The epicardium is a single layer of epithelial (mesothelial) cells that covers the entire heart surface, but whose function in adult mammals is poorly understood. Defining the role of epicardial cells during homeostasis, growth and injury has potential to provide new treatment strategies for human diseases that result in heart failure, due to extensive loss of viable cardiac tissue. We hypothesized that epicardial cells contribute to repair as transplantable progenitor cells for cellular regeneration and as a source of secreted growth factors for cell protection after myocardial infarction. Adult epicardial cells were prospectively isolated as uncommitted epithelial cells using epithelial-specific beta-4 integrin (CD104). These cells underwent epithelial to mesenchymal transformation in culture to generate epicardial cell derivatives (EPDCs). We demonstrate that the C-terminal peptide from Connective Tissue Growth Factor (CTGF-D4), when combined with insulin, effectively primes EPDCs for robust cardiac engraftment in rats and contributes to improvement in cardiac function at one month after MI. Furthermore, we define a signaling axis comprised of CTGF-D4, low density lipoprotein receptor-related protein 6 (LRP6), sex determining region Y-box 9 (Sox9) and Endothelin Receptor B (ETBR) that controls several key processes that impact EPDC graft success: cell survival, proliferation and migration. Interestingly, conditional deletion of ETBR using epicardial-specific transgenic mice prevented epicardial cell proliferation and migration into myocardium after MI. We therefore observed a congruence in the signals and signaling pathways that control the proliferation and migration of endogenous EPDCs after MI and EPDCs that can be generated in cell culture and grafted back to the heart. To gain additional insight into the cellular contribution of the epicardium, we utilized a non-injurious running exercise model to evaluate epicardial activity as a consequence of cardiac hypertrophy (i.e. myocardial growth model). We employed an inducible lineage-tracing system to specifically label and track epicardial cells by GFP expression. Prolonged exercise resulted in a significant number of GFP-positive proliferating epicardial cells and epicardial-derived GFP-positive endothelial cells and few GFP-positive smooth muscle cells in the heart. These observations highlight the cellular plasticity of the adult epicardium and its function as a cardiac progenitor cell niche, maintaining a source of replacement cells. To investigate the paracrine properties of adult epicardial cells for their role in cell protection after MI and reperfusion, human epicardial cells were isolated from donor atrial tissue explants. We predicted that medium conditioned by cultured epicardial cells (EPI CdM) contained secreted reparative factors that would promote endothelial cell survival. Administration of EPI CdM promoted endothelial cell survival in culture and in vivo, 24 hours after ischemia-reperfusion injury. By screening EPI CdM, we detected protein complexes containing hepatocyte growth factor (HGF) with polyclonal IgG that imparted vascular protection in vivo in a manner similar to EPI CdM. Overall, the studies presented here illustrate the unique biology of epicardial cells, their signaling networks, and their contribution to cardiac cell protection and regeneration. Importantly, these properties have the potential to be exploited in translational applications for cardiac repair.

Pancreaic stem cells are potent to differentiate into insulin producing -cells. Stem cells would be use for the cell therapy in the future. This diploma thesis is focused on this four transcription factors (LIF, noggin, TGF- a BMP-2) and their effects on the differentiation of the pancreatic stem cells into -cells. The results were analysed by evidential methods (RT-PCR, immunofluorescence and static incubation.

