Ethylene, a plant hormone, plays an essential role in many aspects about plant development, growth, ripening, and senescence. In addition, it also regulates several responses when plants suffer stress from drought, flood, herbivore bites, wound, etc. ACC synthase and ACC oxidase belong to two multigene families. In this study, PCR (polymerase chain reaction) and RACE (rapid amplification of cDNA ends) methods were used to amplify the ACC oxidase sequences in Cattleya bicolor orchid flower. The results show that there exists differences in the 3¡¦-UTR (untranslated region) of orchid gene sequences. Compare the ACC oxidase sequences, including the cDNA ORF (open reading frame) sequences and the amino acid sequences, of several different species, the sequence similarity among the three Laeliinae orchids, namely C.bicolor, C. intermedia, and Laelia anceps, is the highest. The similarity of cDNA ORF sequences and amino acid sequences between orchids and the other plants, such as rice, apple and torenia, is comparatively lower. It was proposed that the protein located in cytoplasma (or in mitochondrial matrix space), agrees with the result from analysis of amino acid hydrophilicity prediction. The ultimate goal of this study is to postpone the flower senescence by the way of plant transfection. In the present findings, it only deals with the cloning and analysis of the ACC oxidase genes in C. bicolor.

O Brasil abrange grande diversidade de espécies da família Orchidaceae, onde o gênero Cattleya se destaca devido a reconhecida importância horticultural e espécies altamente relacionadas de difícil delimitação taxonômica. Anteriormente, Cattleya loddigesii e C. harrisoniana foram reconhecidas como espécies distintas devido à descontinuidade morfológica, fenológica e distribuição geográfica. Entretanto, esses critérios não são suficientes para determinar com clareza a delimitação dessas espécies, uma vez que existem populações com características morfológicas e fenológicas intermediárias consideradas introgredidas. Com o intuito de esclarecer o relacionamento entre C. loddigesii e C. harrisoniana, a relação das populações introgredidas, a estruturação das populações, bem como padrões filogeográficos envolvidos, análises filogeográficas baseadas em sequencias de DNA de cloroplasto (cpDNA) e DNA nuclear ribossomal (ITS) foram utilizadas. No total, foram amostrados 130 indivíduos das duas espécies distribuídos em 17 populações. Os resultados obtidos suportam a distinção entre as plantas, onde a árvore de estimativa de tempo de divergência para ITS separou mais evidentemente em clados distintos as duas espécies, corroborando a alta estruturação encontrada pela AMOVA (ΦCT = 0,597), distribuição haplotípica e análises bayesianas. Apesar disso, os resultados para cpDNA não evidenciaram claramente essa distinção. Os resultados obtidos pelo software Migrate também suportam a distinção das espécies e, ainda, sugerem que as populações introgredidas são mais relacionadas com C. loddigesii. Ademais, os dados sugerem que a estruturação populacional encontrada segue o modelo de isolamento por distância, assim como sugeriram as análises de clados aninhados - NCPA e bayesiana. Ademais, os resultados de estruturação para ambas as regiões, e as possíveis incongruências entre os resultados de cpDNA e ITS estão indicando que existe maior número de indivíduos híbridos e introgressão, necessitando de novos estudos para corroborar essas evidências. Uma das possíveis razões pelo amplo compartilhamento de haplótipos, principalmente para cpDNA, pode ter sido devido à conectividade mantida através das populações introgredidas. Além disso, a reprodução alogâmica, a dispersão por abelhas e a dispersão de sementes pelo vento a longas distâncias podem também ter contribuído para a conexão entre elas. Os resultados da reconstrução filogeográfica, bem como o número de migrantes sugerem que as populações se dispersaram em direção ao Norte-Sul em períodos glaciais do Pleistoceno. Além disso, a alta diversidade e a diferenciação das populações do extremo Sul de SP indicam indícios de uma possível zona de refúgio neste local. / Brazil covers a wide range of species of the orchid family, where the Cattleya genus stands out due to a recognized horticultural importance and highly related species difficult taxonomic delimitation. Previously, Cattleya loddigesii and C. harrisoniana were recognized as distinct species due to morphological, phenological and geographical distribution discontinuity. However, these criteria are not