Orientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Maria Aparecida Azevedo Koike Folgueira / Banca: Claudio Kemp / Resumo: Sabe-se que o E2 e o status hormonal da paciente são importantes para a proliferação e o tratamento do câncer de mama, quanto ao T3, apesar dos estudos epidemiológicos serem ainda contraditórios em relação a sua influência no câncer de mama, estudos laboratoriais demonstram sua capacidade de induzir a sua proliferação e induzir genes que são induzidos por estrógeno. Portanto a hipótese formulada foi que os hormônios tireoidianos modulam a expressão dos mesmos genes que o estrógeno em carcinoma de mama. Para materializar a hipótese o objetivo foi comparar a expressão dos genes TGFA, TGFB1 e PGR, resultantes da ação do estrógeno, e dos genes TNFRSF9, BMP6 e THRA, resultantes da ação do hormônio tireoidiano, combinados ou não com a ação do Tamoxifem, em carcinoma de mama colocado em cultura primária. Foram selecionadas 12 pacientes do sexo feminino, menopausadas, com Carcinoma de Mama estádio grau 1 e 2 , do Hospital do Câncer de São Paulo, verificou-se a existência de disfunção tireoidiana concomitante, através das dosagens laboratoriais de T3L, T4L, TSH, TPO-AB, assim como o status hormonal em relação aos níveis estrogênicos. Fragmentos tumorais obtidos cirurgicamente foram colocados em cultura primária. Essas células foram tratadas com E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + TAM (10-6M), T3 (10-8M) + TAM (10-6M), TAM (10-6M), com posterior extração de RNA total. Foi utilizada a metodologia de PCR em Tempo Real para verificar a ação do T3 e do E2 em genes normalmente induzidos pelo E2 (PGR, TGFA e TGFB1), verificada a expressão de genes que aumentam (TNFRSF9 e THRA) e diminuem (BMP6) pela ação do T3 em seu receptor (TR) e a presença de mutações no TR. Não foram encontradas mutações envolvendo o receptor de hormônio... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It is known that E2 and the patient's hormonal status is important for the proliferation and the treatment of the breast cancer. Despite the contradictory epidemic studies of T3 and its influence in the breast cancer, laboratory studies demonstrate its capacity to induce not only its proliferation but also genes that are induced by estrogen. Therefore the hypothesis was that the thyroid hormones modulate the expression of the same genes as the estrogen in breast carcinoma. The objective was to compare the expression of the genes TGFA, TGFB1 and PGR, resultant of the estrogen action and genes TNFRSF9, BMP6 and THRA, resultant of the thyroid hormone action, combined or not with the Tamoxifen action in breast carcinoma in primary culture. 12 menopausal patients with breast carcinoma stages 1 and 2, of São Paulo Cancer Hospital were selected. The existence of concomitant thyroid dysfunction was verified through laboratory dosages of T3L, T4L, TSH, TPOAB, as well as the hormonal status in relation to the estrogen levels. Tumor fragments surgically obtained were put in primary culture. Those cells were treated with E2 (10-7M), T3 (10-8M), E2 (10-7M) + …, with subsequent extraction of total RNA. The methodology of PCR was used in Real Time to verify the action of T3 and E2 in genes usually induced by E2 (PGR, TGFA and TGFB1), verified the expression of genes which increase (TNFRSF9 and THRA) and decrease (BMP6) by the action of T3 in its receptor (TR) and the presence of mutations in TR. Mutations involving the thyroid hormone receptor were not found. Related to the genic expressions, in the ER positive patients, the treatment with T3 increased the expression of TGFA, THRA, TNFRSF9 and PGR genes significantly and reduced the expression of TGFB1 and BMP6. When... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: José Ricardo Paciência Rodrigues / Banca: Afonso Mazario / Banca: Henrique Benedito Brenelli / Banca: Cleverson Teixeira / Banca: Gilberto Uemura / Resumo: Estudos de expressão gênica têm identificado vários grupos moleculares de carcinoma de mama, com diferentes comportamentos clínico e biológico. A correlação entre "cDNA microarray" e imunoistoquímica(IQ) com marcadores para citoceratinas, Her2/neu, receptor de estrógeno(RE) e de células basais mioepiteliais (1A4, S-100 e p63), identificaram cinco grupos: (1) luminal A (RE+; Her2/neu-), (2) luminal B (RE+; Her2/neu+), (3) superexpressão de Her2/neu (RE-; Her2/neu+), (4) tipo basal (RE-; Her2/neu-; Ck 5/6 +) e (5) nenhum destes ("null"). Os de tipo luminal expressam citoceratinas de padrão luminal (Ck8/18) e os de tipo basal expressam citoceratinas 5/6 e 14 ou marcadores de células basais mioepiteliais. Avaliamos a expressão de Ck5/6, Ck8/18 e 1A4 em material de citoinclusão, comparando-a ao espécime cirúrgico. Material e Métodos: Foram selecionados 62 casos, seqüenciais, de carcinoma de mama diagnosticados por PAAF, com citoinclusão e espécime cirúrgico. Cortes de citoinclusão e do espécime cirúrgico foram imunocorados para Ck 5/6, Ck 8/18 e 1A4. Resultados e Conclusão: Os valores, em porcentagem, de sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo(VPP), valor preditivo negativo(VPN) e acurácia foram, respectivamente: Ck5/6 (77, 100, 100, 92 e 94); Ck8/18 ( 98, 66, 96, 80 e 95) e 1A4 ( 92, 96, 85, 98 e 95). Portanto, a identificação de Ck5/6, Ck8/18 e 1A4 por IQ em material de citoinclusão é método confiável, com resultados muito próximos aos obtidos no espécime cirúrgico e pode contribuir para a classificação dos carcinomas mamários de expressão luminal e basal, fornecendo informações importantes que possam orientar na escolha do tratamento, bem como na avaliação de fatores prognósticos e preditivos. A importância da obtenção de dados morfológicos e imunoistoquímicos sobre os carcinomas mamários através do material... (Rewsumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Genetic expression studies have identified many molecular groups of breast carcinoma, with different clinical and biological behavior. The correlation between cDNA microarray and immunohistochemistry (IHC) with markers for cytokeratin, Her2/neu, estrogen receptor (ER) and of basal myoepithelial cells (1A4, S-100 e p63), identified five groups: (1) luminal A (ER+; Her2/neu-), (2) luminal B (ER+; Her2/neu+), (3) overexpression of Her2/neu (ER- ; Her2/neu+), (4) basal-like (ER- ; Her2/neu-; Ck 5/6 +) and (5) none of them (null). The luminal-like express cytokeratines of luminal pattern (Ck8/18) and the basal-like express cytokeratines 5/6 and 14 or markers of myoepithelial basal cells. We have evaluated the expression of Ck5/6, Ck8/18 and 1A4 in cell block comparing it to the surgical specimen. Material and Methods: 43 62 cases have been selected, sequencial, of breast carcinoma diagnosed through fine needle aspiration (FNA), with cell block and surgical specimen. Cuts of cell block and from the surgical specimen were immunostained for Ck 5/6, Ck 8/18 and 1A4. The value, in percentage, of sensibility, specificity, positive predictive value, negative predictive value, and accuracy were respectively: Ck5/6 (77, 100, 100, 92 e 94); Ck8/18 (98, 66, 96, 80 e 95) e 1A4 ( 92, 96, 85, 98 e 95). Therefore, the identification of CK5/6, 8/18 and 1A4 for IHC in cell block is a reliable method, with results very close to the ones obtained in the surgical specimen, and it can contribute to the sub classification of the breast carcinomas of luminal and basal expression, providing important information, which can orientate the treatment... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O carcinoma medular de tireóide familiar (CMTF) é uma doença autossômica dominante relacionada a mutações do proto-oncogene RET, que ocorre principalmente nas regiões cisteínas da proteína RET dependentes dos códons 10 e 11. Responde por 5 a 15% dos casos de CMT hereditários. Para caracterizar o CMT de natureza familiar, este deve estar presente em pelo menos 4 indivíduos de uma mesma família. O presente trabalho objetivou o estudo clínico-genético de uma família portadora de carcinoma medular de tireóide. Esta família consiste de 25 indivíduos (13 homens e 2 mulheres) distribuídos em três gerações. Destes, seis apresentam a doença ativa: um homem da 1ª geração e dois homens e três mulheres da 2ª geração. Nenhum membro da 3ª geração