Resumo: Este estudo teve como objetivo geral utilizar células da linhagem MDPC-23 em testes de citotoxicidade de materiais e na investigação dos efeitos de proteínas bioativas no estímulo da síntese de componentes da matriz dentinária. Os objetivos específicos foram avaliar o efeito citotóxico de soluções utilizadas na lavagem de paredes cavitárias e de materiais dentários recomendados para aplicação em dentina sobre células de linhagem odontoblástica MDPC-23. Também foi intuito avaliar o efeito do concentrado de proteínas extraídas da dentina de coelho sobre a expressão de genes específicos. Este trabalho, apresentado na forma de três artigos científicos, utilizou a técnica de MTT para avaliar o efeito citotóxico de soluções de CLX em variadas concentrações sobre as células MDPC-23. Esta técnica foi utilizada também para a investigação do efeito citotóxico de três diferentes cimentos de ionômero de vidro modificados por resina: Vitrebond (VB); Vitremer (VM); e RelyX Luting Cement (RX), associada ao teste de implantação destes materiais resinosos no tecido conjuntivo subcutâneo de ratos. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 e fibronectina nas células expostas ao concentrado de proteínas extraídas da dentina de coelhos foi avaliada por RT-PCR. Os resultados demonstraram que a CLX é citotóxica às células da linhagem MDPC-23 de maneira dose-dependente. Também foi demonstrado que os cimentos de ionômero de vidro são biocompatíveis ao tecido conjuntivo subcutâneo de ratos, apesar de apresentarem diferentes graus de citotoxicidade sobre as células odontoblastóides. As proteínas bioativas extraídas da dentina de coelhos apresentaram efeito estimulatório na expressão de genes que codificam para colágeno tipo-1 e fibronectina. Pode-se concluir que as células MDPC-23 são um modelo que pode ser utilizado nos testes de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Abstract: The general aim of this in vitro and in vivo study was to evaluate the cytotoxicity of rinsing solutions and dental materials as well as to determine the expression of genes related with the dentinogenesis. The specific objectives were to evaluate the cytotoxicity effects of rinsing solutions used to clean cavity walls and dental materials used to restore dental cavities. The effects of EDTA soluble dentin proteins (members of TGF-â superfamily) on specific gene espression was also evaluated. For this porpose three scientific papers were prepared: 1) MTT assay was employed to investigate the cytotoxic effects of different concentrations of chlorhexidine to MDPC-23 cells as well as to; 2) to determine the cytotoxicity of three different resin-modified glass-ionomer cements (RMGIC): Vitrebond (VB); Vitremer (VM); and RelyX Luting Cement (VM). The results of this in vitro study was compared to the in vivo study in which RMGICs were implanted into the connective tissue of rats; 3) Type-1 collagen and fibronectin gene expression on cells exposed to EDTAsoluble dentin proteins was assessed by means of semi-quantitative RT-PCR. The results demonstrated that chlorhexidine is cytotoxic to MDPC-23 cells in a dose-dependent way. It was also demonstrated that RMGICs are biocompatible following implantation into surgical pockets prepared in the dorsal connective tissue of rats in spite of the different degrees of in vitro cytotoxicity presented by these materials to MDPC-23 cells. The stimulatory effects of the bioactive molecules on the expression of the genes that encodes to type-1 collagen and fibronectin was clearly demonstrated. Based on the experimental conditions, it was concluded that MDPC-23 cells are suitable model to be used on cytotoxicity tests of dental materials and rinsing solutions as well as to evaluate the dentinogenesis mechanisms. / Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Coorientador: Claudio Miguel da Costa Neto / Banca: Maria Aparecida de Andrade Moreira Machado / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Mestre