sufficient to determine clearly the identification of these species, as there are populations with intermediate morphological and phenological characteristics considered introgressed. In order to clarify the relationship between C. loddigesii and C. harrisoniana, the ratio of introgressed populations, the population structure and the phylogeographic patterns involved, phylogeographic analyses based on chloroplast DNA sequences (cpDNA) and ribosomal nuclear DNA (ITS), were used. Overall, we sampled 130 individuals of the two species distributed into 17 populations. Results support the distinction between plants, where the tree of divergence time estimate for ITS separated the two species more clearly into distinct clades, corroborating the high structure found by AMOVA (ΦCT = 0.597), haplotype distribution and Bayesian analyses. Nevertheless, the results for cpDNA did not demonstrated that distinction clearly. The results obtained by the Migrate software also support the species distinction and suggest that the introgressed populations are more closely related to C. loddigesii. Furthermore, the data suggest that the population structure found follows the isolation by distance model, as also suggested in the nested clades - NCPA and Bayesian analyses. Furthermore, the population structure results for both regions, plus possible inconsistencies between the cpDNA and ITS results, may indicate that there is a greater number of hybrid individuals and introgression, requiring new studies to corroborate this evidence. One of the possible reasons for the broad sharing of haplotypes, especially for cpDNA, may have been due to connectivity maintained through introgressed populations. Furthermore, the allogamous reproduction, the dispersal by bees and dispersal of seeds by wind over long distances may also have contributed to the connection between them. The results of phylogeographic reconstruction, as well as the number of migrants suggest that the population is dispersed towards North-South in glacial periods of the Pleistocene. In addition, the high diversity and differentiation of populations of the Southern tip of SP indicate evidence of a possible refuge zone at this area.

O Brasil abrange grande diversidade de espécies da família Orchidaceae, onde o gênero Cattleya se destaca devido a reconhecida importância horticultural e espécies altamente relacionadas de difícil delimitação taxonômica. Anteriormente, Cattleya loddigesii e C. harrisoniana foram reconhecidas como espécies distintas devido à descontinuidade morfológica, fenológica e distribuição geográfica. Entretanto, esses critérios não são suficientes para determinar com clareza a delimitação dessas espécies, uma vez que existem populações com características morfológicas e fenológicas intermediárias consideradas introgredidas. Com o intuito de esclarecer o relacionamento entre C. loddigesii e C. harrisoniana, a relação das populações introgredidas, a estruturação das populações, bem como padrões filogeográficos envolvidos, análises filogeográficas baseadas em sequencias de DNA de cloroplasto (cpDNA) e DNA nuclear ribossomal (ITS) foram utilizadas. No total, foram amostrados 130 indivíduos das duas espécies distribuídos em 17 populações. Os resultados obtidos suportam a distinção entre as plantas, onde a árvore de estimativa de tempo de divergência para ITS separou mais evidentemente em clados distintos as duas espécies, corroborando a alta estruturação encontrada pela AMOVA (ΦCT = 0,597), distribuição haplotípica e análises bayesianas. Apesar disso, os resultados para cpDNA não evidenciaram claramente essa distinção. Os resultados obtidos pelo software Migrate também suportam a distinção das espécies e, ainda, sugerem que as populações introgredidas são mais relacionadas com C. loddigesii. Ademais, os dados sugerem que a estruturação populacional encontrada segue o modelo de isolamento por distância, assim como sugeriram as análises de clados aninhados - NCPA e bayesiana. Ademais, os resultados de estruturação para ambas as regiões, e as possíveis incongruências entre os resultados de cpDNA e ITS estão indicando que existe maior número de indivíduos híbridos e introgressão, necessitando de novos estudos para corroborar essas evidências. Uma das possíveis razões pelo amplo compartilhamento de haplótipos, principalmente para cpDNA, pode ter sido devido à conectividade mantida através das populações introgredidas. Além disso, a reprodução alogâmica, a dispersão por abelhas e a dispersão de sementes pelo vento a longas distâncias podem