin and linear expression of TN and FN delimitating the reparative dentin. In the predentin, TN showed strong immunostaining, and FN had a variable expression. Conclusions Based on the results, it may be concluded that there was no difference in the expression of TN and FN among the distinct haemostatic agents being all the time intervals taken into account. Moreover, TN and FN were present in pulp repair,confirming their active participation in this event. It might also be suggested that both glycoproteins are responsible for the odontoblastic differentiation and for the maintenance of the cell shape. It can also be concluded that TN and FN are important factors in the mineralization of the newly-formed dentin matrix. / O controle do sangramento frente a uma exposição pulpar é de fundamental importância no sucesso do capeamento direto. As soluções de hipoclorito de sódio e de gluconato de clorexidina têm sido utilizadas como agentes de limpeza e hemostasia na terapia pulpar conservadora. Alguns estudos têm indicado para o controle da hemorragia e sucesso do capeamento pulpar adesivo o hipoclorito de sódio (COX et al, 1998; COX et al., 1999). Além de ser bom agente antimicrobiano, o hipoclorito possui elevado Ph, o que implicaria na solubilização de fatores de crescimento da dentina, e conseqüentemente, na estimulação à formação de dentina (SMITH et al., 2002). No entanto, pesquisas também demonstram a atividade de dissolução tecidual do hipoclorito quando empregado a 5.25%. Porém esta é limitada às células superficiais pulpares sem efeitos adversos sobre o tecido pulpar subjacente (SENIA et al., 1971; ROSENFELD et al., 1978). Pouco se sabe a respeito da biocompatibilidade da clorexidina (THOMAS et al., 1995). Cox et al. (1998) sugeriram que esta substância poderia ser a causa de desastrosos resultados encontrados no estudo de Pameijer & Stanley (1998). Em contrapartida, a clorexidina a 0,2% utilizada no capeamento pulpar direto como agente hemostático e de limpeza, tem demonstrado boa performance em estudos em humanos (HORSTED et al., 2003) e em macacos (MURRAY et al. 2004) Diante das evidências apresentadas, pode-se observar que não há unanimidade entre os pesquisadores a respeito de qual dessas substâncias e suas respectivas concentrações seria mais efetiva na realização das terapias conservadoras vitais, especialmente no capeamento pulpar direto. Adicionalmente, as alterações na distribuição de componentes da matriz extracelular (ME) têm sido estudadas durante o desenvolvimento dentário e nos processos de reparo pulpar. As duas maiores glicoproteínas da ME, Fibronectina (FNC) e Tenascina (TNC) têm sido descritas como importantes para o estímulo e mobilidade celulares, durante a diferenciação de células odontoblastóides a partir de células multipotentes da polpa. No entanto, a participação da ME e sua interação com as reações celulares têm sido pouco exploradas e compreendidas. Desta forma, tornam-se fundamentais as investigações sobre a expressão dos componentes da 15 ME durante o processo de reparo pulpar, na tentativa de buscar melhor entendimento dos eventos de resposta deste tecido após o capeamento direto. O objetivo deste estudo é avaliar a biocompatibilidade do hipoclorito de sódio e do gluconato de clorexidina em diferentes concentrações, através de estudo in vitro de cultivo celular; a genotoxicidade dessas duas soluções, utilizando a reação de Feulgen para detecção e análise de micronúcleos e a expressão de componentes da matriz extracelular, através de estudo imunoistoquímico (técnica da estreptoavidina-biotina) em polpas humanas expostas, tratadas com os agentes hemostáticos hipoclorito de sódio a 5,25% e gluconato de clorexidina a 2%, empregados previamente ao capeamento pulpar direto. Para o ensaio de citotoxicidade do MTT será utilizada a linhagem celular NIH/3T3 (fibroblastos de rato). Este ensaio foi escolhido porque estudos prévios (COSTA, 2001; ZHANG et al., 2003) têm mostrado ser o mesmo apropriado para a avaliação da viabilidade ou citotoxicidade celulares, frente a materiais de uso odontológico. Serão testadas em diferentes tempos de exposição, as soluções de hipoclorito de sódio a 0,5%, 1%, 2,5% e 5,25% e de gluconato de clorexidina a 0,12%, 0,2%, 1% e 2%, bem como a solução salina 0,9%, que funcionará como controle negativo dos testes. Para o ensaio de genotoxicidade, será feita a análise semi-quantitativa dos micronúcleos de amostras previamente emblocadas, oriundas de 45 espécimens com polpas humanas tratadas com hipoclorito de sódio a 5,25% (n=16), gluconato de clorexidina (n=15) e