desenvolveu a doença até agora. Foram coletadas amostras de sangue periférico de 19 desses indivíduos. Nestas amostras foram realizadas amplificações dos segmentos gênicos de interesse pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) e os respectivos seqüenciamentos. Até o momento, detectou-se em dois indivíduos, mutação no códon 10 (cys611tyr). Esta mutação tem uma incidência baixa (1-3%) nos casos de CMTF, mas, no entanto, implica em alto risco de agressividade do tumor. Além disso, detectou-se a presença de 3 polimorfismos (G691S, L769L, S904S), nos éxons 11, 13 e 15. Enquanto que a mutação cys611tyr está relacionada ao desenvolvimento do CMTF, sua relação com os polimorfismos encontrados e o papel desta relação com esses tumores não está esclarecida. A realização do rastreamento genético das mutações no RET deve ser considerada pela sua praticidade, custo-benefício e sensibilidade e especificidade do método. Além disso, a determinação de mutações nos familiares com CMT implicará em indicação cirúrgica preventiva e aconselhamento genético familiar. / Abstract: Familial medullary thyroid carcinoma (FMTC) is an autosomic dominant disorder related to mutations in the RET proto-oncogene. These mutation occur mostly in the extracellular rich cistein domains of the RET protein, related to the codons 10 and 11. The FMTC represents 5-15% of hereditary medullary thyroid carcinoma (MTC). To characterize MTC of familial origin, at least four members of a family must be affected. The present study focused upon clinical-genetics characteristics of a 25-member family (13 men and 12 women) distributed through three generations. Six of them had MTC: one first generation man, two men and three women from the second generation. Up until now, no member from the third generation has developed the disease. We studied 19 of these individuals for mutations in the RET protooncogene. A cys611tyr mutation was found in two of the kindreds. This mutation has a low incidence (1-3%) in FMTC, but implies in high aggressiveness risk. Moreover, we found the polymorphisms G691S, L769L, S904S in the exons 11, 13 and 15, respectively. While cys611tyr mutation is responsible for cases of FMTC, its relationship to these polymorphisms and the consequences of this interrelation to tumor development is still unknown. The screening for RET proto-oncogene mutations in relatives of MTC patients must be considered for its practicability, low cost, high specificity and sensibility. Besides, the determination of mutations in FMTC patients' kindred will conduct them to prophylactic surgery and familial counseling. / Orientador: Célia Regina Nogueira / Coorientador: Denise Perone / Banca: Glaúcia Mozeto / Banca: Laura Ward / Doutor

Orientador: Glauco Issamu Miyahara / Coorientador: José Fernando Garcia / Coorientador: Styna Marita Syrjänen / Banca: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Eder Ricardo Biasoli / Banca: Alan Roger dos Santos Silva / Banca: Ricardo Della Coletta / Resumo: O papilomavirus humano (HPV) tem sido relacionado com a etiologia dos carcinomas epidermóides de cabeça e pescoço, em análise de tecidos cerca de 60% destes carcinomas podem ser HPV positivos. O objetivo deste trabalho foi analisar a presença do HPV em material genético obtidos de tecidos, secreção salivar e sangue de pacientes portadores de carcinoma epidermóide (CEC) de orofaringe e controles e a correlação da presença viral com as váriáveis sexo, idade, tabagismo, etilismo e perfil anatomopatologico do tumor. Foi realizada uma análise do material genético de 46 pacientes com diagnóstico de CEC de orofaringe e 40 pacientes sem carcinoma. A extração do DNA dos espécimes foi realizada utilizando o kit de extração de DNA QuiAMP. O DNA isolado foi submetido a PCR para beta-globina para confirmar a presença e integridade do DNA, em seguida, foram realizadas novas reações para detecção do DNA do HPV. Para análise estatística foram empregados o teste Qui-quadrado e teste exato de Fisher. A idade média de idade foi de 60 anos para os casos e 58,2 anos para os controles e a mediana foi de 59 e 56 anos, respectivamente. Os