Regenerative medicine is an emerging technology and with hundreds of cell therapies currently in clinical trials there is a need to expand the limited knowledge related to their storage, shipment and preservation. The most widely used medium for human cell cryopreservation is 10%wt dimethyl sulfoxide (DMSO) in serum. However given its potential toxicity, DMSO usage is a key issue in cryopreservation. Methods specify the need to reduce cell exposure time to DMSO above 0°C as much as possible but the maximum amount of time cells can be exposed to DMSO to prevent a detrimental effect needs to be clarified. There are also regulatory issues and concerns with the xenotoxicity, ethics and supply of the other core component in the standard cryomedia formulation: Foetal Bovine Serum (FBS). Developing a viable alternative to FBS is crucial. In cryobiology literature thawing appears poorly understood. A stable process is as vital as freezing to prevent injury to cells. Protocols are currently too vague for cell therapy regulation and need improvement. The time dependent DMSO cytotoxicity was evaluated by overexposing cells to DMSO during and/or after cryopreservation. A broad investigation found that after 1 hour overexposure post thaw viability of human mesenchymal stem cells (hMSCs) was reduced from 96.3±0.6% to 74.1±4.0% and the co-expression of five key hMSC markers was changed from 97.9±1.3% to 68.3±2.6%. This significant change could cause indicate a change in product efficacy and affect patient health, to prevent this, DMSO exposure must be kept to below 1 hour. A range of alternative vehicle solutions were screened and human platelet lysate (hPL) investigated as an alternative. In depth experimentation with hPL as a cryopreservation vehicle solution and culture supplement (in place of FBS) found it to be a worthy, statistically similar alternative. With no xenological or ethical concerns, lower costs than other serum-free alternatives hPL could allow for a move away from xenological components. A heat transfer model was developed and determined that 720J is required to thaw a vial. Using the heat transfer model and additional factors such as pre-thaw stabilisation and on thaw dilution, a two-stage experiment found that the current standard process (warming in a 37°C waterbath) within the current paradigm of a 1.8mL cryovial is optimal but further work is required to define the process for scaled-up product.

Lesões na cartilagem articular do joelho são patologias frequentes e geralmente causadas por traumas. Apesar de algumas serem assintomáticas, essas alterações osteocondrais podem evoluir para degeneração da cartilagem articular e osteoartrose. Uma da degeneração progressiva da cartilagem articular leva a osteoartrite (OA), comumente sendo a articulação femorotibiopatelar a mais afetada. Como os tratamentos convencionais para OA não são curativos, apenas paliativos, a terapia celular com células-tronco (CT) desponta como alternativa. Neste trabalho utilizamos células-tronco de dente decíduo esfoliado (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous teeth - SHED), cultivadas em associação com um biomaterial, para tratar lesões osteocondrais provocadas em joelhos de ovinos. Quatro defeitos osteocondrais foram cirurgicamente produzidos para testar quatro condições: 1) SHED associada ao biomaterial, 2) somente biomaterial, 3) somente SHED e 4) nenhum tratamento (controle). Os ovinos foram acompanhados clinicamente e através de exames radiográfico, US e artroscopia, por 120, 190, 365 e 730 dias até a eutanásia. Os resultados revelaram que o tratamento com biomaterial em associação com SHED, produziu reparo similar à estrutura cartilagínea a partir de 190 dias, apresentando características de cartilagem adjacente. Entretanto, apesar dos resultados positivos em relação ao reparo da lesão osteocondral, não foi possível afirmar se a melhora deveu-se a diferenciação direta das SHED para células presentes na cartilagem ou se foi um efeito parácrino das mesmas. Em tempo, não foi observada rejeição e nenhuma reação adversa ao implante celular xenogênico durante o período experimental. / Articular cartilage injuries on the knee are frequent pathologies and usually caused by trauma. Although some are asymptomatic, these changes may evolve into osteochondral articular cartilage degeneration and osteoarthritis. A progressive degeneration of articular cartilage leads to osteoarthritis (OA), being femorotibiopatelar joint the most affected one. As conventional treatments for OA are not curative, but palliative, cell therapy with stem cells (SC) stands out as an alternative. In this work we used stem cells from human exfoliated deciduous teeth (SHED), grown in association with a biomaterial, to treat osteochondral lesions on sheep\'s knees. Four osteochondral defects were surgically produced to test four conditions: 1) SHED associated with the biomaterial, 2) only the biomaterial, 3) only SHED and 4) no treatment (control). The sheep were followed clinically and through radiographic exams, US and arthroscopy, for 120, 190, 365 and 730 days until euthanasia. The results showed that treatment with biomaterial in combination with SHED produced repair similar to the cartilage structure from 190 days, showing cartilage adjacent features. However, despite the positive results in relation to the repair of osteochondral lesion it was not possible to say whether the improvement was due to direct differentiation of SHED for cells present in cartilage or was a paracrine effect. In time, there was no rejection and no adverse reaction to the xenogenic cell implant during the trial period.

A Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA), também conhecida como Doença de Lou Gehrig, é a forma mais comum de doença do neurônio motor. Tem início geralmente tardio (4ª/5ª década de vida), afetando tanto os neurônios motores superiores quanto os inferiores. A degeneração provocada pela ELA é progressiva e irreversível. Em geral, a evolução da doença é rápida, levando os pacientes ao óbito entre 3 e 5 anos após o início dos sintomas, devido principalmente à falência respiratória. Atualmente, o único medicamento liberado pelo FDA (Food and Drug Administration) para o uso em ELA é o Riluzol, que tem um efeito mínimo na expectativa de vida dos pacientes. Neste cenário, a terapia celular vem sendo avaliada como uma possível alternativa. Estudos pré-clínicos indicam efeitos benéficos do tratamento de camundongos SOD1 (modelo animal para ELA) com células estromais mesenquimais ou simplesmente células mesenquimais (MSCs), atribuída principalmente à ação de fatores solúveis. Aqui propusemos o uso de pericitos, uma linhagem celular ainda não testada para tratamento pré-clinico em modelo murinho de ELA. Pericitos são células perivasculares que circundam células endoteliais e que desempenham importantes funções celulares como por exemplo participação da formação e manutenção da barreira hematoencefálica, essencial para proteger o sistema nervoso central de danos em doenças neurodegenerativas. Dessa forma, este trabalho pretendeu comparar o potencial terapêutico de células mesenquimais e pericitos obtidos do tecido adiposo humano de um mesmo doador, em camundongos SOD1. Para tal, testes físicos (peso, PaGE, motor score, rotarod) foram aplicados semanalmente e a sobrevida dos animais foi avaliada. Os resultados demonstram que, com exceção dos benefícios observados nos testes do PaGE e do motor score em uma fase mais inicial da doença, o tratamento com MSCs ou pericitos não resulta em efeitos significativos no quadro clínico de camundongos SOD1 do sexo feminino. Para os machos, o tratamento com pericitos se destaca em relação aos tratamentos com MSCs ou HBSS (veículo), resultando em efeitos benéficos na sobrevida e em determinadas funções motoras dos animais, com destaque para os testes do motor score e do rotarod, onde há uma melhora na fase inicial da doença. A análise da expressão gênica no cérebro e na medula de animais em fase final da doença sugere que o tratamento de machos com pericitos é capaz de estimular as defesas antioxidantes do animal. Ainda nestes órgãos, não foram encontrados vestígios das células humanas injetadas, indicando um possível efeito sistêmico das mesmas / Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS), also known as Lou Gehrig\'s disease, is the most common form of motor neuron disease. Most cases are characterized by an adult onset of symptoms, usually in the fourth or fifth decade of life, affecting both upper and lower motor neurons. The degeneration caused by ALS is progressive and irreversible. On average, the survival ranges from 3 to 5 years after onset, mainly due to respiratory failure. Currently, the only Food and Drug Administration (FDA)-approved medication for this disorder is Riluzole, but its effects on survival are minimal. In this scenario, cell therapy is being evaluated as a possible alternative. Preclinical studies indicate beneficial effects of treatment of SOD1 mice (animal model for ALS) with mesenchymal stromal cells or simply mesenchymal cells (MSCs), mainly attributed to the action of soluble factors. Here we propose the use of pericytes, a cell line not yet tested for preclinical treatment in of ALS. Pericytes are perivascular cells surrounding endothelial cells and play important cellular roles such as assistance of formation and maintenance of the blood-brain barrier, which is essential to protect the central nervous system from damage in neurodegenerative diseases. Thus, this study sought to compare the therapeutic potential of mesenchymal cells and pericytes, both obtained from the same human adipose tissue, in SOD1 mice. For this purpose, survival and physical performance (weight, PaGE, motor score and rotarod) were evaluated. Except for the benefits observed in PaGE and the motor score tests in an early stage of the disease, treatment with MSCs and pericytes does not result in significant effects on disease progression of SOD1 female mice. For males, treatment with pericytes stands out compared to treatment with MSCs or HBSS (vehicle), resulting in beneficial effects on survival and in certain physical functions of the animals, particularly for the motor score and rotarod tests, where improvement was observed in the initial stage of the disease. The analysis of gene expression in the brain and spinal cord in end-stage animals suggests that treatment of males with pericytes can stimulate the animals\' antioxidant defense. No traces of injected human cells were observed in brain or spinal cord of mice, indicating a possible systemic effect of the transplant

A distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma alteração neuromuscular hereditária e progressiva que afeta humanos do sexo masculino. O modelo canino Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) é considerado modelo experimental para estudos de novas propostas terapêuticas e melhor entendimento da fisiopatogênica da DMD. O processo progressivo da distrofia está relacionado com alterações nas populações celulares que compõe o sistema imune dos pacientes, pois devido a ausência da proteína distrofina na membrana sarcoplasmática, o músculo fica mais susceptível à lesões, ocorrendo liberação de citocinas, que recrutam e estimulam células do sistema imune, principalmente macrófagos e linfócitos T. A longo prazo, essa resposta inflamatória contínua e persistente, leva a uma série de reações que culminam com danos cada vez maiores, a ponto de ocorrer um esgotamento de células satélites e fibrose do tecido muscular. Uma das propriedades mais estudadas das células tronco mesenquimais (MSCs) é sua capacidade imunomoduladora, fazendo com que essas células se tornem promissoras na utilização da terapia celular. Neste contexto, esta ferramenta imunomoduladora pode atuar como uma estratégia interessante na manipulação do sistema imune. O estudo proposto foi elaborado com a finalidade de trazer subsídios para viabilização de experimentos de terapia celular na distrofia muscular, por meio do conhecimento sobre a imunomodulação durante o tratamento in vitro, contribuindo para uma possível aplicação terapêutica em humanos. Para tanto, foram estudados dois grupos de cães, um grupo controle (GR; n=5) e um grupo de cães afetados (GRMD; n=9), compostos por machos e fêmeas. O estudo consistiu na avalição da proliferação de linfócitos na presença de MSC em diferentes concentrações, bem como da proliferaçao de linfócitos específicos como o Tauxiliar (CD4+FoxP3-) e Tregulatórios (CD4+FoxP3+) com as MSCs. Adicionalmente, realizamos a dosagem de nitrito com o intuito de quantificar a produção de óxido nítrico (NO) através do cocultivo de macrófagos com as MSCs. Neste estudo foi possível observar que as MSCs estimularam a proliferação significativa de linfócitos T regulatórios. Adicionalmente, essa porcentagem de divisão aumentou em cocultivos que utilizaram maiores concentrações de MSC. Maior concentração de nitrito também foi encontrada no cocultivos de MSC e macrófagos estimulado com LPS. Estas informações geram incrementos no entendimento de como as MSCs podem agir no organismo distrófico e como poderemos explorar essa fonte para promover um retardamento no processo inflamatório e consequentemente melhorar a qualidade de vida do paciente. / The Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a progressive hereditary neuromuscular disorder that affects human males. The canine model Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) is considered experimental model for studies of new therapies and better understanding of the DMD. The process of progressive dystrophy is related to changes in cell populations that comprise the immune system of patients, because due to the absence of the protein dystrophin in the sarcoplasmic membrane, the muscle is more susceptible to injury, occurring release of cytokines that recruit and stimulate cell immune, mainly macrophages and T lymphocytes in the long term, this continuous and persistent inflammatory response, the system takes a series of reactions that culminate with increasing damage to the point of exhaustion of satellite cells of muscle tissue and fibrosis occur. One of the most studied properties of mesenchymal stem cells (MSCs) is their immunomodulatory capacity, making these cells become promising in the use of cell therapy. In this context, this immunomodulatory can act as an interesting strategy in manipulating the immune system. The proposed study was designed in order to provide support for the feasibility of cell therapy trials in muscular dystrophy, through the knowledge of immunomodulation during treatment in vitro, contributing to a possible therapeutic application in humans. In this purpose, two groups were studied, a group of affected dog (GRMD, n=9) and a control group (GR, n=5 GR). The study consisted of rating of lymphocyte proliferation in the presence of MSCs in different concentrations as well as the proliferation of specific lymphocytes as Thelper (CD4+FoxP3-) and Tregulatory (CD4+FoxP3+) to MSCs. In addition, the dosage of nitrite performed in order to quantify the production of nitric oxide (NO) by coculture with macrophages MSCs. In this study we observed that MSCs stimulated significant proliferation of regulatory T lymphocytes. Additionally, this percentage split increased cocultivos that used higher concentrations of MSC. Highest concentration of nitrite was also found in cocultivos of MSC and macrophages stimulated with LPS. This information generates increments in understanding how MSCs may act in the body dystrophic and how we exploit this source to promote a delay in the inflammatory process and consequently improve the quality of life of patients

O sistema olfatório desempenha um papel relevante na exploração do ambiente e no reconhecimento social e sexual de mamíferos. Por meio deste sistema os animais podem reconhecer, detectar e discriminar uma grande quantidade de odorantes de estruturas químicas variadas, sinais químicos no ambiente essenciais para a sobrevivência e os ferormônios, que desencadeiam comportamentos sociais e reprodutivos. Algumas doenças e certos tipos de injúrias fisiológicas podem provocar a morte destas células, o que pode levar a perda da sensibilidade olfatória, embora já se saiba que este epitélio apresenta grupos de neurônios capazes de regeneração. A partir deste contexto, a terapia celular acaba sendo uma alternativa para o tratamento de patologias as quais acometem o sistema olfatório, como por exemplo, a anosmia que pode causar problemas graves, desde acidentes com gás ou comida estragada até depressão e distúrbios alimentares, causadas pela perda do paladar. Objetivou-se com este trabalho avaliar a recuperação da função olfatória de ratos anósmicos, bulbectomizados e submetidos a terapia celular com células-tronco provenientes do epitélio olfatório de ratos wistar. Para tanto foram utilizados 21 ratos machos Wistar de sessenta dias de idade, onde três foram utilizados para obtenção das células tronco do epitélio olfatório, dois para o controle cirúrgico, e restante foram divididos em 4 grupos: GI, GII, GIII e GIV os quais foram transplantados após 3, 7, 14 e 21 dias após a bulbectomia, respectivamente. A técnica cirúrgica foi realizada com incisão de pele, tecido subcutâneo e periósteo, seguida de abertura em janela de formato ovalado e remoção dos bulbos olfatórios mediante aspiração. Para a comprovação da anosmia após a cirurgia, os ratos foram submetidos ao teste comportamental do \"odor de gato\", e os do grupo controle após o período experimental foram sacrificados e a área encefálica da lesão causada pela cirurgia foi coletada onde foram realizadas análises histopatológicas. Os animais do GI, GII, GIII e GIV após 3, 7, 14 e 21 dias após bulbectomia foram anestesiados e receberam células tronco (1x106) do EOR no mesmo local da realização da bulbectomia, e posteriormente foram submetidos ao teste comportamental do \"odor de gato\". Transcorrido o período experimental, foram eutanasiados e os fragmentos de encéfalo foram coletados para análise histopatológica e imunohistoquímica. Os resultados evidenciam que realização da intervenção cirúrgica demonstrou remoção parcial do BO, com destruição da conexão nervosa entre os bulbos olfatórios e o epitélio olfatório. Ainda, a partir do teste comportamental do \"odor de gato\", e pela análise histopatológica das lesões causadas pela cirurgia, que evidenciou extensa área de necrose, com presença de hemossiderina e astrogliose reativa, constatou-se que a técnica empregada para promoção da bulbectomia foi eficaz para promoção da anosmia. A partir da análise comportamental, dos animais submetidos a terapia celular, os animais do GII e GIII apresentaram modificações no comportamento olfativo, com comportamento olfativo positivo ao \"odor do gato\", aversão comportamento defensivo, enquanto 100% dos animais do GI e GIV não apresentaram nenhuma modificação no comportamento olfativo. As análises por imunohistoquímica evidenciaram marcação positiva para o GFP, o que indica a presença das células tronco transduzidas com eGFP nos locais das lesões e ainda a expressão positiva do GFAP que evidencia a presença de astrogliose reativa com presença de cicatriz glial nos locais das lesões. / The olfactory system plays an important role in the exploration of the environment and in social and sexual behavior in mammals. Disturbances of the olfactory system such as observed in anosmia has