Abstract Introduction. Green mould, Penicillium digitatum (Pers.: Fr.) Sacc., causes economically important postharvest disease in citrus. Materials and methods. Ethiopian plant extracts of Acacia seyal (Del. Var. Seyal) and Withania somnifera (L.) Dual were used to test the control of green mould in wound-inoculated fruit, stored for 21 d at 7 °C and at > 85% RH. The chemical compositions of the two extracts were determined using high-performance chromatography. Thereafter, freshly harvested (naturally infected) fruit were subjected to different postharvest treatments and stored for 50 d to investigate the effects of the two plant extracts on fruit quality parameters. Treatments included (pre-wax + leaf extracts), (wax + leaf extracts incorporated into wax, Citrosol A®), (leaf extract alone), (fruit washed in chlorinated water at 5.25%), (untreated fruit) and (commercially treated fruit). Results. Extracts of A. seyal and W. somnifera reduced the incidence of green mould by 56.1% and 50%, respectively, in wound-inoculated fruit. A. seyal extract contained a high concentration of gallic acid (60.3 mg·mL–1) whilst W. somnifera contained low concentrations of caffeic acid (8.7 mg·mL–1), salicylic acid (6.3 mg·mL–1) and 3,4 dihydroxy benzoic acid (3.8 mg·mL–1). Green mould was absent in naturally infected fruit subjected to (pre-wax + leaf extracts), (wax mixed with leaf extracts) and (leaf extracts) treatments. (Pre-wax + leaf extracts) and (wax mixed with leaf extract) treatments significantly reduced weight loss; retained firmness and colour; and they maintained eating qualities and a maturity index (SSC/TA) similar to commercial treatment. Conclusion. Both extracts of A. seyal and W. somnifera showed potential to be used as an alternative in combined applications with wax application under low temperature storage to replace synthetic fungicides, to ultimately control green mould and retain overall fruit quality.

A high-throughput sequencing pipeline to characterize Citrus tristeza virus isolates was developed. Three alternative viral templates (total RNA, double-stranded RNA and virus particles) were first tested on a single, previously characterized GFMS12 sub-isolate for their enrichment qualities, and combined with random RT-PCR amplification were subjected to Illumina paired-end sequencing. Double-stranded RNA was found to be most useful and was selected for further characterization of additional isolates (glasshouse-kept and field-derived). A novel South African genotype, named CT-ZA3 was assembled de novo and shown to be the dominant component in all GFMS12 sub-isolates tested. Genotype distributions within field-derived isolates collected from commercial orange (Citrus sinensis) orchards revealed a mixed infection status, dominated by a resistance breaking (RB)-like component (Tai-SP) coupled with a minor, VT-like (mild) (Kpg3) component. Based on read mapping patterns from field isolates, it is further suggested that two previously unknown recombinants may be present: a SP/Kpg3 and HA16-5/Kpg3 combination. This study underlined the effectiveness of next-generation sequencing for genotype discovery as well as whole-genome characterization of CTV isolates to a level of detail previously unreachable with classical methods such as SSCP and Sanger sequencing of multiple clones. / Dissertation (MSc)--University of Pretoria, 2013. / gm2014 / Microbiology and Plant Pathology / unrestricted

O HLB tem sido uma das principais doenças responsáveis pelos prejuízos econômicos enfrentados na citricultura mundial. Essa doença é associada a três espécies de bactérias de colonização restrita ao floema das plantas, as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri. Uma vez que na?o ha? medidas curativas para a doenc?a, o manejo baseia-se em medidas preventivas incluindo o controle do inseto vetor. O silenciamento gênico por interferência de RNA (RNAi) é uma nova ferramenta biotecnológica no controle de pragas, pois, proporciona uma ação eficiente e gene-espécie específica. Entretanto, essa tecnologia depende de análises de expressão gênica com genes de referência adequados e estáveis. Este trabalho buscou selecionar e validar a estabilidade da expressão de seis genes de referência potenciais de D. citri sob diferentes condições experimentais e avaliar a biologia deste inseto em plantas transgênicas de laranja doce expressando dsRNA do gene DcV-ATPase-A visando o seu controle. Para isso, foram avaliados: 1) a estabilidade de seis genes candidatos a referência: fator de elongação 1alfa (EF 1-α), actina (ACT), gliceradeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), proteina ribossomal L7 (RPL7), proteina ribossomal L17 (RPL17) e alfa tubulina (TUB), através de diferentes algorítimos matemáticos: Delta Ct, NormFinder, BestKeeper e Genorm em cinco estádios de desenvolvimento (Ninfas de 1° e 2° ínstar; Ninfa de 3° ínstar; Ninfas de 4° e 5° ínstar , Adulto de 1 