também ter contribuído para a conexão entre elas. Os resultados da reconstrução filogeográfica, bem como o número de migrantes sugerem que as populações se dispersaram em direção ao Norte-Sul em períodos glaciais do Pleistoceno. Além disso, a alta diversidade e a diferenciação das populações do extremo Sul de SP indicam indícios de uma possível zona de refúgio neste local. / Brazil covers a wide range of species of the orchid family, where the Cattleya genus stands out due to a recognized horticultural importance and highly related species difficult taxonomic delimitation. Previously, Cattleya loddigesii and C. harrisoniana were recognized as distinct species due to morphological, phenological and geographical distribution discontinuity. However, these criteria are not sufficient to determine clearly the identification of these species, as there are populations with intermediate morphological and phenological characteristics considered introgressed. In order to clarify the relationship between C. loddigesii and C. harrisoniana, the ratio of introgressed populations, the population structure and the phylogeographic patterns involved, phylogeographic analyses based on chloroplast DNA sequences (cpDNA) and ribosomal nuclear DNA (ITS), were used. Overall, we sampled 130 individuals of the two species distributed into 17 populations. Results support the distinction between plants, where the tree of divergence time estimate for ITS separated the two species more clearly into distinct clades, corroborating the high structure found by AMOVA (ΦCT = 0.597), haplotype distribution and Bayesian analyses. Nevertheless, the results for cpDNA did not demonstrated that distinction clearly. The results obtained by the Migrate software also support the species distinction and suggest that the introgressed populations are more closely related to C. loddigesii. Furthermore, the data suggest that the population structure found follows the isolation by distance model, as also suggested in the nested clades - NCPA and Bayesian analyses. Furthermore, the population structure results for both regions, plus possible inconsistencies between the cpDNA and ITS results, may indicate that there is a greater number of hybrid individuals and introgression, requiring new studies to corroborate this evidence. One of the possible reasons for the broad sharing of haplotypes, especially for cpDNA, may have been due to connectivity maintained through introgressed populations. Furthermore, the allogamous reproduction, the dispersal by bees and dispersal of seeds by wind over long distances may also have contributed to the connection between them. The results of phylogeographic reconstruction, as well as the number of migrants suggest that the population is dispersed towards North-South in glacial periods of the Pleistocene. In addition, the high diversity and differentiation of populations of the Southern tip of SP indicate evidence of a possible refuge zone at this area.

This thesis explores the biosynthesis of two secondary metabolites, fluoroacetate and longianone, and involves the synthesis and feeding of deuterated putative intermediates. The bacterium Streptomyces cattleya produces fluoroacetate and 4- fluorothreonine; the mechanism by which C-F bond formation occurs is unknown. The stereochemistry of the fluorination event was investigated by feeding [2,2,3,3-(^-2)H(_4)]-succinate and (2R)-[l-(^2)H(_2)]- and (2S)-[l-(^2)H(_2)]-glycerols. The chirality of the resultant [2-(^2)H]-fluoroacetate was determined by chiral liquid crystal (^2)H-NMR and the fluorination was demonstrated to proceed with retention of stereochemistry. Longianone is produced by the slow growing fungus Xylaria longiana. This simple bicyclic metabolite is an isomer of the notorious fungal toxin patulin. Putative deuterated intermediates were administered to the fungus and the longianone produced analysed by (^2)H-NMR. It was demonstrated that longianone is biosynthesised from 6-methylsalicylic acid in a pathway closely related to that found in patulin biosynthesis.