Thesis (D.P.H.)--University of Michigan, 1993.

Salvia officinalis (Lamiaceae), conhecida popularmente como sálvia, tem sido muito utilizada no sul do Brasil como condimento nos alimentos, tintura hidroalcoólica e chá para o tratamento de vários distúrbios de saúde. As propriedades dessa planta são estudadas por apontar possíveis mecanismos de ação antioxidante e antitumoral. Neste trabalho, o extrato hidroalcoólico e aquoso de sálvia foram analisados quimicamente por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas (GC-MS) e electrospray de alta resolução acoplada a espectrômetro de massas (ESI-QTOF MS/MS) em modo negativo. A identificação química mostrou a presença de ácidos como caféico, rosmarínico, málico, succínico, tartárico, cítrico, ursólico e compostos como luteolina-7-O-glucoronide, eucaliptol, β-tujona, β-cariofileno, α-cariofileno, α- tujona, cânfora viridiflorol, mannol, rosmanol e seus isômeros metilcarnosato e ácido 12-metoxicarnosinico. Os extratos apresentaram compostos polifenólicos com capacidade de varrer os radicais 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH•) e 2,2’- azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) (ABTS•+), além de atividade catalase (CATlike) e superóxido dismutase (SOD-like). Ambos os extratos apresentaram menor citotoxicidade em linhagens não tumorais (HeK-293 e MRC-5) e seletividade para linhagens tumorais (Hep-2, HeLa, A-549, HT-29, A-375 e HepG2). Além disso, verificou-se que o aumento do tempo de exposição ao extrato hidroalcoólico diminuiu a viabilidade em linhagens tumorais. Foram observadas alterações morfológicas por coloração de Giemsa e a avaliação da apoptose com anexina V e iodeto de propídeo mostraram a maioria das células tumorais em estágios finais do processo de apoptose e necrose após 24h de tratamento em ambos os extratos. Sugere-se que o extrato de Salvia officinalis (L.) possui atividade biológica em células tumorais, podendo ser objetivo de mais estudos com a finalidade de comprovar sua eficácia como possível agente para o tratamento do câncer. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-12T12:00:17Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Charlene Silvestrin Celi Garcia.pdf: 2151872 bytes, checksum: 7bfd73bdf5fd152982466e3f75044d21 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T12:00:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Charlene Silvestrin Celi Garcia.pdf: 2151872 bytes, checksum: 7bfd73bdf5fd152982466e3f75044d21 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul, FAPERGS / Salvia officinalis (Lamiaceae), popularly known as sage, has been used in south of Brazil as a condiment in foods, as tincture and tea for the treatment various health disorders. The properties of this plant have been studied and suggest possible mechanisms of antioxidant and antitumor action. Here, the sage hydroalcoholic and aqueous extract were chemically analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and by high-resolution electrospray ionization mass spectrometry (ESI-HRMS) in negative mode. The chemical identification showed the presence of acids as caffeic, rosmarinic, malic, succinic, tartaric, citric, ursolic and compouns like luteolin-7-O-glucoronide, eucalyptol, β-thujone, β-caryophyllene, α-caryophyllenen and α-thujone, camphor, viridiflorol, mannol, rosmanol and its isomers methylcarnosate and 12-methoxycarnosinic acid. The extracts showed the content of polyphenolic compounds, ability to scavenge the free radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH•) and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS•+), moreover catalase (CAT-like) and superoxide dismutase (SOD-like) activity. Both extracts showed lower cytotoxicity in non-tumor lines (HEK-293 and MRC-5) and selectivity for tumor cell lines (Hep-2, HeLa, A-549, HT-29, A-375 e HepG2). Furthermore, it was found that increasing the treatment exposure time of the hydroalcoholic extract decreases the tumor cell viability. Morphological changes by giemsa were observed and staining for annexin V and propidium iodide showed majority of tumor cells at late stages of the apoptotic process and necrosis after 24h treatment with both extracts. The results of this study suggest that the extract of Salvia officinalis (L.) has biological activity against tumor cell and may be the objective of further studies in order to prove its effectiveness as a possible agent for the treatment of cancer.