dia; Adulto de 10 dias) e dois hospedeiros (Citrus sinensis e Murraya paniculata). O ranquamento final dos genes foi obtido através do RefFinder e a validação dos mesmos através do gene V-ATPase-A; 2) a sobrevivência de psilídeos adultos alimentados em plantas transgênicas; a biologia da D. citri em plantas transgênicas expressando o dsRNA do gene DcV-ATPase-A; e a expressão relativa deste gene. Recomenda-se a utilização de dois genes de referência quando consideram-se diferentes hospedeiros e fases de desenvolvimento distintas. Para análise de expressão gênica, independentemente da fase de desenvolvimento do inseto, quando utiliza-se M. paniculata como hospedeiro de criação, recomenda-se a utilização dos genes GAPDH e RPL7, enquanto que para C. sinensis sugerem-se os genes GAPDH e EF 1-α. Os bioensaios demonstraram a internalização pelo inseto das moléculas de dsRNA/siRNA produzidas pelas plantas transgênicas e o potencial de redução da expressão do gene alvo pelo RNAi. Apesar da ausência de fenótipo letal em psilídeos adultos alimentados nas plantas transgênicas, alterações significativas na duração, sobrevivência e longevidade foram verificadas em D. citri quando esta desenvolveu seu ciclo biológico nas plantas que expressam dsRNA do gene DcVAPTase-A. / HLB has been one of the main diseases responsible for the economic losses faced in the citriculture worldwide. This disease is associated to three species of colonization bacteria restricted to the phloem of the plants, which are transmitted by the psyllid Diaphorina citri. Since there are no curative methos for the disease, management is based on preventive methods including vector insect control. Gene silencing by RNA interference (RNAi) has been presented as a new biotechnological tool in pest control, since it provides a efficient and especific gene-specie control. However, this technology depends on analyzes of gene expression with suitable and stable reference genes. Thus, this work aimed to select and validate the stability of the expression of six potential reference genes of D. citri under different experimental conditions and to evaluate the biology of this insect on sweet orange transgenic plants expressing dsRNA of DcV-ATPase-A gene aiming their control. In order to do this, it was evaluated: 1) the stability of six candidate reference genes: elongation factor 1 alpha (EF 1-α), actin (ACT), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), ribosomal protein L7 (RPL7), ribosomal protein L17 (RPL17) e alpha tubulin (TUB), through different mathematical algorithms: Delta Ct, NormFinder, BestKeeper and Genorm in five developmental stages and two hosts (Citrus sinensis and Murraya paniculata). The final rank was obtained through the RefFinder and validated by the V-ATPase-A gene; 2) the survival of adult psyllids fed on transgenic plants; the biology of D. citri in transgenic plants expressing dsRNA of the DcV-ATPase-A gene; and the relative expression of this gene. According to our results, two reference genes are recommended when different hosts and different developmental stages are considered. For gene expression analysis, regardless the insect developmental stage, when using M. paniculata as a breeding host, it is recommended to use GAPDH and RPL7 genes, whereas for C. sinensis GAPDH and EF 1-α are indicated. The bioassays demonstrated the insect\'s internalization of the dsRNA / siRNA molecules produced by the transgenic plants and the potential for reducing the target gene expression by RNAi. Despite the absence of lethal phenotype in adult psyllids fed to transgenic plants, significant changes in duration, survival and longevity were observed for D. citri when it developed its biological cycle in plants that express dsRNA of the DcVAPTase-A gene.

O Brasil é o maior produtor de laranja do mundo, liderando também a produção e exportação de suco concentrado congelado. Um dos fatores que ameaçam o setor é o grande número de doenças, principalmente, as bacterianas como o Huanglongbing (HLB). O HLB é considerado uma das mais graves doenças dos citros, que compromete seu desenvolvimento e produção, podendo levar à morte das plantas afetadas. Os agentes associados a esta doença são bactérias endógenas restritas ao floema (Candidatus Liberibacter spp.). No gênero Citrus, ainda não foram encontradas espécies resistentes ao HLB, o que tem estimulado a utilização de ferramentas biotecnológicas, como a transformação genética, para auxiliar os programas de melhoramento genético, nos quais genes de interesse agronômico são introduzidos visando resistência a doenças. Na busca por uma planta transgênica resistente ao HLB, é desejável obter construções gênicas nas quais o gene de interesse se expresse, preferencialmente, na região em que a bactéria coloniza a planta, ou seja, no caso do HLB, no floema. Este trabalho objetivou avaliar plantas transgênicas de citrange \'Carrizo\' [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] com