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2076_1.pdf: 3360789 bytes, checksum: 2d5b1a9180b6f5c6cdd46d9026fd0c3e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cattleya granulosa Lindl. é uma orquídea endêmica e ameaçada de extinção restrita a fragmentos de Floresta Atlântica do Nordeste do Brasil. A biologia floral e os sistemas reprodutivos de C. granulosa no Parque das Dunas e Barreira do Inferno no Rio Grande do Norte foram investigados, e ainda, foram realizadas coletas de machos de abelhas Euglossini atraídos por iscas odores para verificar a ocorrência de políneas aderidas ao corpo. As flores apresentam cores que variam entre os tons esverdeados, amarelados e castanhos avermelhados, osmóforos que produzem fragrância fortemente adocicada e guias de néctar no labelo que absorvem luz ultravioleta. Mimetizam um modelo geral de flor tipicamente melitófila, porém produz pouco néctar floral e pode estar atuando com um mecanismo de engodo. As visitas que resultam em polinização são muito raras e a frutificação é baixa (9,19%) para as duas áreas estudadas e isso pode ter gerado a ausência dos polinizadores efetivos nas observações focais. Existe diferença significativa na formação natural de frutos entre as duas áreas, sendo o Parque das Dunas o local de menor frutificação. Cattleya granulosa é autocompatível, porém dependente de polinizador para reprodução, haja vista que nesta espécie não ocorreu reprodução vegetativa nas duas áreas. Os resultados do estudo são discutidos acerca dos atributos florais relacionados à síndrome de polinização melitófila, dos visitantes das flores e os prováveis polinizadores, do sistema reprodutivo e a importância do vetor de pólen, assim como, as causas da fragmentação da Floresta Atlântica e medidas mitigadoras do processo de extinção dessa espécie

Made available in DSpace on 2016-01-26T18:56:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Fontes Fileti.pdf: 657960 bytes, checksum: d27058552310d001b7d5b1306d3396dd (MD5) Previous issue date: 2015-08-04 / Orchid seeds are the smallest and rich in lipids, which turn them in an ideal model to deterioration studies as large populations can be worked in small samples. Controlled deterioration (CD) is a procedure that uses a control in the seed water content during ageing process. The objective of this work was to verify the controlled deterioration effect over orchid seeds. This work was done by the first time with five tropical orchid species: Cattleya brevicaulis, C. tenebrosa, C. amethystoglossa, C. tigrina and Encyclia granitica submitted to three temperatures 41, 43 and 45ºC during the periods of 0, 1, 3, 6, 9, 15, 24 and 48 hours. The variables Total germination, Germination Velocity Index (GVI), Tetrazolium test, MDA content, SOD and PRX activities were evaluated. Results were more expressive after 15 horas of exposition to temperatures of 43 and 45ºC. Total germination, GVI and Tetrazolium test exhibited decreases with the increase in the controlled deterioration. Cattleya tigrina and C. tenebrosa showed expressive increase of MDA content after 48h of controlled deterioration, the other species (C. amethystoglossa, C. brevicaulis and Encyclia granitica) did not. Enzyme activities (SOD and PRX) showed decreases in all temperatures. Total germination, GVI and Tetrazolium test were more efficient to detect variations in the aged seeds. / Sementes de orquídeas são diminutas e constituídas em grande parte por lipídeos, o que as torna um modelo ideal para estudos de deterioração, uma vez que grandes populações podem ser trabalhadas em pequenas amostras. A deterioração controlada é um tratamento que apresenta controle do teor de água das sementes durante o envelhecimento. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da deterioração controlada sobre sementes de orquídeas. Este trabalho foi conduzido pela primeira vez em cinco espécies de orquídeas: Cattleya brevicaulis, C. tenebrosa, C. amethystoglossa, C. tigrina e Encyclia granítica submetidas a três temperaturas 41, 43 e 45ºC durante os períodos de 0, 1, 3, 6, 9, 15, 24 e 48 horas. As variáveis de germinação total, índice de velocidade de germinação (IVG), teste de tetrazólio, além dos testes bioquímicos como acúmulo de Malondialdeído (MDA), atividade enzimática de Superóxido Dismutase (SOD) e Peroxidase (PRX), foram avaliadas. Os resultados foram mais expressivos a partir de 15 horas de exposição às temperaturas de 43 e 45ºC. A germinação total, o IVG e o teste de tetrazólio apresentaram decréscimos com o aumento da deterioração controlada para todas as espécies. Cattleya tigrina e C. tenebrosa apresentaram incrementos expressivos de MDA após 48 h de deterioração controlada, ao contrário de C. amethystoglossa, C. brevicaulis e Encyclia granitica. A atividade enzimática das duas enzimas testadas (SOD e PRX) apresentaram decréscimos nas três temperaturas. A germinação total, o IVG e o teste de tetrazólio foram mais eficientes para detectar as variações de viabilidade e vigor nas sementes deterioradas.