resultados obtidos com a metodologia descrita permitiram concluir que não houve diferenças estatisticamente significativas na análise das variáveis em relação à presença do papilomavírus humano nas amostras de tecidos biológicos dos pacientes estudados / Abstract: Human papillomavirus (HPV) it has been related with head and neck SCC etiology, about 60% of these carcinomas tissues can be HPV positive. The aim of this study was to analyze the HPV presence in genetic material obtained from tissues, salivary secretion and blood of oropharyngeal SCC patients and controls and correlate the virus presence with variables: sex, age, smoking, alcoholism and pathological profile of the tumours.It was made molecular and statistical analysis of genetic material of 46 oral and oropharyngeal SCC patients and 40 controls patients without carcinoma. The DNA extraction of all specimens was accomplished using the DNA extraction kit QuiAMP. The isolated DNA was submitted PCR for beta-globin to confirm the DNA presence and integrity, after new reactions it was accomplished for HPV DNA detection. Chi-square test and Fisher exact test were used for statistical analysis. The average age was 60 years for cases and 58.2 years for controls and the median age was 59 and 56 years respectively. The results obtained with the described methodology shows there was no statistically significant differences between HPV presence in samples of biological tissues and the analyzed variables / Doutor

Orientador: Ulisses Frederigue Júnior / Resumo: O grau nuclear é considerado um dos principais fatores prognósticos do carcinoma invasivo de ductos mamários, porém não é frequentemente utilizado em Punção aspirativa por agulha fina (PAAF) na rotina diária de muitos patologistas. Para avaliar a concordância citohistológica da graduação nuclear foi realizado estudo retrospectivo de 90 casos de carcinoma ductal invasivo da mama, inicialmente diagnosticados por PAAF e com subsequente confirmação histológica. As leituras dos preparados citológicos foram realizadas em esfregaços corados pela Hematoxilina-Eosina por dois patologistas independentemente, utilizandose a graduação nuclear de Black modificada por Fisher (BM) e simplificada por Cajulis (BS) e posteriormente confrontadas com a graduação de Bloom&Richardson na histologia. O índice de concordância com a histologia variou de 64,4% a 68,8% na classificação de BM e de 86,6% a 88,8% na classificação de BS. Na graduação pelo sistema de Black modificado, a reprodutibilidade intra-observador foi de 68,8%, enquanto que a reprodutibilidade inter-observador variou de 56,6% a 68,8%. No sistema de Black simplificado, a reprodutibilidade intraobservador foi de 93,3%, enquanto que a reprodutibilidade interobservador variou de 82,2% a 84,4%. Constatou-se que a graduação nuclear na PAAF utilizando o sistema de Black simplificado (BS) teve maior concordância... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Nuclear grading is one of the major prognostic factors of invasive ductal carcinoma of the breast. However, many pathologists do not routinely use it in fine-needle aspiration biopsy (FNAB). A retrospective study was performed on 90 cases of invasive breast ductal carcinoma, diagnosed by FNAB and confirmed by histology, to evaluate the cyto-histological agreement of nuclear grading. Cytological readings were made from smears stained with Hematoxilin-Eosin by two independent pathologists, using Black's nuclear grading a) modified by Fisher (BM) and b) simplified by Cajulis (BS). This was then compared with Bloom & Richardson's histological grade. The histological agreement rate was between 64.4% and 68.8% for BM classification and between 86.6% and 88.8% for BS. Grading using BM classification showed intraand inter-observer reproducibility rates of 68.8% and from 56.6% to 68.8% respectively, while BS showed 93.3% and from 82.2% to 84.4% respectively. Nuclear grading in FNAB using Black's simplified system (BS) gave... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Ana Sueli Rodrigues Cavalcante / Banca: Marília Trierveiler Martins / Banca: Janete Dias Almeida / Resumo: A queilite actínica (QA) é uma lesão multifocal do vermelhão do lábio com potencial de malignização para carcinoma epidermóide (CE). O principal fator etiológico envolvido nestas doenças é a exposição excessiva ou em longo prazo à radiação ultravioleta (UV) do sol. Além dos danos diretos aos tecidos do lábio, a radiação UV induz mastócitos (MCs) a liberarem substâncias que participam do processo de imunossupressão permitindo o desenvolvimento neoplásico. Estas células também são associadas a um pior prognóstico e favorecimento a metástase de diversas neoplasias. O objetivo deste trabalho foi analisar a densidade de MCs a fim de melhorar o entendimento da patogenia da QA e o possível mecanismo de sua progressão para o CE. Estudou-se 66 casos de QA, com diferentes graus de atipia epitelial, 57 de CE e 28 casos de mucosa de lábio com lesão benigna não relacionada à exposição solar (grupo controle), diagnosticados clínica e histologicamente, no Departamento de Biociências e Diagnóstico Bucal da FOSJC-UNESP. A amostra foi corada histoquimicamente com hematoxilina-eosina e azul de toluidina e imunoistoquimicamente com anticorpo anti-triptase. Em todos os casos a contagem de MCs foi realizada em microscópio de luz, com aumento final de 400x, em três campos com área de 0,04 mm2 cada. A densidade de MCs no CE, QA e grupo controle foi de 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 ( triptase) e 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 ( azul de toluidina) cells/mm2 , respectivamente. Os dados foram analisados estatisticamente pelos testes de Kruskal-wallis, Wilcoxon e Dunn, adotando-se nível de significância de 5%. Houve diferença estatisticamente significante na densidade de MCs entre os três grupos estudados (p=0,0001). Concluiu-se que os MCs participam das alterações que ocorrem na matriz extra-celular da QA, o que pode ser um indício do favorecimento à malignização da QA para CE. / Abstract: Actinic cheilitis (AC) is a multifocal lesion of lip vermillion with malignant potential to squamous cell carcinoma (SCC). The main etiology involved in this disease is excessive or long exposure to ultraviolet radiation (UV) of sunlight. UV radiation damages lip tissues, furthermore it is able to activate mast cells (MCs) that participate of immunossupression process, contributing to tumour development. These cells are associated with a worst prognosis and contribute to tumour metastasis. The aim of this study was perform an assessment of MCs density which can improve the knowledge of AC pathogenesis and the possible mechanism of its progression to SCC. Sixty six cases of AC with different levels of epithelial atypia, fifty seven cases of SCC and twenty eight cases of lip mucosa with benign lesion non related to sunlight exposure (Control group) were studied in Department of Biosciences and Oral Diagnosis of São Paulo State University/UNESP. Samples were stained by histochemistry with hematoxylin/eosin, toluidine blue and, by immunohistochemistry with antitryptase. Quantitative analysis was done in all cases by light microscopy (magnification x400), in three fields with 0,04 mm2 each one. Mast cell density in SCC, AC and control group was 36,91 ± 17,43; 22,17 ± 11,49; 8,86 ± 3,98 cells/mm2 (triptase) and 22,71 ± 11,48; 13,30 ± 6,08; 7,29 ± 3,22 cells/mm2 (toluidine blue), respectively. Data was analyzed by Kruskal-wallis, Wilcoxon and Dunn's tests, p-values of < 0,05. There was statistically significant difference in mast cell density between the experimental and control groups (p=0,0001). This study concluded that mast cells contribute to changes in extracelular matrix in AC and may be used as indicators for disease progression in lip carcinogenesis. / Mestre