gene uidA (β-glucuronidase), dirigido pelos promotores dos genes CsPP2.1 (Phloem protein 2) e CsVTE2 (homogentisato fitiltransferase) obtidos de Citrus sinensis. Foram analisadas as especificidades de cada promotor, e estes foram comparados com a ação do promotor constitutivo CaMV35S. Análises moleculares, como Southern blot e qPCR, foram realizadas a fim de verificar o número de cópias do transgene em cada planta avaliada, e quantificar a expressão relativa do gene uidA dirigido pelos diferentes promotores, respectivamente. Análises histológicas foram feitas para verificar a localização da expressão do gene repórter GUS (uidA). A expressão relativa do gene uidA dirigido pelos promotores específicos foi mais baixa quando comparada com o promotor constitutivo CaMV35S, uma vez que estes promotores direcionam a expressão apenas para tecidos específicos. O promotor CsPP2.1 direcionou a expressão do gene uidA para o tecido floemático, mais especificamente junto às células companheiras e elementos de tubo crivado. O promotor CsVTE2 direcionou a expressão do gene repórter preferencialmente para a periferia do parênquima cortical e para as células guarda, o que corresponde às áreas com presença de cloroplastos, além de também direcionar a expressão para o tecido floemático. Apesar de não ser específico de floema, o promotor CsVTE2 constitui-se em uma boa alternativa para construções visando o combate a doenças vasculares por estar envolvido em importantes processos fisiológicos da planta, como o combate a estresses oxidativos e o carregamento de fotoassimilados no floema. Os resultados sugerem que CsPP2.1 e CsVTE2 são promotores potenciais para serem utilizados em construções gênicas visando o controle de doenças vasculares tais como o HLB. / Brazil is the world\'s largest sweet orange producer, leading also the export of frozen concentrated orange juice. However, the citrus industry is constantly threatened by diseases, particularly those caused by bacteria, such as Huanglongbing (HLB). HLB is considered one of the most harmful citrus diseases, leading the plants to their death. The associated agents of this disease are endogenous bacteria restricted to the phloem of the plants (Candidatus Liberibacter spp.). No resistance has been found in Citrus spp. that could be used in breeding programs. Therefore, biotechnological strategies, such as genetic transformation, could help such programs to introduce genes for disease resistance. It is desirable the use of gene constructs that are preferentially expressed where the bacterium colonizes the plant, i.e., the phloem in plants affected by HLB. This study aimed to evaluate transgenic plants of \'Carrizo\' citrange [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] with uidA gene (β-glucuronidase), driven by the promoters of CsPP2.1 (Phloem protein 2) and CsVTE2 (homogentisato fitiltransferase) genes obtained from Citrus sinensis plants. Each promoter specificity was analyzed and gene expression was compared with that induced by the constitutive promoter CaMV35S. Molecular analyses such as Southern blot and qPCR were performed in order to verify the number of transgenic copies in plants and to quantify relative expression of the uidA gene driven by different promoters, respectively. Histological analyses were done in order to identify the exact location of the GUS (uidA) reporter gene expression. Relative expressions of the uidA gene driven by specific promotors were lower than that driven by the CaMV35S constitutive promoter, since the expression was limited to specific tissues. The CsPP2.1 promoter drove the uidA gene expression to the phloem tissue, specifically to the companion cells and sieve elements. On the other hand, CsVTE2 promoter drove the reporter gene expression mainly to the periphery of the cortical parenchyma and to the guard cells, where high number of chloroplasts were present, and also drove the expression to the phloem. Although the CsVTE2 promoter is not phloem-specific, it might be used in gene constructs aiming vascular disease control, since it is involved in physiological processes such as mitigating oxidative stress and photoassimilate phloem loading. The results suggest that CsPP2.1 e CsVTE2 are promising promoters to be used in gene constructs in order to control vascular diseases, such as HLB.