Made available in DSpace on 2016-07-18T17:51:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jessica Fontes Fileti.pdf: 657960 bytes, checksum: d27058552310d001b7d5b1306d3396dd (MD5) Previous issue date: 2015-08-04 / Orchid seeds are the smallest and rich in lipids, which turn them in an ideal model to deterioration studies as large populations can be worked in small samples. Controlled deterioration (CD) is a procedure that uses a control in the seed water content during ageing process. The objective of this work was to verify the controlled deterioration effect over orchid seeds. This work was done by the first time with five tropical orchid species: Cattleya brevicaulis, C. tenebrosa, C. amethystoglossa, C. tigrina and Encyclia granitica submitted to three temperatures 41, 43 and 45ºC during the periods of 0, 1, 3, 6, 9, 15, 24 and 48 hours. The variables Total germination, Germination Velocity Index (GVI), Tetrazolium test, MDA content, SOD and PRX activities were evaluated. Results were more expressive after 15 horas of exposition to temperatures of 43 and 45ºC. Total germination, GVI and Tetrazolium test exhibited decreases with the increase in the controlled deterioration. Cattleya tigrina and C. tenebrosa showed expressive increase of MDA content after 48h of controlled deterioration, the other species (C. amethystoglossa, C. brevicaulis and Encyclia granitica) did not. Enzyme activities (SOD and PRX) showed decreases in all temperatures. Total germination, GVI and Tetrazolium test were more efficient to detect variations in the aged seeds. / Sementes de orquídeas são diminutas e constituídas em grande parte por lipídeos, o que as torna um modelo ideal para estudos de deterioração, uma vez que grandes populações podem ser trabalhadas em pequenas amostras. A deterioração controlada é um tratamento que apresenta controle do teor de água das sementes durante o envelhecimento. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da deterioração controlada sobre sementes de orquídeas. Este trabalho foi conduzido pela primeira vez em cinco espécies de orquídeas: Cattleya brevicaulis, C. tenebrosa, C. amethystoglossa, C. tigrina e Encyclia granítica submetidas a três temperaturas 41, 43 e 45ºC durante os períodos de 0, 1, 3, 6, 9, 15, 24 e 48 horas. As variáveis de germinação total, índice de velocidade de germinação (IVG), teste de tetrazólio, além dos testes bioquímicos como acúmulo de Malondialdeído (MDA), atividade enzimática de Superóxido Dismutase (SOD) e Peroxidase (PRX), foram avaliadas. Os resultados foram mais expressivos a partir de 15 horas de exposição às temperaturas de 43 e 45ºC. A germinação total, o IVG e o teste de tetrazólio apresentaram decréscimos com o aumento da deterioração controlada para todas as espécies. Cattleya tigrina e C. tenebrosa apresentaram incrementos expressivos de MDA após 48 h de deterioração controlada, ao contrário de C. amethystoglossa, C. brevicaulis e Encyclia granitica. A atividade enzimática das duas enzimas testadas (SOD e PRX) apresentaram decréscimos nas três temperaturas. A germinação total, o IVG e o teste de tetrazólio foram mais eficientes para detectar as variações de viabilidade e vigor nas sementes deterioradas.