A jabuticaba (Plinia sp.), uma fruta nativa do Brasil, tem despertado grande interesse científico devido ao seu conteúdo de fitonutrientes e seus benefícios a saúde, sendo considerada um alimento funcional. Estudos demonstraram que a jabuticaba é rica em compostos fenólicos, principalmente antocianinas e flavonóis. Esses compostos vêm sendo relacionados à redução da incidência de doenças que apresentam o estresse oxidativo e nitrosativo em sua fisiopatologia, como doenças cardiovasculares, diabetes e o câncer. Recentemente, estudos têm demonstrado que a disfunção mitocondrial está presente como um fator determinante no desenvolvimento e progressão do estresse oxidativo e nitrosativo e que compostos fenólicos teriam a capacidade de regular essa disfunção. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a composição de macronutrientes, o conteúdo de compostos fenólicos totais e antocianinas da casca e da polpa de jabuticaba (P. trunciflora). Paralelamente, determinou-se a composição química do extrato de casca de jabuticaba (ECJ), através de espectrometria de massas, e a sua atividade antioxidante in vitro através dos ensaios de DPPH• e ABTS•+. Além disso, avaliou-se a capacidade do ECJ em reduzir o estresse oxidativo/nitrosativo e modular a função mitocondrial, a qual foi determinada através da atividade do complexo I da cadeia de transporte de elétrons e da biossíntese de ATP, na linhagem celular de fibroblastos de pulmão humano (MRC-5) tratados com H2O2. Os resultados demonstraram que o principal macronutriente presente tanto na casca quanto na polpa da jabuticaba são carboidratos. A casca apresentou maior conteúdo de fibras totais em relação à polpa. Além disso, os compostos fenólicos apresentaram-se em maior quantidade na casca da jabuticaba, sendo que a maior parte destes compostos encontrados na casca são antocianinas. A análise de espectrometria de massas do ECJ permitiu a identificação de cianidina-3-O-glicosideo, canferol, ácido hexadecanóico e ácido octadecanóico. O ECJ apresentou atividade antioxidante in vitro nos dois ensaios utilizados. Nas células MRC-5 o ECJ foi capaz de evitar significativamente a diminuição da atividade do complexo I da cadeia de transporte de elétrons e atenuou a diminuição na biossíntese de ATP induzida pelo H2O2. Concomitantemente, o ECJ foi capaz de minimizar o aumento da peroxidação lipídica, os níveis de óxido nítrico e a perda da viabilidade induzida pelo H2O2 nas células MRC-5. Estes dados mostram, pela primeira vez, a capacidade do ECJ em reduzir danos oxidativos/nitrosativos via modulação da função mitocondrial em células de mamíferos. Além disso, esses achados representam um avanço em relação ao entendimento dos mecanismos de ação dos compostos fenólicos e colaboram como uma alternativa para o desenvolvimento de possíveis tratamentos de doenças que apresentam a disfunção mitocondrial e o estresse oxidativo/nitrosativo em sua fisiopatologia. / Submitted by Ana Guimarães Pereira (agpereir@ucs.br) on 2015-02-12T12:25:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caroline Calloni.pdf: 2384035 bytes, checksum: b09d76eb830be7e315d9a2479fa5b6fc (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-12T12:25:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Caroline Calloni.pdf: 2384035 bytes, checksum: b09d76eb830be7e315d9a2479fa5b6fc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Jaboticaba (Plinia sp.), a native fruit from Brazil, has attracted scientific interest due to its phytonutrient content and potential health benefits, and therefore it has being considered a functional food. Studies have shown that jaboticaba is a rich source of phenolic compounds, mainly anthocyanins and flavonols. Phenolic compounds are natural products that hold important biological activities and have been reported to reduce the incidence of disease associated with oxidative and nitrosative stress in their pathophysiology, such as cardiovascular diseases, diabetes and cancer. Recent studies have shown that mitochondrial dysfunction is a key factor in development and progression of oxidative and nitrosative stress. Moreover, studies have observed the ability of phenolic compounds to modulate mitochondrial function. Thus the aim of this study was to evaluate the macronutrient composition, the total phenolic content and anthocyanins content in