Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2018-01-19T11:42:45Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804820 bytes, checksum: 1d6c01f9b6cbd5f4e3e61bbba11e4db6 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-19T11:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 804820 bytes, checksum: 1d6c01f9b6cbd5f4e3e61bbba11e4db6 (MD5) Previous issue date: 2017-07-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A eficiência da hidrólise da biomassa lignocelulósica apresenta algumas limitações, dentre elas a possível adsorção inespecífica das enzimas à lignina. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o perfil de adsorção de proteínas e enzimas do fungo fitopatogênico Chrysoporthe cubensis em bagaços de cana-de-açúcar pré-tratados e com diferentes conteúdos de lignina e avaliar a eficiência da recuperação destas enzimas e proteínas utilizando metodologias de reciclagem enzimática. De modo a obter o extrato enzimático, o fungo foi cultivado sob fermentação em estado semi-sólido com farelo de trigo. Os bagaços de cana foram pré-tratados com NaOH (BAL) e com H 2 SO 4 (BAC), de modo a conter 8,1% e 33,8% de lignina, respectivamente. A isoterma de Langmuir obtida pelo experimento em condições não hidrolíticas, revelou os parâmetros Pmax e Kp superiores para BAC, e K superior para BAL. Ao final da hidrólise, BAC foi capaz de adsorver maiores quantidades de proteínas, comparado ao substrato BAL. As enzimas celobiohidrolase e xilanase sofreram maiores adsorções em BAC, e de modo contrário, a endoglucanase adsorveu majoritariamente em BAL. A β-glicosidase foi a enzima que menos adsorveu em ambos os substratos. Esses resultados demonstraram o efeito da lignina presente em biomassas complexas ao promover uma maior adsorção de proteínas e de algumas enzimas do extrato enzimático de C. cubensis. Dentre os experimentos de reciclagem enzimática, todos demonstraram ser eficientes na recuperação de proteínas e enzimas adsorvidas na biomassa. A reciclagem com adição de substratos e enzimas frescas foi capaz de promover a maior eficiência de hidrólise da biomassa. Entretanto, para BAC, com elevado conteúdo de lignina, as reciclagens de enzimas e proteínas não demonstraram ser tão eficazes, bem como a hidrólise de açúcares. Desse modo, conclui-se que a lignina presente em altas concentrações nos substratos, além de promover maiores adsorções de proteínas e enzimas, também interfere nos métodos de reciclagem. Também foi comprovada a alta eficiência de reciclagem das enzimas de C. cubensis, mesmo no substrato contendo alta concentração de lignina, além da alta termoestabilidade dessas enzimas, mesmo após 216 h de hidrólise. Desse modo, é confirmado o grande potencial hidrolítico do extrato enzimático obtido desse fungo. / The efficiency of biomass hydrolysis by enzymes has some limitations, such as the possible non-specific adsorptions of enzymes in lignin. The aims of this work were to evaluate the adsorption profile of proteins and enzymes from the phytopathogenic fungus Chrysoporthe cubensis in pretreated sugarcane bagasses with different lignin contents and to evaluate the efficiency of recuperation of this enzymes and proteins using enzymatic recycling methodologies. In order to obtain the enzymatic extract, the fungus was cultivated under semi-solid state fermentation with wheat bran. The sugarcane bagasses were pretreated with NaOH (BAL) and H 2 SO 4 (BAC), in order to obtain 8.1% and 33.8% of lignin, respectively. The Langmuir isotherm obtained by the experiment under non-hydrolytic conditions showed the highest Pmax and Kp parameters for BAC, while K was higher for BAL. At the end of hydrolysis, BAC was able to adsorb greater amounts of proteins compared to BAL. The enzymes cellobiohydrolase and xylanase showed higher adsorption on BAC, and endoglucanase adsorbed mostly on BAL. β-glycosidase was the enzyme that suffered less adsorption on both substrates. These results demonstrate8d the negative effect of the lignin present in complex biomasses which promotes greater adsorption of proteins and some enzymes of the C. cubensis enzymatic extract. Among the enzymatic recycling experiments, all of them were efficient in the recovery of proteins and enzymes adsorbed in biomass. The recycling with the addition of fresh substrates and enzymes was able to promote higher biomass