La toxina-ε, produïda per la soca D de Clostridium perfringens, és la principal responsable de l’enterotoxèmia en animals de granja. Produeix un edema generalitzat, uns efectes citotòxics molt greus al ronyó (mort de les cèl•lules epitelials dels túbuls distals) i també efectes neurològics (mort neuronal provocada per excitotoxicitat). Tots aquests efectes porten finalment a la mort de l’animal. Actualment existeixen tractaments preventius de la toxina mitjançant la vacunació, però encara es desconeix el mecanisme d’acció letal, el seu receptor i els primers passos que porten a la citotoxicitat. Amb la finalitat d’estudiar el comportament d’aquesta toxina, al nostre laboratori vàrem produir una proteïna de fusió formada per la toxina-ε i la proteïna verda fluorescent GFP (toxina-ε-GFP). Aquesta eina va ser de gran utilitat, ja que es comportava igual que la toxina-ε nativa i podia localitzar-se de manera directa utilitzant microscòpia de fluorescència. De fet, injeccions i.v de toxina-ε-GFP a ratolí, varen revelar un edema generalitzat i una mort de les cèl•lules epitelials dels túbuls distals del ronyó de manera idèntica a la toxina nativa. A més, també mostrava citotoxicitat en cultius de la línia cel•lular MDCK, on heptameritzava a la membrana cel•lular, formava porus i provocava la mort cel•lular (Soler-Jover et al., 2004). L’objectiu d’aquesta tesi va ser aprofundir en el coneixement de les primeres etapes de la intoxicació per la toxina-ε, caracteritzant la seva unió i distribució en els diferents òrgans i sistemes, en especial el renal i nerviós. Per dur a terme aquest objectiu general, vàrem realitzar dues aproximacions experimentals: 1. Vàrem incubar la toxina-ε-GFP sobre seccions de teixits, on vàrem observar la seva unió a la mielina tant del SNC com del SNP. També vàrem veure que en el sistema renal, la toxina-ε-GFP reconeixia cèl•lules epitelials dels túbuls distals i col•lectors del ronyó, així com cèl•lules de l’uroteli. Els estudis realitzats en aquest treball (tractaments amb pronasa E, detergents, Nglicosidasa F i beta-eliminació) apunten que el receptor podria tractar-se d’una Oglicoproteïna tant en el sistema nerviós com en el renal, i que un ambient lipídic (o la integritat de la membrana) seria necessari per permetre la unió de la toxina-ε al seu receptor. A més, els estudis realitzats amb cross-linkers en les cèl•lules MDCK han permès identificar una proteïna d’uns 36 kDa (Annexina A2) que podria actuar com a correceptor o intervenir en l’oligomerització i formació de porus a la membrana plasmàtica. Mitjançant un assaig d’ELISA en cèl•lules MDCK, vàrem observar que només hi ha un sol lloc d’unió per a la toxina-ε, i aquest és saturable i d’alta afinitat. 2. Vàrem reproduir a ratolí els efectes de la toxina injectant i.v dosi letals de toxina-ε- GFP, i vàrem estudiar la seva distribució en el sistema nerviós. Vàrem veure que la toxina-ε-GFP a banda d’unir-se a les cèl•lules endotelials també era capaç de travessar la barrera hematoencefàlica (BHE) i arribar així al parènquima del cervell, on provocaria la mort neuronal ja fos d’una manera directa o indirecta (Soler-Jover et al., 2007). Donat l’interés en trobar nous vehicles capaços de travessar la BHE, vàrem analitzar aquesta propietat en diferents mutants de toxina-ε, tot i que encara no hem identificat cap mutant que hagi perdut la capacitat tòxica però no seva capacitat invasiva. La futura identificació del receptor de la toxina-ε, la formació dels heptàmers i la seva inserció a la membrana són, sens dubte, els grans reptes que ajudaran a caracteritzar el mecanisme d’acció de la toxina-ε de Clostridium perfringens. / ε-Toxin, produced by Clostridium perfringens type D, is the main agent responsible for enterotoxaemia in livestock. ε-Toxin accumulates specifically in the renal and nervous system were it produces the death of the epithelial cells from the distal tubules and neurons, respectively. Vaccines are very useful in the prevention of the ε-toxin intoxication, but nothing is known about the receptor and the first intoxication steps. We produced a recombinant ε-toxin protein with the green fluoresence protein GFP (ε- toxin-GFP) which is a useful tool because it behaves as the native ε-toxin and it can be detected by fluorescence (Soler-Jover et al., 2004). The aim of this thesis is to go into detail in the knowledge of the first steps in the intoxication pathway, characterizing the binding and distribution of the ε-toxin in different organs and tissues, especially in the renal and nervous system. To