O Brasil é o maior produtor de laranja do mundo, liderando também a produção e exportação de suco concentrado congelado. Um dos fatores que ameaçam o setor é o grande número de doenças, principalmente, as bacterianas como o Huanglongbing (HLB). O HLB é considerado uma das mais graves doenças dos citros, que compromete seu desenvolvimento e produção, podendo levar à morte das plantas afetadas. Os agentes associados a esta doença são bactérias endógenas restritas ao floema (Candidatus Liberibacter spp.). No gênero Citrus, ainda não foram encontradas espécies resistentes ao HLB, o que tem estimulado a utilização de ferramentas biotecnológicas, como a transformação genética, para auxiliar os programas de melhoramento genético, nos quais genes de interesse agronômico são introduzidos visando resistência a doenças. Na busca por uma planta transgênica resistente ao HLB, é desejável obter construções gênicas nas quais o gene de interesse se expresse, preferencialmente, na região em que a bactéria coloniza a planta, ou seja, no caso do HLB, no floema. Este trabalho objetivou avaliar plantas transgênicas de citrange \'Carrizo\' [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] com gene uidA (β-glucuronidase), dirigido pelos promotores dos genes CsPP2.1 (Phloem protein 2) e CsVTE2 (homogentisato fitiltransferase) obtidos de Citrus sinensis. Foram analisadas as especificidades de cada promotor, e estes foram comparados com a ação do promotor constitutivo CaMV35S. Análises moleculares, como Southern blot e qPCR, foram realizadas a fim de verificar o número de cópias do transgene em cada planta avaliada, e quantificar a expressão relativa do gene uidA dirigido pelos diferentes promotores, respectivamente. Análises histológicas foram feitas para verificar a localização da expressão do gene repórter GUS (uidA). A expressão relativa do gene uidA dirigido pelos promotores específicos foi mais baixa quando comparada com o promotor constitutivo CaMV35S, uma vez que estes promotores direcionam a expressão apenas para tecidos específicos. O promotor CsPP2.1 direcionou a expressão do gene uidA para o tecido floemático, mais especificamente junto às células companheiras e elementos de tubo crivado. O promotor CsVTE2 direcionou a expressão do gene repórter preferencialmente para a periferia do parênquima cortical e para as células guarda, o que corresponde às áreas com presença de cloroplastos, além de também direcionar a expressão para o tecido floemático. Apesar de não ser específico de floema, o promotor CsVTE2 constitui-se em uma boa alternativa para construções visando o combate a doenças vasculares por estar envolvido em importantes processos fisiológicos da planta, como o combate a estresses oxidativos e o carregamento de fotoassimilados no floema. Os resultados sugerem que CsPP2.1 e CsVTE2 são promotores potenciais para serem utilizados em construções gênicas visando o controle de doenças vasculares tais como o HLB. / Brazil is the world\'s largest sweet orange producer, leading also the export of frozen concentrated orange juice. However, the citrus industry is constantly threatened by diseases, particularly those caused by bacteria, such as Huanglongbing (HLB). HLB is considered one of the most harmful citrus diseases, leading the plants to their death. The associated agents of this disease are endogenous bacteria restricted to the phloem of the plants (Candidatus Liberibacter spp.). No resistance has been found in Citrus spp. that could be used in breeding programs. Therefore, biotechnological strategies, such as genetic transformation, could help such programs to introduce genes for disease resistance. It is desirable the use of gene constructs that are preferentially expressed where the bacterium colonizes the plant, i.e., the phloem in plants affected by HLB. This study aimed to evaluate transgenic plants of \'Carrizo\' citrange [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] with uidA gene (β-glucuronidase), driven by the promoters of CsPP2.1 (Phloem protein 2) and CsVTE2 (homogentisato fitiltransferase) genes obtained from Citrus sinensis plants. Each promoter specificity was analyzed and gene expression was compared with that induced by the constitutive promoter CaMV35S. Molecular analyses such as Southern blot and qPCR were performed in order to verify the number of transgenic copies in plants and to quantify relative expression of the uidA gene driven by different promoters, respectively. Histological analyses were done in order to identify the exact location of the GUS (uidA) reporter gene expression. Relative expressions of the uidA gene driven by specific promotors were lower than that driven by the CaMV35S constitutive promoter, since the expression was limited to specific tissues. The CsPP2.1 promoter drove the uidA gene expression to the phloem tissue, specifically to the companion cells and sieve elements. On the other hand, CsVTE2 promoter drove the reporter gene expression mainly to the periphery of the cortical parenchyma and to the guard cells, where high number of chloroplasts were present, and also drove the expression to the phloem. Although the CsVTE2 promoter is not phloem-specific, it might be used in gene constructs aiming vascular disease control, since it is involved in physiological processes such as mitigating oxidative stress and photoassimilate phloem loading. The results suggest that CsPP2.1 e CsVTE2 are promising promoters to be used in gene constructs in order to control vascular diseases, such as HLB.