jaboticaba (P. trunciflora) peel and pulp. Simultaneously, it was determined the chemical composition of the jaboticaba peel extract (JPE) by mass spectrometry, and its in vitro antioxidant activity through the DPPH• and ABTS•+ assays. The ability of JPE to reduce oxidative/nitrosative stress and modulate mitochondrial function, assessed by complex I activity and ATP biossintesis, in human lung fibroblasts cells (MRC 5) challenged with H2O2 were also determined. Results evidenced that the majority of macronutrients present in both peel and pulp are carbohydrates. Jaboticaba peel showed higher fiber content than the pulp. Phenolic compounds are also present in higher quantity in the peel, and almost all phenolic compounds present in the peel are anthocyanins. Mass spectrometry analysis of the JPE allowed the identification of cyanidin-3-O-glucoside, kaempferol, hexadecanoic acid and octadecanoic acid compounds. The JPE presented in vitro antioxidant activity, through DPPH• and ABTS•+ assays. In MRC-5 cells, JPE was able to prevent the decrease in complex I activity and attenuated the decrease in ATP levels induced by H2O2. The ECJ was also able to minimize the increased in lipid peroxidation and nitric oxide levels, and prevented the cell viability loss induced by H2O2. These results show for the first time, the ability of JPE to reduce oxidative/nitrosativos damage via modulation of mitochondrial function in mammalian cells. Furthermore, these findings represent an advance over the understanding of the mechanisms of action of phenolic compounds and collaborate as an alternative for the development of potential treatments for diseases with mitochondrial dysfunction and oxidative/nitrosative stress in their pathophysiology.

A jabuticaba (Plinia sp.), uma fruta nativa do Brasil, tem despertado grande interesse científico devido ao seu conteúdo de fitonutrientes e seus benefícios a saúde, sendo considerada um alimento funcional. Estudos demonstraram que a jabuticaba é rica em compostos fenólicos, principalmente antocianinas e flavonóis. Esses compostos vêm sendo relacionados à redução da incidência de doenças que apresentam o estresse oxidativo e nitrosativo em sua fisiopatologia, como doenças cardiovasculares, diabetes e o câncer. Recentemente, estudos têm demonstrado que a disfunção mitocondrial está presente como um fator determinante no desenvolvimento e progressão do estresse oxidativo e nitrosativo e que compostos fenólicos teriam a capacidade de regular essa disfunção. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a composição de macronutrientes, o conteúdo de compostos fenólicos totais e antocianinas da casca e da polpa de jabuticaba (P. trunciflora). Paralelamente, determinou-se a composição química do extrato de casca de jabuticaba (ECJ), através de espectrometria de massas, e a sua atividade antioxidante in vitro através dos ensaios de DPPH• e ABTS•+. Além disso, avaliou-se a capacidade do ECJ em reduzir o estresse oxidativo/nitrosativo e modular a função mitocondrial, a qual foi determinada através da atividade do complexo I da cadeia de transporte de elétrons e da biossíntese de ATP, na linhagem celular de fibroblastos de pulmão humano (MRC-5) tratados com H2O2. Os resultados demonstraram que o principal macronutriente presente tanto na casca quanto na polpa da jabuticaba são carboidratos. A casca apresentou maior conteúdo de fibras totais em relação à polpa. Além disso, os compostos fenólicos apresentaram-se em maior quantidade na casca da jabuticaba, sendo que a maior parte destes compostos encontrados na casca são antocianinas. A análise de espectrometria de massas do ECJ permitiu a identificação de cianidina-3-O-glicosideo, canferol, ácido hexadecanóico e ácido octadecanóico. O ECJ apresentou atividade antioxidante in vitro nos dois ensaios utilizados. Nas células MRC-5 o ECJ foi capaz de evitar significativamente a diminuição da atividade do complexo I da cadeia de transporte de elétrons e atenuou a diminuição na biossíntese de ATP induzida pelo H2O2. Concomitantemente, o ECJ foi capaz de minimizar o aumento da peroxidação lipídica, os níveis de óxido nítrico e a perda da viabilidade induzida pelo H2O2 nas células MRC-5. Estes dados mostram, pela primeira vez, a capacidade do ECJ em reduzir danos oxidativos/nitrosativos via modulação da função mitocondrial em células de mamíferos. Além disso, esses achados representam um avanço em relação ao entendimento dos mecanismos de ação dos compostos fenólicos e colaboram como uma alternativa para o desenvolvimento de possíveis tratamentos de doenças que apresentam a disfunção mitocondrial e o estresse oxidativo/nitrosativo em sua fisiopatologia. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Jaboticaba (Plinia sp.), a native fruit from Brazil, has attracted scientific interest due to its phytonutrient content and potential health benefits, and therefore it has being considered a functional food. Studies have shown that jaboticaba is a rich source of phenolic compounds, mainly anthocyanins and flavonols. Phenolic compounds are natural products that hold important biological activities and have been reported to reduce the incidence of disease associated with oxidative and nitrosative stress in their pathophysiology, such as cardiovascular diseases, diabetes and cancer. Recent studies have shown that mitochondrial dysfunction is a key factor in development and progression of oxidative and nitrosative stress. Moreover, studies have observed the ability of phenolic compounds to modulate mitochondrial function. Thus the aim of this study was to evaluate the macronutrient composition, the total phenolic content and anthocyanins content in jaboticaba (P. trunciflora) peel and pulp. Simultaneously, it was determined the chemical composition of the jaboticaba peel extract (JPE) by mass spectrometry, and its in vitro antioxidant activity through the DPPH• and ABTS•+ assays. The ability of JPE to reduce oxidative/nitrosative stress and modulate mitochondrial function, assessed by complex I activity and ATP biossintesis, in human lung fibroblasts cells (MRC 5) challenged with H2O2 were also determined. Results evidenced that the majority of macronutrients present in both peel and pulp are carbohydrates. Jaboticaba peel showed higher fiber content than the pulp. Phenolic compounds are also present in higher quantity in the peel, and almost all phenolic compounds present in the peel are anthocyanins. Mass spectrometry analysis of the JPE allowed the identification of cyanidin-3-O-glucoside, kaempferol, hexadecanoic acid and octadecanoic acid compounds. The JPE presented in vitro antioxidant activity, through DPPH• and ABTS•+ assays. In MRC-5 cells, JPE was able to prevent the decrease in complex I activity and attenuated the decrease in ATP levels induced by H2O2. The ECJ was also able to minimize the increased in lipid peroxidation and nitric oxide levels, and prevented the cell viability loss induced by H2O2. These results show for the first time, the ability of JPE to reduce oxidative/nitrosativos damage via modulation of mitochondrial function in mammalian cells. Furthermore, these findings represent an advance over the understanding of the mechanisms of action of phenolic compounds and collaborate as an alternative for the development of potential treatments for diseases with mitochondrial dysfunction and oxidative/nitrosative stress in their pathophysiology.

Salvia officinalis (Lamiaceae), conhecida popularmente como sálvia, tem sido muito utilizada no sul do Brasil como condimento nos alimentos, tintura hidroalcoólica e chá para o tratamento de vários distúrbios de saúde. As propriedades dessa planta são estudadas por apontar possíveis mecanismos de ação antioxidante e antitumoral. Neste trabalho, o extrato hidroalcoólico e aquoso de sálvia foram analisados quimicamente por meio de cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massas (GC-MS) e electrospray de alta resolução acoplada a espectrômetro de massas (ESI-QTOF MS/MS) em modo negativo. A identificação química mostrou a presença de ácidos como caféico, rosmarínico, málico, succínico, tartárico, cítrico, ursólico e compostos como luteolina-7-O-glucoronide, eucaliptol, β-tujona, β-cariofileno, α-cariofileno, α- tujona, cânfora viridiflorol, mannol, rosmanol e seus isômeros metilcarnosato e ácido 12-metoxicarnosinico. Os extratos apresentaram compostos polifenólicos com capacidade de varrer os radicais 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH•) e 2,2’- azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-ácido sulfônico) (ABTS•+), além de atividade catalase (CATlike) e superóxido dismutase (SOD-like). Ambos os extratos apresentaram menor citotoxicidade em linhagens não tumorais (HeK-293 e MRC-5) e seletividade para linhagens tumorais (Hep-2, HeLa, A-549, HT-29, A-375 e HepG2). Além disso, verificou-se que o aumento do tempo de exposição ao extrato hidroalcoólico diminuiu a viabilidade em linhagens tumorais. Foram observadas alterações morfológicas por coloração de Giemsa e a avaliação da apoptose com anexina V e iodeto de propídeo mostraram a maioria das células tumorais em estágios finais do processo de apoptose e necrose após 24h de tratamento em ambos os extratos. Sugere-se que o extrato de Salvia officinalis (L.) possui atividade biológica em células tumorais, podendo ser objetivo de mais estudos com a finalidade de comprovar sua eficácia como possível agente para o tratamento do câncer. / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul, FAPERGS / Salvia officinalis (Lamiaceae), popularly known as sage, has been used in south of Brazil as a condiment in foods, as tincture and tea for the treatment various health disorders. The properties of this plant have been studied and suggest possible mechanisms of antioxidant and antitumor action. Here, the sage hydroalcoholic and aqueous extract were chemically analyzed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) and by high-resolution electrospray ionization mass spectrometry (ESI-HRMS) in negative mode. The chemical identification showed the presence of acids as caffeic, rosmarinic, malic, succinic, tartaric, citric, ursolic and compouns like luteolin-7-O-glucoronide, eucalyptol, β-thujone, β-caryophyllene, α-caryophyllenen and α-thujone, camphor, viridiflorol, mannol, rosmanol and its isomers methylcarnosate and 12-methoxycarnosinic acid. The extracts showed the content of polyphenolic compounds, ability to scavenge the free radical 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH•) and 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS•+), moreover catalase (CAT-like) and superoxide dismutase (SOD-like) activity. Both extracts showed lower cytotoxicity in non-tumor lines (HEK-293 and MRC-5) and selectivity for tumor cell lines (Hep-2, HeLa, A-549, HT-29, A-375 e HepG2). Furthermore, it was found that increasing the treatment exposure time of the hydroalcoholic extract decreases the tumor cell viability. Morphological changes by giemsa were observed and staining for annexin V and propidium iodide showed majority of tumor cells at late stages of the apoptotic process and necrosis after 24h treatment with both extracts. The results of this study suggest that the extract of Salvia officinalis (L.) has biological activity against tumor cell and may be the objective of further studies in order to prove its effectiveness as a possible agent for the treatment of cancer.

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Fast photochemical oxidation of proteins (FPOP) is an emerging footprinting method that utilizes hydroxyl radicals. The use of hydroxyl radicals create stable labeled products that can be analyzed with mass spectrometry. The advantage of FPOP over other methods is the fast acquisition of results and the small amount of sample required for analysis. Protein structure and protein- ligand interactions have been studied with FPOP. Here we evaluated (1) the reproducibility of FPOP, (2) the effect of hydrogen peroxide concentration on oxidation and (3) the use of FPOP to evaluate protein- nucleic acid interaction with Apurinic/Apurinic endonuclease 1 (APE1) protein. APE1 is a pleotropic protein that has been crystallized and studied widely. The 35641.5 Da protein has two major functional activities: DNA repair and redox function. An intact protein study of APE1 showed consistent global labeling by FPOP and a correlation between oxidation and hydrogen peroxide concentration. Furthermore, analysis of APE1 with DNA was done in hopes of probing the DNA binding site. Although the oxidation observed was not sufficient to define the complex pocket, a dramatic effect was seen in residue oxidation when DNA was added. Interestingly, the internal residues were labeled collectively in all APE1 experiments which indicates partial unfolding of the protein as previously suggested in the literature. Hence, these findings establish the use of FPOP to capture protein dynamics and provide evidence of the existence breathing dynamics of APE1.