Enzymatic fluorination of natural products is extremely rare. Of the 4000 halogenated natural products identified, only 13 possess a fluorine atom. The C-F bond forming enzyme from the soil bacterium, Streptomyces cattleya, remains the only native enzyme to be identified that is capable of such biochemistry. It generates 5’-fluoro-5-deoxyadenosine (5‘-FDA) from S-adenosyl-L-methionine (SAM) and F-. The “fluorinase” is the first committed step toward the biosynthesis of the two fluorometabolites, 4-fluorothreonine and fluoroacetate, via the common intermediate, fluoroacetaldehyde (FAld). The enzymatic steps responsible for the conversion of 5’-FDA to the fluorometabolites remained to be fully characterised when this project began. Previously, a purine nucleoside phosphorylase was identified that was capable of generating 5-fluorodeoxyribose-1-phosphate (5-FDRP) from 5’-FDA. 5-FDRP is subsequently isomerised to 5-fluorodeoxyribulose-1-phosphate (5-FDRulP) by an aldose-ketose isomerase enzyme. Chapter 2 describes the identification of the isomerase gene from the genomic DNA of S. cattleya and the corresponding protein product was capable of generating 5-FDRulP from 5-FDRP. The next intermediate, FAld, is generated from 5-FDRulP by a fuculose aldolase. Attempts to identify the aldolase gene from S. cattleya were unsuccessful, however a putative fuculose aldolase from Streptomyces coelicolor was isolated that could generate FAld from 5-FDRulP, which is described in Chapter 3. Following the identification and over expression of a PLP-dependant transaldolase, which generates 4-fluorothreonine (4-FT) from FAld and L-threonine in S. cattleya, Chapter 4 details the successful in vitro reconstitution of fluorometabolite biosynthesis using five over- expressed enzymes. In Chapter 5, attempts to develop a novel assay for fluorinase activity was explored. The colorimetric detection of L-methionine produced by the fluorinase in a coupled L-amino acid oxidase and horseradish peroxidase assay, leading to the oxidation of a dye substance. This was carried out with interest in developing a high-throughput assay for fluorinase mutants, generated by random mutagenesis, in order to identify those with increased activity. In the event, it proved unsuccessful.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-04T18:16:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2678959 bytes, checksum: 1530553ed498eff5fb1415df6fa3359e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-04T18:16:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2678959 bytes, checksum: 1530553ed498eff5fb1415df6fa3359e (MD5) Previous issue date: 2002-03-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Algumas espécies da família Orchidaceae, como as do gênero Cattleya, possuem elevada importância econômica no mercado florístico, que está em plena expansão. Isto demonstra a necessidade de se disporem de métodos adequados de propagação massal, como a cultura de tecidos. Os objetivos deste trabalho foram verificar a capacidade morfogênica de algumas espécies de orquídeas do grupo Cattleya, em grande medida, a formação de novas plantas a partir de explantes específicos, cultivados em diferentes meios de cultivo. No primeiro capítulo, foram descritos os ensaios que subsidiaram os experimentos desta pesquisa. Foram utilizados vários tipos de explante, como ápices radiculares de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro, calos originados de protocormóides, formados in vitro, em temperatura elevada, e gemas axilares dianteiras de brotações de plantas adultas de distintas espécies, cultivadas em distintos meios, objetivando verificar as respostas morfogênicas dos citados explantes, bem como formulações e composição dos meios, condições de cultivo e métodos de desinfestação adequados para a condução dos experimentos. No segundo capítulo, foram utilizados segmentos de plântulas obtidas pela via seminífera in vitro de Brassolaeliocattleya Sun King Orange x Laelia purpurata, cultivados em meios com concentrações variadas de auxina e citocinina, para estabelecer um meio com adequado balanço hormonal. Concluiu-se que para o híbrido utilizado, pode-se recomendar o cultivo em 47 dias, em um meio de cultivo liquído constituído de minerais nutrientes de MS, adicionando 1,24 mg L-1 de BAP e 0,6 mg L-1 de 2,4-D. No terceiro capítulo, foram usados ápices caulinares de brotações e gemas axilares, extraídos de brotações e da base dos pseudobulbos