achieve this aim we performed two experimental approaches. On one hand, we incubated the ε-toxin-GFP on tissue sections, were its binding to myelin from CNS and PNS was observed. We also observed binding of ε-toxin to the urothelium and epithelial cells from distal and collecting tubules in the kidney. Our work revealed that the receptor in the nervous and renal system could be an Oglycoprotein, and that a lipidic environment (or the membrane integrity) would be required for the binding of ε-toxin to its receptor. In addition, an ELISA-based binding assay revealed a single high-affinity binding site for ε-toxin in MDCK cells. Moreover, cross-linking experiments identified a 36 kDa protein (Annexin A2) which could be involved in the membrane pore formation step. On the other hand, we reproduced in mice the in vivo effects by injecting i.v ε-toxin- GFP. The toxin crossed the BBB and penetrated the brain parenchyma producing neuronal death (Soler-Jover et al., 2007). We are interested in the finding of new vehicles to cross the BBB. In fact, some ε-toxin mutants have been studied but no one is able to cross the BBB without producing cell damage and animal death.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Universiẗat, Diss., 2004--Bonn.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-11-30Bitstream added on 2014-06-13T20:04:34Z : No. of bitstreams: 1 ragazani_avf_dr_jabo.pdf: 399859 bytes, checksum: f93ad8981a9e4aaa051ed6bff03ccacc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Entre as espécies de Clostridium de importância em patologia animal, destaca-se o Clostridium perfringens, o Clostridium botulinum, o Clostridium chauvoei. O objetivo desta pesquisa foi verificar a presença de bactérias anaeróbias esporuladas (Clostridium sp), assim como, identificar as espécies de Clostridium patogênicos para a saúde animal, principalmente de bovinos, no solo de pastagem da micro-região de Jaboticabal, SP. Foram coletadas 250 amostras de solo e realizadas contagens de bactérias esporuladas do gênero Clostridium e identificação das espécies patogênicas presentes. Os resultados permitiram demonstrar a contagem de UFC de Closrtidium sp com média em log 10 igual a 2,79, sendo que os valores mínimo e máximo obtido foram 2,15 e 3,68 respectivamente. Para caracterização e identificação, os resultados permitiram identificar a presença de bactérias anaeróbias esporuladas em 233 amostras (93,2%), entre estas 180 eram do gênero Clostridium... / The species of Clostridium of major importance to animal pathology are Clostridium perfringens, Clostridium botulinum, and C. chauvoei. Considering this, the objective of this research was to verify the presence of anareobic sporulate bacteria (Clostridium sp), and also identify the species of pathogenic Clostridium for the animal health, mostly to bovine, in pasture soil of Jaboticabal-SP. A total of 250 samples were collected and used to determine the number of sporulated bacteria from Clostridium genderand identify the pathogenic species present. The results demonstrated that the average number of CFU in log 10 of Closrtidium sp was 2,79, and the minimum and maximum values obtained were 2,15 and 3,68 respectively. After characterization and isolation and identification, the results showed the presence of 233 samples (93,2%) of sporulated bacteria, of these 180 were of Clostridium gender. The biochemical tests were identified in 42 samples, being 23 samples (9,2%) of Clostridium perfringens, 13 samples (5,2%) of Clostridium botulinum and 6 samples (2,4%) of C. chauvoei ...(Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-27Bitstream added on 2015-03-03T12:07:01Z : No. of bitstreams: 1 000811220.pdf: 462686 bytes, checksum: 819f94ea9094e6242a1747ff899e45b2 (MD5) / O gênero Clostridium é amplamente distribuído na natureza, está presente no solo e conteúdo intestinal dos animais, produzem toxinas que são capazes de provocar doenças e intoxicações. O Clostridium perfringens está envolvido com prejuízos na avicultura, pois a doença (Enterite Necrotica) na maioria das vezes é subclínica, e o produtor só observa na hora do abate que a ave não ganhou o peso esperado. O controle dessa e de outras enfermidades e agentes patogênicos na avicultura de corte tem grande importância uma vez que o Brasil está entre os principais países exportadores de carne. O objetivo deste trabalho primeiramente foi pesquisar Clostridium perfringens em frangos de corte sadios, provenientes de dois grandes frigoríficos com Inspeção federal, um no Estado de São Paulo e outro no Estado de Minas Gerais. Foram obtidos 300 raspados intestinais, os quais foram semeados em Agar SPS e incubados em anaerobiose. A identificação dos tipos A, B, C, D e E de C. perfringens foi realizada mediante o emprego da PCR multiplex por amplificação dos genes codificadores das toxinas alfa, beta, épsilon e iota do mesmo. A partir das amostras positivas na PCR (37), procedeu-se o isolamento do agente. Depois de muitas tentativas, verificou-se por meio do sequenciamento da região 16S rDNA, que as colônias sulfito redutoras que estavam sendo isoladas eram Enterococcus spp, microrganismo coexistente na microbiota intestinal de frango de corte, que compete com o C. perfringens pelo crescimento das colônias no mesmo meio de cultura, ainda que este seja seletivo e diferencial para clostrídios sulfito redutores. Dessa forma, notou-se que o crescimento de colônias de enterococos interferia muito na identificação e enumeração do C. perfringens e ainda apresentavam colônias muito semelhantes às de C. perfringens nos oito meios de cultura testados. Visto isto, foram feitos alguns testes para avaliar o comportamento dos ... / Clostridium genus is widely distributed in nature and is present in soil and intestinal contents of animals, produce toxins which are capable of causing diseases and intoxication. Clostridium perfringens is involved with losses in the poultry industry, because the disease is most often subclinical, and producer only observed at the time of slaughter the bird has not gained the expected weight. The control of this and other diseases and pathogens in poultry production is very important since Brazil is among the major meat exporting countries. The aim of this study was to evaluate the presence of Clostridium perfringens in poultry coming from two large slaughter-house, one from São Paulo state and another from Minas Gerais. Were obtained 300 intestinal scraped and cecal contents, which were sown onto SPS agar and incubated anaerobically. The identification of C. perfringens types A, B, C, D and E was performed by the use of multiplex PCR. After identification of the presence of C. perfringens in 37 of 300 samples by amplification of the cpa gene, alpha toxin encoder, the isolation of pure colonies was proceeded. However, through the sequencing of 16S rDNA region, it was also found the presence of Enterococcus spp. that lives in the intestinal microbiota of poultry and disputes in growth on the same culture medium, even been selective and differential for clostridia. Thus, it was observed that colony morphology of enterococci is very similar to C. perfringens in this medium what make isolation of pure colonies difficult. Having on mind the difficulty of C. perfringens isolation under these circumstances, the PCR is an rapid and secure alternative for detection of C. perfringens and its different types, being effective for diagnostics

Orientador: Ana Maria Centola Vidal / Banca: Karina Paes Bürger / Banca: Andréia Cristina Nakashima Vaz / Resumo: O tratamento térmico por UAT elimina formas vegetativas dos microrganismos, porém, formas esporuladas altamente resistentes ao calor podem permanecer nos produtos e após a germinação dos esporos são capazes de liberar toxinas causadoras de doenças transmitidas por alimentos (DTAs). No presente estudo, objetivou-se avaliar a qualidade microbiológica de produtos tratados por UAT, por meio da contagem de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos, isolamento e contagem de bactérias do grupo do Bacillus cereus e de Clostridium perfringens, comparar lotes dos três produtos quanto a tais microrganismos, identificar a espécie dos isolados e a presença dos fatores de virulência de bactérias do grupo do B. cereus. Para isso, foram obtidas 75 amostras, sendo 25 de cada produto (de leite de cabra UAT, alimento com soja UAT e bebida de leite de cabra e soja UAT), de 5 diferentes lotes, no comércio do interior do Estado de São Paulo. Os resultados evidenciaram possíveis falhas de processamento e utilização de matéria-prima inadequada, uma vez que altas populações (>104UFC/mL) de microrganismos heterotróficos aeróbios mesófilos foram verificadas em 100% dos lotes de alimento com soja e bebida de leite de cabra e soja e 80% dos lotes de leite de cabra. Microrganismos do grupo do B. cereus foram isolados de 80% dos lotes de alimento com soja, e 60% dos lotes de bebida de leite de cabra e soja e leite de cabra, com populações superiores a 1018 UFC/mL. C. perfringens foi isolado de 20% d... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Heat treatment by UHT (ultra-high temperature) eliminates the vegetative forms of microorganisms, however, sporulated forms highly resistant to heat can remain in the products and following spore germination are capable of releasing toxins that cause foodborne diseases (FD's). The objective of this study is to evaluate the microbiological quality of products submitted to UHT, namely goat milk, soy food, and goat and soy milk drinks, by the counting of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms, the isolation and counting of bacteria from the Bacillus cereus groups and Clostridium perfringens, comparing batches of the three products for such microorganisms, to identify the species of the isolated and the presence of the virulence factors of bacteria of the B. cereus group. For this, 75 samples were obtained, 25 of each product (from UAT goat milk, food with UAT soy and drink from goat milk and UAT soy) from 5 different lots, in the interior trade of the State of São Paulo. The results demonstrated possible failures in the processing and use of inadequate raw material since high population (>104 ) of heterotrophic aerobic mesophilic microorganisms were found in 100% of the lots of soy food and goat and soy milk drinks and 80% of the lots of goat milk. Microorganisms from the B. cereus group were isolated from 80% of the lots of soy food and 60% of the lots of goat and soy milk drinks, with population above 1018 . The C. perfringens microorganisms were isolated from 20% of the soy food lots, with population above 103 . In the comparison between the lots, the expiration date did not influence the population of the analyzed microorganisms, therefore, they were conveyed by the raw material used. Of the B. cereus isolated, 100% (29/29) showed amplification for the hbl complex gene, 96,5% (28/29) for the nhe complex gene and 75,8% (22/29) for t... Complete abstract click electronic access below / Mestre

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:17Z : No. of bitstreams: 1 000843074.pdf: 809233 bytes, checksum: 3fd2a7a7ea5772ef33b3acf27d16420f (MD5) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de aditivos alternativos aos antibióticos promotores de crescimento sobre o desempenho, morfometria intestinal e controle de enterite necrótica em frangos de corte, para isso foram realizados dois ensaios. No primeiro, foram utilizados 1920 pintinhos machos Cobb 500®, distribuídos em 8 tratamentos e 8 repetições com 30 aves em cada parcela. Os tratamentos foram: Controle positivo, sem aditivos na dieta e sem desafio sanitário; Controle negativo (CN), sem aditivos e com desafio sanitário; CN + antibiótico, CN + prebiótico A; CN + antibiótico + prebiótico A; CN + probiótico; CN + ácido orgânico; CN + prebiótico B. Foram avaliados peso corporal, ganho de peso, consumo de ração, e conversão alimentar, bem como os parâmetros intestinais altura de vilo, profundidade de cripta, relação vilo:cripta e número de células caliciformes. Não houve diferença significativa no desempenho animal e qualidade do trato intestinal entre os tratamentos testados. Entretanto, houve aumento significativo no número de células caliciformes no jejuno de aves tratadas com prebiótico A e com antibiótico + prebiótico A. No segundo ensaio, foram utilizados 1360 pintinhos machos Cobb 500®, distribuídos em 5 tratamentos e 8 repetições com 34 aves em cada parcelas. Os tratamentos foram: Não desafiado, sem aditivo na dieta e sem desafio sanitário; Desafiado, sem aditivo e com desafio sanitário; Controle positivo, Desafiado + enramicina 10 ppm; Desafiado + Premium Lac AP; Desafiado + Premium Lac BP. Foram avaliados peso corporal, ganho de peso, consumo de ração, e conversão alimentar, bem como escore de lesão intestinal causada por enterite necrótica. No período de 1 a 42 dias, houve diferença estatística apenas para consumo de ração. Entretanto, no período de 22 a 35 dias quando houve a inoculação com C. perfringens, o tratamento não desafiado apresentou melhores resultados, já o... / The aim of this study was evaluate the use of alternative additives to antibiotic growth promoter on performance, intestinal morphometric and necrotic enteritis control of broilers, for this were realized two trials. In the first trial, were used 1,920 male Cobb 500® broilers, distributed into 8 treatments and 8 replicates in a completely randomized design, with 30 birds per pens. The treatments were: Positive Control (PC), with no additives in the diet and no sanitary challenge; Negative control (NC), with no additives in the diet but with sanitary challenge; NC + antibiotic; NC + prebiotic A; NC + antibiotic + prebiotic A; NC + probiotic; NC + organic acid; NC + prebiotic B. We evaluated body weight, body weight gain, feed intake, and feed conversion ratio, as well as the intestinal parameters villus height, crypt depth, villus:crypt ratio, and goblet cell count. No significant differences were found in animal performance between the tested treatments tested. No significant differences in the quality of the intestinal tract were seen. However, the number of goblet cells in the jejunum significantly increased in birds treated with prebiotic A and with antibiotic + prebiotic A. In the second trial, were used 1,360 male Cobb 500® broilers, distributed into 5 treatments and 8 replicates in a completely randomized design, with 34 birds per pens. The treatments were: Unchallenged, diet with no additives inclusion and no sanitary challenge; Challenged, diet with no additives inclusion but with sanitary challenge; Positive Control, diet with antibiotic (enramycin 10 ppm) and sanitary challenge; Challenged + Premium Lac AP; Challenged + Premium Lac BP. We evaluated body weight, body weight gain, feed intake, and feed conversion ratio, as well as intestinal lesion score caused by necrotic enteritis were evaluated. There was statistic difference in the period from 1 to 42 days only for feed intake. However, in the period from 22 to 35 days when ...

Orientador: Nilva Kazue Sakomura / Banca: Daniella Carolina Zanardo Donato / Banca: Flavio Alves Longo / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso de aditivos alternativos aos antibióticos promotores de crescimento sobre o desempenho, morfometria intestinal e controle de enterite necrótica em frangos de corte, para isso foram realizados dois ensaios. No primeiro, foram utilizados 1920 pintinhos machos Cobb 500®, distribuídos em 8 tratamentos e 8 repetições com 30 aves em cada parcela. Os tratamentos foram: Controle positivo, sem aditivos na dieta e sem desafio sanitário; Controle negativo (CN), sem aditivos e com desafio sanitário; CN + antibiótico, CN + prebiótico A; CN + antibiótico + prebiótico A; CN + probiótico; CN + ácido orgânico; CN + prebiótico B. Foram avaliados peso corporal, ganho de peso, consumo de ração, e conversão alimentar, bem como os parâmetros intestinais altura de vilo, profundidade de cripta, relação vilo:cripta e número de células caliciformes. Não houve diferença significativa no desempenho animal e qualidade do trato intestinal entre os tratamentos testados. Entretanto, houve aumento significativo no número de células caliciformes no jejuno de aves tratadas com prebiótico A e com antibiótico + prebiótico A. No segundo ensaio, foram utilizados 1360 pintinhos machos Cobb 500®, distribuídos em 5 tratamentos e 8 repetições com 34 aves em cada parcelas. Os tratamentos foram: Não desafiado, sem aditivo na dieta e sem desafio sanitário; Desafiado, sem aditivo e com desafio sanitário; Controle positivo, Desafiado + enramicina 10 ppm; Desafiado + Premium Lac AP; Desafiado + Premium Lac BP. Foram avaliados peso corporal, ganho de peso, consumo de ração, e conversão alimentar, bem como escore de lesão intestinal causada por enterite necrótica. No período de 1 a 42 dias, houve diferença estatística apenas para consumo de ração. Entretanto, no período de 22 a 35 dias quando houve a inoculação com C. perfringens, o tratamento não desafiado apresentou melhores resultados, já o... / Abstract: The aim of this study was evaluate the use of alternative additives to antibiotic growth promoter on performance, intestinal morphometric and necrotic enteritis control of broilers, for this were realized two trials. In the first trial, were used 1,920 male Cobb 500® broilers, distributed into 8 treatments and 8 replicates in a completely randomized design, with 30 birds per pens. The treatments were: Positive Control (PC), with no additives in the diet and no sanitary challenge; Negative control (NC), with no additives in the diet but with sanitary challenge; NC + antibiotic; NC + prebiotic A; NC + antibiotic + prebiotic A; NC + probiotic; NC + organic acid; NC + prebiotic B. We evaluated body weight, body weight gain, feed intake, and feed conversion ratio, as well as the intestinal parameters villus height, crypt depth, villus:crypt ratio, and goblet cell count. No significant differences were found in animal performance between the tested treatments tested. No significant differences in the quality of the intestinal