Polarimetry, as applied to chemical analysis, deals with the determination of the extent and direction that an optically active chemical species will rotate incident linearly polarized light. Although well developed for physical sensing, the technique of fiber optic polarimetry for chemical sensing remains in its infancy. This thesis is concerned with the design and development of an optical fiber polarimeter which measures the optical rotation of linearly polarized light that occurs in a sensing region between two multi-mode optical fibers. Over short distances, the polarization preserving capabilities of large-core multi-mode optical fibers were investigated. Polarimetric analyses were performed using sucrose and quinine hydrochloride. The instrument has a resolution of 0.08·, and is an excellent platform for an LC or FIA detector. Its more intriguing future lies in evanescent field sensor applications and studies of chiroptical surface interactions. / Master of Science

Thesis (MComm (Statistics and Actuarial Science))--University of Stellenbosch, 2009. / When determining the chemical composition of a specimen, traditional laboratory techniques are often both expensive and time consuming. It is therefore preferable to employ more cost effective spectroscopic techniques such as near infrared (NIR). Traditionally, the calibration problem has been solved by means of multiple linear regression to specify the model between X and Y. Traditional regression techniques, however, quickly fail when using spectroscopic data, as the number of wavelengths can easily be several hundred, often exceeding the number of chemical samples. This scenario, together with the high level of collinearity between wavelengths, will necessarily lead to singularity problems when calculating the regression coefficients. Ways of dealing with the collinearity problem include principal component regression (PCR), ridge regression (RR) and PLS regression. Both PCR and RR require a significant amount of computation when the number of variables is large. PLS overcomes the collinearity problem in a similar way as PCR, by modelling both the chemical and spectral data as functions of common latent variables. The quality of the employed reference method greatly impacts the coefficients of the regression model and therefore, the quality of its predictions. With both X and Y subject to random error, the quality the predictions of Y will be reduced with an increase in the level of noise. Previously conducted research focussed mainly on the effects of noise in X. This paper focuses on a method proposed by Dardenne and Fernández Pierna, called Noise Addition Partial Least Squares (NAPLS) that attempts to deal with the problem of poor reference values. Some aspects of the theory behind PCR, PLS and model selection is discussed. This is then followed by a discussion of the NAPLS algorithm. Both PLS and NAPLS are implemented on various datasets that arise in practice, in order to determine cases where NAPLS will be beneficial over conventional PLS. For each dataset, specific attention is given to the analysis of outliers, influential values and the linearity between X and Y, using graphical techniques. Lastly, the performance of the NAPLS algorithm is evaluated for various

Introdução: Pacientes hipertensos resistentes (HR) são indivíduos com pressão arterial não controlada - apesar do tratamento com um diurético e dois anti-hipertensivos com mecanismos de ação diferentes em doses adequadas. Há duas áreas de interesse nesse contexto: a ancestralidade genética que, a princípio, poderia impactar em controles pressóricos, e a farmacometabolômica que, conceitualmente, é um conjunto de mudanças em concentrações de metabólitos - um novo campo que pode esclarecer mecanismos de variações de respostas farmacológicas. Assim, nossos principais objetivos foram: associar mensurações séricas de fármacos anti-hipertensivos e seus metabólitos às respostas farmacoterapêuticas em pacientes hipertensos e analisar a ancestralidade genética em pacientes hipertensos a fim de verificar uma possível associação com as respostas farmacoterapêuticas e a hipertensão resistente. Métodos: Foram utilizadas amostras de 1.597 pacientes, sendo 187 HR. A preparação e a análise da amostra foram realizadas usando uma coluna com nanotubos de carbono de acesso restrito (RACNTs) em um sistema de cromatografia líquida acoplada a espectrômetro de massa (UPLC-MS/MS), em modo column switching. A ancestralidade genética foi realizada usando um painel de 192 marcadores polimórficos; três referências foram usadas (europeia, ameríndia e africana). A raça foi determinada pela autodeclaração, segundo IBGE (branco, pardo, negro e outros). Resultados: O método foi totalmente validado de acordo com as diretrizes da Food and Drug Administration (FDA). O tempo de execução total para cada análise foi de 12,0 min - incluindo a preparação da amostra. Não foram encontradas diferenças significativas nas concentrações