Orientador: Carlos Roberto Daleck / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Maria Denise Lopes / Resumo: A correta orientação do Médico Veterinário, aos proprietários de cães, usados com finalidades reprodutivas, submetidas à quimioterapia com cisplatina, é importante na medida que este agente citostático age nas células em constante divisão, podendo ser citotóxicos para as células germinativas testiculares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade espermática através do espermograma de cães que receberam cisplatina em diferentes momentos de análise espermática. A dose utilizada foi de 70 mg/mø, em intervalos de 21 dias, totalizando 4 infusões. Os cães foram divididos em dois grupos de 4 animais cada, sendo que um dos grupos recebeu a quimioterapia e o protocolo de diurese para proteção renal, já o grupo controle não recebeu a cisplatina, estando sujeito apenas aos fatores ambientais. Os resultados obtidos demonstraram que a cisplatina influenciou na qualidade espermática de cães, pois elevou as patologias maiores e totais acima do aceitável para cães aptos a reprodução. Portanto, infere-se que este citostático possa acarretar alterações morfofuncionais nos túbulos seminíferos e conduto epididimário. / Abstract: The correct veterinary's orientation for male dogs' owners used for reproduction goals, undergone cisplatin administration, is important because of this cistostatic act in cell with frequently proliferation, and could to cause germ cell injury. The objections of this experiment was to analysis the sperm quality through dogs' spermogram that received cisplatin's infusions. The dose used was 70 mg/mø in 21 days periods, with 4 infusion in total. The dogs were divided in 2 groups with 4 animal each one. One of the groups received all the diuresys protocol (to protect the kidney) and the citostatic. And the other control group just didn't receive the cisplatin infusion to know the real action of cisplatin effects without environmental stresses. The results show that cisplatin influence at the sperm quality in the dogs, because it elevated the major and total defects above that would be acceptable for competent dog to reproduct. It could deduct that cisplatin cause phisiologic alteration in the testis and epididymis. / Mestre

Resumo: A neuropatia induzida por drogas quimioterápicas é uma complicação no tratamento do câncer e outras doenças por ser freqüentemente dolorosa e requerer a interrupção da terapia. O antitumoral cisplatina é comumente usado contra muitas formas de câncer há aproximadamente 40 anos. Entretanto, sua aplicação é associada a muitos efeitos tóxicos, como neurotoxicidade, nefrotoxicidade, perda da audição e vômitos. Estes efeitos adversos têm levado ao desenvolvimento de agentes específicos para amenizar a toxicidade do fármaco. Alguns estudos sugerem que a administração de antioxidantes é capaz de reduzir os danos e proteger os tecidos. Dessa forma, os carotenóides são mais uma opção a ser avaliada, pois são considerados eficazes agentes antioxidantes. O urucum é uma fonte natural de corantes vermelhos e além da bixina (fração lipossolúvel do extrato), estão presentes nas suas sementes, outros carotenóides, como a norbixina, o bcaroteno, a criptoxantina, a luteína e a zeaxantina. Neste estudo, foi avaliada a genotoxicidade e a antigenotoxicidade do urucum e da bixina sobre a toxicidade induzida pelo antitumoral cisplatina em culturas de células PC12. A citotoxicidade foi determinada pelo método do MTT, a frequência de danos cromossômicos pelo Teste do Micronúcleo e a extensão de danos primários ao DNA pelo Ensaio do Cometa. O urucum e a bixina foram avaliados preliminarmente quanto a sua genotoxicidade. O urucum nas concentrações 0,2, 0,5 e 1,0 mg/mL e a bixina nas concentrações 0,05, 0,08 e 0,10 mg/mL não foram citotóxicos e nem genotóxicos às células PC12. Assim, essas concentrações foram utilizadas nos experimentos para verificar a proteção do urucum e da bixina contra os danos induzidos pela cisplatina. Embora o efeito protetor do urucum e da bixina não tenha sido evidente nos resultados obtidos pelo Ensaio do Cometa, eles se mostraram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The neuropathy induced by chemotherapeutic drugs is a complication in the treatment of cancer and other diseases, because it is often painful and requires discontinuation of the therapy. Cisplatin has been commonly used against many forms of cancer for approximately 40 years. However, its application is associated with many toxic effects such as neurotoxicity, nephrotoxicity, hearing loss and vomiting. These adverse effects have led to the development of specific agents to lessen the toxicity of the drug. Some studies have suggested that the administration of antioxidants is able to reduce the damage and protect the tissues. Thus, the carotenoids are one more option to be evaluated, because they are considered to be effective antioxidants. Annatto is a natural source of red dyes and pigments and in addition to bixin (liposoluble fraction of the extract), other carotenoids are present in its seeds, such as norbixin, B-carotene, cryptoxanthin, lutein