hydrolysis yields. However, for BAC, with high lignin content, the enzymes and proteins recycling did not show to be effective, as well as the sugars hydrolysis. Thus, it is concluded that high concentrations of lignin in the substrates, besides promoting greater adsorption of proteins and enzymes, also interferes in recycling methods. The results also demonstrated the high recycling efficiency of C. cubensis enzymes, even in the substrate containing high lignin concentration, besides the high thermostability of these enzymes, even after 216 h of hydrolysis. Thus, the great hydrolytic potential of enzymatic extract obtained from this fungus is confirmed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-15Bitstream added on 2014-06-13T18:58:00Z : No. of bitstreams: 1 souza_hg_me_botfca.pdf: 1426991 bytes, checksum: 7c8beacd93595a04b7e0ef427ee21af6 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O termo cancro é utilizado para designar lesões localizadas na casca do caule de plantas lenhosas que podem resultar no anelamento do caule e no secamento da parte superior da copa e a morte da planta. A melhor opção para o controle da doença é a resistência genética dos indivíduos quanto ao patógeno utilizado. Com o objetivo de estudar o comportamento de resistência e mecanismos moleculares de clones dos parentais e das progênies de eucalipto quanto ao cancro causado por Chrysoporthe cubensis e Botryosphaeria sp. foram executados ensaios em casa de vegetação e em campo. Os isolados utilizados foram Chrysoporthe cubensis e Botryosphaeria sp. sendo produzidos em meio BDA e inoculados nos indivíduos pelo método do disco. A avaliação foi realizada 60 dias após a inoculação, medindo a área da lesão de cada material. Para o patógeno C. cubensis inoculados nos parentais foi encontrado uma média de 3,20 e 6,14 cm2 de área de lesão do tronco causado pelos isolados provenientes de Piracicaba e Bofete, respectivamente, enquanto que para Botryosphaeria sp. a média variou de 7,29 cm ² a 9,72cm ² da área da lesão. Dos indivíduos testados, com C. cubensis, foram encontrados 46,66% de plantas classificadas como resistentes; 6,67% plantas moderadamente resistente, 13,33% planta moderadamente suscetíveis e 33,34% plantas suscetíveis. Já para o teste de clones com Botryosphaeria sp. verificou-se 91,67% resistentes, 5% moderadamente resistentes, 1,67% moderadamente suscetível e 1,67% suscetíveis. As variâncias fenotípicas encontradas foram de 41,32 a 0,23 inoculados com C. cubensis e 0,285 a 156,88, quando inoculados com Bothyosphaeria sp. Os coeficientes de variação foram de 125% a 15,05% para C. cubensis e 29,86% a 101,13% para Bothyosphaeria sp. Os resultados indicam que os materiais genéticos testados possuem boa fonte de resistência para os dois fitopatógenos... / The term canker is used to assign to injuries located in the bark of stems of woody plants that can result in the anelamento of stems and drying of the superior part of the crown and the death of the plant. The best option for the control of the illness is the resistance genetic of the individuals concerning to the used patógeno. The objective of this study the molecular behavior of resistance and mechanisms of clonals of parental and the lineages the eucalyptus concerning the canker caused for Chrysoporthe cubensis and Dothiorella sp. The essays executed in the greenhouse and field. The isolated ones used concerning Chrysoporthe cubensis and Dothiorella sp. being produced in inoculated medium BDA and in the individuals for the method of the disk. The evaluation was concluded 60 days after the inoculation, measuring the area of the injury of each material. For pathogeno C. cubensis inoculated in the parental ones a 6,14 was found average of 3,20 and cm² of area of isolated injury of the trunk caused for the proceeding ones from Piracicaba and Bofete, respectively. The average of the area of the injury for the studied lineages varied of 7,29 cm ² 9,72cm ² for Dothiorella sp. The clonals inoculated C. cubensis were grouped into the categories HS (highly susceptible – 33,34%), MS (moderately susceptible -13,3%), MR (moderately resistant- 6,67%), and HR (highly resistant -46,66%). The clonal tested, with Botryosphaeria sp., verified resistant 91.67%, 5% moderately resistant, 1.67% moderately susceptible and 5,26% susceptible. The phenotypic variation found was from 41,32 to 0,23, inoculated with C. cubensis while Botryosphaeria sp from 0,285 to156,88. The coefficient of variation from 125% to 15,95% for C. cubensis and 29,86% to 101,13% for Botryosphaeria sp. The results indicate that the tested genetic materials possess good source of resistance for the two fitopatógenos tested... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Edson Luis Furtado / Banca: Marli Teixiera de Almeida Minhoni / Banca: Celso Garcia Auer / Resumo: O termo cancro é utilizado para designar lesões localizadas na casca do caule de plantas lenhosas que podem resultar no anelamento do caule e no secamento da parte superior da copa e a morte da planta. A melhor opção para o controle da doença é a resistência genética dos indivíduos quanto ao patógeno utilizado. Com o objetivo de estudar o comportamento de resistência e mecanismos moleculares de clones dos parentais e das progênies de eucalipto quanto ao cancro causado por Chrysoporthe cubensis e Botryosphaeria sp. foram executados ensaios em casa de vegetação e em campo. Os isolados utilizados foram Chrysoporthe cubensis e Botryosphaeria sp. sendo produzidos em meio BDA e inoculados nos indivíduos pelo método do disco. A avaliação foi realizada 60 dias após a inoculação, medindo a área da lesão de cada material. Para o patógeno C. cubensis inoculados nos parentais foi encontrado uma média de 3,20 e 6,14 cm2 de área de lesão do tronco causado pelos isolados provenientes de Piracicaba e Bofete, respectivamente, enquanto que para Botryosphaeria sp. a média variou de 7,29 cm ² a 9,72cm ² da área da lesão. Dos indivíduos testados, com C. cubensis, foram encontrados 46,66% de plantas classificadas como resistentes; 6,67% plantas moderadamente resistente, 13,33% planta moderadamente suscetíveis e 33,34% plantas suscetíveis. Já para o teste de clones com Botryosphaeria sp. verificou-se 91,67% resistentes, 5% moderadamente resistentes, 1,67% moderadamente suscetível e 1,67% suscetíveis. As variâncias fenotípicas encontradas foram de 41,32 a 0,23 inoculados com C. cubensis e 0,285 a 156,88, quando inoculados com Bothyosphaeria sp. Os coeficientes de variação foram de 125% a 15,05% para C. cubensis e 29,86% a 101,13% para Bothyosphaeria sp. Os resultados indicam que os materiais genéticos testados possuem boa fonte de resistência para os dois fitopatógenos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The term canker is used to assign to injuries located in the bark of stems of woody plants that can result in the anelamento of stems and drying of the superior part of the crown and the death of the plant. The best option for the control of the illness is the resistance genetic of the individuals concerning to the used patógeno. The objective of this study the molecular behavior of resistance and mechanisms of clonals of parental and the lineages the eucalyptus concerning the canker caused for Chrysoporthe cubensis and Dothiorella sp. The essays executed in the greenhouse and field. The isolated ones used concerning Chrysoporthe cubensis and Dothiorella sp. being produced in inoculated medium BDA and in the individuals for the method of the disk. The evaluation was concluded 60 days after the inoculation, measuring the area of the injury of each material. For pathogeno C. cubensis inoculated in the parental ones a 6,14 was found average of 3,20 and cm² of area of isolated injury of the trunk caused for the proceeding ones from Piracicaba and Bofete, respectively. The average of the area of the injury for the studied lineages varied of 7,29 cm ² 9,72cm ² for Dothiorella sp. The clonals inoculated C. cubensis were grouped into the categories HS (highly susceptible - 33,34%), MS (moderately susceptible -13,3%), MR (moderately resistant- 6,67%), and HR (highly resistant -46,66%). The clonal tested, with Botryosphaeria sp., verified resistant 91.67%, 5% moderately resistant, 1.67% moderately susceptible and 5,26% susceptible. The phenotypic variation found was from 41,32 to 0,23, inoculated with C. cubensis while Botryosphaeria sp from 0,285 to156,88. The coefficient of variation from 125% to 15,95% for C. cubensis and 29,86% to 101,13% for Botryosphaeria sp. The results indicate that the tested genetic materials possess good source of resistance for the two fitopatógenos tested... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre