Exossomos (Exo) originados de células dendríticas (DCs) carregam moléculas associadas à apresentação antigênica. Neste trabalho procurou-se estabelecer se Exo de DCs seriam capazes de conferir imunogenicidade às células tumorais. Os Exo isolados de culturas de DCs expressavam as moléculas HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 e CD18. Estes foram então adicionados às células da linhagem humana de adenocarcinoma mamário, SK-BR-3, as quais passaram a expressar as moléculas HLA-DR, CD86 e CD11c. As células tumorais modificadas pelos Exo induziram a produção de IL-6 e IL-10, detectados no sobrenadante das co-culturas destas com linfócitos T. Estas células tumorais também induziram aumento do número de linfócitos produtores de IFN-<font face=\"Symbol\">g, pré-sensibilizados contra antígenos tumorais, e aumento da expressão de SOCS3 nestes. Em conclusão, nossos resultados mostram que, Exo de DCs alteram o fenótipo de células tumorais, modificando sua interação com linfócitos T, sem induzir nas mesmas capacidade de ativar respostas proliferativas ou citotóxicas de linfócitos T in vitro. / Exosomes (Exo) originated from dendritic cells (DCs) contain molecules involved in antigen presentation. The present work sought to determine if Exo from DCs would be able to transfer immunogenicity to tumor cells. Exo isolated from DCs cultures carried HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 and CD18. These Exo were added to cultures of the human breast adenocarcinoma cell line, SK-BR-3, which gained expression of HLA-DR, CD86 and CD11c. Tumor cells modified by Exo induced IL-6 and IL-10 production, detected in the supernatant of their co-cultures with T lymphocytes. These tumor cells also induced an increase in the frequency of IFN-<font face=\"Symbol\">g-producing T lymphocytes, pre-sensitized against tumor antigens, and an increased expression of SOCS3. In conclusion, our results show that, Exo from DCs affect the phenotype of tumor cells, modifying their interaction with T lymphocytes, without inducing the ability to activate cytotoxic or T cell proliferative responses in vitro.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2005. / Härtill 5 uppsatser.

Exossomos (Exo) originados de células dendríticas (DCs) carregam moléculas associadas à apresentação antigênica. Neste trabalho procurou-se estabelecer se Exo de DCs seriam capazes de conferir imunogenicidade às células tumorais. Os Exo isolados de culturas de DCs expressavam as moléculas HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 e CD18. Estes foram então adicionados às células da linhagem humana de adenocarcinoma mamário, SK-BR-3, as quais passaram a expressar as moléculas HLA-DR, CD86 e CD11c. As células tumorais modificadas pelos Exo induziram a produção de IL-6 e IL-10, detectados no sobrenadante das co-culturas destas com linfócitos T. Estas células tumorais também induziram aumento do número de linfócitos produtores de IFN-<font face=\"Symbol\">g, pré-sensibilizados contra antígenos tumorais, e aumento da expressão de SOCS3 nestes. Em conclusão, nossos resultados mostram que, Exo de DCs alteram o fenótipo de células tumorais, modificando sua interação com linfócitos T, sem induzir nas mesmas capacidade de ativar respostas proliferativas ou citotóxicas de linfócitos T in vitro. / Exosomes (Exo) originated from dendritic cells (DCs) contain molecules involved in antigen presentation. The present work sought to determine if Exo from DCs would be able to transfer immunogenicity to tumor cells. Exo isolated from DCs cultures carried HLA-ABC, HLA-DR, CD86, CD11c, CD81, CD54 and CD18. These Exo were added to cultures of the human breast adenocarcinoma cell line, SK-BR-3, which gained expression of HLA-DR, CD86 and CD11c. Tumor cells modified by Exo induced IL-6 and IL-10 production, detected in the supernatant of their co-cultures with T lymphocytes. These tumor cells also induced an increase in the frequency of IFN-<font face=\"Symbol\">g-producing T lymphocytes, pre-sensitized against tumor antigens, and an increased expression of SOCS3. In conclusion, our results show that, Exo from DCs affect the phenotype of tumor cells, modifying their interaction with T lymphocytes, without inducing the ability to activate cytotoxic or T cell proliferative responses in vitro.

