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Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2001. / Härtill 5 uppsatser.

A Via Alternativa é a principal via de ativação do sistema complemento (SC), sendo o Fator H (FH) um de seus principais reguladores. No presente estudo, nós investigamos os mecanismos moleculares pelo qual o paciente com a mutação Arg127His no FH possui deficiência do SC. Para isto, utilizamos fibroblastos de paciente e individuo normal estimulados com IFN-<font face=\"Symbol\">g e verificamos que as células do paciente eram capazes de produzir FH, contudo a maior parte das proteínas estava retida no retículo endoplasmático (RE). Em paralelo, transfectamos células Cos-7 com plasmídeos contendo a mutação CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T e observamos que a mutação foi responsável pelo retardo na secreção de FH. Apesar da mutação reduzir a secreção de FH, observamos que a capacidade de FH atuar como co-factor não foi afetada. Assim, avaliamos se o uso de chaperonas químicas poderia induzir a secreção da proteína e observamos que houve aumento na secreção de FH nos fibroblastos. Desta forma, propomos o uso desses fármacos como alternativa de tratamento para melhorar a sobrevida do paciente. / Factor H (FH) is one of the most important regulatory proteins of the alternative pathway of the complement system (CS). In this study, we investigated the consequences of FH Arg127His mutation to the secretion ratio of this protein by skin fibroblasts in vitro. We stimulated the FH synthesis from patient and normal control with IFN<font face=\"Symbol\">g when we observed that the patient cells were able to synthetize FH, however this mutant protein was mainly retained at the endoplasmic reticulum. In parallel, we transfected Cos-7 cells with plasmids containing CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T mutation and observed that the mutation was responsible for the delay in the FH secretion. Although the mutation reduced the FH secretion, we observed that the FH function was not affected. Thus, we evaluated whether the treatment with chemical chaperones could release FH to the culture supernant. We observed that patients fibroblasts treated increased the secretion of FH. In conclusion, we suggest the use of these chemical chaperones as a potential alternative therapeutic to improve the patients survival.

A Via Alternativa é a principal via de ativação do sistema complemento (SC), sendo o Fator H (FH) um de seus principais reguladores. No presente estudo, nós investigamos os mecanismos moleculares pelo qual o paciente com a mutação Arg127His no FH possui deficiência do SC. Para isto, utilizamos fibroblastos de paciente e individuo normal estimulados com IFN-<font face=\"Symbol\">g e verificamos que as células do paciente eram capazes de produzir FH, contudo a maior parte das proteínas estava retida no retículo endoplasmático (RE). Em paralelo, transfectamos células Cos-7 com plasmídeos contendo a mutação CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T e observamos que a mutação foi responsável pelo retardo na secreção de FH. Apesar da mutação reduzir a secreção de FH, observamos que a capacidade de FH atuar como co-factor não foi afetada. Assim, avaliamos se o uso de chaperonas químicas poderia induzir a secreção da proteína e observamos que houve aumento na secreção de FH nos fibroblastos. Desta forma, propomos o uso desses fármacos como alternativa de tratamento para melhorar a sobrevida do paciente. / Factor H (FH) is one of the most important regulatory proteins of the alternative pathway of the complement system (CS). In this study, we investigated the consequences of FH Arg127His mutation to the secretion ratio of this protein by skin fibroblasts in vitro. We stimulated the FH synthesis from patient and normal control with IFN<font face=\"Symbol\">g when we observed that the patient cells were able to synthetize FH, however this mutant protein was mainly retained at the endoplasmic reticulum. In parallel, we transfected Cos-7 cells with plasmids containing CG453T<font face=\"Symbol\">&#174; CA453T mutation and observed that the mutation was responsible for the delay in the FH secretion. Although the mutation reduced the FH secretion, we observed that the FH function was not affected. Thus, we evaluated whether the treatment with chemical chaperones could release FH to the culture supernant. We observed that patients fibroblasts treated increased the secretion of FH. In conclusion, we suggest the use of these chemical chaperones as a potential alternative therapeutic to improve the patients survival.

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Células dendríticas (DCs) são as responsáveis por orquestrar a resposta imunológica adaptativa através da estimulação de células T. Na imunoterapia do câncer, as DCs são um dos principais alvos de estimulação. Entretanto a maturação anormal destas pode interferir no resultado final da resposta imune. Neste estudo, analisaram-se os efeitos causados pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) na maturação de DCs. Nas DCs maturadas em presença de VEGF, utilizando-se citoquímica, constatou-se alterações morfológicas, como número reduzido de dendritos e citoplasma basofílico; a análise de expressão gênica global por microarranjos de DNA mostrou grande variação da expressão de genes relacionados com adesão celular e citoesqueleto. Na avaliação funcional verificou-se redução da capacidade das DCs de ativar linfócitos. Juntos esses resultados sugerem que células expostas ao VEGF seriam menos especializadas. A compreensão do impacto do VEGF em mecanismos de maturação celular contribui para o entendimento da supressão imunológica nos tumores que secretam VEGF. / Dendritic cells (DCs) are in charge of orchestrating the adaptive immune response through T cells activation. DCs are the main target in cancer cell immunotherapy. However, DCs inadequate maturation interferes in the outcome of the immune response. In this study, were analyzed the effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on DCs maturation. DCs matured in the presence of VEGF, showed morphologic alterations such as reduced number of dendrites and basophilic cytoplasm by cytochemistry. Global gene expression assessed by DNA microarrays demonstrated broad variation in the expression of cell adhesion and cytoskeleton regulation-related genes. Functional studies detected the reduced capacity of VEGF-exposed DCs in the activation of lymphocytes. All together these results suggest that cells exposed to VEGF are less differentiated, a possible mechanism involved in the immune suppression caused by VEGF secreting tumors.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst. / Härtill 5 uppsatser.

