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Avaliação da diversidade morfológica de diferentes populações de espécies de Brevipalpus (Acari: Tenuipalpidae) transmissores de vírus e de suas competências como vetor / Evaluation of the morphological diversity of different populations of Brevipalpus species (Acari: Tenuipalpidae) that are virus vectors

Tassi, Aline Daniele 23 January 2014 (has links)
Brevipalpus é um gênero de ácaros pertencentes à família Tenuipalpidae (Acari: Prostigmata), que são comumente encontrados nas regiões tropical e subtropical em todo o mundo. O gênero inclui mais de 280 espécies, e apresenta importância econômica porque causam danos a diversas culturas como pragas e, também por que algumas espécies transmitem vírus de plantas. B. californicus Banks, B. obovatus Donnadieu e B. phoenicis (Geijskes) são as espécies atualmente conhecidas como vetoras de vírus. As espécies de Brevipalpus são morfologicamente similares e, algumas delas, têm sido erroneamente identificadas. Dentre as viroses transmitidas por esses ácaros encontra-se a leprose dos citros que é considerada uma das doenças mais destrutivas da indústria citrícola. A leprose é considerada uma das importantes viroses de citros. No estado de São Paulo, maior produtor mundial de suco de laranja, gastam-se cerca de US$ 80 milhões/ano com acaricidas, para o controle do ácaro vetor Brevipalpus phoenicis. Este trabalho teve como objetivo geral gerar subsídios para rápida e acurada identificação de espécies de Brevipalpus, contribuir para a sistemática do grupo e relacioná-la à transmissão de vírus, principalmente o da leprose dos citros tipo citoplasmático (CiLV-C). Espera-se contribuir para melhor entendimento da epidemiologia do vírus e manejo. Os objetivos específicos foram: 1) Estudar e descrever a variação fenotípica entre as diferentes espécies e grupos morfológicos de ácaros Brevipalpus procedentes de diferentes plantas hospedeiras e regiões geográficas. Para tal foi empregada microscopia de luz e eletrônica de varredura, analisando-se características morfológicas externas e internas de diferentes populações. Foi dada atenção a diferentes detalhes morfológicos para se encontrar características, além das setas laterodorsais e solenídios no tarso da perna II, atualmente utilizadas, que possam auxiliar na discriminação das espécies; 2) Contribuir para a catalogação de novas hospedeiras de ácaros Brevipalpus e sua distribuição geográfica; 3) Avaliar a competência de diferentes grupos morfológicos e populações de Brevipalpus amostradas, na transmissão de alguns vírus, em especial CiLV-C. O exame de mais de 8.000 espécimes de Brevipalpus oriundas de 111 espécies de plantas, coletadas em várias regiões do Brasil e outros países, resultaram na detecção de seis espécies diferentes: B. phoenicis, divididos em sete grupos morfológicos; B. californicus divididos em dois grupos morfológicos; B. obovatus; B. chilensis; B. araucanus; B. longisetosus; Brevipalpus ainda sem identificação definida a nível de espécie, encontrados em Delonix regia. No Brasil foram encontrados ácaros em 111 espécies, distribuídas em 45 famílias botânicas, tendo sido identificadas quatro espécies nas plantas amostradas: B. californicus, B. obovatus e B. phoenicis e Brevipalpus sp. Nos testes de transmissão, realizados para CiLV-C, vírus da pinta verde do maracujá (Passion fruit green spot virus PFGSV) e vírus da mancha anular de Solanum violaefolium (Solanum violaefolium ringspot virus- SvRSV) constatou-se que apenas ácaros coletados na planta hospedeira do vírus foram capazes de transmiti-los em condições experimentais. / Brevipalpus is a genus of mites belonging to the family Tenuipalpidae (Acari: Prostigmata), which are commonly found in tropical and subtropical regions. The genus includes more than 280 species, and is of economic importance because they cause damage in various crops as pests and also as vector for some plant viruses. B. californicus Banks, B. obovatus Donnadieu and B.phoenicis (Geijskes) are the species known as vector. Brevipalpus species are morphologically very similar, frequently resulting misidentification. Among the virus diseases transmitted by these mites is citrus leprosis which is considered one of the most destructive diseases of citrus industry. Leprosis