also been related to accidents caused by gas leak and intoxications by food poisoning, in addition to eating disorders due to relation of the olfactory system with the taste. Through the olfactory system, animals recognize, detect and discriminate a large amount of odorants in a variety of chemical products, including pheromones, as well as in the environment which may guarantee their survival. Some diseases and injuries cause death of cells from the olfactory system leading to decrease or loss of the smell sensitivity. It is known that the olfactory epithelium has cells capable of regenerating neurons. Therefore, the utilization of these cells in cell therapy represents an alternative for the treatment of the olfactory system disorders. The objective of this study was to evaluate the regenaration of olfactory function of bulbectomized rats that were subjected to cell therapy with cells isolated from the olfactory epithelium. Twenty one male Wistar rats, sixty days of age were included in this study. Three rats were used for isolation of the olfactory epithelium cells, two for the surgical control and the remaining were divided into 4 groups: GI, GII, GIII and GIV corresponding to groups where cells were transplanted after 3, 7, 14 and 21 days after bulbectomy, respectively. The surgical technique was performed with skin, subcutaneous and periosteum incisions, followed by craniectomy and the removal of olfactory bulbs upon aspiration. For proof of anosmia, the rats were subjected to behavioral testing know as \"cat odor\". The animals of the control group were sacrificed and brain, with the lesion area, collected and processed for histopathological analysis. The animals of the experimental groups (GI, GII, GIII and GIV) were anesthetized and received heterologous cells (1x106) from olfactory epithelium, thorugh the same venue of the bulbectomy. These animals subsequently underwent behavioral \"cat odor\" testing. After 3, 7, 14 and 21 days of the cell injection, the rats were euthanized and the animals brains were collected for histopathological and immunohistochemical analyses. The results show that the surgical procedure promoted partial removal of olfactory bulbs, with destruction of the neural connection between the olfactory bulb and the olfactory epithelium. The behavioral \"cat odor\" test and the histopathological exams of the lesions, which revealed a large area of necrosis with presence of hemosiderin and reactive astrogliosis, demonstrated that the bulbectomy technique used to promote anosmia was effective. The behavioral test showed that the animals from GII and GIII presented changes in olfactory sensitivity, with positive \"cat odor\" aversion and defensive reaction. This test did not show change in GI and GIV groups. Immunohistochemistry analysis was positive for GFP, suggesting the presence of eGFP transduced cells at the sites of injury. In addition, the expression of GFAP positive cells demonstrated the presence of reactive astrogliosis with glial scar at the sites of injury.

A Diabetes mellitus em cães é cada vez mais frequente, decorrente de fatores genéticos e/ou ambientais, como um distúrbio endócrino que, de forma semelhante à que ocorre em humanos, falha no controle adequado de glicose no sangue, desencadeia a hiperglicemia, glicosúria e perda de peso. A terapia celular utilizando as células beta-pancreáticas tem sido alvo de estudos, devido à grande demanda de novos casos de Diabetes mellitus e à falta de órgãos para transplantes em humanos e animais. Acredita-se que a ciência possa responder e inovar em tratamentos, encontrando a possível cura para esta doença complexa. Portanto, o objetivo deste estudo foi obter e caracterizar células derivadas do pâncreas fetal canino de animais com idades compreendidas entre 50 e 60 dias de gestação. As células pancreáticas de fetos caninos apresentam morfologia fibroblastóide e crescimento em monocamada em cultivo, apresentam células pluripotentes e proliferativas, não são tumorigênicas e apresentam expressão de PDX1, um fator de transcrição que tem papel importante na ativação do gene promotor da insulina. O pâncreas possui inervação simpática, observado por fibras nervosas TH+. Histologicamente, o pâncreas fetal canino apresenta ácinos num estágio de organização avançado, com parênquima semelhante ao encontrado no cão adulto. As ilhotas pancreáticas são distribuídas no tecido de maneira irregular, organizando-se em pequenos aglomerados de células por entre os ácinos, especialmente próximas aos vasos sanguíneos. A coloração com Ditizona permitiu inferir a presença de insulina no tecido