O HLB tem sido uma das principais doenças responsáveis pelos prejuízos econômicos enfrentados na citricultura mundial. Essa doença é associada a três espécies de bactérias de colonização restrita ao floema das plantas, as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri. Uma vez que na?o ha? medidas curativas para a doenc?a, o manejo baseia-se em medidas preventivas incluindo o controle do inseto vetor. O silenciamento gênico por interferência de RNA (RNAi) é uma nova ferramenta biotecnológica no controle de pragas, pois, proporciona uma ação eficiente e gene-espécie específica. Entretanto, essa tecnologia depende de análises de expressão gênica com genes de referência adequados e estáveis. Este trabalho buscou selecionar e validar a estabilidade da expressão de seis genes de referência potenciais de D. citri sob diferentes condições experimentais e avaliar a biologia deste inseto em plantas transgênicas de laranja doce expressando dsRNA do gene DcV-ATPase-A visando o seu controle. Para isso, foram avaliados: 1) a estabilidade de seis genes candidatos a referência: fator de elongação 1alfa (EF 1-α), actina (ACT), gliceradeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH), proteina ribossomal L7 (RPL7), proteina ribossomal L17 (RPL17) e alfa tubulina (TUB), através de diferentes algorítimos matemáticos: Delta Ct, NormFinder, BestKeeper e Genorm em cinco estádios de desenvolvimento (Ninfas de 1° e 2° ínstar; Ninfa de 3° ínstar; Ninfas de 4° e 5° ínstar , Adulto de 1 dia; Adulto de 10 dias) e dois hospedeiros (Citrus sinensis e Murraya paniculata). O ranquamento final dos genes foi obtido através do RefFinder e a validação dos mesmos através do gene V-ATPase-A; 2) a sobrevivência de psilídeos adultos alimentados em plantas transgênicas; a biologia da D. citri em plantas transgênicas expressando o dsRNA do gene DcV-ATPase-A; e a expressão relativa deste gene. Recomenda-se a utilização de dois genes de referência quando consideram-se diferentes hospedeiros e fases de desenvolvimento distintas. Para análise de expressão gênica, independentemente da fase de desenvolvimento do inseto, quando utiliza-se M. paniculata como hospedeiro de criação, recomenda-se a utilização dos genes GAPDH e RPL7, enquanto que para C. sinensis sugerem-se os genes GAPDH e EF 1-α. Os bioensaios demonstraram a internalização pelo inseto das moléculas de dsRNA/siRNA produzidas pelas plantas transgênicas e o potencial de redução da expressão do gene alvo pelo RNAi. Apesar da ausência de fenótipo letal em psilídeos adultos alimentados nas plantas transgênicas, alterações significativas na duração, sobrevivência e longevidade foram verificadas em D. citri quando esta desenvolveu seu ciclo biológico nas plantas que expressam dsRNA do gene DcVAPTase-A. / HLB has been one of the main diseases responsible for the economic losses faced in the citriculture worldwide. This disease is associated to three species of colonization bacteria restricted to the phloem of the plants, which are transmitted by the psyllid Diaphorina citri. Since there are no curative methos for the disease, management is based on preventive methods including vector insect control. Gene silencing by RNA interference (RNAi) has been presented as a new biotechnological tool in pest control, since it provides a efficient and especific gene-specie control. However, this technology depends on analyzes of gene expression with suitable and stable reference genes. Thus, this work aimed to select and validate the stability of the expression of six potential reference genes of D. citri under different experimental conditions and to evaluate the biology of this insect on sweet orange transgenic plants expressing dsRNA of DcV-ATPase-A gene aiming their control. In order to do this, it was evaluated: 1) the stability of six candidate reference genes: elongation factor 1 alpha (EF 1-α), actin (ACT), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), ribosomal protein L7 (RPL7), ribosomal protein L17 (RPL17) e alpha tubulin (TUB), through different mathematical algorithms: Delta Ct, NormFinder, BestKeeper and Genorm in five developmental stages and two hosts (Citrus sinensis and Murraya paniculata). The final rank was obtained through the RefFinder and validated by the V-ATPase-A gene; 2) the survival of adult psyllids fed on transgenic plants; the biology of D. citri in transgenic plants expressing dsRNA of the DcV-ATPase-A gene; and the relative expression of this gene. According to our results, two reference genes are recommended when different hosts and different developmental stages are considered. For gene expression analysis, regardless the insect developmental stage, when using M. paniculata as a breeding host, it is recommended to use GAPDH and RPL7 genes, whereas for C. sinensis GAPDH and EF 1-α are indicated. The bioassays demonstrated the insect\'s internalization of the dsRNA / siRNA molecules produced by the transgenic plants and the potential for reducing the target gene expression by RNAi. Despite the absence of lethal phenotype in adult psyllids fed to transgenic plants, significant changes in duration, survival and longevity were observed for D. citri when it developed its biological cycle in plants that express dsRNA of the DcVAPTase-A gene.