tract were seen. However, the number of goblet cells in the jejunum significantly increased in birds treated with prebiotic A and with antibiotic + prebiotic A. In the second trial, were used 1,360 male Cobb 500® broilers, distributed into 5 treatments and 8 replicates in a completely randomized design, with 34 birds per pens. The treatments were: Unchallenged, diet with no additives inclusion and no sanitary challenge; Challenged, diet with no additives inclusion but with sanitary challenge; Positive Control, diet with antibiotic (enramycin 10 ppm) and sanitary challenge; Challenged + Premium Lac AP; Challenged + Premium Lac BP. We evaluated body weight, body weight gain, feed intake, and feed conversion ratio, as well as intestinal lesion score caused by necrotic enteritis were evaluated. There was statistic difference in the period from 1 to 42 days only for feed intake. However, in the period from 22 to 35 days when ... / Mestre

Resumo: toxina Épsilon (ETX) produzida pelo Clostridium perfringens tipos B e D é uma das mais potentes toxinas clostridiais superada apenas pelas neurotoxinas botulínica e tetânica. É responsável por quadros fatais de enterotoxemia em ovinos, caprinos e ocasionalmente em outros animais, caracterizados por edema em vários órgãos e aumento da permeabilidade vascular. Nos estudos "in vitro", a linhagem de células "Madin-Darby canine kidney" (MDCK) é susceptível à ação da ETX, que se heptameriza nas membranas celulares formando um poro complexo que evolui para a lise celular. No presente estudo, foram avaliadas a morfologia e a viabilidade celular, a despolarização da membrana mitocondrial e a expressão de mediadores de morte celular programada (Bax e Bcl-2), após a exposição das células MDCK, com a ETX, a cada 24 horas, durante intervalo de 1 a 5 horas. Verificou-se o aparecimento de vacúolos no interior do citoplasma celular associados à perda de viabilidade celular, que evoluíram de forma progressiva, nos períodos de 1 a 5 horas pós-exposição. Foram realizadas análises por citometria de fluxo acústica para obtenção de uma visão mais aprofundada da patogenia causada pela ETX. Utilizando a citometria de fluxo acústica, considerada altamente sensível, as células MDCK expostas à ação da ETX, nos períodos de 1 a 5 horas, revelaram uma diminuição do potencial de membrana mitocondrial, seguido da expressão das proteínas Bax (25,48 %) e Bcl-2 (45,45 %) na fase de formação do pré-poro (1 hora pós exposição). Estes resultados, juntamente com alta citotoxicidade e visualização de vacúolos celulares, demonstra que a análise por citometria de fluxo acústico representa potencialmente uma ferramenta eficaz para estudar a patogênese da ETX / Abstract:Epsilon toxin (ETX) produced by Clostridium perfringens types B and D is one of the most powerful clostridial toxins surpassed only by neurotoxins botulinum and tetanus. Studies blame the ETX by developing a fatal enterotoxemia in sheep, goats and occasionally in other animals, characterized by edema in multiple organs and increased vascular permeability. In "in vitro" toxicoinfection studies the "Madin-Darby canine kidney" (MDCK) cell line is susceptible to the action of ETX, which forms a heptamer in the cell membranes forming a pore complex that progresses to cell lysis. In the present study, we assessed cell viability and morphology, mitochondrial membrane depolarization and expression of programmed cell death mediators (Bax and Bcl-2) after exposure of MDCK cells with the ETX every 24 hours for range of 1 to 5 hours. Our results shows the appearance of vacuoles within the cytoplasm associated with loss of cell viability, which evolved gradually, in periods 1-5 hours after exposure. Analyzes were performed by acoustic flow cytometry to obtain further insight into the pathogenesis caused by ETX. Using acoustic flow cytometry, considered highly sensitive, MDCK cells exposed to the action of ETX, during 1 to 5 hours showed a decrease in mitochondrial membrane potential followed by the expression of Bax (25.48%) and Bcl-2 (45.45%) proteins at the pre-pore stage (1 hour post exposure). These results along with high cytotoxicity and visualization of cellular vacuoles, demonstrates that the flow cytometry analysis acoustic represents a potentially powerful tool for studying the pathogenesis of ETX / Orientador:Tereza Cristina Cardoso da Silva / Banca:Rafael Silva Cipriano / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Banca:Marcia Marinho / Banca:Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Curci / Mestre