de plantas adultas, objetivando identificar o melhor explante para Laelia lobata Jenni x L. lobata alba. Embora os três tipos de explantes apresentassem alta porcentagem de oxidação, todos mostraram boa capacidade morfogênica, principalmente as gemas axilares de brotações, potencializando uma via promissora para propagação em escala comercial dessa espécie. No quarto capítulo, utilizou-se pedúnculo de inflorescência de Cattleya White Dream, cujas novas estruturas poderiam ser utilizadas para o desenvolvimento de plântulas. Para esse híbrido, discos de pedúnculos de inflorescências não apresentaram respostas morfogênicas, segundo os procedimentos experimentais adotados. Uma vez que para cada espécie ou híbrido foi necessário um protocolo específico para sua propagação in vitro, obtiveram-se, de modo geral, respostas morfogênicas de algumas espécies, formando plântulas completas e, em alguns casos, em grande número. Dada a importância dos cultivos celulares para esta planta, estudos futuros devem ser conduzidos para se testarem outros tipos de explante, outros meios e condições de cultivo, de modo a otimizar o processo de propagação massal. / Some species of the Orchidaceae family, such as those form the Cattleya, have high economic importance in the flower market, which is in clear expansion. This shows the necessity of adequate methods for mass propagation, like tissue culture. The goals of this work are to verify the morphogenic capacity of some orchid species of the Cattleya group, for a great measure, the formation of new plants from specific explants, grown in different culture media. In the first chapter we describe the essays that subsidized the experiments in this thesis. Various kinds of explants were used, such as root tips from seedlings obtained through in vitro seed propagation, callus originated from protocorm-like bodies, formed in vitro under high temperatures, and forward axillary buds from young shoots of adult plants from different species, grown in different media, aiming to verify the morphogenic response of the aforementioned explants, as well as the formulation and composition of the media, growing conditions and adequate de-infestation methods for the execution of the experiments. In the second chapter, segments of seedling obtained through in vitro seed propagation of Brassolaeliocattleya Sun King 'Orange' x Laelia purpurata, grown in media with different concentrations of auxin and cytokinin, were used to establish a medium with adequate hormonal balance. We concluded that for the hybrid used we can recommend the cultivation in 47 days, in a liquid growing medium composed of MS nutritive minerals, adding 1.24 mg L-1 of BAP and 0.6 mg L-1 of 2.4-D. In the third chapter, young shoot tips and axillary buds, extracted from young shoots and from the basis of adult plant pseudobulbs, were used to identify the best explants for Laelia lobata 'Jenni' x L. lobata alba. Although the three kinds of explants showed high percentage of oxidation, all exhibited good morphogenic capacity, specially the young shoot tips, indicating a promising solution for the propagation of that species in commercial scale. In the fourth chapter, we used inflorescence peduncles of Cattleya White Dream, whose formation of new structures could be used for the growing of seedlings. For that hybrid, sections of inflorescence peduncles did not exhibit morphogenic responses according to the experimental proceedings adopted. Considering that for each species or hybrid a specific protocol was necessary for its in vitro propagation, we achieved, in general, morphogenic responses from some species, forming complete seedlings and, in some cases, in large numbers. Given the importance of cellular cultivation for that plant, future studies must be conducted to test other kinds of explants, other media and growing conditions, in order to optimize the process of mass propagation.