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A mancha preta dos citros (MPC) é causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa e está entre as principais doenças citrícolas do Brasil. Esse fungo provoca lesões superficiais e queda precoce dos frutos. Essas lesões não comprometem a qualidade interna do fruto, porém limita a comercialização no mercado brasileiro de frutos e impede que o Brasil seja exportador do produto in-natura devido à presença dos sintomas. A MPC é uma doença quarentenária A1 na União Europeia (UE) por não estar presente em seus países membros. Essa é a principal razão pela qual o Brasil, embora seja o maior produtor mundial de frutos e suco, não apareça no topo dos países exportadores. O principal controle utilizado para a doença é o controle químico associado a práticas culturais. Os principais fungicidas utilizados são os cúpricos, os benzimidazóis e a mistura de estrobilurinas e triazóis. Porém, em 2012 os benzimidazóis foram retirados da lista de produtos permitidos em pomares com frutos destinados ao mercado externo. Nesse contexto, os produtores se veem com uma opção a menos para o controle da doença no campo. Sabe-se que o beneficiamento em packinghouse é um método de controle dos frutos em pós-colheita, porém a eficiência desse processo nunca foi avaliada. Por essa razão, este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência do processo de beneficiamento em packinghouse na redução de incidência de frutos com MPC. Para isso, foi avaliado quinzenalmente, no período de abril de 2012 a maio de 2013 a incidência e a severidade de MPC nos frutos antes a após o beneficiamento pelo packinghouse. Para a avaliação da severidade foi utilizada a escala diagramática. A redução da incidência no lote chegou a 53,3 %, enquanto que a redução da severidade no lote chegou a 68 %. Foi observado que grande parte dos frutos se agrupa em intervalos baixos de severidade, entre 0,5 a 1,7 %. A eficiência do packinghouse aumenta com o incremento na classe de severidade, por exemplo, a redução da MPC é de 100 % em casos em que a severidade dos frutos é maior que 11,6 %. Os frutos com baixa severidade são dificilmente detectados e não são retirados da linha de beneficiamento, já que o packinghouse tem seus frutos destinados ao mercado interno e menos exigentes na questão fitossanitária. A quantificação de picnídios em lesões novas de mancha sardenta foi realizada em frutos que já apresentavam sintomas da doença. Os frutos foram mantidos em recipientes plásticos, a temperatura de 25 ? C sob luz constante, o acompanhamento era feito a cada dois dias. Foi verificado que o aparecimento de picnídios ocorre de 2 a 18 dias após o aparecimento da lesão e não foi verificado um padrão de produção dos picnídios em manchas sardentas. O efeito da aplicação de cera de carnaúba e fungicida imazalil nos sintomas pós-colheita foi realizado em frutos com três tratamentos, (1) cera de carnaúba, (2) cera de carnaúba + imazalil e (3) controle. Os frutos foram mantidos em recipientes plásticos, a temperatura de 25 ? C sob luz constante, a avaliação era feita a cada quatro dias. Foi verificado que a taxa de progresso da doença foi crescente para os tratamentos (1) cera de carnaúba + imazalil, (2) cera de carnaúba e (3) controle. As taxas diferiram estatisticamente pelo teste-t a 5 % de probabilidade. / The citrus black spot (CBS) is caused by Phyllosticta citricarpa fungus and is one of the main citrus diseases in Brazil. This fungus causes surface lesions and early fruit drop. These lesions do not compromise the internal quality of the fruit; however, they limit its commercialization in the domestic market and hinder exports of the fruit in-natura. The CBS is a quarantine disease classified as A1 by the European Union (EU) with no occurrence in its member countries. For this reason, the EU has tolerance zero for fruits contaminated with CBS. This is the main reason that stops Brazil, the world\"s largest fruit and juice producer, from being the top citrus exporter country. The disease is controlled mainly by the use of chemicals associated with cultural practices. The main chemical products used are cupric, benzimidazols and mixture of strobilurin and triazole. However, in 2012 benzimidazols were banned from the domestic market. Therefore, producers have fewer options for the control of the disease in the field. The processing of fruits at a packinghouse is a method of post-harvest fruit control; nevertheless, the efficiency of this process was never assessed. This study aimed to evaluate the efficiency of packinghouse process in reducing incidence of CBS in oranges. The incidence and severity of CBS in the fruits before and after packinghouse process were evaluated every fifteen days, from April 2012 to May 2013. The diagrammatic scale was used to assess the severity of CBS. Incidence reduction of these fruits can reach 50.5 %, whereas the reduction of fruits severity decreased up to 68 %. We observed that large quantities of fruits are aggregated to low severity breaks on the diagrammatic scale, from 0.5 to 1.7 %. For fruits with high severity, the detection is easier and they are removed from the processing belt, improving efficiency. The efficiency of a packinghouse in reducing the occurrence of CBS is 100% in cases where severity of