pancreático, o que foi comprovado mediante técnica de imunofluorescência, além da presença de células que expressam o hormônio somatostatina. Os resultados desta investigação indicam que o pâncreas fetal canino demonstra características favoráveis para ser uma fonte viável de células para estudos aplicados à terapia celular em cães. Outras investigações referentes à comprovação da produção de insulina in vitro por essas células se fazem necessárias / Diabetes mellitus in dogs is increasingly common, due to genetic and/or environmental factors such as an endocrine disorder, similarly to what occurs in humans, failure to adequately control blood glucose triggers hyperglycemia, glycosuria and weight loss. Cell therapy using the pancreatic beta cells has been the subject of studies, due to the great demand of new cases of diabetes mellitus and the lack of organs for transplants in humans and animals. It is believed that science can respond and innovate treatments, finding a possible cure for this disease complex. Therefore, the objective of this study was to obtain and characterize derived cells from canine fetal pancreas, of animals aged between 50 and 60 days of gestation. The pancreatic cells of canine fetuses exhibit fibroblastoid morphology and growth in monolayer culture, exhibit pluripotent and proliferative cells, are not tumorigenic and have PDX1 expression, a transcription factor that plays an important role in the activation of the insulin gene promoter. The pancreas has sympathetic innervation observed by TH+ nerve fibers. Histologically, the fetal pancreatic acini canine presents an advanced stage organization with similar parenchyma that found in adult dog. The pancreatic islets are distributed in the fabric unevenly, organizing themselves into small clusters of cells through the acini, especially close to the blood vessels. Staining with Dithizone allowed inferring the presence of insulin in the tissue, which was confirmed by immunofluorescence, in addition to cells that express somatostatin. The results of this investigation indicate that the canine fetal pancreas shows favorable characteristics to be a feasible source of cells for cell therapy applied to studies in dogs. Further investigation regarding the evidence of in vitro production of insulin by these cells are required

As células-tronco (CT) são células que apresentam propriedades de auto-renovação, capazes de gerar diferentes tipos celulares e reconstituir diversos tipos de tecidos, por isso têm sido vistas como uma alternativa terapêutica para o tratamento de muitas doenças cujo tratamento convencional não é eficiente. Além disso, por sua plasticidade, as CT podem ser usadas para produzir modelos in vitro para o estudo de doenças, o que tem sido particularmente interessante para doenças que acometem o sistema nervoso. As células-tronco humanas de dente decíduo esfoliado (Stem cell from Human Esfoliated Deciduous teeth, SHED) são descritas em alguns trabalhos como capazes de se diferenciarem em células neuronais através da transdiferenciação direta, um processo simples que possibilita a diferenciação de um tipo celular em outro por meio da utilização de agentes químicos. No entanto, a diferenciação de SHED em neurônios é contestada como sendo um artefato de cultura devido ação citotóxica destes agentes. Com base nesta premissa, o objetivo deste trabalho foi realizar protocolos para a produção de neurônios a partir das SHED utilizando modificações de métodos descritos na literatura e utilizados na diferenciação neuronal. Durante um dos protocolos utilizados, foi possível verificar a morfologia de células semelhantes à neurônio, porém após alguns dias de manutenção, as células voltavam ao formato fusiforme original. Com este trabalho podemos afirmar que, de acordo com os resultados obtidos, as SHED não geram neurônios funcionais / Stem cells (SC) are cells that present self-renewal properties, capable of generating cells types and reconstitute several tissue types. For this reason, they have been seen as a therapeutic alternative to the treatment of many diseases which conventional treatment is not efficient. Besides, because of its plasticity, SC may be used to produce in vitro models in order to study diseases, what is interesting to diseases that affect the nervous system. Human SC from SHED (Stem cell from Human Exfoliated Deciduous teeth, SHED) are described in some papers as being capable of self-differentiation in neuronal cells through the direct transdifferentiation, a simple process that makes possible the differentiation of a cell type in another through the use of chemical agents. Nevertheless, SHED differentiation is refuted as being a artifact of culture due to cytotoxic action of these agents. Based on this premise, the aim of this study was to carry out protocols in order to produce neurons from SHED, using modifications and methods of neuronal differentiation described in the literature and used in the neuronal differentiation. During one of the protocols used, it was possible to verify the morphology of the cells as neuron-like, however, after some days of maintenance, they turn back to their original fusiform format. In this study, we can state, according to the obtained results, that SHED do not generate functional neurons