Resumo: Foram selecionados 62 casos de carcinoma de mama, diagnosticados por punção aspirativa por agulha fina (PAAF), com confirmação pelo espécime cirúrgico. Citoinclusão e espécime cirúrgico foram submetidos à reação imunoistoquímica (IQ) para receptor de estrógeno (RE), de progesterona (RP) e proteína Her-2/neu. Consideraram-se positivos para RE e RP, casos com 1% ou mais de células coradas. Positividade para Her-2/neu foi avaliada numa escala de 0 a 3+. O índice de concordância entre citoinclusão e espécime cirúrgico variou de 90 a 94%. Sensibilidade, especificidade, valores preditivo positivo (VPP) e negativo (VPN) e acurácia da citoinclusão na pesquisa para os RE e RP e proteína Her-2/neu (3+) foram respectivamente: RE (92,7%; 85,7%; 92,7%; 85,7% e 90,3%), RP (92,7%; 94,7%; 97,4%; 87,0% e 93,5%) e Her-2/neu (70,0%; 100,0%; 100,0%; 94,5% e 95,2%). A citoinclusão apresenta excelente correlação com o espécime cirúrgico na pesquisa por IQ dos receptores hormonais e da proteína Her-2/neu. / Abstract: It was selected 62 cases of breast carcinoma, diagnosed by fine needle aspiration (FNA), with confirmation by surgical specimen. Cell-block and surgical specimen were submitted to immunohistochemistry (IHC) reaction, for estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and Her-2/neu protein. Cases with 1% or more cells stained were considered positive for ER and PR. Her-2/neu Positivity was evaluated by a score from 0 to 3+. The concordance index between cell-block and surgical specimen had a variation of 90 to 94%. Sensibility, specificity, predictive positive and negative values and accuracy for ER, PR and Her-2/neu protein, was respectively: ER (92,7%; 85,7%; 92,7%; 85,7% and 90,3%), PR (92,7%; 94,7%; 97,4%; 87,0% and 93,5%) and Her- 2/neu (70,0%; 100,0%; 100,0%; 94,5% and 95,2%). Cell-block shows excellent correlation with surgical specimen in assessment of hormonal receptors and Her-2/neu protein, by IHC. / Orientador: Rosa Marlene Viero / Coorientador: Cléverson Teixeira Soares / Banca: Rosa Marlene Viero / Banca: Gilberto Uemura / Banca: Ulisses Frederigue Junior / Mestre

Orientador: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Katia Ramos Moreira Leite / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Paulo Peitl Júnior / Resumo: Os agentes químicos utilizados para o tratamento do câncer ativam vias de sinalização que levam ao bloqueio ou retardo no ciclo celular, ativação ou desativação de mecanismos de reparo do DNA e apoptose. Entretanto, os mecanismos moleculares responsáveis por tais atividades ainda não foram completamente elucidados. Nesse contexto, os estudos de expressão gênica tornaram-se ferramentas importantes para a obtenção de informações que podem contribuir para o entendimento das respostas celulares frente à exposição a agentes neoplásicos e os mecanismos envolvidos na gênese e regressão de neoplasias. Em relação ao câncer de bexiga, a combinação de cisplatina/gencitabina é considerada como protocolo quimioterapêutico padrão. Entretanto, o mecanismo exato de ação dessas drogas ainda não foi completamente elucidado, principalmente no que diz respeito ao status do gene TP53, uma das principais alterações encontradas em câncer de bexiga. Com base nessas premissas, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da cisplatina e da gencitabina sobre o índice apoptótico, ciclo celular e padrão de expressão gênica, em 3 linhagens de células de carcinoma transicional de bexiga (RT4, TP53 selvagem, grau 1; 5637, TP53 mutado, grau 2; T24, TP53 mutado, grau 3). Para avaliar tais respostas celulares foram utilizados os ensaios de citotoxicidade, sobrevivência celular e clonogência, análise do ciclo celular e apoptose por citometria de fluxo, e análise da expressão gênica usando microarranjos de cDNA. Os resultados mostraram: 1) que as células TP53 selvagem (RT4) foram mais sensíveis à apoptose do que células TP53 mutadas quando tratadas com cisplatina e gencitabina, ou com a combinação de ambas; 2) parada permanente do ciclo em G1, nas três linhagens celulares, após tratamento com a gencitabina e com a combinação cisplatina/gencitabina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: currently, the combination cisplatin/gemcitabine is considered a (second) standard chemotherapeutical protocol for bladder cancer. However, the mechanism by which these drugs act on tumor cells is not completely understood. Therefore, the aim of the present was to investigate the effects of these two antineoplastic drugs on the apoptotic index and cell cycle distribution