Orientador: Vera Lúcia Borges Isaac / Banca: Marcos Antonio Corrêa / Banca: Pedro Alves da Rocha Filho / Resumo: Diversos antioxidantes demonstram considerável efeito na prevenção do câncer por reduzir o estresse oxidativo causado por uma ampla variedade de ataques: biológicos, químicos e físicos, dentre os quais a radiação solar ultravioleta (UV) é o estresse físico ambiental descrito entre os mais freqüentes ataques que ocorrem sobre a pele, o qual está associado no desenvolvimento na maioria das doenças, incluindo o câncer. Vários componentes da dieta podem ser utilizados sozinhos ou em combinação com fármacos convencionais para prevenir doenças. Ainda, a busca por metodologias alternativas à experimentação com animais para o teste de eficácia de formas cosméticas de uso tópico é devido à pressão pública existente neste sentido, introduzida principalmente pela Comunidade Européia (93/95/EC). O presente estudo teve por objetivo avaliar a atividade do ácido alfa- lipóico em cultura de células, além do estudo de estabilidade de emulsões O/A e seu comportamento reológico. Para isto, foram utilizadas culturas de células como modelo experimental, na tentativa de desenvolver um método alternativo à experimentação com animais que poderá ser utilizado pela indústria cosmética. Foram utilizadas culturas de células HepG2 (metabolizadoras de xenobióticos) e cultura de células HaCaT (queratinócitos) / Abstract: Several antioxidants show significant effect in preventing cancer by reducing oxidative stress caused by a wide variety of attacks: biological, chemical and physical agents, amongst which the sun's ultraviolet (UV) is the most physical stress environment described among the most frequent attacks that occur on the skin, which is associated with development in most diseases, including cancer. Several dietary components can be used alone or in combination with conventional drugs to prevent disease. Still, the search for alternative methods to animal testing to test the efficacy of topical cosmetic forms is due to public pressure that exists in this sense, introduced mainly by the European Union (93/95/EC). This study aims to assess the activity of alpha-lipoic acid in cultured cells, in addition to studying the stability of O / W emulsions and their rheological behavior. For this, cell cultures are used as experimental models in an attempt to develop an alternative method to animal testing that may be used by the cosmetics industry. Will be used HepG2 cell cultures (xenobiotic metabolizing) and cell culture of HaCaT (keratinocytes) / Mestre

Orientador: Débora Aparecida Pires de Campos Zuccari / Banca: Dorotéia Rossi Silva / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Resumo: O estudo de marcadores prognósticos e preditivos no câncer tem se mostrado efetivo na pesquisa e rotina diagnóstica. A glutationa (GSH) e as enzimas glutationa peroxidase (GPX) e glutationa S transferase pi (GSTpi) exercem papel fundamental na defesa antioxidante das células e na detoxificação de quimioterápicos. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão das proteínas GSH, GPX e GSTpi em pacientes com câncer de mama, além de avaliar a expressão gênica dessas proteínas em amostras tumorais in vitro após o tratamento com quimioterápico. As proteínas foram detectadas no tecido tumoral de 63 pacientes por imuno-histoquímica e quantificadas pela técnica de densitometria óptica. A expressão dos genes que sintetizam GSH, glutamato cisteina ligase (GCLC) e glutationa sintetase (GSS) e dos genes codificadores da GPX e GSTpi foi analisada por PCR em tempo real em células cultivadas provenientes de 12 amostras tumorais de mama. As células foram submetidas in vitro ao quimioterápico doxorrubicina, e a expressão gênica foi analisada antes e após o tratamento. A expressão da GSH relacionou-se com tumor receptor de estrógeno (RE) negativo (p<0,05). A expressão da GPX foi maior em tumor receptor de progesterona (RP) negativo e em pacientes que vieram a óbito (p<0,05). Alta expressão da GSTpi relacionou-se com características tumorais de prognóstico desfavorável como positividade para p53, grau histológico III, maior tamanho tumoral e óbito (p<0,05). Além disso, as pacientes foram divididas em subgrupos de acordo com o tratamento recebido. Assim, a alta expressão da GSH relacionou-se com a ocorrência de metástase no grupo de pacientes tratadas apenas com quimioterapia adjuvante (p<0,05). Nas pacientes que receberam quimioterapia e