A doença renal crônica é uma doença de alta incidência na espécie felina, sendo responsável por altas taxas de mortalidade e morbidade. O tratamento clínico é paliativo. Atualmente as células-tronco têm sido estudadas para várias doenças degenerativas e crônicas, entre elas a doença renal. O presente estudo testou a utilização uma nova linhagem de células, progenitoras do tecido renal na terapia de gatos domésticos acometidos naturalmente com doença renal crônica, nos estágios 1, 2 e 3 da doença (creatinina <1,6 a 5,0 mg/dl), por meio de avaliações clínicas e laboratoriais. Os animais foram divididos em dois grupos, experimental e controle. No grupo experimental foi aplicado pela via intraperitoneal 2x106 células progenitoras renais e os animais do grupo controle receberam a aplicação de PBS. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7 e 14 e monitorados clinicamente e por meio de exames laboratoriais, incluindo hemograma, creatinina, urinálise e o SDMA. A análise estatística foi realizada pelo teste Scheirer Ray Hare para dados não paramétricos (p=0,05). A aplicação intraperitoneal ocorreu sem intercorrências e aparenta ser segura para utilização em gatos. Dos 4 animais do grupo experimental 3 apresentaram melhora clínica, melhora do apetite e ganho de peso, o quarto animal apresentou perda de peso inicial, mas retornou ao peso do início do estudo 14 dias após a aplicação das células. Não houve diferenças estatísticas nos parâmetros de creatinina, ureia, fósforo e densidade urinária. Os leucócitos do grupo experimental apresentaram uma redução significativa em relação ao grupo controle. O SDMA apresentou redução em 3 animal do grupo experimental e aumento nos animais do grupo controle, mas a análise não apresentou diferença estatística devido ao aumento dos valores no em um dos animais. A aplicação de células progenitoras renais no tratamento da DRC em gatos é promissora e pode ser realizada pela via intraperitoneal, sem que ocorra intercorrências. / Chronic kidney disease is a high incidence disease in the feline species, responsible for high rates of mortality and morbidity. The clinical treatment is palliative. Currently, stem cells have been studied for various degenerative and chronic diseases, including kidney disease. The present study tested the use of a new lineage of renal tissue progenitor cells in the therapy of naturally occurring chronic kidney disease in cats at stages 1, 2 and 3 of the disease (creatinine <1.6 to 5.0 mg/dl), through clinical and laboratory evaluations. The animals were divided into two groups, experimental and control. In the experimental group 2x106 renal progenitor cells were administered intraperitoneally and the animals in the control group received PBS application. The animals were evaluated on days 0, 7 and 14 and monitored clinically and through laboratory tests, including complete blood count, creatinine, urinalysis and SDMA assay. Statistical analysis was performed by the Scheirer Ray Hare test for non-parametric data (p = 0.05). The intraperitoneal application occurred uneventfully and appeared to be safe for use in cats. Of the 4 animals in the experimental group 3 showed clinical improvement, food intake and weight gain, the fourth animal presented initial weight loss, but returned to the weight of the study beginning 14 days after the application of the cells. There were no statistical differences in the parameters of creatinine, urea, phosphorus and urinary density. Leukocytes in the experimental group showed a significant reduction in relation to the control group. The SDMA showed reduction in 3 animals from the experimental group and increase in the animals from the control group, but the analysis did not show statistical difference due to the increase values in one of the animals. The application of renal progenitor cells in the treatment of CKD in cats is promising and can be performed intraperitoneally, without causing intercurrences.