Tuberculosis (TB) is a global health problem, which is proving extremely difficult to control in the absence of an effective vaccine. Bacille Calmette-Gu&eacute;rin (BCG), the only vaccine currently licensed against TB, demonstrates variable efficacy in humans and cattle. A greater understanding of what constitutes a protective host immune response is required in order to aid the development of improved vaccines. Tissue-resident memory T cells (T_RM) are a recently-identified subset of T cells, which may represent an important aspect of protective immunity to TB. This thesis aims to characterise the role of lung T_RM in BCG-induced protection against TB. In a mouse model, intravascular staining allowed discrimination between lung-vascular and lung-parenchymal T cells. Experiments demonstrated that BCG vaccination induced a population of antigen-specific lung-parenchymal CD4⁺ T cells, a putative tissue-resident population. This lung-parenchymal population was significantly increased in frequency following mucosal BCG vaccination, compared to systemic BCG vaccination. This correlated with enhanced protection against Mycobacterium tuberculosis (M.tb) infection in the lungs of mice receiving mucosal BCG, compared to those receiving systemic BCG. Mucosal BCG induced lung-parenchymal CD4⁺ T cells with enhanced proliferative capacity and a PD1⁺KLRG1^- cell-surface phenotype, a memory-like phenotype associated with improved protection against M.tb infection. These cells may represent a BCG-induced lung T_RM population responsible for the enhanced protection observed following mucosal BCG. Overall, this thesis highlights the potential of mucosal vaccination to elicit lung T_RM and identifies this as a possible immunological mechanism underlying enhanced protection against M.tb infection. These cells may constitute an important target for future vaccination strategies.

Células dendríticas (DCs) são as responsáveis por orquestrar a resposta imunológica adaptativa através da estimulação de células T. Na imunoterapia do câncer, as DCs são um dos principais alvos de estimulação. Entretanto a maturação anormal destas pode interferir no resultado final da resposta imune. Neste estudo, analisaram-se os efeitos causados pelo fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) na maturação de DCs. Nas DCs maturadas em presença de VEGF, utilizando-se citoquímica, constatou-se alterações morfológicas, como número reduzido de dendritos e citoplasma basofílico; a análise de expressão gênica global por microarranjos de DNA mostrou grande variação da expressão de genes relacionados com adesão celular e citoesqueleto. Na avaliação funcional verificou-se redução da capacidade das DCs de ativar linfócitos. Juntos esses resultados sugerem que células expostas ao VEGF seriam menos especializadas. A compreensão do impacto do VEGF em mecanismos de maturação celular contribui para o entendimento da supressão imunológica nos tumores que secretam VEGF. / Dendritic cells (DCs) are in charge of orchestrating the adaptive immune response through T cells activation. DCs are the main target in cancer cell immunotherapy. However, DCs inadequate maturation interferes in the outcome of the immune response. In this study, were analyzed the effects of vascular endothelial growth factor (VEGF) on DCs maturation. DCs matured in the presence of VEGF, showed morphologic alterations such as reduced number of dendrites and basophilic cytoplasm by cytochemistry. Global gene expression assessed by DNA microarrays demonstrated broad variation in the expression of cell adhesion and cytoskeleton regulation-related genes. Functional studies detected the reduced capacity of VEGF-exposed DCs in the activation of lymphocytes. All together these results suggest that cells exposed to VEGF are less differentiated, a possible mechanism involved in the immune suppression caused by VEGF secreting tumors.

Paracoccidioidomicose é adquirida pela via respiratória e a enzima indolamina-2,3-dioxigenase (IDO) e o catabolismo do triptofano estão envolvidos no controle da imunidade inata e adaptativa contra patógenos. Investigamos o papel da IDO na doença em animais suscetíveis (B10.A) e resistentes (A/J). Caracterizamos o efeito do tratamento com 1-Metil-DL-Triptofano (1MT) no fenótipo e comportamento de células dendríticas (DCs) e T reguladoras (Tregs) de A/J e B10.A quanto à expressão de IDO. IDO controla a carga fúngica de A/J e B10.A, reduzindo a imunidade de TCD4 e TCD8 e aumentando Tregs. Constatamos que IDO diminuiu a migração de DCs para o pulmão de A/J e B10.A e a inibição da atividade anti-inflamatória de IDO por 1MT tem um efeito deletério somente em B10.A cuja suscetibilidade é ligada à excessiva atividade pró-inflamatória. A infecção de A/J e B10.A parece induzir as funções catalítica e sinalizadora de IDO.Grande parte da função de IDO nos mecanismos imunorreguladores na paracoccidioidomicose se faz através da modulação da função de DCs em A/J e B10.A. / Paracoccidioidomycosis is acquired by the respiratory route and the enzyme indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO) and tryptophan catabolism are involved in the control of innate and adaptive immunity against pathogens. We investigated the role of IDO in the infection in susceptible (B10.A) and resistant (A/J) mice. We characterized the effect of treatment with 1-Methyl-DL-Tryptophan (1MT) in the behavior and phenotype of dendritic cells (DCs) and regulatory T cells (Tregs) from A/J and B10.A for expression of IDO. IDO controls the fungal load in A/J and B10.A, reducing the immunity of CD4 and CD8 T cells and Tregs increased. IDO decreased the migration of DCs to the lung of A/J and B10.A and inhibition of anti-inflammatory activity of IDO by 1MT has a deleterious effect only in B10.A whose susceptibility is linked to excessive proinflammatory activity. Infection of A/J and B10.A appears to induce catalytic functions of IDO. Much of the function IDO immunoregulatory mechanisms paracoccidioidomycosis is done by modulating the function of DCs in A/J and B10.A.