de cada analito de acordo com pacientes responsivos e não responsivos, possivelmente, por causa do número de amostra ainda baixo (n total de 171 amostras). As médias das mensurações no grupo dos respondedores foram: clonidina 1,308microg/L; amlodipina 44,044microg/L; enalapril 67,706microg/L; enalaprilato 44,144microg/L; losartana 202,622microg/L; ácido carboxílico de losartana 65,99microg/L, glicuronídeo N-2 de losartana 43,4microg/L e espironolactona 85,87microg/L. Para o grupo dos não respondedores, obtivemos: clonidina 1,4microg/L; amlodipina 78,89microg/L; enalapril 87,821microg/L; enalaprilato 78,878microg/L; losartana 148,026microg/L, ácido carboxílico de losartana 83,535microg/L, glicuronídeo N-2 de losartana 122,452microg/L e espironolactona 79,72microg/L. A raça autodeclarada foi associada aos componentes da ancestralidade genética desses pacientes (p<0,001). A ancestralidade genética, disponível para 1.503 pacientes, teve média geral de 0,53, para europeia; 0,11, para ameríndia; e 0,35, para africana. Não foram encontradas diferenças estatísticas nas médias de ancestralidade de acordo com os grupos respondedor ou HR. Conclusões: O método analítico foi validado e a ancestralidade genética foi realizada, ambos não associados à farmacoterapêutica e à hipertensão resistente / Background: Resistant hypertensive (RH) patients are individuals with uncontrolled blood pressure - despite treatment with one diuretic and two antihypertensives with different mechanisms of action in adequate doses. There are two areas of interest in this context: genetic ancestry that could initially impact on blood pressure controls, and pharmacometabolomics, which conceptually is a set of changes in metabolite concentrations - a new field that can clarify mechanisms of pharmacological response variation. Thus, our main objectives were: to associate serum measurements of antihypertensive drugs and their metabolites to the pharmacotherapeutic responses in hypertensive patients and to analyze genetic ancestry in hypertensive patients in order to verify a possible association with pharmacotherapeutic responses and resistant hypertension. Methods: Samples of 1,597 patients were used, being 187 RH. Sample preparation and analysis were performed using a column with restricted access carbon nanotubes (RACNTs) in a liquid chromatography coupled to mass spectrometer (UPLC-MS/MS) in column switching mode. Genetic ancestry was performed using a panel of 192 polymorphic markers; three references were used (European, Amerindian and African). The race was determined by self-declaration, according to IBGE (white, brown, black and others). Results: The method has been fully validated according to the guidelines of the Food and Drug Administration (FDA). The total run time for each analysis was 12.0 min including sample preparation. No significant differences were found in the concentrations of each analyte according to responsive and nonresponsive patients, possibly because of the still low number of samples (total n of 171 samples). The means of the measurements in the responders group were: clonidine 1.308microg/L; amlodipine 44.044microg/L; enalapril 67.706microg/L; enalaprilat 44.144microg/L; losartan 202.622microg/L; losartan carboxylic acid 65.99microg/L, N-2 glucuronide of losartan 43,4microg/L and spironolactone 85.87microg/L. For the group of non-responders, we obtained: clonidine 1.4 microg/L; amlodipine 78.89microg/L; enalapril 87.821microg/L; enalaprilat 78.878microg/L; losartana 148.026microg/L, losartan carboxylic acid 83.535microg/L, N-2 glucanide of losartan 122.452microg/L and spironolactone 79.72microg/L. Self-reported race was associated with the components of the genetic ancestry of these patients (p<0.001). Genetic ancestry, available for 1,503 patients, had an overall mean of 0.53 for European; 0.11 for Amerindian; and 0.35 for African. No statistical differences were found in the means of ancestry according to responder or RH groups. Conclusion: The analytical method was validated and genetic ancestry was performed, both unrelated to pharmacotherapeutic and resistant hypertension

Introdução: Pacientes hipertensos resistentes (HR) são indivíduos com pressão arterial não controlada - apesar do tratamento com um diurético e dois anti-hipertensivos com mecanismos de ação diferentes em doses adequadas. Há duas áreas de interesse nesse contexto: a ancestralidade genética que, a princípio, poderia impactar em controles pressóricos, e a farmacometabolômica que, conceitualmente, é um conjunto de mudanças em concentrações de metabólitos - um novo campo que pode esclarecer mecanismos de variações de respostas farmacológicas. Assim, nossos principais objetivos foram: associar mensurações séricas de fármacos anti-hipertensivos e seus metabólitos às respostas farmacoterapêuticas em pacientes hipertensos e analisar a ancestralidade genética em pacientes hipertensos a fim de verificar uma possível associação com as respostas farmacoterapêuticas