Introdução: O carcinoma de células renais metastático (CCRm) é um tumor altamente agressivo e resistente. Seu tratamento é baseado em terapia alvo molecular e citocinas. Avaliamos os efeitos antineoplásicos do Amblyomin-X, sobre CCR. Métodos: Avaliadas culturas de CCR RENCA e fibroblastos normais NIH/3T3 tratadas ou não com Amblyomin-X. Realizados ensaios de viabilidade celular por MTT e determinação, por citometria de fluxo, da proporção de células em apoptose/necrose; expressão da P-gp; Bad; Bax; Bcl-2; ciclina D1; caspase 3; Ki-67; p53; VEGFR1; citocromo c; análise das fase do ciclo celular; e atividade do proteassoma. Analisamos as populações celulares por microscopia eletrônica de varredura. Empregados testes T e One-way ANOVA para análise estatística. Resultados: O Amblyomin-X demonstrou citotoxicidade em células RENCA por indução de apoptose, diminuição de proliferação celular, inibição do proteassoma e modulação do ciclo celular em G0/G1. Em fibroblastos normais não houve citotoxicidade Conclusão: O Amblyomin-X apresentou efeito antineoplásico em CCR e não exerceu efeito citotóxico em células normais, demonstrando um possível potencial terapêutico no tratamento do CCRm. Estudos futuros deverão confirmar estes resultados. / Introduction: Metastatic renal cell carcinoma (mRCC) is a highly agressive and resistant tumour. Its treatment is based on targeted therapies and cytokines. We have evaluated the antineoplasic effects of Amblyomin-X on RCC. Methods: RCC (RENCA) and fibroblasts (NIH/3T3) cell cultures treated or not with Amblyomin-X were evaluated. MTT assay was performed to determine cell viability. Apoptosis/necrosis ratio; expression of P-gp; Bad; Bax; Bcl-2; cyclin D1; caspase-3; Ki-67; p53; VEGFR1; cytochrome c; cell cycle analysis and proteasome activity were obtained by flow cytometry. Cellular populations were analised by Scanning Electron Microscopy. Statistical analyses was performed using T-Tests and One-way ANOVA. Results: Amblyomin-X showed cytotoxic activity on RENCA tumor cells. It has induced apoptosis, decreased tumor cell proliferation, targeted the ubiquitinproteasome system and modulated genes related to cell cycle in G0/G1. There was no toxicity on fibroblasts. Conclusion: Amblyomin-X showed antineoplasic effects on RCC cells preserved normal fibroblast cells. There is a potential role of its therapeutic use in mRCC treatment. Future studies should confirm our initial results.

Introdução: O carcinoma de células renais metastático (CCRm) é um tumor altamente agressivo e resistente. Seu tratamento é baseado em terapia alvo molecular e citocinas. Avaliamos os efeitos antineoplásicos do Amblyomin-X, sobre CCR. Métodos: Avaliadas culturas de CCR RENCA e fibroblastos normais NIH/3T3 tratadas ou não com Amblyomin-X. Realizados ensaios de viabilidade celular por MTT e determinação, por citometria de fluxo, da proporção de células em apoptose/necrose; expressão da P-gp; Bad; Bax; Bcl-2; ciclina D1; caspase 3; Ki-67; p53; VEGFR1; citocromo c; análise das fase do ciclo celular; e atividade do proteassoma. Analisamos as populações celulares por microscopia eletrônica de varredura. Empregados testes T e One-way ANOVA para análise estatística. Resultados: O Amblyomin-X demonstrou citotoxicidade em células RENCA por indução de apoptose, diminuição de proliferação celular, inibição do proteassoma e modulação do ciclo celular em G0/G1. Em fibroblastos normais não houve citotoxicidade Conclusão: O Amblyomin-X apresentou efeito antineoplásico em CCR e não exerceu efeito citotóxico em células normais, demonstrando um possível potencial terapêutico no tratamento do CCRm. Estudos futuros deverão confirmar estes resultados. / Introduction: Metastatic renal cell carcinoma (mRCC) is a highly agressive and resistant tumour. Its treatment is based on targeted therapies and cytokines. We have evaluated the antineoplasic effects of Amblyomin-X on RCC. Methods: RCC (RENCA) and fibroblasts (NIH/3T3) cell cultures treated or not with Amblyomin-X were evaluated. MTT assay was performed to determine cell viability. Apoptosis/necrosis ratio; expression of P-gp; Bad; Bax; Bcl-2; cyclin D1; caspase-3; Ki-67; p53; VEGFR1; cytochrome c; cell cycle analysis and proteasome activity were obtained by flow cytometry. Cellular populations were analised by Scanning Electron Microscopy. Statistical analyses was performed using T-Tests and One-way ANOVA. Results: Amblyomin-X showed cytotoxic activity on RENCA tumor cells. It has induced apoptosis, decreased tumor cell proliferation, targeted the ubiquitinproteasome system and modulated genes related to cell cycle in G0/G1. There was no toxicity on fibroblasts. Conclusion: Amblyomin-X showed antineoplasic effects on RCC cells preserved normal fibroblast cells. There is a potential role of its therapeutic use in mRCC treatment. Future studies should confirm our initial results.