and zeaxanthin. In the present study, the genotoxicity and antigenotoxicity of annatto and bixin on the cisplatin induced-toxicity in PC12 cell cultures was assessed. Cytotoxicity was determined by the MTT assay, chromosomal damage by the Micronucleus test and the extent of primary damage to the DNA by the Comet assay. Annatto and bixin were first assessed with respect to their genotoxicity. Annatto concentrations of 0.2, 0.5 and 1.0 mg/ml and bixin concentrations of 0.05, 0.08 and 0.10 mg/ml were neither cytotoxic nor genotoxic to the PC12 cells. Thus, these concentrations were used in experiments to verify the protective effect of annatto and bixin against damage induced by cisplatin. Although the protective effect of annatto and bixin was not evident in the results obtained by the Comet assay, effective inhibition of the chromosomal damage (Micronucleus test) induced by cisplatin was shown. Annatto and bixin protected... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria de Lourdes Pires Bianchi / Coorientador: Antonio Cardozo dos Santos / Banca: Alessandro de Oliveira Rios / Banca: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: João Bosco Faria / Banca: Cecilia Rodrigues Silva / Doutor

Orientador: Carlos Roberto Daleck / Banca: José Jurandir Fagliari / Banca: Duvaldo Eurides / Resumo: A cisplatina é um fármaco antineoplásico utilizado como adjuvante no tratamento de diversas neoplasias. Neste estudo foram avaliados o hemograma e os teores de sódio, potássio, magnésio, cálcio e fósforo do soro sanguíneo de cães submetidos à terapia com cisplatina. Foram utilizados oito cães, machos, sem raça definida, com 10 a 15 kg de peso, clinicamente sadios. Os cães foram distribuídos em dois grupos, contendo 4 animais cada, sendo que os animais do grupo 1 receberam cisplatina e aqueles do grupo 2 não receberam cisplatina. Os cães do grupo 1 receberam quimioterapia e protocolo de diurese para proteção renal, já o grupo controle 2 não recebeu a cisplatina, estando sujeito apenas aos fatores ambientais. Os animais do grupo 1 foram submetidos a quatro sessões de quimioterapia com cisplatina na dose de 70mg/mø, administrada por via intravenosa, durante 20 minutos, no intervalo de 21 dias. Antes da administração da cisplatina, realizou-se fluidoterapia com solução fisiológica a 0,9% na dose de 25mL/kg/hora, por via intravenosa, durante duas horas, e depois por mais uma hora. Todos os animais receberam metoclopramida na dose de 2mg/kg, por via intravenosa, 15 minutos antes da administração da cisplatina e furosemida na dose de 2 mg/kg, por via intravenosa, 5 minutos após administração de metoclopramida. As amostras foram processadas e analisadas antes de cada sessão de quimioterapia. Os resultados mostraram que não houve diferença significativa entre os grupos para as contagens de hemácias, concentração de hemoglobina, hematócrito e contagem de leucócitos, mesmo assim as concentrações séricas de eletrólitos mantiveram-se dentro dos padrões da normalidade. Os resultados obtidos podem ser indicativos de que o protocolo empregado para o grupo 1 se mostrou efetivo para manter as características do hemograma e a concentração sérica dos eletrólitos. / Abstract: The cisplatin is an antineoplasic drug used like adjunct treatment of various neoplasms. In this study, one evaluated the hemogram and sodium, potassium, magnesium, calcium and phosphorus levels in the dogs' blood under administration of cisplatin. One used 8 male dogs, with no definite race, weighing from 10 to 15 kilograms, and clinically healthy. The dogs were divided into two groups of 4 animals each, being group 1 treated with cisplatin and group 2 with no cisplatin. Group 1 received chemotherapy and the diurese protocol for kidney protection, group 2 did not receive cisplatin, being exposed only to the environmental factors. The animals from group 1 were submitted to four chemotherapy sessions with cisplatin 70mg/m2 administered intravenously for 20 minutes, in a 21 days interval before the cisplatin administration, one carried out a fluidotherapy with physiologic solution 0,9% on a dosage of 25mg/kg/hour intravenously during 2 hours, and posteriorly for one more hour. All the animals received methoclopramid intravenously on a dosage of 2mg/kg, 15 minutes before the cisplatin and furosemide administration on a 2mg/kg dosage, 5 minutes before the cisplatin infusion. The evaluation of the hemogram and the electrolytes levels above mentioned were done before each chemotherapy session. The results demonstrate that there were no significant differences among the groups for red blood cells counting, hemoglobin concentration, hematocrit and leucocytes counting, but still, the electrolytes seric concentration maintained itself in a normal standard. The results obtained may indicate that the protocol employed for group 1 showed efficiency to maintain the characteristics of the hemogram and the electrolytes seric concentration. / Mestre