e a hipertensão resistente. Métodos: Foram utilizadas amostras de 1.597 pacientes, sendo 187 HR. A preparação e a análise da amostra foram realizadas usando uma coluna com nanotubos de carbono de acesso restrito (RACNTs) em um sistema de cromatografia líquida acoplada a espectrômetro de massa (UPLC-MS/MS), em modo column switching. A ancestralidade genética foi realizada usando um painel de 192 marcadores polimórficos; três referências foram usadas (europeia, ameríndia e africana). A raça foi determinada pela autodeclaração, segundo IBGE (branco, pardo, negro e outros). Resultados: O método foi totalmente validado de acordo com as diretrizes da Food and Drug Administration (FDA). O tempo de execução total para cada análise foi de 12,0 min - incluindo a preparação da amostra. Não foram encontradas diferenças significativas nas concentrações de cada analito de acordo com pacientes responsivos e não responsivos, possivelmente, por causa do número de amostra ainda baixo (n total de 171 amostras). As médias das mensurações no grupo dos respondedores foram: clonidina 1,308microg/L; amlodipina 44,044microg/L; enalapril 67,706microg/L; enalaprilato 44,144microg/L; losartana 202,622microg/L; ácido carboxílico de losartana 65,99microg/L, glicuronídeo N-2 de losartana 43,4microg/L e espironolactona 85,87microg/L. Para o grupo dos não respondedores, obtivemos: clonidina 1,4microg/L; amlodipina 78,89microg/L; enalapril 87,821microg/L; enalaprilato 78,878microg/L; losartana 148,026microg/L, ácido carboxílico de losartana 83,535microg/L, glicuronídeo N-2 de losartana 122,452microg/L e espironolactona 79,72microg/L. A raça autodeclarada foi associada aos componentes da ancestralidade genética desses pacientes (p<0,001). A ancestralidade genética, disponível para 1.503 pacientes, teve média geral de 0,53, para europeia; 0,11, para ameríndia; e 0,35, para africana. Não foram encontradas diferenças estatísticas nas médias de ancestralidade de acordo com os grupos respondedor ou HR. Conclusões: O método analítico foi validado e a ancestralidade genética foi realizada, ambos não associados à farmacoterapêutica e à hipertensão resistente / Background: Resistant hypertensive (RH) patients are individuals with uncontrolled blood pressure - despite treatment with one diuretic and two antihypertensives with different mechanisms of action in adequate doses. There are two areas of interest in this context: genetic ancestry that could initially impact on blood pressure controls, and pharmacometabolomics, which conceptually is a set of changes in metabolite concentrations - a new field that can clarify mechanisms of pharmacological response variation. Thus, our main objectives were: to associate serum measurements of antihypertensive drugs and their metabolites to the pharmacotherapeutic responses in hypertensive patients and to analyze genetic ancestry in hypertensive patients in order to verify a possible association with pharmacotherapeutic responses and resistant hypertension. Methods: Samples of 1,597 patients were used, being 187 RH. Sample preparation and analysis were performed using a column with restricted access carbon nanotubes (RACNTs) in a liquid chromatography coupled to mass spectrometer (UPLC-MS/MS) in column switching mode. Genetic ancestry was performed using a panel of 192 polymorphic markers; three references were used (European, Amerindian and African). The race was determined by self-declaration, according to IBGE (white, brown, black and others). Results: The method has been fully validated according to the guidelines of the Food and Drug Administration (FDA). The total run time for each analysis was 12.0 min including sample preparation. No significant differences were found in the concentrations of each analyte according to responsive and nonresponsive patients, possibly because of the still low number of samples (total n of 171 samples). The means of the measurements in the responders group were: clonidine 1.308microg/L; amlodipine 44.044microg/L; enalapril 67.706microg/L; enalaprilat 44.144microg/L; losartan 202.622microg/L; losartan carboxylic acid 65.99microg/L, N-2 glucuronide of losartan 43,4microg/L and spironolactone 85.87microg/L. For the group of non-responders, we obtained: clonidine 1.4 microg/L; amlodipine 78.89microg/L; enalapril 87.821microg/L; enalaprilat 78.878microg/L; losartana 148.026microg/L, losartan carboxylic acid 83.535microg/L, N-2 glucanide of losartan 122.452microg/L and spironolactone 79.72microg/L. Self-reported race was associated with the components of the genetic ancestry of these patients (p<0.001). Genetic ancestry, available for 1,503 patients, had an overall mean of 0.53 for European; 0.11 for Amerindian; and 0.35 for African. No statistical differences were found in the means of ancestry according to responder or RH groups. Conclusion: The analytical method was validated and genetic ancestry was performed, both unrelated to pharmacotherapeutic and resistant hypertension