is one of the most important problem for citrus in the state of São Paulo, Brazil, the world largest producer of orange juice, where about $ 80 million/year are spent with acaricides for control the mite vector B. phoenicis. The present work aimed to give support for the a rapid and accurate identification of species of Brevipalpus, to contribute for the systematic of the group, and relate it to the transmission of viruses, especially of citrus leprosis cytoplasmic type (CiLV-C). The expectation is to contribute for a better understanding of the epidemiology of the CiLV-C and its management. The specific objectives were: 1) To study and describe the phenotypic variation among different species and morphological groups of Brevipalpus mites evaluated by light and scanning electron microscopy. Internal and external morphology of different populations were observed, trying to find characteristics new details, beyond dorsal lateral setae, solenidion on the tarsus of leg II presently used, that could help in the discrimination of species; 2) To contribute to update the list of Brevipalpus mites hosts in Brazil and the world; 3) To assess the hability of distict Brevipalpus populations to transmit plant viruses, especially CiLV-C. In the surveys made, resulting in the analysis of more than 8,000 specimens, collected from 111 plant species in Brazil and several other countries, six different species of Brevipalpus were identified: B. phoenicis, divided into seven morphological groups; B. californicus divided into two morphological groups; B. obovatus; B. chilensis; B. araucanus; B. longisetosus; and Brevipalpus sp. This latter was found in Delonix regia and not identified to species level yet. In Brazil mites were found in 111 species belonging to 45 botanical families. Four species have been identified: B. californicus, B. obovatus and B. phoenicis and Brevipalpus sp. Mite transmission tests, involving CiLV-C, Passion fruit green spot virus (PFGSV) and Solanum violaefolium ringspot virus (SvRSV), only mites species collected in host plants for these viruses were able to transmit these viruses under experimental conditions.
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Avaliação da diversidade morfológica de diferentes populações de espécies de Brevipalpus (Acari: Tenuipalpidae) transmissores de vírus e de suas competências como vetor / Evaluation of the morphological diversity of different populations of Brevipalpus species (Acari: Tenuipalpidae) that are virus vectors

Aline Daniele Tassi 23 January 2014 (has links)
Brevipalpus é um gênero de ácaros pertencentes à família Tenuipalpidae (Acari: Prostigmata), que são comumente encontrados nas regiões tropical e subtropical em todo o mundo. O gênero inclui mais de 280 espécies, e apresenta importância econômica porque causam danos a diversas culturas como pragas e, também por que algumas espécies transmitem vírus de plantas. B. californicus Banks, B. obovatus Donnadieu e B. phoenicis (Geijskes) são as espécies atualmente conhecidas como vetoras de vírus. As espécies de Brevipalpus são morfologicamente similares e, algumas delas, têm sido erroneamente identificadas. Dentre as viroses transmitidas por esses ácaros encontra-se a leprose dos citros que é considerada uma das doenças mais destrutivas da indústria citrícola. A leprose é considerada uma das importantes viroses de citros. No estado de São Paulo, maior produtor mundial de suco de laranja, gastam-se cerca de US$ 80 milhões/ano com acaricidas, para o controle do ácaro vetor Brevipalpus phoenicis. Este trabalho teve como objetivo geral gerar subsídios para rápida e acurada identificação de espécies de Brevipalpus, contribuir para a sistemática do grupo e relacioná-la à transmissão de vírus, principalmente o da leprose dos citros tipo citoplasmático (CiLV-C). Espera-se contribuir para melhor entendimento da epidemiologia do vírus e manejo. Os objetivos específicos foram: 1) Estudar e descrever a variação fenotípica entre as diferentes espécies e grupos morfológicos de ácaros Brevipalpus procedentes de diferentes plantas hospedeiras e regiões geográficas. Para tal foi empregada microscopia de luz e eletrônica de varredura, analisando-se características morfológicas externas e internas de diferentes populações. Foi dada atenção a