Orientador: Daisy Maria Fávero Salvadori / Banca: Maria Inês de Moura Campos Pardini / Banca: Katia Ramos Moreira Leite / Banca: Daniel Araki Ribeiro / Banca: Paulo Peitl Júnior / Resumo: Os agentes químicos utilizados para o tratamento do câncer ativam vias de sinalização que levam ao bloqueio ou retardo no ciclo celular, ativação ou desativação de mecanismos de reparo do DNA e apoptose. Entretanto, os mecanismos moleculares responsáveis por tais atividades ainda não foram completamente elucidados. Nesse contexto, os estudos de expressão gênica tornaram-se ferramentas importantes para a obtenção de informações que podem contribuir para o entendimento das respostas celulares frente à exposição a agentes neoplásicos e os mecanismos envolvidos na gênese e regressão de neoplasias. Em relação ao câncer de bexiga, a combinação de cisplatina/gencitabina é considerada como protocolo quimioterapêutico padrão. Entretanto, o mecanismo exato de ação dessas drogas ainda não foi completamente elucidado, principalmente no que diz respeito ao status do gene TP53, uma das principais alterações encontradas em câncer de bexiga. Com base nessas premissas, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos da cisplatina e da gencitabina sobre o índice apoptótico, ciclo celular e padrão de expressão gênica, em 3 linhagens de células de carcinoma transicional de bexiga (RT4, TP53 selvagem, grau 1; 5637, TP53 mutado, grau 2; T24, TP53 mutado, grau 3). Para avaliar tais respostas celulares foram utilizados os ensaios de citotoxicidade, sobrevivência celular e clonogência, análise do ciclo celular e apoptose por citometria de fluxo, e análise da expressão gênica usando microarranjos de cDNA. Os resultados mostraram: 1) que as células TP53 selvagem (RT4) foram mais sensíveis à apoptose do que células TP53 mutadas quando tratadas com cisplatina e gencitabina, ou com a combinação de ambas; 2) parada permanente do ciclo em G1, nas três linhagens celulares, após tratamento com a gencitabina e com a combinação cisplatina/gencitabina... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: currently, the combination cisplatin/gemcitabine is considered a (second) standard chemotherapeutical protocol for bladder cancer. However, the mechanism by which these drugs act on tumor cells is not completely understood. Therefore, the aim of the present was to investigate the effects of these two antineoplastic drugs on the apoptotic index and cell cycle distribution in urinary bladder transitional cell carcinoma (TCC) cell lines with different TP53 status (RT4, with wild type TP53; 5637 and T24, with mutated TP53). Methods: cytotoxicity, cell survival and clonogenic survival assays, and flow citometry analysis for cell cycle and apoptosis cells were done in the cell lines treated with different concentrations of cisplatin and gemcitabine. Results: wild type TP53 cells were more sensitive to apoptosis than mutated TP53 cells when treated with cisplatin or gemcitabine; permanent G1 cell-cycle arrest was observed in the three cell lines after treatment with gemcitabine or with the combination of both; significant cell death was detected in all the cell lines after treatments with cisplatin or gemcitabine. However, when drugs were given in combinations, lower percentage of survival occurred independent on TP53 status. Conclusions: it was demonstrated that the combination of cisplatin and gemcitabine can be effective despite of tumor-associated TP53 mutations. Thus, the synergism between low concentrations of cisplatin and gemcitabine may have clinical relevance, since the use of high concentrations of cisplatin is toxic to the whole organism. / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Banca: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Andrigo Barboza De Nardi / Resumo: A correta orientação do Médico Veterinário, aos proprietários de cães, usados com finalidades reprodutivas, submetidas à quimioterapia com cisplatina, é importante na medida que este agente citostático age nas células em constante divisão, podendo ser citotóxico para as células germinativas testiculares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a qualidade espermática através do espermograma, ultra-som e avaliação de ultraestruturas do testículo de cães que receberam cisplatina em diferentes momentos de análise espermática. A dose utilizada foi de 70 mg/m², dose terapêutica, em intervalos de 21 dias, totalizando 4 infusões. Os cães foram divididos em dois grupos de 4 animais cada, sendo que um dos grupos recebeu a quimioterapia e o protocolo de diurese para proteção renal, já o grupo controle não recebeu a cisplatina, estando sujeito apenas aos fatores ambientais e ao tratamento suporte. Os resultados obtidos demonstraram que a cisplatina influenciou na qualidade espermática de cães, pois elevou as patologias maiores e totais acima do aceitável para cães aptos a reprodução, além de alterações de volume testicular observados pelo exame ultra-sonográfico ao longo dos tratamentos e constatação da degeneração testicular em variados graus observados pela análise ultraestrutural. Portanto, infere-se que este citostático possa acarretar alterações morfofuncionais nos túbulos seminíferos / Abstract: The Veterinary Doctor's correct orientation, to the proprietors of dogs, used with reproductive purposes, submitted to