Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Farmácia / Made available in DSpace on 2012-10-26T11:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2015-03-18T20:42:43Z : No. of bitstreams: 1 310448.pdf: 1153725 bytes, checksum: a30e0a76515f31d96e76c1c23888958e (MD5) / O desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas, como as que utilizam as plantas medicinais, tem despertado grande interesse no tratamento do câncer, pois as terapêuticas tradicionais não são capazes de regredir totalmente a evolução da doença e/ou apresentam elevada toxicidade. B. pilosa e C. sylvestris, plantas medicinais que possuem vários usos populares no Brasil e outros países americanos, têm sido indicadas para o tratamento de tumores. Neste estudo a extração supercrítica (ESC) foi o método de escolha, por seu bom fracionamento presentes na matriz vegetal. Assim sendo, o presente trabalho se propôs avaliar as atividades citotóxica, antiproliferativa, antitumoral, nucleásica, antiangiogênica e pró-apoptótica dos extratos bruto e supercrítico de B. pilosa e C. sylvestris em diferentes condições de extração utilizando modelos experimentais in vitro e in vivo. Para se atingir tal objetivo, foram realizados experimentos para avaliar primeiramente a atividade citotóxica (MTT) in vitro com extrato bruto (EB) (0-500 ?g/mL) e nos extratos na extração supercrítica (ESC) 250bar/40°C (0-100 ?g/mL), e a atividade antiproliferativa através do ensaio clonogênico (100 e 200 ?g/mL ) dos extratos de B. pilosa. Os resultados obtidos no MTT e ensaio clonogênico mostraram que os EB e ESC 250 bar/40°C de B. pilosa foram ineficazes em reduzir a viabilidade celular e antiproliferativa em células MCF-7 e T-24. A partir dos resultados obtidos com B. pilosa descritos acima, foram realizados os ensaios de viabilidade celular (MTT) em células MCF-7 (5, 10, 20, 40 e 80 ?g/mL) e T-24 (1; 2,5; 5; 7,7 e 10 ?g/mL) com as diversas condições de ESC de C. sylvestris. Já o EB de C. sylvestris foi realizado em células MCF-7, em concentrações de 62,5; 125; 250; 500 e 1000 ?g/mL e em T-24 nas concetrações de 10; 25; 50; 75 e 100 ?g/mL. Além disso, foi avaliado o efeito dos extratos (EtOH5% 300bar/40°C e EtOac5% 300bar/40°C) sobre o DNA plasmidial através da ativida nucleásica. A atividade antitumoral in vivo foi realizada em camundongos Balb/C inoculados com o TAE e tratados com EB de C. sylvestris e ESC (EtOH5% 300 bar/40°C e EtOac5% 300bar/40°C) de C. sylvestris nas concentrações de 0,1; 1 e 10 mg/kg e através da atividade antiangiogênica em ovos fertilizados de Gallus domesticus, através do ensaio da membrana corioalantóica (MCA), nas mesmas concentrações de 1, 5 e 10 mg/kg/dia. Também foi avaliada a capacidade pró-poptótica, através do ensaio de anexina V por citometria de fluxo em células TAE retiradas dos camundongos após o tratamento com os extratos supercríticos EtOH 5% 300bar/40°C de 0,1 mg/kg/dia, EtOac5% 300bar/40°C de 0,1mg/kg/dia e EtOac5% 300bar/40°C de 1 mg/kg/dia, que elevaram o percentual de células apoptóticas e necróticas de C. sylvestris. Os resultados demonstraram que os extratos supercríticos (EtOH5% 300bar/40°C e EtOac5% 300bar/40°C) de C. Sylvestris reduziram de maneira significativa a viabilidade de células MCF-7 e T-24. Em relação à avaliação da atividade nucleásica com o extrato supercrítico EtOH5% 300bar/40°C, se observou que houve dano direto ao DNA, sendo que o mesmo foi dose-dependente. Os ensaios in vivo demonstraram que os extratos supercríticos EtOH5% 300bar/40°C e EtOac5% 300bar/40°C apresentaram atividades antitumorais consideráveis. O tratamento com os extratos causaram importante inibição do crescimento tumoral nos camundongos, principalmente o extrato supercrítico EtOH5% 300bar/40°C (0,1 mg/kg/dia), causando também aumento do percentual médio de longevidade (PAL). O ensaio da anexina V revelou que a morte celular induzida pelos extratos supercríticos foi do tipo apoptose (EtOH 0,1 mg/kg/dia e EtOac 0,1 mg/kg/dia) e necrose (EtOac 1 mg/kg/dia). A atividade antiangiogênica dos EtOH5% 300bar/40°C e EtOAc5% 300bar/40°C (1, 5 e 10 mg/kg/dia) mostrou que os extratos foram capazes de reduzir de forma significativa o percentual de vasos sanguíneos em torno do embrião, sendo este efeito inversamente proporcional às concentrações. / The development of new therapies, such as therapies using medicinal plants, has aroused great interest in cancer treatment, because the available therapies are not able to completely regress the disease progression and/or presents high toxicity. B. pilosa and C. sylvestris, medicinal plants that possess multiple popular uses in Brazil and other American countries, has been indicated for tumor treatment. In this study, the supercritical extraction (ESC) was the choice method for its superior performance in isolation of chemical compounds. Therefore, this study aimed to assess the cytotoxic, antiproliferative, antitumor, nucleasic, antiangiogenic and apoptotic activity of supercritical extract of B. pilosa and C. sylvestris at different extraction conditions using experimental models in vitro and in vivo. To achieve this goal, experiments were performed previously to evaluate the cytotoxic activity (MTT) in vitro with EB (0-500 µg/mL) and supercritical extract 250bar/40 °C (0-100 µg/mL), and antiproliferative activity via the clonogenic assay of B. pilosa extracts. The results obtained from MTT and clonogenic assay demonstrated that the B. pilosa EB and supercritical extract 250bar/40°C were ineffective in reducing cell viability and antiproliferative in MCF-7 cells and T-24. Considering the results obtained with B. pilosa described above, assays were performed in cell viability (MTT) in MCF-7 cells (5, 10, 20, 40 and 80 ?g/mL) and T-24 (1; 2.5; 5; 7.7 and 10 µg/ml) with ESC conditions with C. sylvestris. The EBC was performed on MCF-7 cells at concentrations of 62.5, 125, 250, 500 and 1000 µg/mL and T-24 in concetrations 10, 25, 50, 75 and 100 µg/ mL. Furthermore, the effect of extracts (EtOH5% 300bar/40°C and EtOac5% 300bar/40 °C) on plasmid DNA through the nuclease activity was also evaluated. The in vivo antitumor activity was performed in Balb/C mice inoculated with TAE treated with EBC and supercritical extract (EtOH5% 300bar/40°C and EtOac5% 300bar/40°C) of C. sylvestris at concentrations of 0.1, 1 and 10 mg/Kg and through the antiangiogenic activity of Gallus domesticus eggs fertilized by the chorioallantoic membrane essay (CAM) at the same concentrations of 1, 5 and 10 mg/kg/day. The pro-apoptotic ability was also evaluated by annexin V essay using flow cytometry in TAE cells taken from mice after treatment with the supercritical extract EtOH5% 300bar/40°C of 0.1 mg/kg/day, EtOac5% 300bar/40°C of 0.1 mg/ kg/day and EtOac 1mg/kg/day of 1 mg/kg/day that increased the apoptotic and necrotic cells percentage of C. sylvestris. The results demonstrated that the supercritical extract (EtOH5% 300bar/40°C and EtOac5% 300bar/40 °C) of C. Sylvestris significantly reduced the viability of MCF-7 and T-24 cells. Regarding the nuclease activity assessment with the supercritical extract EtOH5% 300bar/40°C, there was a direct dose-dependent damage on DNA. In vivo assays demonstrated that supercritical extract EtOH5% 300bar/40°C and EtOac5% 300bar/40°C showed considerable antitumor activity. The treatment with the extracts caused significant inhibition of tumor growth in mice, mainly the supercritical extract EtOH5% 300bar/40°C (0.1 mg/kg/day), also causing increase in the average percentage of longevity (PAL). The annexin V essay revealed that the induced cell death by extracts was apoptosis type (EtOH5% 300bar/40°C 0.1 mg/kg/day and EtOac5% 300bar/40°C 0.1 mg/kg/day) and also necrosis type (EtOac5% 300bar/40°C 1mg/kg/day). The antiangiogenic activity of the EtOH5% 300bar/40°C and EtOac5% 300bar/40°C (1, 5 and 10 mg/kg/day) demonstrated that the extracts were able to reduce significantly the percentage of blood vessels around the embryo being this effect inversely proportional to their concentrations.