fruits is greater than 11.6%. The behavior adopted by the packinghouse to detect fruits changes depending on severity. The fruits with low severity are hard to be detected on the belt and are not removed from the processing line, because the packinghouse studied allocates its fruits to the domestic market, which is less demanding in terms of plant health. Quantification of pycnidia in new freckled spot lesions was carried out in fruits that already show symptoms of the disease, the fruits were kept in containers at 25 ? C under constant light, the monitoring was done every two days. It was found that the appearance of pycnidia was between 2 and 18 days after onset of the injury and was not observed standard in pycnidia production. The appearance of freckles spot was performed with three treatments on fruit (1) carnauba wax, (2) carnauba wax + imazalil and (3) control. The fruits were kept in containers at a temperature of 25 ? C under constant light, the assessment was carried out every four days. It was found that the rate of progress of the disease increased for treatment (1) Carnauba wax + imazalil, (2) carnauba wax and (3) control. Rates differed statistically in the t-test at 5% probability.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O fruto da cultivar âValÃnciaâ à uma laranja doce de excelente qualidade, tanto para produÃÃo de suco, como para o consumo in natura. O trabalho objetivou avaliar a qualidade e conservaÃÃo, o efeito da utilizaÃÃo de cera à base de carnaÃba (ARUà TROPICALÂ) e/ou desverdecimento nos frutos da laranjeira âValÃncia Deltaâ produzida em Ãrea de clima semi-Ãrido sob diferentes condiÃÃes de armazenamento. Foi avaliada a influÃncia do recobrimento sobre os frutos e seus efeitos nas propriedades fÃsicas e fÃsico-quÃmicas. As laranjas da cultivar âValÃncia Deltaâ, produzidas no pÃlo do Baixo Jaguaribe, estado do CearÃ, foram recobertas com cera à base de carnaÃba e armazenadas sob condiÃÃo ambiente e refrigerada, por um perÃodo de 28 dias. Em um segundo experimento, os frutos foram desverdecidos com etileno exÃgeno e, apÃs o desverdecimento, recobertos com cera à base de carnaÃba. Foram realizados, simultaneamente, dois experimentos. No primeiro, os frutos foram armazenados sob condiÃÃo refrigerada por 35 dias e foram submetidos Ãs anÃlises fÃsicas e fÃsico-quÃmicas. No segundo experimento, dentre os frutos refrigerados foram retiradas amostras para o armazenamento ambiente (3 dias a 24 ÂC; 40 % UR). Os frutos com recobrimento apresentaram a menor perda de massa ao final do experimento, alto rendimento de suco e teor de sÃlidos solÃveis, alta relaÃÃo SS/AT e os compostos bioativos apresentaram aumento durante o perÃodo de armazenamento. Os frutos desverdecidos decresceram em compostos bioativos durante o perÃodo de armazenamento e apresentaram baixo teor de sÃlidos solÃveis. A aplicaÃÃo do desverdecimento promoveu mudanÃa na cor da casca, tornando-os frutos amarelos, e a utilizaÃÃo de recobrimento em laranjas âValÃncia Deltaâ mostrou-se eficiente, pois reduziu a perda de massa, intensificou o brilho do flavedo, e manteve a qualidade visual dos frutos durante o perÃodo de armazenamento. O armazenamento refrigerado associado à utilizaÃÃo de recobrimento mostrou-se eficiente para as caracterÃsticas externas dos frutos e preservou os parÃmetros indicadores da qualidade interna. / The fruit of the cultivar 'Valencia' is a sweet orange of excellent quality, both for production of juice and for consumption in natura. The study aimed to evaluate the quality and conservation, the effect of the use of carnauba based wax (ARUà TROPICALÂ) and/or degreening in the fruits of orange 'Valencia Delta' produced in the area of semi-arid climate under different storage conditions. The influence of coating on the fruit and its effects was appraised on physical and physical-chemical properties. The oranges of the cultivar 'Valencia Delta', produced at the pole Baixo Jaguaribe, state of CearÃ, were coated with carnauba based wax and stored at room temperature and refrigerated, for a period of 28 days. In a second experiment, the fruits were degreened with exogenous ethylene and, after degreening, coated with carnauba based wax. Simultaneously, two experiments were conducted: in first, the fruits were stored under refrigerated conditions by 35 days and submitted to physical and physical -chemical analysis. For the second experiment, among the refrigerated fruits were removed samples for the ambient storage (3 days at 24 C and 40 % RH). The coated fruits showed the lowest mass loss at the end of the experiment, high yield of juice and soluble solids level, high ratio SS/TA and the bioactive compounds showed increase during the storage period. The degreened fruits decreased in bioactive compounds during storage and showed low level of soluble solids. The application of degreening promoted change in the color of the peel, making them yellow fruit, and the use of coating on oranges 'Valencia Delta' was effective because it reduced the loss of weight, enhanced the brightness of the flavedo and maintained the visual quality of the fruits during the storage period. The refrigerated storage associated with the use of coating was affective for the external characteristics of fruits and preserved the indicator parameters of the internal quality.