the chemotherapy with cisplatin, it is important in the measure that this citostatic agent acts in the cells in constant division, could be toxicity for the testicle germ cells . The objective of that work was to evaluate the spermatic quality through the spermogram, ultra-sound and evaluation of ultrastructures of the testicle of dogs that received cisplatin in different moments of spermatic analysis. The used dose was of 70 mg/m², therapeutic dose, in intervals of 21 days, totaling 4 infusions. The dogs were divided in two groups of 4 animals each, and one of the groups received the chemotherapy and the diuresis protocol for renal protection, the group control didn't already receive the cisplatin, being just subject to the environmental factors and the treatment supports. The obtained results demonstrated that the cisplatin influenced in the spermatic quality of dogs, because it elevated the larger and total pathologies above the acceptable for capable dogs the reproduction, besides alterations of volume testicular observed by the ultra-sound exam along the treatments and verification of the degeneration testicular in varied degrees observed by the analysis ultrastructural. Therefore, it is inferred that this citostatic agent can cart alterations morphofunctional in the seminiferous tubules / Mestre

Orientador: Maria de Lourdes Pires Bianchi / Banca: Maria de Lourdes Pires Bianchi / Banca: Eliana Aparecida Varanda / Banca: Heloisa Della Coletta Francescato / Resumo: Os antioxidantes, principalmente os encontrados na dieta, são agentes responsáveis pela inibição e redução dos danos oxidativos causados pelas espécies reativas nas células. A cisplatina (cDDP), um potente agente antineoplásico utilizado com frequência no tratamento de tumores sólidos, tem seu uso clínico limitado devido aos efeitos adversos como nefrotoxicidade, genotoxicidade e supressão da medula óssea. Como a geração de espécies reativas pode resultar em danos ao DNA pela ação destas espécies ou indiretamente via produtos de degradação da peroxidação lipídica, nosso estudo avaliou o possível efeito protetor da adição da polpa de maracujá amarelo na dieta de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) e Wistar normotensos, contra a nefrotoxicidade e genotoxicidade induzida pela cDDP. Os resultados obtidos nas condições experimentais estabelecidas neste trabalho mostraram que a cDDP promoveu um aumento dos níveis das substâncias reativas aos ácido tiobarbitúrico, bem como decréscimo nos níveis de glutationa nos rins dos animais SHR, reforçando a hipótese que a peroxidação lipídica está relacionada com o mecanismo de nefrotoxicidade. O tratamento com doses múltiplas da polpa de maracujá amarelo não alterou os outros parâmetros da função renal no período analisado. Embora o efeito protetor da polpa de maracujá contra os danos induzidos ao DNA em células renais e hepáticas não tenha sido evidente nos resultados obtidos pelo Ensaio do Cometa, a polpa foi eficaz na redução de micronúcleos induzidos pela cDDP. Assim, umas das hipóteses para a redução da pressão arterial sistólica observada neste trabalho, poder ser atribuída à presença de alguns compostos fenólicos e outros ainda não identificados na polpa. Visto que, a interação entre os fitoquímicos presentes na polpa de maracujá demonstraram eficácia na redução da mutagenicidade e efeitos protetores antioxidantes. / Abstract: The antioxidants, particularly those found in the diet, are responsible for inhibiting and reducing the damage caused by reactive species in the cells. Cisplatin (cDDP), a potent anticancer agent often used in the treatment of solid tumors, has limited clinical use due to adverse effects such as nephrotoxicity, genotoxicity and myelosuppression. As the generation of reactive species can result in DNA damage by direct action of this or indirectly by degradation products of the lipid peroxidation, our study evaluated the potential protector of adding yellow passion fruit pulp to the diet of spontaneously hypertensive rats (SHR) and normotensive wistar rats, against the nephrotoxicity and genotoxicity induced by cDDP. The results showed that the cDDP promoted an increase in the levels of thiobarbituric acid reactive substances and a decrease in the levels of glutathione in the kidneys of the animals, reinforcing the hypothesis that lipid peroxidation be related to the mechanism of nephrotoxicity. The treatment with multiple doses of passion fruit pulp did not change the others parameters of renal function in the schedule. Although the protective effect of passion fruit pulp against the damage caused to the DNA of kidney and hepatic cells has not been evident in the results obtained by Comet assay, the pulp was effective in the reduction of micronuclei induced by cDDP. One of the hypotheses for the reduction in systolic blood pressure observed in the present study attributed this effect to the presence of some phenolic compounds and others not yet identified in the passion fruit pulp. Furthermore, the interaction between the phytochemicals of the pulp demonstrated effectiveness in reducing the mutagenic and antioxidant effects. / Mestre