in urinary bladder transitional cell carcinoma (TCC) cell lines with different TP53 status (RT4, with wild type TP53; 5637 and T24, with mutated TP53). Methods: cytotoxicity, cell survival and clonogenic survival assays, and flow citometry analysis for cell cycle and apoptosis cells were done in the cell lines treated with different concentrations of cisplatin and gemcitabine. Results: wild type TP53 cells were more sensitive to apoptosis than mutated TP53 cells when treated with cisplatin or gemcitabine; permanent G1 cell-cycle arrest was observed in the three cell lines after treatment with gemcitabine or with the combination of both; significant cell death was detected in all the cell lines after treatments with cisplatin or gemcitabine. However, when drugs were given in combinations, lower percentage of survival occurred independent on TP53 status. Conclusions: it was demonstrated that the combination of cisplatin and gemcitabine can be effective despite of tumor-associated TP53 mutations. Thus, the synergism between low concentrations of cisplatin and gemcitabine may have clinical relevance, since the use of high concentrations of cisplatin is toxic to the whole organism. / Doutor

Orientador: Mário Roberto Hatayde / Banca: Mirela Tinucci Costa / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: Este estudo apresenta uma análise comparativa da taxa de proliferação celular e da expressão da enzima cicloxigenase-2 na pele de cães saudáveis e acometidos por ceratose actínica e carcinoma de células escamosas cutâneo (CCE). O objetivo foi avaliar o prognóstico destes cães utilizando-se a imunorreatividade a COX-2 e o índice de proliferação celular. Foram analisados 20 amostras de pele de cães, sendo 10 casos de ceratose actínica (G1) e 10 de CCE cutâneo (G2). Os dados epidemiológicos e as características clínicas e histopatológicas foram estudados. A taxa de proliferação celular foi avaliada por meio de índice mitótico (IM) e imunomarcação para MIB-1. A expressão da enzima cicloxigenase foi pesquisada por exame imunoistoquímico. Os cães da raça Pit Bull foram os mais acometidos em G1 e G2 e a média de idade foi 4,3 (±0,8) anos e 5,6 (±1,7) anos, respectivamente. Os valores médios do índice mitótico foram 0,4; 4,6 (±3,6) e 4,9 (±2,6) em G0, G1 e G2, respectivamente. Não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0. Houve imunomarcação para COX-2 em G1 e G2, a média dos escores foi 8,16 (±3,51) e 8,56 (±1,03), respectivamente. Não houve imunomarcação nas amostras de G0 e não houve diferença estatística entre G1 e G2, mas sim em relação ao G0 (p>0,05). A média da porcentagem de células imunomarcadas para Ki-67 em G0, G1 e G2 foi 0,4; 15,77 (± 8,81) e 17,71 (± 12,21), respectivamente. Não houve diferença entre G1 e G2, mas sim destes em relação ao G0 (p>0,05). A ceratose actínica se comportou como o CCE cutâneo, revelando não ser uma lesão pré-neoplásica, mas sim o estágio inicial da neoplasia propriamente dita. / Abstract: This research presents a comparative analysis of cell proliferation index and cyclooxigenase-2 expression in skin of healthy and with actinic keratosis and cutaneous squamous cell carcinoma (SCC) dogs. The goal was to evaluate the prognosis of these dogs by COX-2 immunorreactivity and cell proliferation index. Skin sections from 20 dogs were evaluated, which 10 were actinic keratosis (G1) and 10 cutaneous SCC (G2). Epidemiological information, clinical and histopathological aspects were evaluated. Cell proliferation index hás been stimated by mitotic index (MI) and MIB-1 staining. Cyclooxigenase-2 expression has been analyzed by immunohistochemistry study. Pit Bull dogs were the main affected in G1 and G2 and the mean age was 4,3 (±0,8) years old and 5,6 (±1,7) years old, relatively. MI mean values were 0,4; 4,6 (±3,6) and 4,9 (±2,6) in G0, G1 and G2, relatively. There was no statistical difference between G1 and G2, but it did with G0. There was positive staining for COX-2 in G1 and G2, the score mean value was 8,16 (±3,51) and 8,56 (±1,03), relatively. There was no positive staining in G0 samples and neither statistical difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). The positive cells for Ki-67 mean percentage in G0, G1 and G2 was 0,4; 15,77 (± 8,81) and 17,71 (± 12,21), relatively. There was no difference between G1 and G2, but it did with G0 (p>0,05). Actinic keratosis behavior was similar to cutaneous SSC, demonstrating that it is not a pre-neoplastic disease, but, in fact, the initial of neoplasm. / Mestre