radioterapia adjuvantes, a alta expressão da GPX foi relacionada com óbito e a alta expressão da GSTpi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study of prognostic and predictive markers in cancer has been proven effective in research and diagnostic routine. Glutathione (GSH) and glutathione peroxidase (GPX) and glutathione S transferase pi (GSTpi) play a crucial role in antioxidant defense of cells and detoxification of chemotherapeutic agents. In this context, the objective of this study was to evaluate the protein expression of GSH, GPX and GSTpi in patients with invasive ductal carcinoma, and to evaluate the expression of genes encoding these proteins in tumor samples in vitro before and after treatment with chemotherapy. The proteins were detected in tumor tissue of 63 patients by immunohistochemistry and quantified by optical densitometry technique. The expression of genes that synthesize GSH, glutamate cysteine ligase (GCLC) and glutathione synthetase (GSS) and the genes encoding GPX and GSTpi were analyzed by real time PCR in cultured cells from 12 tumor samples from patients with breast cancer. The cells were treated in vitro to doxorubicin chemotherapy, and gene expression was analyzed before and after treatment. The expression of GSH was related to tumor estrogen receptor (ER) negative (p <0.05). The expression of GPX was higher in tumor progesterone receptor (PR) negative and patients who died (p <0.05). High expression of GSTpi was related to tumor characteristics of poor prognosis such as p53 positivity, histologic grade III, larger tumor size and death (p <0.05). In addition, patients were divided into subgroups according to treatment received. Thus, high expression of GSH was related to the occurrence of metastasis in patients treated only with adjuvant chemotherapy (p <0.05). In patients who received adjuvant chemotherapy and radiotherapy, high expression of GPX was associated with death and high expression of GSTpi was correlated to local tumor recurrence, metastasis and death (p <0.05)... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Márcia Carneiro Valera / Banca: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Resumo: A proposta deste trabalho foi avaliar a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio liberado por agentes clareadores, utilizados para clareamento de dentes tratados endodonticamente, sobre cultura de fibroblastos provenientes do tecido gengival humano (FMM1). As células foram cultivadas em DMEM e quando apresentaram-se em quantidade suficiente e entre a quinta e décima passagens foram plaqueadas em placas de 96 poços onde receberam os meios de cultura condicionados de acordo com os grupos experimentais (n=12): G1- Perborato de Sódio + água; G2- Perborato de sódio + Peróxido de Carbamida 20%; G3- Peróxido de Carbamida 20%; G4- Perborato de Sódio + Peróxido de Hidrogênio 35%; G5- Peróxido de Hidrogênio 35%. O grupo controle (n=12) correspondeu à curva de crescimento e viabilidade celular, onde as células não receberam tratamento. O ensaio com MTT foi realizado nos períodos de 24 e 48 horas para avaliar a viabilidade celular. Paralelamente, mediu-se em espectrofotômetro a quantidade de peróxido de hidrogênio liberado nas condições experimentais. Os dados foram analisados através dos testes de ANOVA e Tukey. Todos os grupos experimentais apresentaram diferença significativa em relação ao controle. O tempo de avaliação mostrou diferença estatística, exceto para o G1 (PS + H2O). Concluiu-se que: todos os agentes clareadores testados foram citotóxicos, diminuindo significantemente o metabolismo e viabilidade celular; a associação do perborato de sódio com água destilada foi o agente clareador mais tóxico e o peróxido de carbamida 20% o menos tóxico. / Abstract: The propose of this study was to evaluate the cytotoxicity from five bleaching agents, used for the technique of intracanal bleaching, on human gingival fibroblasts (FMM1). The cells were cultivated in DMEM and when they were presented in enough amount and between the fifth and tenth passages they were placed in plates of 96 wells; where they received the conditional culture according to the experimental groups (n=12): G1- SP + H2O; G2- SP + CP20%; G3- CP20%; G4- SP + HP35%; G5- HP35%. The control group (n=12) corresponded to the curve of cell growth and viability, where the cells didn't receive any treatment. The MTT assay was carried through in the periods of 24 and 48 hours to evaluate the cellular viability. The amount of set free hydrogen peroxide in the experimental conditions was also measured in a spectrophotometer. The data were submitted to statistical analysis of variance and Turkey's test. All the experimental groups presented significant difference in comparison to the control. The evaluation time showed statistical difference, except for the G1 (SP + H2O). Conclusion: all the bleaching agents had showed cytotoxicity effects, reducing significantly the cell metabolism and viability; the association of sodium perborate with distilled water was the most toxic bleaching agent and carbamide peroxide 20% the least. / Mestre

Orientador: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: Hélio José Montassier / Banca: Hiro Goto / Resumo: O objetivo do estudo foi avaliar o papel imunomodulatório das citocinas TGF-ß1, IL-10 e INF-g nos extratos de baço e de fígado e no sobrenadante de cultura de células brancas esplênicas, em cães machos assintomáticos e sintomáticos, naturalmente infectados por Leishmania (Leishmania) chagasi. Trinta cães oriundos da cidade de Araçatuba, SP, área endêmica para leishmaniose visceral, selecionados por reação sorológica ELISA positiva para Leishmania sp. foram divididos em dois grupos: cães sem sintomas (n=15) que constituíram o grupo assintomático, e os cães com pelo menos três dos sinais clínicos característicos (febre, dermatites, linfoadenopatias, onicogrifose, perda de peso, caquexia, problemas de locomoção, conjuntivite, epistaxe, hepato-esplenomegalia, edema, apatia), que constituíram o grupo sintomático (n=15). Após a eutanásia, fragmentos de baço e de fígado foram coletados para quantificação de TGF-ß1, IL-10 e INF-g ex vivo. O TGF-ß1 ativo naturalmente produzido in vitro também foi avaliado no sobrenadante de cultura de células esplênicas. O extrato de baço e de fígado do grupo de cães assintomáticos apresentou níveis médios maiores de TGF-ß1, quando comparado ao grupo de cães sintomáticos. A citocina IL-10 foi detectada em altas concentrações no extrato de baço e, principalmente, de fígado dos dois grupos de cães avaliados. O INF-g foi encontrado no extrato de baço, do grupo de cães assintomáticos, e de fígado, do grupo de cães sintomáticos. Embora a citocina INF-g tenha sido detectada na infecção canina, os níveis médios de TGF-ß1 e IL-10 no extrato de baço e de fígado foram mais elevados, sugerindo que tanto em cães assintomáticos quanto em sintomáticos a resposta imune predominante foi do tipo Ta2. / Abstract: The aims of this study were to evaluate the immunomodulatory role of TGF-ß1, IL-10, & INF-g in spleen and liver extracts and supernatant cultures of white spleen cells from male symptomatic and asymptomatic dogs, naturally infected by Leishmania (Leishmania) chagasi. Thirty dogs from Araçatuba, SP, an endemic leishmaniasis area, were selected by positive ELISA serological reaction for Leishmania sp. and divided into two groups: asymptomatic (n=15), and symptomatic (n=15) consisting of animals with at least three characteristic signs (fever, dermatitis, lymphoadenopathy, onychogryphosis, weight loss, cachexia, locomotion problems, conjunctivitis, epistaxis, hepatosplenomegaly, edema, and apathy). After euthanasia, spleen and liver fragments were collected for ex vivo quantification of TGF-ß1, IL-10, and INF-g. Naturally active in vitro produced TGF-ß1 was also evaluated in spleen cell culture supernatant. Spleen and liver extract of asymptomatic dogs had higher mean TGF-ß1 levels than symptomatic dogs. High concentrations of IL-10 were found in spleen, and mainly in liver extract of both groups. Higher INF-g concentrations were found in spleen extracts of asymptomatic dogs, and in liver extracts of symptomatic dogs. Although INF-g is being produced in canine infection, mean levels of TGF-ß1 and IL-10 from spleen and liver extracts were much higher, suggesting that immune response in both asymptomatic and symptomatic dogs was predominantly type Th2. / Mestre