A mancha preta dos citros (MPC) é causada pelo fungo Phyllosticta citricarpa e está entre as principais doenças citrícolas do Brasil. Esse fungo provoca lesões superficiais e queda precoce dos frutos. Essas lesões não comprometem a qualidade interna do fruto, porém limita a comercialização no mercado brasileiro de frutos e impede que o Brasil seja exportador do produto in-natura devido à presença dos sintomas. A MPC é uma doença quarentenária A1 na União Europeia (UE) por não estar presente em seus países membros. Essa é a principal razão pela qual o Brasil, embora seja o maior produtor mundial de frutos e suco, não apareça no topo dos países exportadores. O principal controle utilizado para a doença é o controle químico associado a práticas culturais. Os principais fungicidas utilizados são os cúpricos, os benzimidazóis e a mistura de estrobilurinas e triazóis. Porém, em 2012 os benzimidazóis foram retirados da lista de produtos permitidos em pomares com frutos destinados ao mercado externo. Nesse contexto, os produtores se veem com uma opção a menos para o controle da doença no campo. Sabe-se que o beneficiamento em packinghouse é um método de controle dos frutos em pós-colheita, porém a eficiência desse processo nunca foi avaliada. Por essa razão, este trabalho teve por objetivo avaliar a eficiência do processo de beneficiamento em packinghouse na redução de incidência de frutos com MPC. Para isso, foi avaliado quinzenalmente, no período de abril de 2012 a maio de 2013 a incidência e a severidade de MPC nos frutos antes a após o beneficiamento pelo packinghouse. Para a avaliação da severidade foi utilizada a escala diagramática. A redução da incidência no lote chegou a 53,3 %, enquanto que a redução da severidade no lote chegou a 68 %. Foi observado que grande parte dos frutos se agrupa em intervalos baixos de severidade, entre 0,5 a 1,7 %. A eficiência do packinghouse aumenta com o incremento na classe de severidade, por exemplo, a redução da MPC é de 100 % em casos em que a severidade dos frutos é maior que 11,6 %. Os frutos com baixa severidade são dificilmente detectados e não são retirados da linha de beneficiamento, já que o packinghouse tem seus frutos destinados ao mercado interno e menos exigentes na questão fitossanitária. A quantificação de picnídios em lesões novas de mancha sardenta foi realizada em frutos que já apresentavam sintomas da doença. Os frutos foram mantidos em recipientes plásticos, a temperatura de 25 ? C sob luz constante, o acompanhamento era feito a cada dois dias. Foi verificado que o aparecimento de picnídios ocorre de 2 a 18 dias após o aparecimento da lesão e não foi verificado um padrão de produção dos picnídios em manchas sardentas. O efeito da aplicação de cera de carnaúba e fungicida imazalil nos sintomas pós-colheita foi realizado em frutos com três tratamentos, (1) cera de carnaúba, (2) cera de carnaúba + imazalil e (3) controle. Os frutos foram mantidos em recipientes plásticos, a temperatura de 25 ? C sob luz constante, a avaliação era feita a cada quatro dias. Foi verificado que a taxa de progresso da doença foi crescente para os tratamentos (1) cera de carnaúba + imazalil, (2) cera de carnaúba e (3) controle. As taxas diferiram estatisticamente pelo teste-t a 5 % de probabilidade. / The citrus black spot (CBS) is caused by Phyllosticta citricarpa fungus and is one of the main citrus diseases in Brazil. This fungus causes surface lesions and early fruit drop. These lesions do not compromise the internal quality of the fruit; however, they limit its commercialization in the domestic market and hinder exports of the fruit in-natura. The CBS is a quarantine disease classified as A1 by the European Union (EU) with no occurrence in its member countries. For this reason, the EU has tolerance zero for fruits contaminated with CBS. This is the main reason that stops Brazil, the world\"s largest fruit and juice producer, from being the top citrus exporter country. The disease is controlled mainly by the use of chemicals associated with cultural practices. The main chemical products used are cupric, benzimidazols and mixture of strobilurin and triazole. However, in 2012 benzimidazols were banned from the domestic market. Therefore, producers have fewer options for the control of the disease in the field. The processing of fruits at a packinghouse is a method of post-harvest fruit control; nevertheless, the efficiency of this process was never assessed. This study aimed to evaluate the efficiency of packinghouse process in reducing incidence of CBS in oranges. The incidence and severity of CBS in the fruits before and after packinghouse process were evaluated every fifteen days, from April 2012 to May 2013. The diagrammatic scale was used to assess the severity of CBS. Incidence reduction of these fruits can reach 50.5 %, whereas the reduction of fruits severity decreased up to 68 %. We observed that large quantities of fruits are aggregated to low severity breaks on the diagrammatic scale, from 0.5 to 1.7 %. For fruits with high severity, the detection is easier and they are removed from the processing belt, improving efficiency. The efficiency of a packinghouse in reducing the occurrence of CBS is 100% in cases where severity of fruits is greater than 11.6%. The behavior adopted by the packinghouse to detect fruits changes depending on severity. The fruits with low severity are hard to be detected on the belt and are not removed from the processing line, because the packinghouse studied allocates its fruits to the domestic market, which is less demanding in terms of plant health. Quantification of pycnidia in new freckled spot lesions was carried out in fruits that already show symptoms of the disease, the fruits were kept in containers at 25 ? C under constant light, the monitoring was done every two days. It was found that the appearance of pycnidia was between 2 and 18 days after onset of the injury and was not observed standard in pycnidia production. The appearance of freckles spot was performed with three treatments on fruit (1) carnauba wax, (2) carnauba wax + imazalil and (3) control. The fruits were kept in containers at a temperature of 25 ? C under constant light, the assessment was carried out every four days. It was found that the rate of progress of the disease increased for treatment (1) Carnauba wax + imazalil, (2) carnauba wax and (3) control. Rates differed statistically in the t-test at 5% probability.