Orientador: Ana Maria Pires Soubhia / Resumo: Realizamos um estudo clínico, histopatológico e histoquímico utilizando a técnica de coloração pela prata, para evidenciação das regiões organizadoras de nucléolos (Agnor). Foram analisados 81 casos de biópsias incisionais de carcinoma espinocelular de boca de regiões diferentes, ou seja, lábio, língua, assoalho, palato e retromolar. Foram observados e analisados os dados com relação a sexo, cor, idade, grau de diferenciação, estadiamento e hábitos de fumar e beber. Esses dados analisados entre si revelaram que a maior incidência de carcinoma espinoceluar em nossos estudos foi de carcinoma de assoalho bucal em torno de 30% contrariando a literatura que se refere à língua como local de maior freqüência; os outros dados analisados foram todos concordantes com a literatura de vários autores. A análise quantitativa e morfométrica das Nors foram realizadas por um sistema computadorizado, Imagelab 2000 que analisa as imagens capturadas de um microscópio por uma câmera e transfere para o sistema computadorizado, onde são analisadas. Usando esse sistema analisamos lâminas coradas pela técnica Agnor para verificação do número de Nors, área das Nors, número de Núcleos e área dos Núcleos das células presentes em tecidos removidos por biópsia incisional de boca, em áreas diferentes. Pelos resultados obtidos na análise histoquímica podemos verificar que existe uma diferença significativa na proporção do número de Nors/Núcleo para as diferentes áreas analisadas, mas que são coerentes com a literatura em carcionoma bem diferenciado e moderadamente diferenciado. Notamos ainda diferenças significativas entre as áreas das Nors, área dos Núcleos e números dos Núcleos entre as regiões diferentes analisadas e não conclusiva, portanto necessitando de outros estudos com a técnica de Agnor para aprimoramento da mesma, elucidação de resultados e uso mais freqüente em laboratórios de Anatomia Patológica. / Abstract: We have carried out a clinical, histopathological and histochemical study using silver staining technique, to evidence the nucleolar organizing regions (Agnor). Eighty-one cases of incisional biopsies of oral squamous cell carcinoma from different regions of de mouth (lip, tongue, floor, palate and retromolar) have been observed and analyzed with regard to sex, race, age, degree of differentiation, staging and habit to smoke and to drink. The compared analyses of the data in our study indicated a greater incidence of oral floor cell carcinoma (about 30%) in disagreement with the current literature with mentions the tongue as the local of greater occurrence. The other analyzed data were all in agreement with the literature. The quantitative and morphometric analyses of the Nors have been carried out by a computerized system, Imagelab 2000 that analyzes the captured images of a microscope for a camera and transfers to the computerized system, where are analyzed. Using this system we have analyzed slides stained by the Agnor technique for verification of the number of Nors, area of the Nors, number of nuclei and area of the nuclei of the cells present in tissue removed by incisional biopsy of mouth in different areas. By the results gotten in the histochemical analysis we can verify that there is a significant difference in the ratio of the number of Nors/Nuclei for the different analyzed areas, but they are coherent with the literature for well differentiated and moderately differentiated carcinoma. We notice too significant differences between the areas of the Nors, area and de numbers of the nuclei among the different regions analyzed and not conclusive, therefore needing other studies with the Agnor technique for better interpretation of the results. / Doutor