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:38:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9752_Dissertação Jadson Bonini Zampirollo.pdf: 1850424 bytes, checksum: 3ad76b00bed4dc3388a2280f461a435d (MD5) Previous issue date: 2016-03-29 / CAPES / Neste estudo foram avaliadas características ecofisiológicas em folhas e pseudobulbos de espécies de orquídeas epífitas com metabolismo CAM (Cattleya warneri T. Moore) e C3 (Miltonia spectabilis Lindl.) submetidas ao déficit hídrico (DH) prolongado (0, 15, 30, 45, 60, 75, e 90 dias.). Para isto, plantas de C. warneri e M. spectabilis obtidas em um orquidário em João Neiva/ES foram transferidas para orquidário na UFES Campus de São Mateus/ES, onde avaliações da fluorescência transiente da clorofila a, conteúdo relativo de água (CRA) e pigmentos fotossintéticos foram realizadas em folhas e pseudobulbos. Sob DH, o CRA foi significativamente reduzido nas folhas e pseudobulbos de ambas as espécies, porém, de maneira similar entre os órgãos da espécie CAM (a partir dos 30 dias de DH) e mais lentamente nas folhas em relação aos pseudobulbos na espécie C3 (a partir do DH-60 e DH-30, respectivamente). A concentração de pigmentos fotossintéticos também foi alterada em resposta ao déficit hídrico, com declínios observados na concentração de clorofila a, b e total e incrementos dos carotenoides nas folhas de ambas as espécies, com acréscimos de todos esses pigmentos nos pseudobulbos de C. warneri e nenhuma alteração em M. spectabilis. Parâmetros da fluorescência da clorofila a revelaram incrementos nas fases O-J, J-I, Bandas-L e K, F0, ABS/RC, DI0/RC e decréscimos na fase I-P, FV/FM, ET0/TR0, ET0/ABS e PITOTAL em folhas e pseudobulbos de ambas as espécies, porém, mais expressivamente nos pseudobulbos de M. spectabilis e com certa similaridade entre folhas e pseudobulbos de C. warneri. Dessa forma, observou-se que ambas as espécies demonstraram-se vulneráveis ao DH prolongado, com declínios no CRA, fotodestruição dos pigmentos fotossintéticos e declínios nas atividades fotoquímicas, especialmente após o DH-30. Entretanto, a melhor manutenção dos valores de CRA e menor perda do desempenho das reações fotoquímicas observados nas folhas da espécie C3, M. spectabilis, associadas a um maior comprometimento dos pseudobulbos, indicam que esta espécie apresenta-se mais tolerante ao DH de longo prazo. A explicação para isso pode ser o fato de as folhas senescentes, e, principalmente os pseudobulbos, estarem atuando como órgãos facilitadores na mobilização de água mais eficientemente em M. spectabilis, permitindo a manutenção do CRA mais elevado nas folhas jovens com consequente manutenção das atividades fotoquímicas. / In this study ecophysiological characteristics were evaluated in leaves and pseudobulbs of epiphytic orchids species with CAM (Cattleya warneri T. Moore) and C3 (Miltonia spectabilis Lindl.) metabolism under prolonged water deficit (WD) (0, 15, 30, 45, 60, 75, and 90 days). For this, C. warneri and M. spectabilis plants obtained from a nursery in João Neiva/ES were transferred to nursery in UFES - Campus de São Mateus/ES, where chlorophyll a fluorescence transient, relative water content (RWC) and photosynthetic pigments were measured in leaves and pseudobulbs. Under WD, the RWC was significantly reduced in leaves and pseudobulbs of both species, however, in a similar way between the organs of CAM species (as from 30 days of WD - WD-30) and more slowly in the leaves in relation to pseudobulbs in C3 species (as from WD-60 and WD-30, respectively). The photosynthetic pigments concentration also were changed in response to water deficit, with declines observed in the chlorophyll a, b and total and increases of carotenoids in the leaves of both species, with increases in all of these pigments in the pseudobulbs of C. warneri, and no change in M. spectabilis. Chlorophyll a fluorescence parameters revealed increases in O-J and J-I phases, L and K-Bands, F0, ABS/RC, DI0/RC and decreases in the I-P phase, FV/FM, ET0/TR0, ET0/ABS e PITOTAL in leaves and pseudobulbs of both species, but more markedly in the pseudobulbs of M. spectabilis and with certain similarity between leaves and pseudobulbs of C. warneri. Thus, it is noted that both species demonstrated vulnerable to prolonged WD, with declines in the RWC, photodestruction of photosynthetic pigments and declines in photochemical activities, especially after the WD-30. However, the better maintenance of RWC values and smaller loss of performance of photochemical reactions observed in leaves of C3 species, M. spectabilis, associated with greater engagement of pseudobulbs indicate that this species is more tolerant to prolonged WD. The explanation for this may be the fact that senescent leaves, and mainly pseudobulbs are acting as facilitators organs in the in mobilization of water more effectively in this species, allowing the maintenance of the highest RWC on young leaves with consequent maintenance of photochemical activities.