diferentes detalhes morfológicos para se encontrar características, além das setas laterodorsais e solenídios no tarso da perna II, atualmente utilizadas, que possam auxiliar na discriminação das espécies; 2) Contribuir para a catalogação de novas hospedeiras de ácaros Brevipalpus e sua distribuição geográfica; 3) Avaliar a competência de diferentes grupos morfológicos e populações de Brevipalpus amostradas, na transmissão de alguns vírus, em especial CiLV-C. O exame de mais de 8.000 espécimes de Brevipalpus oriundas de 111 espécies de plantas, coletadas em várias regiões do Brasil e outros países, resultaram na detecção de seis espécies diferentes: B. phoenicis, divididos em sete grupos morfológicos; B. californicus divididos em dois grupos morfológicos; B. obovatus; B. chilensis; B. araucanus; B. longisetosus; Brevipalpus ainda sem identificação definida a nível de espécie, encontrados em Delonix regia. No Brasil foram encontrados ácaros em 111 espécies, distribuídas em 45 famílias botânicas, tendo sido identificadas quatro espécies nas plantas amostradas: B. californicus, B. obovatus e B. phoenicis e Brevipalpus sp. Nos testes de transmissão, realizados para CiLV-C, vírus da pinta verde do maracujá (Passion fruit green spot virus PFGSV) e vírus da mancha anular de Solanum violaefolium (Solanum violaefolium ringspot virus- SvRSV) constatou-se que apenas ácaros coletados na planta hospedeira do vírus foram capazes de transmiti-los em condições experimentais. / Brevipalpus is a genus of mites belonging to the family Tenuipalpidae (Acari: Prostigmata), which are commonly found in tropical and subtropical regions. The genus includes more than 280 species, and is of economic importance because they cause damage in various crops as pests and also as vector for some plant viruses. B. californicus Banks, B. obovatus Donnadieu and B.phoenicis (Geijskes) are the species known as vector. Brevipalpus species are morphologically very similar, frequently resulting misidentification. Among the virus diseases transmitted by these mites is citrus leprosis which is considered one of the most destructive diseases of citrus industry. Leprosis is one of the most important problem for citrus in the state of São Paulo, Brazil, the world largest producer of orange juice, where about $ 80 million/year are spent with acaricides for control the mite vector B. phoenicis. The present work aimed to give support for the a rapid and accurate identification of species of Brevipalpus, to contribute for the systematic of the group, and relate it to the transmission of viruses, especially of citrus leprosis cytoplasmic type (CiLV-C). The expectation is to contribute for a better understanding of the epidemiology of the CiLV-C and its management. The specific objectives were: 1) To study and describe the phenotypic variation among different species and morphological groups of Brevipalpus mites evaluated by light and scanning electron microscopy. Internal and external morphology of different populations were observed, trying to find characteristics new details, beyond dorsal lateral setae, solenidion on the tarsus of leg II presently used, that could help in the discrimination of species; 2) To contribute to update the list of Brevipalpus mites hosts in Brazil and the world; 3) To assess the hability of distict Brevipalpus populations to transmit plant viruses, especially CiLV-C. In the surveys made, resulting in the analysis of more than 8,000 specimens, collected from 111 plant species in Brazil and several other countries, six different species of Brevipalpus were identified: B. phoenicis, divided into seven morphological groups; B. californicus divided into two morphological groups; B. obovatus; B. chilensis; B. araucanus; B. longisetosus; and Brevipalpus sp. This latter was found in Delonix regia and not identified to species level yet. In Brazil mites were found in 111 species belonging to 45 botanical families. Four species have been identified: B. californicus, B. obovatus and B. phoenicis and Brevipalpus sp. Mite transmission tests, involving CiLV-C, Passion fruit green spot virus (PFGSV) and Solanum violaefolium ringspot virus (SvRSV), only mites species collected in host plants for these viruses were able to transmit these viruses under experimental conditions.
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Análise da expressão gênica de Arabidopsis thaliana em resposta ao Citrus leprosis virus C e ao seu vetor Brevipalpus phoenicis / Gene expression analysis of Arabidopsis thaliana in response to Citrus leprosis virus C and its vector Brevipalpus phoenicis

Arena, Gabriella Dias 30 May 2014 (has links)
A leprose dos citros, principal doença viral que afeta a citricultura no Brasil, é causada pelo Citrus leprosis virus C (CiLV-C, gênero Cilevirus). CiLV-C possui um genoma bipartido de RNA de fita simples, polaridade positiva, que codifica para seis proteínas. O vírus é transmitido de planta a planta por ácaros Brevipalpus phoenicis e pode infectar mais de 40 espécies vegetais, produzindo lesões localizadas cloróticas ou necróticas ao redor do sítio de inoculação pelo ácaro. Invariavelmente, o patógeno não realiza movimento sistêmico em nenhuma de suas hospedeiras conhecidas. Para se revelar os mecanismos moleculares que determinam a atípica interação vírus/ácaro/planta, as atividades das principais vias de defesa foram avaliadas durante a infestação de A. thaliana com ácaros avirulíferos e virulíferos para o CiLV-C. A expressão de 19 genes marcadores associados às respostas de defesa do hospedeiro foi verificada mediante PCR quantitativo (RT-qPCR) em um experimento de time course (6, 12 e 24 horas após a infestação, e no momento do aparecimento dos sintomas de leprose). As análises demostraram que os genes envolvidos na via do ácido salicílico (SA) foram induzidos durante a interação com o ácaro e com o vírus. O perfil de expressão dos genes desta via durante a infestação com ácaros virulíferos foi similar ao observado com ácaros avirulíferos, porém a resposta da planta a ambos os estímulos foi mais intensa. Ademais, ambas as vias do ácido jasmônico e etileno foram ativadas durante a interação com o ácaro e reprimidas ao longo da infecção com o vírus, sugerindo uma interferência antagonística mediada pela via do SA. O mecanismo de silenciamento de RNA foi regulado de maneira diferencial em resposta à interação com ácaros avirulíferos e virulíferos. Diante da infecção viral, em tempos iniciais da infecção, as plantas responderam com a ativação de uma primeira linha de defesa mediada por AGO1, e depois alternaram para uma segunda linha de defesa mediada por AGO2. Os resultados indicam a ativação de um processo multifatorial em resposta ao CiLV-C e ao ácaro B. phoenicis em A. thaliana. / Citrus leprosis, the main viral disease affecting citrus orchards in Brazil, is caused by Citrus leprosis virus C (CiLV-C, genus Cilevirus). CiLV-C has a bipartite genome of singled stranded positive RNA, which encodes six proteins. CiLV-C is plant-to-plant transmitted by Brevipalpus phoenicis mites and can infect more than 40 plant species, invariably producing localized chlorotic or necrotic lesions around the site of feeding of the viruliferous mites. Viral long distance movement in its hosts is not accomplished. To unveil the mechanisms determining the unique characteristic of the virus/mite/plant interaction, activities of main plant defense pathways were evaluated during aviruliferous and CiLV-C viruliferous mite infestation in Arabidopsis thaliana. The expression of 19 marker genes involved in defense responses along a time course experiment (6, 12 and 24 hours after infestation, and after appearance of leprosis symptoms) was assessed by RT-qPCR. Analyses showed that genes involved in the salicylic acid (SA) pathway were up-regulated during plant interaction with mite and virus. The SA pathway expression profile observed at the infestation by viruliferous mites resembled those observed for the aviruliferous mites, but plant response to both stimuli was stronger. Both the jasmonic acid and ethylene pathways were activated during mite/plant interaction and were repressed at the course of infection with CiLV-C, suggesting an antagonistic effect mediated by the activated SA pathway. Gene silencing mechanism was differentially regulated in response to both aviruliferous and viruliferous mites. Upon viral infection, plants responded with the activation of an AGO1-mediated first defense line, in early times of infection; and then switched to an AGO2-mediated defense. Results indicate the activation of a multifactorial process in response to CiLV-C and B. phoenicis mites in A. thaliana.
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Análise da expressão gênica de Arabidopsis thaliana em resposta ao Citrus leprosis virus C e ao seu vetor Brevipalpus phoenicis / Gene expression analysis of Arabidopsis thaliana in response to Citrus leprosis virus C and its vector Brevipalpus phoenicis

Gabriella Dias Arena 30 May 2014 (has links)
A leprose dos citros, principal doença viral que afeta a citricultura no Brasil, é causada pelo Citrus leprosis virus C (CiLV-C, gênero Cilevirus). CiLV-C possui um genoma bipartido de RNA de fita simples, polaridade positiva, que codifica para seis proteínas. O vírus é transmitido de planta a planta por ácaros Brevipalpus phoenicis e pode infectar mais de 40 espécies vegetais, produzindo lesões localizadas cloróticas ou necróticas ao redor do sítio de inoculação pelo ácaro. Invariavelmente, o patógeno não realiza movimento sistêmico em nenhuma de suas hospedeiras conhecidas. Para se revelar os mecanismos moleculares que determinam a atípica interação vírus/ácaro/planta, as atividades das principais vias de defesa foram avaliadas durante a infestação de A. thaliana com ácaros avirulíferos e virulíferos para o CiLV-C. A expressão de 19 genes marcadores associados às respostas de defesa do hospedeiro foi verificada mediante PCR quantitativo (RT-qPCR) em um experimento de time course (6, 12 e 24 horas após a infestação, e no momento do aparecimento dos sintomas de leprose). As análises demostraram que os genes envolvidos na via do ácido salicílico (SA) foram induzidos durante a interação com o ácaro e com o vírus. O perfil de expressão dos genes desta via durante a infestação com ácaros virulíferos foi similar ao observado com ácaros avirulíferos, porém a resposta da planta a ambos os estímulos foi mais intensa. Ademais, ambas as vias do ácido jasmônico e etileno foram ativadas durante a interação com o ácaro e reprimidas ao longo da infecção com o vírus, sugerindo uma interferência antagonística mediada pela via do SA. O mecanismo de silenciamento de RNA foi regulado de maneira diferencial em resposta à interação com ácaros avirulíferos e virulíferos. Diante da infecção viral, em tempos iniciais da infecção, as plantas responderam com a ativação de uma primeira linha de defesa mediada por AGO1, e depois alternaram para uma segunda linha de defesa mediada por AGO2. Os resultados indicam a ativação de um processo multifatorial em resposta ao CiLV-C e ao ácaro B. phoenicis em A. thaliana. / Citrus leprosis, the main viral disease affecting citrus orchards in Brazil, is caused by Citrus leprosis virus C (CiLV-C, genus Cilevirus). CiLV-C has a bipartite genome of singled stranded positive RNA, which encodes six proteins. CiLV-C is plant-to-plant transmitted by Brevipalpus phoenicis mites and can infect more than 40 plant species, invariably producing localized chlorotic or necrotic lesions around the site of feeding of the viruliferous mites. Viral long distance movement in its hosts is not accomplished. To unveil the mechanisms determining the unique characteristic of the virus/mite/plant interaction, activities of main plant defense pathways were evaluated during aviruliferous and CiLV-C viruliferous mite infestation in Arabidopsis thaliana. The expression of 19 marker genes involved in defense responses along a time course experiment (6, 12 and 24 hours after infestation, and after appearance of leprosis symptoms) was assessed by RT-qPCR. Analyses showed that genes involved in the salicylic acid (SA) pathway were up-regulated during plant interaction with mite and virus. The SA pathway expression profile observed at the infestation by viruliferous mites resembled those observed for the aviruliferous mites, but plant response to both stimuli was stronger. Both the jasmonic acid and ethylene pathways were activated during mite/plant interaction and were repressed at the course of infection with CiLV-C, suggesting an antagonistic effect mediated by the activated SA pathway. Gene silencing mechanism was differentially regulated in response to both aviruliferous and viruliferous mites. Upon viral infection, plants responded with the activation of an AGO1-mediated first defense line, in early times of infection; and then switched to an AGO2-mediated defense. Results indicate the activation of a multifactorial process in response to CiLV-C and B. phoenicis mites in A. thaliana.

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