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:11:07Z : No. of bitstreams: 1 coelho_mbp_me_sjc.pdf: 1030661 bytes, checksum: 7c0d147360adb506d9e2d37c94aec539 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os cimentos endodônticos utilizados na obturação endodôntica permanecem em íntimo contato com os tecidos, e dependendo da sua constituição química podem promover uma resposta inflamatória de extensão e duração indeterminada. Diante disso, é necessário que estes materiais sejam bem tolerados pelos tecidos e, se possível, auxiliem no processo de reparo. Este estudo teve como objetivos analisar a citotoxicidade, por meio dos testes XTT e SRB, de quatro compostos presentes em cimentos endodônticos, bem como a expressão gênica da fosfatase alcalina (ALP) e sialoproteína óssea (BSP), em culturas primárias de fibroblastos de polpa humana. Os métodos do XTT e SRB foram selecionados para avaliação da citotoxicidade dos extratos dos seguintes compostos: BisGMA (bisfenol A glicidil metacrilato), UDMA (uretano dimetacrilato), óleo resina da copaíba e polímero da mamona. Após a obtenção dos extratos originais dos materiais foram realizadas sete diluições seriadas e as mesmas permaneceram em contato com fibroblastos de polpa humana pelo período de 24 h. Após a determinação de duas diluições de média toxicidade dos extratos testados, foi verificada a expressão dos genes da fosfatase alcalina (ALP) e sialoproteína óssea (BSP) pelo método qRT-PCR. Os testes de citotoxicidade indicaram que a sobrevivência celular foi do mais para o menos tóxico: BisGMA > Copaíba > UDMA > Mamona. Em relação ao estudo da expressão gênica, apenas o gene ALP foi utilizado devido à ausência de resultados consistentes em relação à padronização do gene BSP, provavelmente devido a sua baixa expressão nestas células. Assim para o gene ALP, apenas as amostras tratadas com a mamona revelaram um aumento significante na expressão do gene para as duas diluições selecionadas, contudo testes funcionais são necessários a fim... / Endodontic sealers remain for long periods in contact with apical tissues, and depending on their chemical constitution, these periods may be indeterminate. Therefore, it is necessary that these materials be well tolerated by tissues and, if possible, assists in the repair process. This study aims to examine the cytotoxicity by XTT and SRB of monomers and natural extracts presents in endodontic sealers, as well as evaluate the gene expression of alkaline phosphatase (ALP) and bone sialoprotein (BSP) in cultures of human pulp fibroblasts. XTT and SRB will evaluate the cytotoxicity of the following compounds extracts: BisGMA (bisphenol-A-glycidylmethacrylate), UDMA (diurethane dimethacrylate), Copaiba oil resin and castor oil polymer. After obtaining the original extracts materials seven serial dilutions were performed and they remained in contact with the pulp human fibroblasts for a period of 24 h. After determination of two dilutions of low toxicity, gene expression of alkaline phosphatase (ALP) and bone sialoprotein (BSP) were evaluated by the method qRT-PCR. Cytotoxicity test has showed: BisGMA > Copaíba > UDMA > Mamona. For gene expression studies, only the ALP gene was used due to lack of consistent results to standardizing the gene BSP, probably due to the low expression in these cells. Thus, ALP gene for the samples treated with castor revealed an increase in gene expression for the two dilutions selected, however the functional tests are necessary to verify if indeed increased gene expression generated conversion... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Carlos Henrique Ribeiro Camargo / Coorientador: Bruno das Neves Cavalcanti / Banca: Marcia Carneiro Valera / Banca: Caio Cesar Randi Ferraz / Resumo: Os cimentos endodônticos utilizados na obturação endodôntica permanecem em íntimo contato com os tecidos, e dependendo da sua constituição química podem promover uma resposta inflamatória de extensão e duração indeterminada. Diante disso, é necessário que estes materiais sejam bem tolerados pelos tecidos e, se possível, auxiliem no processo de reparo. Este estudo teve como objetivos analisar a citotoxicidade, por meio dos testes XTT e SRB, de quatro compostos presentes em cimentos endodônticos, bem como a expressão gênica da fosfatase alcalina (ALP) e sialoproteína óssea (BSP), em culturas primárias de fibroblastos de polpa humana. Os métodos do XTT e SRB foram selecionados para avaliação da citotoxicidade dos extratos dos seguintes compostos: BisGMA (bisfenol A glicidil metacrilato), UDMA (uretano dimetacrilato), óleo resina da copaíba e polímero da mamona. Após a obtenção dos extratos originais dos materiais foram realizadas sete diluições seriadas e as mesmas permaneceram em contato com fibroblastos de polpa humana pelo período de 24 h. Após a determinação de duas diluições de média toxicidade dos extratos testados, foi verificada a expressão dos genes da fosfatase alcalina (ALP) e sialoproteína óssea (BSP) pelo método qRT-PCR. Os testes de citotoxicidade indicaram que a sobrevivência celular foi do mais para o menos tóxico: BisGMA > Copaíba > UDMA > Mamona. Em relação ao estudo da expressão gênica, apenas o gene ALP foi utilizado devido à ausência de resultados consistentes em relação à padronização do gene BSP, provavelmente devido a sua baixa expressão nestas células. Assim para o gene ALP, apenas as amostras tratadas com a mamona revelaram um aumento significante na expressão do gene para as duas diluições selecionadas, contudo testes funcionais são necessários a fim... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endodontic sealers remain for long periods in contact with apical tissues, and depending on their chemical constitution, these periods may be indeterminate. Therefore, it is necessary that these materials be well tolerated by tissues and, if possible, assists in the repair process. This study aims to examine the cytotoxicity by XTT and SRB of monomers and natural extracts presents in endodontic sealers, as well as evaluate the gene expression of alkaline phosphatase (ALP) and bone sialoprotein (BSP) in cultures of human pulp fibroblasts. XTT and SRB will evaluate the cytotoxicity of the following compounds extracts: BisGMA (bisphenol-A-glycidylmethacrylate), UDMA (diurethane dimethacrylate), Copaiba oil resin and castor oil polymer. After obtaining the original extracts materials seven serial dilutions were performed and they remained in contact with the pulp human fibroblasts for a period of 24 h. After determination of two dilutions of low toxicity, gene expression of alkaline phosphatase (ALP) and bone sialoprotein (BSP) were evaluated by the method qRT-PCR. Cytotoxicity test has showed: BisGMA > Copaíba > UDMA > Mamona. For gene expression studies, only the ALP gene was used due to lack of consistent results to standardizing the gene BSP, probably due to the low expression in these cells. Thus, ALP gene for the samples treated with castor revealed an increase in gene expression for the two dilutions selected, however the functional tests are necessary to verify if indeed increased gene expression generated conversion... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre